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[ कैमोमाइल घटक / III पर जैव रसायन अध्ययन। (--)-अल्फा-बिसाबोलोल के एंटीपेप्टिक गतिविधि के बारे में in vitro अध्ययन (संपादक का अनुवाद)]. (--)-अल्फा-बिसाबोलोल में खुराक के आधार पर एक प्राथमिक एंटीपेप्टिक कार्रवाई होती है, जो पीएच-मान में परिवर्तन के कारण नहीं होती है। पेप्सिन की प्रोटीओलिस्टिक गतिविधि 1/0.5 के अनुपात में bisabolol जोड़ने के माध्यम से 50 प्रतिशत कम होती है। Bisabolol का एंटीपेप्टिक प्रभाव केवल सीधे संपर्क के मामले में होता है। सब्सट्रेट के साथ पिछले संपर्क के मामले में, अवरोधक प्रभाव खो जाता है।
[एक मजबूत प्रतिरक्षा उत्तेजक कम-मूल्य वजन पदार्थ के ट्यूमर अवरोधक गुणों का प्रदर्शन। Immuno-labile DS carcinosarcoma पर ifosfamide के साथ तुलनात्मक अध्ययन। ऑटोइमोनिक गतिविधि का उत्तेजना लगभग 20 दिनों के लिए बीए 1, एक एन-(2-सियानोएथेलन)-यूरेवा द्वारा। नए संभावित संभावित संभावित संभावित संभावित संभावित संभावित]। BA 1 [N-(2-cyanoethylene)-urea] में उत्कृष्ट प्रतिरक्षा विशेषताओं की हालिया खोज पर एक रिपोर्ट दी गई है जिसमें (कम) आणविक द्रव्यमान M = 111,104 है। Wistar चूहों के साथ 214 DS carcinosarcoma में प्रयोगों ने दिखाया है कि बीए 1, केवल लगभग 12 प्रतिशत LD50 (150 मिलीग्राम किलोग्राम) और निराशाजनक घातकता (1.7 प्रतिशत) की खुराक पर, हाइपरग्लीकामिया के बिना 40 प्रतिशत की वसूली दर और, एक परीक्षण में, हाइपरग्लीकामिया के साथ 80 प्रतिशत का परिणाम। अन्यथा अपरिवर्तित परिस्थितियों में, संदर्भ पदार्थ ifosfamide (IF) - cyclophosphamide का एक और विकास - उच्च ग्लाइपरग्लिसमिया के बिना अपने सबसे प्रभावी खुराक 47 प्रतिशत LD50 (150 मिलीग्राम किलोग्राम) में लागू किया गया, 18 प्रतिशत की घातकता के साथ 25 प्रतिशत की वसूली दर का कारण बन गया। (बीए 1 के विपरीत, 250 मिनट की हाइपरग्लीक्सामिया ने वसूली दर में कोई और सुधार नहीं किया। हालांकि, इस तुलना को इस तथ्य द्वारा विशेषता दी जाती है कि दोनों पदार्थों में दो पूरी तरह से अलग (अलग) कार्य तंत्र दिखाई देते हैं। उपरोक्त कैंसरस्टैटिक दवाओं और खुराक के आवेदन के बाद किए गए वाइकोसाइट गिनती ने बीए 1 और ifosfamide के साथ एक स्पष्ट उत्तेजना दिखाई, जिसे सामान्य रूप से मानक कैंसरस्टैटिक दवाओं के साथ उपचार के बाद अवधि में ज्ञात अवरुद्धता पाया जाता है। बीए 1 के लिए उद्धृत प्लेट परीक्षण के साथ संयोजन में, रक्त परीक्षण तब प्रतिरक्षा की स्थिति के बारे में निष्कर्षों की अनुमति देता है। चूंकि आईएफ को सबसे प्रभावी कैंसरस्टैटिक में से एक के रूप में लिया जा सकता है - अब तक कोई अन्य रासायनिक चिकित्सा ज्ञात नहीं है जो चूहों में डीएस carcinosarcoma पर अधिक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है - ये निष्कर्ष विशेष रूप से महत्वपूर्ण हैं। अंत में, वाइकोसाइट्स और लिम्फोसाइट्स की कुल मात्रा और उनके समय व्यवहार को बीए 1 के आंतरिक आवेदन के बाद ट्यूमर मुक्त चूहों के रक्त चित्र से निर्धारित किया गया था। इस तरह से प्राप्त संख्यात्मक मूल्यों से स्पष्ट रूप से पता चलता है कि इस पदार्थ के निवारक उपयोग पर आगे के अनुसंधान का काम आवश्यक और बहुत आशाजनक लगता है।
कुल और क्षेत्रीय मायोकार्डिया रक्त प्रवाह पर etafenone का प्रभाव। बाएं कमर के मुक्त दीवार के subendocardial, medium और subepicardial परतों में रक्त प्रवाह का वितरण normoxic (A), hypoxic (B) स्थितियों और फार्माकोलॉजिकल रूप से उत्तेजित (etafenone) coronary vasodilation (C) के तहत एनेस्थेटिक कुत्तों में अध्ययन किया गया था। क्षेत्रीय मायोकार्डिया रक्त प्रवाह को कण वितरण विधि के माध्यम से निर्धारित किया गया था। normoxia में, प्रवाह का एक transmural ग्रेडेंट देखा गया था, जिसमें subendocardial परतें subepicardial परतों की तुलना में काफी अधिक प्रवाह दर प्राप्त करती हैं। Hypoxia-induced vasodilation में, प्रवाह का यह transmural ग्रेडेंट स्थिर था। इसके विपरीत, फार्माकोलॉजिकल रूप से प्रेरित वासोडिलाशन के दौरान क्षेत्रीय प्रवाह का एक स्पष्ट पुनर्विचार देखा गया था। ट्रांसमूरल ग्रेडेंट कम हो गया है। कुछ निष्कर्षों के विपरीत, इन प्रयोगों से पता चलता है कि मायोकार्डियम के सभी परतों में एक महत्वपूर्ण vasodilatory क्षमता मौजूद है और दवाओं द्वारा उपयोग किया जा सकता है। हाइपोक्सिया और दवा-उत्पादित वासोडिलीकरण के दौरान प्रवाह के intramural वितरण पैटर्न के लिए देखा गया अंतर यह अनुमान का समर्थन करते हैं कि यह पैटर्न क्षेत्रीय मायोकार्डियम चयापचय के संबंधित ग्रेडिएंट को दर्शाता है।
चूहे के यकृत में एंजाइमों के उत्तेजना पर एक नए वायरोस्टैटिक यौगिक का प्रभाव। वायरोस्टैटिक यौगिक N,N-diethyl-4-[2-(2-oxo-3-tetradecyl-1-imidazolidinyl)-ethyl]-1-piperazinecarboxamide-hydrochloride (5531) चूहों के जिगर में tryptophan-pyrrolase और tyrosine aminotransferase के उत्तेजना पर इसका प्रभाव के रूप में विश्लेषण किया गया था। एंजाइमों की मूल गतिविधि को सामान्य या adrenalectomized जानवरों में या तो पदार्थ द्वारा प्रभावित नहीं किया गया था। कॉर्टिज़ोन द्वारा एंजाइमों की उत्तेजना यौगिक की उपस्थिति में बढ़ी, जबकि सब्सट्रेट उत्तेजना में कोई बदलाव नहीं हुआ। ऊतक संस्कृति में dexamethasonephosphate द्वारा tyrosine-aminotransferase के उत्तेजना को अवरुद्ध किया जाता है यदि यौगिक 5531 की खुराक 5 मोम / मिलीलीटर से अधिक है।
नई न्यूरोलेप्टिक यौगिकों की फार्माकोलॉजिकल विशेषताएं RMI 61 140, RMI 61 144 और RMI 61 280 नए संश्लेषित N-[8-R-dibenzo(b,f)oxepin-10-yl]-N'-methyl-piperazine-maleates हैं जो दिलचस्प मनोचिकित्सा प्रभाव दिखाते हैं। इस काम में इन तीन यौगिकों के साथ किए गए एक अध्ययन के परिणाम शामिल हैं, ताकि क्लोरोप्रोमाज़िन (CPZ) और क्लोर्डियाज़ेपोक्साइड (CPD) की तुलना में उनके न्यूरोप्रिकोलेप्टिक गतिविधि का प्रदर्शन किया जा सके। चूहों में देखा गया गतिशीलता के अवरोध से पता चलता है कि यौगिक सामान्य स्वचालित गतिशीलता और मांसपेशियों के टोन को कम करते हैं। केंद्रीय अवसादकारी गतिविधि को बारबिटुराट-इंडोजेड नींद में वृद्धि से साबित किया जाता है और एक उल्लेखनीय आँखों की पिटॉसिस भी देखा जा सकता है। हमारे यौगिक सीपीजेड और सीपीडी की तरह इलेक्ट्रोशॉक पर कोई गतिविधि नहीं दिखाते हैं। एंटी-मनोवैज्ञानिक परिदृश्य के बारे में, हमारे यौगिक समूह चूहों में एम्फेटामाइन के कारण घातकता में मजबूत कमी और एक मजबूत एंटी-अपोमॉर्फिन गतिविधि दिखाते हैं। वे सीपीजी की तुलना में बहुत मजबूत बचत व्यवहार पर एक विरोधी आक्रामक प्रभाव और एक अवरोधक गतिविधि भी दिखाते हैं। हमने भी पाया है extrapyramidal प्रभाव, जैसे catalepsy, हमारे द्वारा उपयोग किए गए मानकों की तरह कई शांतक के लिए आम है। जैसा कि शाकाहारी घटनाओं के लिए, यौगिकों में मध्यम से मजबूत, संभवतः एक ए-रसेप्टर अवरोध के कारण, कम खुराक से संबंधित कार्रवाई दिखाई देती है। एड्रेनालिटिक गतिविधि एड्रेनालाईन, एंटीसेरोटोनिन और एंटीहिस्टामाइन प्रभावों के घातक खुराक के खिलाफ, साथ ही अन्य कार्रवाई (हिपोथर्मिया, analgesia, आदि) यह पुष्टि करते हैं कि RMI 61 140, RMI 61 144 और RMI 61 280 को CPZ की तुलना में समान और अधिक शक्तिशाली फार्माकोलॉजिकल गुणों के साथ समर्पित किया गया है। मस्तिष्क कैथेकोलोमाइन के चयापचय पर अध्ययन से पता चलता है कि वे CPZ के समान हैं, हालांकि डोपामाइन स्तर पर कम प्रभाव पड़ता है।
[एक anticholinergic एजेंट के इंसान में पेट के रस के उत्सर्जन पर एक शांतक के साथ संयोजन में कार्य पर अध्ययन] व्यक्तिगत तुलना के साथ एक दोगुना अंधा अध्ययन किया गया था (8r)-3alpha-hydroxy-8-isopropyl-1alphaH-tropanium bromide(+/-)-tropate (Sch 1000), 15 मिलीग्राम Sch 1000 + 10 मिलीग्राम oxazepam, 10 मिलीग्राम oxazepam और 12 स्वस्थ स्वयंसेवकों में पेट के रस की मात्रा, एसिड की मात्रा, एकाग्रता और पीएच मान पर यादृच्छिक अनुक्रम में मौखिक प्रशासन के साथ प्लेसबो के प्रभावों की जांच करने के लिए। उत्सर्जन पैरामीटरों को 1 घंटे आधार अवधि और 2 घंटे उत्तेजना अवधि के दौरान मापा गया था। पेट का रस पेट ट्यूब के माध्यम से 15 मिनट में खुराक में प्राप्त किया गया था। उत्तेजना को ड्रिप इन्फ्लूज़ेशन के माध्यम से pentagastrin द्वारा 1 mug/kg/h द्वारा किया गया था। फ्रिडमैन परीक्षण का उपयोग तुलनात्मक सांख्यिकीय मूल्यांकन के लिए किया गया था, और व्यक्तिगत तुलना विल्कोक्सन परीक्षण के माध्यम से किए गए थे (पैर-अनुकूलता रैंक)। परिणामों से पता चलता है कि Sch 1000 और Sch 1000 + oxazepam basal और उत्तेजित उत्सर्जन मात्रा पर समान प्रभाव थे। प्लेसबो की तुलना में, अकेले ऑक्साजेपैम के लिए उत्सर्जन मात्रा पर कोई प्रभाव स्थापित करना संभव नहीं था। Sch 1000 और Sch 1000 + oxazepam को basal एसिड की मात्रा को कम करने में equipotent होने के लिए पाया गया था, जबकि oxazepam केवल मूल उत्सर्जन के पहले 30 मिनट के दौरान इस मात्रा को कम कर दिया। तीन सक्रिय तैयारी में से कोई भी उत्तेजित एसिड को अवरुद्ध करने में सक्षम नहीं था, हालांकि दोनों Sch 1000 तैयारी कम औसत मूल्यों की ओर एक स्पष्ट प्रवृत्ति का उत्पादन करती थी। आधारभूत उत्सर्जन अवधि के दौरान, तीन परीक्षण तैयारी में एसिड एकाग्रता पर एक अवरोधक प्रभाव था, लेकिन उत्तेजना अवधि के दौरान उनमें से कोई भी एक महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं था। पीएच मूल्य केवल Sch 1000 और Sch 1000 + oxazepam द्वारा सुरक्षित रूप से बढ़ाया गया था, और यह भी केवल आधार अवधि के दौरान। परिणामों पर चर्चा की जा रही है।
एपिडर्मिस के लिसोसोमल हाइड्रोलासिस। I. ग्लूकोसिडासिस सात अलग-अलग glycosidases (ईसी 3.2) गीना-गर्गी एपिडर्मिस में वर्णित किया गया है। उनके गुणों से पता चलता है कि वे लिज़ोसोमल मूल हैं। एपिडर्मल ग्लाइकोसाडासिस का 'प्रोफ़ाइल' पूरे त्वचा के लिए उल्लेखनीय रूप से अलग है, बीटा-गालैक्टोसाडास और बीटा-एसिटिल ग्लाइकोसामाइडास की गतिविधि बहुत अधिक है और बाकी एंजाइमों की गतिविधि एपिडर्मल में अपेक्षाकृत कम है।
एपिडोरमस के लिसोसोमल हाइड्रोलासिस। एस्टर हाइड्रोलासिस पांच अलग-अलग एस्टर हाइड्रोलासिस (ईसी 3-1) गीना-पुरी एपिडर्मिस में वर्णित किए गए हैं। ये कार्बॉक्सी एस्टरैस, एसिड फॉस्फेटेस, पिरोफॉस्फेटेस, और एरिलसल्फेटेस ए और बी हैं. उनके गुण लिज़ोसोम एंजाइमों के समान हैं।
एक सीरम hemagglutinating गुण polycarboxyl समूहों पर निर्भर करता है। Polycarboxyl समूहों की उपस्थिति में लाल कोशिकाओं के साथ एक सीरम एग्लुटिनिन प्रतिक्रिया की सूचना दी गई है। यह संभावना है कि यह एग्लुटिनिन के प्रकार का एक अतिरिक्त उदाहरण है जिसे पहले ionized कैल्शियम की अनुपस्थिति में agglutinating लाल कोशिकाओं के रूप में वर्णित किया गया था। प्रयोगशाला सबूत प्रस्तुत किया गया है जो इंगित करता है कि यह मुक्त पॉलीकार्बॉक्सील समूह हैं जो एग्लुटिनेशन को बढ़ावा देते हैं और कि किसी भी धातु आयन, जैसे कि कैल्शियम, इन समूहों के साथ केलेशन करने में सक्षम होंगे।
पूरक सक्रियण पर मानव erythrocyte stromata का प्रभाव। सामान्य या पीएनएच-आकार के लाल कोशिकाओं से स्ट्रोमा, साक्रोसिस परीक्षण में कुछ हद तक, लिसा को अवरुद्ध करने और एसिड-सेरम परीक्षण में लिसा को बढ़ाने में सक्षम है। समान विपरीत प्रभाव प्रत्येक स्ट्रोमा तैयारी से प्राप्त Sephadex G-200 से बाहर निकलने वाले पिक्स द्वारा प्रदर्शित किए जाते हैं, जिसका सुझाव है कि दोनों गतिविधियों के लिए एक ही कारक जिम्मेदार हो सकता है। Stromata और पिक्स भी unacidified सीरम में PNH-like कोशिकाओं की लिसिस को उत्तेजित करते हैं, जो कि वैकल्पिक मार्ग के माध्यम से पूरक के सक्रियण को इंगित करता है। यह immunoelectrophoretic निरीक्षण द्वारा पुष्टि की जाती है। जब वैकल्पिक मार्ग के माध्यम से पहले सक्रिय सीरम का उपयोग किया जाता है, तो लिज़ी की मात्रा काफी कम हो जाती है। यह इंगित करेगा कि क्लासिक पथ सक्रियण को वैकल्पिक पथ द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है। PNH रोगियों में हेमोलिटिक संकट को निर्धारित करने में इन कारकों के संभावित नैदानिक महत्व पर चर्चा की जाती है।
सामान्य और G6PD की कमी वाले लाल कोशिकाओं में पेंटोस फॉस्फेट पथ गतिविधि पर ओ-सलिसिलेट का प्रभाव। एस्पिरिन के मुख्य चयापचय का प्रभाव, अर्थात् सलिसिलिक एसिड, सामान्य और G6PD की कमी वाले लाल कोशिकाओं के पेंटोस फॉस्फेट पथ (PPP) पर अध्ययन किया गया है। सलिसिलिक एसिड को मौजूद मात्रा के अनुपात में इस मार्ग को बाधित करने के लिए दिखाया गया है। इस पदार्थ की किसी भी एकाग्रता में, सामान्य लाल कोशिकाओं की तुलना में G6PD की कमी वाले लोगों में पीपीपी का अधिक अवरोध हुआ।
लाल पीएच पर अदरक आधारित पूरक के प्रसंस्करण के प्रभाव, भेड़ों में सूखे घास के स्वयंसेवक सेवन के पाचन दर। एक प्रयोग में, पूरे या पीलेटेड अदरक के सीमित मात्रा के साथ खिलाने के रोमन पीएच पर प्रभाव का अध्ययन किया गया था। पूरे अदरक के साथ, भोजन के समय से जुड़े रमजान पीएच में थोड़ी भिन्नता थी, लेकिन पीलेटेड अदरक के साथ, भोजन से पहले लगभग 7-0 से लगभग 5-3, 2 - 3 घंटे के बाद पीएच में कमी आई। सूखे घास के गायब होने की दर को एक दूसरे प्रयोग में अध्ययन किया गया था जो पूरे या पिलेट किए गए अदरक को प्राप्त करने वाले भेड़ों के रमों में इंक्यूबेशन के दौरान किया गया था। 24 घंटे के इंक्यूबेशन के बाद, केवल 423 मिलीग्राम / ग्राम इंक्यूबेट किए गए पीलेट किए गए अदरक प्राप्त करने वाले भेड़ों के रमज़ान में गायब हो गए थे जबकि 625 मिलीग्राम / ग्राम इंक्यूबेट किए गए पूरे अदरक प्राप्त करने वाले भेड़ों के रमज़ान में इंक्यूबेट किए गए थे। भेड़ों के सूखे घास का स्वयंसेवक सेवन एक तीसरे प्रयोग में अध्ययन किया गया था जब उन्हें 25 या 50 ग्राम पूरे या पीलेटेड अदरक / जीवित वजन के किलोग्राम 0-75 की खुराक दी गई थी। उच्च स्तर पर, पीलेटेड अदरक ने सूखे घास की खपत को 534 ग्राम / किलोग्राम तक कम किया, लेकिन पूरे अदरक ने इसे केवल 352 ग्राम / किलोग्राम तक कम कर दिया। एसिड डिटर्जेंट फाइबर की पचाने की क्षमता को पूरे अदरक की तुलना में पीलेटेड अदरक द्वारा अधिक कम किया गया था, लेकिन प्रसंस्करण के कारण अदरक की पचाने की क्षमता में थोड़ा वृद्धि करने की प्रवृत्ति थी। अनाज के साथ अनाज की पूरकता पर इन निष्कर्षों के परिणामों पर चर्चा की जाती है।
पॉली (8-Aminoguanylic एसिड): व्यवस्थित स्वयं संरचनाओं के गठन और पॉली (सीटीडीलिक एसिड) के साथ बातचीत। पॉली (8-Aminoguanylic एसिड) में एक तटस्थ समाधान में उच्च स्थिरता की एक नई व्यवस्थित संरचना है। 8-एमिनो समूह दो अवशेषों के बीच तीन हाइड्रोजन बंधनों का गठन करने की अनुमति देता है, पूरिन के "उपल" या लंबे एक्सिस के साथ। सामान्य हाइड्रोजन बंधन प्रोटॉन और वॉट्सन-क्रिक जोड़ने वाली साइटों को गठबंधन में शामिल नहीं किया जाता है। बंधन योजना में एक डबल रोटेशन एक्सिस होता है और N (7) पर हेमिप्रोटोन किया जाता है। Poly(8NH2G) को अल्कोहल टाइटरेशन (पीके = 9.7) द्वारा एक पूरी तरह से अलग-अलग क्रमबद्ध संरचना में परिवर्तित किया जाता है, जो कि लगभग पीएच 10-11 की सीमा पर पसंदीदा रूप है। बंधन योजना गुआनिन अवशेषों की एक फ्लैटरी, टेटरमेरिक रेंज से बना है, जिसमें 8-एमिनो समूह इंटरबेस हाइड्रोजन बंधन में भाग नहीं लेता है। पॉली (8NH2G) नाइट्रल समाधान में पॉली (सी) के साथ बातचीत नहीं करता है, क्योंकि हेमिप्रोटोनेड जी-जी आत्म संरचना की उच्च स्थिरता है। हालांकि, अल्कोहल प्लेटफॉर्म के लिए टाइटरिंग, एक दो तारों वाले वॉट्सन-क्रिक हिलेक्स के तैयार गठन की अनुमति देती है। मोनोमर 8NH2GMP के विपरीत, पॉली (8NH2G) किसी भी परिस्थितियों में पॉली (सी) के साथ एक ट्रिपल हिलेक्स नहीं बनाता है। आदेशित संरचनाओं की गुणों को 8-एमिनो समूह के एक तीसरे इंटरबेस हाइड्रोजन बंधन बनाने की मजबूत प्रवृत्ति के रूप में व्याख्या किया जाता है, जब यह संभावना उच्च पीएच द्वारा अवरुद्ध नहीं होती है।
पीएच का प्रभाव मानव यकृत एलनिन एमिनोपेप्टाडासा के आधार और अवरोधक केविनिक स्थिरों पर। दो आयनशील सक्रिय केंद्र समूहों के लिए सबूत। कम से कम दो आयनशील सक्रिय केंद्र समूहों की उपस्थिति का पता लगाया गया है पीएच के प्रभाव के अध्ययन से एल-अलानील-बेटा-नॉफ्टिलामाइड के हाइड्रोलिसिस के कैटलिस पर मानव यकृत एलनिन एमिनोपेप्टाडासा और इनहिबिटरों और सबस्ट्रा एनालॉग्स द्वारा हाइड्रोलिस के अवरोध पर। ऑक्टोनिक एसिड, ऑक्टलीमाइन, और पेप्टाइड इनहिबिटरों को प्रतिस्पर्धी अवरोधकों के रूप में पाया गया है और इसलिए सक्रिय केंद्र को बाध्य करने के लिए माना जाता है। L-Phe पहले सक्रिय केंद्र को बाध्य करने के लिए दिखाया गया था क्योंकि यह ट्रिपप्टाइड substrates (Garner, C. W., और Behal, F. J. (1975), Biochemistry 14, 3208) के हाइड्रोलिस के एक प्रतिस्पर्धी अवरोधक होने के लिए पाया गया था। Substrat L-Ala-beta-naphthylamide के लिए pKm के विपरीत पीएच के एक प्लॉट ने दिखाया कि बंधन pH 5.9 के नीचे और 7.5 से ऊपर कम हो गया है, जिन बिंदुओं पर सैद्धांतिक Curve झुकाव में एक पूरी तरह से परिवर्तन का सामना करता है। इन बिंदुओं को या तो substrat ionizable समूहों या binding-dependent enzyme सक्रिय केंद्र समूहों के pKa के रूप में व्याख्या किया जाता है। L-alanyl-p-nitroanilide के लिए pKm vs. pH के समान ग्रंथों (मस्तिष्क के रूप में) और pKi vs. pH के लिए L-L-L-L-L-L-Leu और D-L-Tyr (इंबिटर के रूप में) के लिए जोड़े के लिए pKa मानों 5.8 और 7.4, 6.0 और 7.5, और 5.7 और 7.5 के अनुरूप। उपरोक्त सभी सब्सट्रेट्स (और D-Leu-L-Tyr) के पास 7.5 के पास pKa मान होते हैं; इसलिए, 7.5 के पास pKa मूल्य के साथ बंधन-आधारित समूह संभवतः इस सब्सट्रेट समूह है। एल-फे, एल-मेट, एल-लेयू, ऑक्टिलमाइन, और ऑक्टोनिक एसिड के अवरोधकों के लिए पीके के समान पीच के लिए केवल एक झुकने का बिंदु 7.7, 7.6, 7.4, 6.3 और 5.9 था। एमिनो एसिड अवरोधक, ऑक्टिलामाइन, और ऑक्टिनिक एसिड के पास 5 और 9 के बीच pKa मूल्यों के साथ कोई समूह नहीं है। इन आंकड़ों से पता चलता है कि लगभग 6.0 और 7.5 के pKa मूल्यों के साथ दो सक्रिय केंद्र आयनशील समूह हैं जो सब्सट्रेट बंधन या अम्माइन एसिड बंधन में शामिल हैं, लेकिन कैटलिस में नहीं हैं क्योंकि Vmax परीक्षण किए गए सभी पीएच मूल्यों पर स्थिर था।
ग्लूटामाइट डीहाइड्रोजेनेस कैलासिड प्रतिक्रिया में अस्थायी जटिलताओं का गठन। एनएडी + और एनएडीपी + के साथ ग्लूटामाइट डीहाइड्रोजेनेस और ग्लूटामाइट (gl) की प्रतिक्रिया को स्टॉप-प्रवाह तकनीकों के साथ अध्ययन किया गया है। सभी प्रयोगों में एंजाइम कोएंजाइम के अतिरिक्त मौजूद था। परिणाम बताते हैं कि टर्नीर परिसर (E-NAD(P)H-kg) स्थिर परिसर (E-NAD(P)H-gl) के गठन में एक मध्यस्थ के रूप में मौजूद है। परिसरों की पहचान उनके अवशोषण स्पेक्ट्रम के आधार पर होती है। कोएंजाइम को (E-gl) से बंधन (E-NAD(P)H-kg) के गठन में दर-आधारित चरण है जबकि इस परिसर से अल्फा-केटोग्लोटारेट (kg) की विघटन (E-NAD(P)H-gl) के गठन में दर-आधारित चरण है। ग्लूटामाइट के लिए Km पहले प्रतिक्रिया में 20-25 mM था और स्थिर परिसर के गठन में 3 mM था। किलोमीटर मूल्यों कोइंजाइम से स्वतंत्र थे। NAD + के साथ प्रतिक्रिया दर NADP + के साथ उन लोगों की तुलना में लगभग 50% अधिक थी। इसके अलावा, उच्च ग्लूटामाइट एकाग्रता (E-NADH-kg) के गठन को अवरुद्ध करती है, जबकि कोएंजाइम के रूप में एनएडीपी + के साथ कोई आधार अवरुद्धता नहीं पाई गई है। एडीपी में वृद्धि हुई जबकि जीटीपी ने (E-NAD(P)H-gl) गठन की दर को कम कर दिया। एडीपी द्वारा (E-NAD(P)H-kg) के गठन की दर को अवरुद्ध किया गया था, जबकि यह उच्च ग्लूटामाइट एकाग्रता में वृद्धि हुई जब छोटी मात्रा में जीटीपी जोड़ा गया था। परिणामों से पता चलता है कि स्थिर राज्य परीक्षण परिस्थितियों में NAD+ के साथ NADP+ की तुलना में NAD+ के साथ पाया गया उच्च गतिविधि अनिवार्य रूप से एंजाइम के एडीपी सक्रियण साइट के लिए NAD+ को बाध्य करने के लिए शामिल नहीं है। इसके अलावा, स्थिर राज्य परीक्षण की स्थिति में उच्च ग्लूटामाइट एकाग्रता में पाया गया सब्सक्रेट अवरोध (E-NAD(P)H-gl) के गठन के कारण नहीं है क्योंकि यह जटिल 3 एमएम ग्लूटामाइट के Km के साथ बनता है, और सब्सक्रेट अवरोध केवल इस एकाग्रता के 20-30 गुना में महत्वपूर्ण है।
मानव मस्तिष्क और प्लेसिंटल कोलिन एसीटीएलट्रेंसेरास: शुद्धता और गुण। कोलिन एसीटीएलट्रान्सेरास (ईसी 2.3.1.6) निम्नलिखित रासायनिक संतुलन के अनुसार एसीटीएलकोलिन के बायोसिंथिस को कैटलिस करता है: एसीटीएल-कोए + कोलिन संतुलन में एसीटीएलकोलिन + कोए। तंत्रिका ऊतक के अलावा, प्राइमेट प्लेन्टा एकमात्र अन्य पशु स्रोत है जिसमें सराहनीय एसीटिलकोलिन और इसके बायोसिंथेटिक एंजाइम होता है। मानव मस्तिष्क caudate कोर और मानव प्लेसिंटल कोलिन एसीटीएलट्रान्सेरास को इलेक्ट्रोफोरेटिक समलैंगिकता तक शुद्ध किया गया था ion-exchange और ब्लू dextran-Sepharose affinity chromatography का उपयोग करके। सेफैडेक्स जी-150 गैल फ़िल्टरिंग और सोडियम डॉडेसिल सल्फेट गैल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारित अणु वजन 67000 प्लस या मिनस 3000 है। N-Ethylmaleimide, p-chloromercuribenzoate, और dithiobis (2-nitrobenzoic एसिड) एंजाइम को बाधित करते हैं। Dithiothreitol इन दो रिएक्टरों द्वारा उत्पन्न अवरोध को उलट देता है। N-Ethylmaleimide अवरोध के साथ जुड़े समूह के pKa 8.6 प्लस या मिस 0.3 है। एक रासायनिक रूप से सक्षम एसीटीएल-टीओएनजेम सेफैडेक्स गैल फ़िल्टरिंग द्वारा अलग किया जा सकता है। मस्तिष्क और प्लेटेंटा से एंजाइम अब तक शारीरिक और जैव रसायनिक रूप से अलग नहीं होते हैं।
एसिड सॉल्वेंट्स में क्लोराइड द्वारा ferricytochrome c की ग्लोबल संरचना की स्थिरता। क्लोराइड की बढ़ती एकाग्रताओं को ferricytochrome c के एसिडिंग से जुड़े दो दृश्य अवशोषण स्पेक्ट्रल संक्रमणों के बीच संकल्प को बढ़ाने के लिए पाया गया था विभिन्न स्पेक्ट्रल और विस्कोसता मापों का विश्लेषण इंगित करता है कि 2.1 +/- 0.2 की स्पष्ट पीके और लगभग 5.3 की आंतरिक पीके के साथ एक समूह के प्रोटोनिंग ने मूल ग्लोबल कॉन्फ़िगरेशन को काफी हस्तक्षेप किए बिना मेथियोनिन लीगेंड को हटा दिया। Methylated ferricytochrome c के विश्लेषण से पता चलता है कि एक carboxylate आयन के प्रोटोनेशन, सबसे अधिक संभावना है एक हेम propionate शेष, methionine ligand के विस्थापन के लिए जिम्मेदार है। एक प्रोटॉन को एक दूसरे समूह में जोड़ना जिसमें 1.2 +/- 0.1 की स्पष्ट पीके है, हिस्टिडिन लीगैंड को स्थानांतरित करता है और प्रोटीन को एक ग्लोबल कॉन्फ़िगरेशन से एक यादृच्छिक सिलेंडर में खोल देता है। यह सबसे अधिक संभावना है कि दूसरा प्रोटोनेशन हिस्टिडिन लीगैंड के इमिडाज़ोल अंगूठी पर होता है। क्लोराइड को हेम आयन के पांचवें समन्वय स्थिति में लिगेशन द्वारा इन संक्रमणों को बाधित करने के लिए प्रस्तावित किया जाता है। इस तरह का गठबंधन 0.0 और 25 डिग्री के पीएच पर ferricytochrome c की ग्लोबल कॉन्फ़िगरेशन को स्थिर करता है।
प्रोटीन में अकेले कार्य समूहों के रासायनिक गुणों को निर्धारित करने के लिए एक प्रतिस्पर्धी लेबलिंग विधि। एक प्रोटीन में कार्यात्मक समूहों की गुणों का उपयोग प्रोटीन की संरचना के अंतर्निहित नमूने के रूप में किया जा सकता है। हमने एक सामान्य प्रक्रिया विकसित की है जिसके माध्यम से प्रोटीन में अकेले कार्य समूहों की आयनशीलता निरंतरता और रासायनिक प्रतिक्रियाशीलता निर्धारित की जा सकती है। इस विधि को हिस्टिडिन, टाइरोसिन, लिसिन, और सिस्टीन के साइड चेन पर लागू किया जा सकता है, साथ ही प्रोटीन के एमिनो टर्मिनस पर भी। विधि, जो दोहरी लेबलिंग प्रक्रिया में [3H]- और [14C]1-फ्लोरो-2,4-डिनिट्रोबेंजेन (N2ph-F) का उपयोग करने वाली प्रतिस्पर्धी लेबलिंग तकनीक का विस्तार है, तेजी से और संवेदनशील है। फायदा इस तथ्य से लिया जाता है कि एक dinitrophenylated प्रोटीन के एसिड हाइड्रोलिसिस के बाद, एक उत्प्रेरक प्राप्त किया जाता है जिसे प्रोटीन में एक अद्वितीय स्थान से प्राप्त किया जाना चाहिए। इस विधि को lysozyme, alpha-lytic protease, और Streptomyces griseus (S.G.) trypsin के एकल हिस्टीडिन अवशेष पर लागू किया गया है, साथ ही साथ बाद के प्रोटीन के एमिनो टर्मिनस पर। N2ph-F के साथ 20 डिग्री सेल्सियस में 0.1 N KCl में प्रतिक्रिया के लिए निम्नलिखित पैरामीटर प्राप्त किए गए थे: 0.188 M-1 मिनट-1 की दूसरी रेंज गति स्थिर के 6.4 pKa और 6.235 M-1 मिनट-1 की दूसरी रेंज गति स्थिर के Histidine, S.G. trypsin के histidine, 6.5 pKa और 0.0328 M-1 मिनट-1 की दूसरी रेंज गति स्थिर; S.G. trypsin के valyl amino terminus, 8.1 pKa और 0.403 M-1 मिनट-1 की दूसरी रेंज गति स्थिर के pKa। इसके अतिरिक्त, प्राप्त परिणाम इन कार्यात्मक समूहों के माइक्रो-अंतरिक्ष के बारे में सूचकांक प्रदान करते हैं, और इंगित करते हैं कि अध्ययन किए गए प्रोटीन पीएच-आधारित अनुरूप परिवर्तनों का सामना करते हैं जो माइक्रो-अंतरिक्ष को प्रभावित करते हैं, और इस प्रकार इन समूहों की रासायनिक प्रतिक्रियाशीलता।
प्रोटीन में आर्जिनिन और लिसिन का परिवर्तन 2,4-पेंटानेडिओन के साथ। प्राथमिक अमीन पीएच 6-9 पर 2,4-पेंटानेडिओन के साथ प्रतिक्रिया करते हैं, एनिमिन, एन-अल्कील-4-एमिनो-3-पाेंटाइन-2-ओन्स बनाते हैं। बाद के यौगिक आसानी से कम पीएच पर या हाइड्रोक्सालामाइन के साथ उपचार पर प्राथमिक एमिन को पुनर्जीवित करते हैं। गुआनिडिन और प्रतिस्थापित गुआनिडिन 2,4-पेंटानेडिओन के साथ प्रतिक्रिया करते हैं ताकि N- प्रतिस्थापित 2-एमिनो-4,6-डिमेथाइलपिरिमिडिन बन जाएं, जो प्राथमिक एमिन के साथ 2,4-पेंटानेडिओन की प्रतिक्रिया दर की तुलना में कम से कम एक कारक 20 से कम है। प्रोटीन में लिसिन और आर्जिनिन साइड चेनों की चुनिंदा संशोधन आसानी से 2,4-पेंटानेडिओन के साथ प्राप्त किया जा सकता है। लिसिन के परिवर्तन को पीएच 7 पर प्रतिक्रिया या पीएच 9 पर संक्षिप्त प्रतिक्रिया समय द्वारा फायदेमंद किया जाता है। आर्जिनिन का चुनिंदा संशोधन 2.4-pentanedione के साथ लंबे समय तक पीएच 9 पर प्रतिक्रिया द्वारा प्राप्त किया जाता है, जिसके बाद प्रोटीन को हाइड्रोक्सालामाइन के साथ इलाज किया जाता है। लिसिन और आर्जिनिन साइड श्रृंखलाओं के परिवर्तन की सीमा को आसानी से स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मापा जा सकता है। पीएच 7 पर 2.4-पेंटानेडिओन के साथ लिज़ोइम के परिवर्तन में 3.8 लिसिन अवशेषों और 24 घंटे में 0.4 से कम अर्जिनिन अवशेषों का परिवर्तन होता है। पीएच 9 पर 2,4-pentanedione के साथ lysozyme के परिवर्तन में 4 lysine शेषों और 4.5 arginine शेषों को 100 घंटे में संशोधित करने का परिणाम है। इस संशोधित प्रोटीन के हाइड्रोक्सालामाइन के साथ उपचार ने संशोधित लिसिन अवशेषों को पुनर्जीवित किया, लेकिन संशोधित आर्जिनिन अवशेषों में कोई परिवर्तन नहीं हुआ। एक आर्जिनिन अवशेष एंजाइम की कैलाइटिक गतिविधि के लिए आवश्यक लग रहा है।
Pepsinogen के अल्कोहल अस्तित्व की उत्पत्ति। पीएच 8.5 से ऊपर, पेप्सिनोजेन को एक रूप में परिवर्तित किया जाता है जो कम पीएच के संपर्क में पेप्सिन में सक्रिय नहीं किया जा सकता है। मध्यवर्ती पीएच के संपर्क में, हालांकि, प्रोटीन को एक रूप में वापस करता है जिसे सक्रिय किया जा सकता है। नमूना में एक प्रतिस्थापित, छोटे अनुरूप परिवर्तन के लिए सबूत प्रस्तुत किया जाता है, जो प्रोटीन के विस्तार से अलग है। उसी समय, अणु को सीमित घुलनशीलता का एक रूप में परिवर्तित किया जाता है, जो कम पीएच पर गिर जाता है, जहां सक्रियण आमतौर पर देखा जाता है। परिणामों को पेप्सिनोजेन अणु की विशिष्ट संरचना के संदर्भ में व्याख्या की जाती है। बुनियादी एनएच 2 टर्मिनल क्षेत्र का टाइटरेशन एक खुले रूप का उत्पादन करता है, जो तटस्थ पीएच पर मूल रूप में वापस जा सकता है, लेकिन पेप्सिन भाग में कार्बोहाइलाइट समूहों के तटस्थकरण द्वारा कम पीएच में बनाए रखा जाता है।
गायों के लिवर dihydrofolate reductase: एंजाइम की शुद्धिकरण और गुण। एक शुद्धीकरण प्रक्रिया 100-200 मिलीग्राम की मात्रा में उच्च उत्पादकता और मात्रा में bovine liver dihydrofolate reductase प्राप्त करने के लिए रिपोर्ट की गई है। प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण कदम सेफोरोस के लिए pteroyl-L-लिसिन को जोड़कर तैयार एक रिश्तेज गेल का उपयोग है। शुद्ध रेडुडुक्टाज में लगभग 100 इकाइयों / मिलीग्राम की विशिष्ट गतिविधि होती है और विश्लेषणात्मक अल्ट्रासेंटीफुगेशन, पॉलीएक्रिलेमाइड गैल इलेक्ट्रोफोरेसिस, और मेटोट्रेक्साट के साथ टाइटरिंग द्वारा न्याय किया जाता है। एडमैन विघटन के पहले चरण के उत्पादों ने न्यूनतम शुद्धता का संकेत दिया 79%. एमिनो एसिड की संरचना के आधार पर रेड्यूक्टास का एक अणु वजन लगभग 21500 है और 22100 +/- 300 संतुलन निचोड़ से है। यह Streptococcus faecium reductase (isoenzyme 2) के लिए एंटीसेरियम द्वारा अवरुद्ध नहीं होता है। कई अन्य vertebrate ऊतकों की रेडुक्टास के विपरीत, bovine एंजाइम को सक्रिय करने के बजाय mercurials द्वारा अवरुद्ध किया जाता है और यह कम और उच्च आयन शक्ति दोनों पर एकल पीएच इष्टतम है। हालांकि, पीएच इष्टतम की स्थिति बदल जाती है और आयन शक्ति में वृद्धि के कारण गतिविधि बढ़ जाती है। स्वचालित एडमैन विघटन का उपयोग एमिनो-टर्मिनल 37 एमिनो एसिड शेषों में से 34 को निर्धारित करने के लिए किया गया है। इस क्षेत्र और S. faecium और Escherichia coli से संबंधित क्षेत्रों के बीच काफी समलैंगिकता मौजूद है। यह इस विचार को मजबूत करता है कि यह क्षेत्र dihydrofolate के लिए बंधन साइट की संरचना में योगदान देता है।
Escherichia coli dihydrofolate reductase के शुद्धिकरण और गुण। Dihydrofolate reductase को एक प्रक्रिया का उपयोग करके Escherichia coli (RT 500) के एक trimetoprim प्रतिरोधी स्टेम से 40 गुना स्पष्ट समलैंगिकता के लिए शुद्ध किया गया है जिसमें methotrexate affinity column chromatography शामिल है। एंजाइम के अमीनो एसिड संरचना, निचोड़ गति, और सोडोजेलिक सल्फेट गेल इलेक्ट्रोफोरेसिस के आधार पर अमीनो एसिड के अणु वजन का निर्धारण 17680, 17470 और 18300 के मूल्यों को दिया। एक कम विशिष्ट गतिविधि वाले एंजाइम का एक aggregated रूप गैल फ़िल्टरिंग द्वारा मोनोमेर से अलग किया जा सकता है; मेक्सेप्टोएथेनॉल या डायथियोट्रेइटोल के साथ aggregate का उपचार एंजाइम गतिविधि में वृद्धि और मोनोमेर के पुनर्जन्म का परिणाम देता है। इसके अलावा, मोनोमेर के कई अणुकार्ड रूपों को पॉलीएक्रेलैमाइड गैल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा पता चला गया है। अस्थिर एंजाइम दो पीएच ऑप्टामा (पीएच 4.5 और पीएच 7.0) का प्रदर्शन करता है, जिसमें डायहाइड्रोफोलैट एक आधार के रूप में होता है। उच्चतम गतिविधि उन बफरों में देखी जाती है जिनमें बड़े कार्बनिक कैटियन्स होते हैं। 100 mM imidazolium क्लोराइड (पीएच 7) में, विशिष्ट गतिविधि dihydrofolate प्रति मिनट प्रति मिलीग्राम 30 डिग्री पर कम 47 mumol है। फोलिक एसिड एक आधार के रूप में भी काम करता है जिसमें एकल पीएच इष्टतम 4.5 है। इस पीएच पर, फोलैट के लिए Km 16 muM है, और Vmax डायहाइड्रोफोलैट के रूप में आधार के रूप में देखे गए दर का 1/1000 है। Monovalent कैशन (Na+, K+, Rb+, और Cs+) dihydrofolate reductase को अवरुद्ध करते हैं; एक निश्चित आयन ताकत पर अवरुद्धता की डिग्री कैशन के आयन रेडियो का एक कार्य है। Divalent कैशन अधिक शक्तिशाली अवरोधक हैं; BaCl2 का I50 250 mM है, KCl के लिए 125 mM की तुलना में। Anions न तो एंजाइम को रोकते हैं और न ही सक्रिय करते हैं।
ट्रिओसेफोस्फेट इज़ोमेरास के साथ अवरोधकों के बातचीत पर पीएच के प्रभाव और सक्रिय साइट कार्बॉक्सील समूह के पीके का निर्धारण। संभावित संक्रमण राज्य analogs 2-phosphoglycolate और 2-phosphoglycolohydroxamate को बाध्य करने पर आयनशीलता प्रभाव खुद लीगैंडों के आयनशीलता की स्थिति में परिवर्तन के कारण होने लगता है, इसलिए त्रियोसेफोस्फेट इज़ोमेरास के सक्रिय स्थान पर एक आयनशीलता अवशेष के अतिरिक्त भागीदारी का अनुमान लगाने के लिए तटस्थ सीमा में कि पर पीएच परिवर्तन के प्रभाव को समझाने के लिए आवश्यक नहीं है। प्रतिस्पर्धी प्रतिबंधक अनियमित सल्फेट का बंधन तटस्थ सीमा में पीएच में परिवर्तन के प्रति असहज है। 3-Chloroacetol सल्फेट, triosephosphate isomerase के लिए एक सक्रिय साइट-विशिष्ट रिएजेंट के रूप में संश्लेषित किया जाता है, इस एंजाइम के आवश्यक carboxyl समूह के pKa का संकेत देने के लिए उपयोग किया जाता है। पहले वर्णित सक्रिय-स्थानीय-विशिष्ट इज़ोमेरास के लिए रिएक्टर फॉस्फेट एस्टर थे, और उनके ionization की स्थिति में परिवर्तन (सक्रिय स्थल के लिए उनके अनुकूलता में संभावित परिवर्तनों के साथ) आवश्यक कार्बोसाइल समूह के pKa निर्धारित करने के पहले प्रयासों को जटिल कर सकते हैं inactivation दर के पीएच निर्भरता से। एक मजबूत मोनोप्रोस्टिक एसिड होने के कारण, क्लोरोएसेटॉल सल्फेट कार्बोसाइल समूह के पीके के निर्धारण के लिए बेहतर उपयुक्त है। Chloroacetol sulfate triosephosphate isomerase को पहले वर्णित फॉस्फेट एस्टर द्वारा esterified के रूप में एक ही carboxyl समूह के चुनिंदा esterification द्वारा inactivates। जीवाश्म ट्रिओसेफोस्फेट इज़ोमेरेस की अस्थिरता दर के पीएच पर निर्भरता से, सक्रिय साइट कार्बोसाइल समूह के स्पष्ट पीके का अनुमान 3.9 +/- 0.1 है।
Monoanion अवरोध और renal dipeptidase के 35Cl परमाणु चुंबकीय संवेदना अध्ययन। 5.88 MHz पर monoanion अवरोध और 15Cl परमाणु चुंबकीय संवेदना के सिनेटिक विश्लेषण को जिंक धातु एंजाइम, renal dipeptidase के साथ monoanion बातचीत का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। glycyldehydrophenylalanine के एंजाइम-कैटलीकृत हाइड्रोलिसिस में प्रतिस्पर्धी अवरोध होता है जब प्रतिक्रिया दर को monovalent anions fluoride, chloride, bromide, iodide, azide, nitrate, या thiocyanate की उपस्थिति में निर्धारित किया गया था या divalent anion, sulfate जोड़ने पर। इन एनीओन्स द्वारा प्रतिस्पर्धी अवरोध पैदा किया गया था। एक एनीओन एक एंजाइम अणु के लिए बाध्य था, और फ्लोराइड के मामले को छोड़कर सभी एनीओन एक ही स्थान पर बाध्य होने लगते थे। सायनाइड आयन ने अन्य मोनोआयनों की तुलना में रेनल डाइपेप्टाडासा की एक बहुत अधिक प्रभावी अवरोध का उत्पादन किया, और यह दिखाया गया कि दो सायनाइड आयन एंजाइम अणु प्रति जुड़े हुए थे। monoanion अवरोध पर पीएच के प्रभाव की एक जांच ने सुझाव दिया कि anion inhibitors एक pK के बारे में 7.8 के साथ समूह से जुड़ते हैं। इस समूह के पूर्ण विघटन (लगभग पीएच 8.4) एनीओन के अवरोधक प्रभाव को समाप्त करता है। 0.5 M NaCl समाधानों में रेनल डाइपेप्टाडासा द्वारा उत्पादित 35Cl लाइन विस्तार aquozinc(II) के बराबर एकाग्रताओं द्वारा उत्पादित 100 गुना अधिक प्रभावी था। लाइन का विस्तार धातु एंजाइम की एकाग्रता पर निर्भर था और उत्तेजक विकिरण की आवृत्ति से स्वतंत्र था। जब धातु एंजाइम से जिंक आयन को डायलिसिस द्वारा हटा दिया गया था या जब क्लोराइड को धातु एंजाइम से साइनाइड द्वारा टाइटर किया गया था, तो लाइन का विस्तार कम हो गया था। प्रतिस्पर्धी अवरोधक, गुआनोसिन ट्रिफॉस्फेट के संतृप्त एकाग्रताओं के साथ रेनल डाइपेप्टाडाज का उपचार, 0.5 M NaCl की उपस्थिति में भी 35Cl लाइन चौड़ाई में एक महत्वपूर्ण कमी का उत्पादन किया। renal dipeptidase द्वारा उत्पादित 35Cl लाइन के विस्तार को 5.8-10.8 के रेंज के माध्यम से बढ़ते पीएच के साथ कम होने के लिए दिखाया गया था। पीएच के साथ लाइन चौड़ाई में यह बदलाव 7.4 के अनुमानित पीके के साथ धातु प्रोटीन पर एक साइट के टाइटरेशन के परिणाम के रूप में दिखाई दिया। क्लोराइड और सायनाइड अवरोधकों की उपस्थिति में धातु एंजाइम द्वारा 35Cl लाइन के विस्तार के तापमान अध्ययन से पता चलता है कि तेजी से विनिमय प्रक्रिया शामिल है और कि प्रचलित रिहाई तंत्र प्रकृति में चौथापोल है।
हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ bovine erythrocyte superoxide dismutase के बातचीत: एंजाइम की निष्क्रियता। bovine erythrocyte superoxide dismutase धीरे-धीरे और अपरिवर्तनीय रूप से हाइड्रोजन पेरोक्साइड द्वारा निष्क्रिय किया गया था। इस अस्थिरता की दर सीधे दोनों H2O2 और एंजाइम की एकाग्रताओं पर निर्भर थी, और पीएच 10.0 और 25 डिग्री पर इसकी दूसरी रेंज दर स्थिरता 6.7 M-1 सेकंड-1 थी। निष्क्रियण को एंजाइम पर क्यू 2 + की तेजी से कमी के कारण सफेद होने से पहले किया गया था, और इसके बाद दृश्य क्षेत्र में एक नए अवशोषण का धीरे-धीरे पुनरावृत्ति हुई, जो कैलाइटिक गतिविधि के नुकसान के साथ समाप्त हुआ। एंजाइम की अस्तित्वहीनता पीएच पर निर्भर थी और एक आवश्यक आयनशीलता का संकेत देती थी, जिसका पीकआ लगभग 10.2 था। H2O को D2O के साथ प्रतिस्थापन ने इस pKa को बढ़ाया, लेकिन superoxide dismutase की कैलाइटिक गतिविधि को कम नहीं किया, जो pH 10.0 पर मापा गया था। एक्संटिन, यूरेट, फॉर्मेट, और एसिड सहित कई यौगिकों ने एंजाइम को एच 2 ओ 2 द्वारा अवरुद्ध होने से बचाया। अल्कोहल और बेंज़ोएट, जो हाइड्रोक्सिल रेडिक को काटते हैं, की रक्षा नहीं की। Singlet ऑक्सीजन के लिए विशेष अनुकूलता वाले यौगिक समान रूप से अप्रभावी थे। डेटा को एंजाइम से जुड़े Cu2+ को H2O2 द्वारा Cu+ में कम करने के संदर्भ में व्याख्या किया गया था, जिसके बाद अतिरिक्त H2O2 के साथ Cu+ के एक Fenton प्रकार के प्रतिक्रिया का पालन किया गया था। इससे Cu2+-OH- या इसके आयनशील समकक्ष, Cu2+-O-- उत्पन्न होगा, जो फिर एक पड़ोसी हिस्टिडिन पर ऑक्सीकरणिक रूप से हमला कर सकता है और इस प्रकार एंजाइम को निष्क्रिय कर सकता है। यौगिक जो एंजाइम की रक्षा करते थे, उन्हें बंधे ऑक्सीडेंट के साथ प्रतिक्रिया करके किया जा सकता था, जो पड़ोसी हिस्टिडिन के साथ प्रतिस्पर्धा कर रहा था।
टाइप III pneumococcal polysaccharide के लिए homogeneous एंटीबॉडी के सर्कल dichroism और fluorescence अध्ययन। तीन homogeneous anti-type III pneumococcal एंटीबॉक्स के लगभग ultraviolet सर्कल डायक्रोसिस (सीडी) की अनुपस्थिति और विशिष्ट हेक्सासैकराइड लीगैंड की उपस्थिति में अध्ययन किया गया था। इसके अतिरिक्त, दो इन एंटीबॉडी से प्राप्त एच और एल श्रृंखलाओं के पुनर्गठन और हाइब्रिडेशन किए गए थे और बंधे और मुक्त पुनर्निर्माण IgG अणुओं के सीडी स्पेक्ट्रम का माप किया गया था। परिणाम बताते हैं कि 260-310 एनएम रेंज में मूल एंटीबॉडी के सीडी स्पेक्ट्रम आकार और संकेत में बहुत समान हैं और 285 एनएम पर एक सकारात्मक बैंड दिखाते हैं। समलैंगिक पुनर्निर्माण एंटीबायोटिक अणुओं में सीडी स्पेक्ट्रम बहुत आकार में और मूल एंटीबायोटिक अणुओं के अणुओं के समान हैं, हालांकि पुनर्गठनशील अणुओं को अब इंटरचेन डिस्ल्फिड बंधनों द्वारा स्थिर नहीं किया जाता है। हेक्सासासैकराइड लीगैंड को जोड़ने के बाद, सीडी स्पेक्ट्रम (18-21%) की amplitude में एक महत्वपूर्ण गिरावट सभी तीन मूल एंटीबायोटिक्स और उनके फैब टुकड़ों में, साथ ही साथ homologous recombinant अणुओं में हुई। कोई सीडी स्पेक्ट्रल परिवर्तन hapten ligand के heterologous recombinants के साथ बातचीत पर पता लगाया जा सकता था। अध्ययन किए गए सभी समलैंगिक एंटीबायोटिक्सों ने ओलिगोसाक्रिड बंधन और उत्सर्जन अधिकतम के नीले स्विच पर फ्लोरोसेंस को समाप्त करने का प्रदर्शन किया। इस संपत्ति ने एक चयनित एंटीबॉडी के बाध्यकारी निरंतर का निर्धारण करने की अनुमति दी। एक साथ लिया गया, सीडी और फ्लोरोसेंस स्पेक्ट्रोस्कोपिक डेटा से पता चलता है कि ओलिगोसाक्रिड लिगैंड एंटीबॉडी के Fab टुकड़े में पता लगाने योग्य कॉन्फार्मेशनल परिवर्तनों को उत्तेजित करते हैं।
एक homogeneous anti-type III pneumococcal एंटीबॉक्स में बढ़ते आकार के ओलिगोसाक्रिड द्वारा प्रेरित कॉन्फार्मेशनल परिवर्तन। ट्रिप्टोफान अवशेषों द्वारा उत्सर्जित चक्र ध्रुवीकरण (सीपीएल) का उपयोग एक समग्र टाइप III pneumococcal एंटीबॉक्स में लिगैंड-इंडुलेक्ट्रिक परिवर्तनों को मापने के लिए एक संवेदनशील सेंसर के रूप में किया गया था। आंशिक एसिड हाइड्रोलिसिस द्वारा प्रकार III पॉलीसाक्रिड से उत्पन्न बढ़ते आकार के ओलिगोसाक्रिड लीगेंड्स की एक श्रृंखला का परीक्षण किया गया था। एंटीबॉडी की फ्लोरोसेंस की सर्कल पॉलीरेजेशन में लीगैंड-इंडेड परिवर्तनों को सभी परीक्षण किए गए एंटीबॉडी के लिए देखा गया था, जिसमें tetra-, hexa-, और octasaccharides और एक 16 शेष oligomer शामिल थे, जिनमें से सबसे बड़े परिवर्तनों को असंगत घुलनशील प्रकार III pneumococcal (SIII) पॉलीसाकराइड के साथ बातचीत पर रिकॉर्ड किया गया था। जब Fab' या F(ab')2 टुकड़ों का उपयोग एंटीबॉडी IgG के बजाय SIII पॉलीसाकराइड को बाध्य करने के लिए किया गया था, तो कॉन्फ़ोनेशनल परिवर्तनों का स्तर कम हो गया था। यह IgG अणु में Fab और Fc भागों के बीच बातचीत और एंटीजन बंधन पर Fc भाग में बाद के अनुकूल परिवर्तनों का सुझाव देता है। Interchain disulfide बंधनों की कमी ने Fc भाग के लिए जिम्मेदार अतिरिक्त स्पेक्ट्रल परिवर्तनों को समाप्त कर दिया, लेकिन Fab भाग में देखा गया परिवर्तनों को नहीं, इस प्रकार यह सुझाव दिया कि उच्चतम CPL परिवर्तनों के लिए बंधन क्षेत्र में interchain disulfide बंधन की उपस्थिति की आवश्यकता होती है। छोटे monovalent ligands, अर्थात्, tetra-, hexa-, और octasaccharides, एंटीबॉडी अणु के Fab हिस्से में CPL परिवर्तनों को उत्तेजित करने में सक्षम थे, साथ ही साथ Fc हिस्से के लिए जिम्मेदार CPL परिवर्तन। लगभग 16 चीनी अवशेषों को शामिल करने वाले एक मल्टीवेलेंट लीगैंड Fc भाग के लिए निर्धारित कॉन्फ्रेंस परिवर्तनों को उत्तेजित करने के लिए आवश्यक न्यूनतम एंटीजन आकार के रूप में दिखता है, जो पूरे पॉलीसाकराइड एंटीजन के साथ बातचीत में देखा जाता है।
50S ribosomal प्रोटीन के कई सक्रिय साइटों में शामिल होने का सबूत। Bacillus stearothermophilus 50S ribosomal प्रोटीन B-L3 (Escherichia coli प्रोटीन L2 के साथ संभवतः समलैंगिक) की कार्यक्षमता का परीक्षण रासायनिक संशोधन द्वारा किया गया था। जटिल [B-L3-23S आरएनए] गुलाब बेंगलल की उपस्थिति में फोटोऑक्साइड किया गया था और अनुकूलित प्रोटीन 50S रिबोजोम उप-यूनिट में पुनर्गठन द्वारा शामिल किया गया था जिसमें सभी अन्य अपरिवर्तित घटक शामिल थे। फोटोऑक्साइड B-L3 सामग्री वाले कण कई कार्यात्मक परीक्षणों में दोषपूर्ण हैं, जिनमें (1) पॉली (यू) निर्देशित पॉली (पीई) संश्लेषण, (2) पेप्टिडील ट्रांसफरस गतिविधि, (3) एक [30 एस-पोली (यू)-पीई-टीआरएनए] जटिल के साथ जुड़ने की क्षमता, और (4) लंबीकरण कारक जी और जीटीपी का बंधन शामिल है। B-L3 के फोटोऑक्सिडेशन के दौरान आंशिक कार्यात्मक गतिविधियों के नुकसान की दरों से पता चलता है कि कम से कम दो स्वतंत्र निष्क्रियण घटनाएं होती हैं, एक तेजी से एक, एक या अधिक हिस्टिडिन अवशेषों के ऑक्सीकरण को शामिल करता है, पेप्टिडील ट्रांसफरैस और उप-यूनिट एसोसिएशन गतिविधियों को प्रभावित करता है और एक धीमी एक जो एफ-जी बंधन को प्रभावित करता है। इसलिए, प्रोटीन बी-एल 3 में एक या अधिक हिस्टिडिन अवशेष होते हैं जो पेप्टिडील ट्रांसफरैस और उप-यूनिट एसोसिएशन के लिए आवश्यक होते हैं, और एक अन्य अवशेष जो एफ-जी-जीटीपी बंधन के लिए आवश्यक होता है। B-L3 रिबोजोमल पेप्टाइड्रेंस प्रोटीन हो सकता है, या सक्रिय साइट का हिस्सा हो सकता है, और अन्य सक्रिय साइटों के लिए कार्यात्मक समूह भी योगदान कर सकता है।
Phospholipase A2 micellar इंटरफ़ेस के साथ बातचीत। N-टर्मिनल क्षेत्र की भूमिका। सूअरों के पेट्रोकराइट फॉस्फोलिपेस ए 2 में पहले अनुमानित इंटरफेस पहचान साइट (आईआरएस) की स्थानिकता, जो एंजाइम और संगठित लिपिड-पानी इंटरफेस के बीच विशिष्ट बातचीत के लिए आवश्यक है, को अल्ट्रासाउंड अंतर स्पेक्ट्रोस्कोप द्वारा, अद्वितीय Trp अवशेष की आंतरिक फ्लोरोसेंस का माप करके, और विशिष्ट ट्राप्टिक हाइड्रोलिसिस के खिलाफ सुरक्षा प्रयोगों द्वारा जांच की गई थी। एंजाइमिक रूप से अपरिवर्तनीय सब्सक्रेट एनालॉग का उपयोग करते हुए: CnH(2n+1)(0-)OOCH2CH2N+(CH3)3-(H,OH), यह दिखाया गया है कि एंजाइम की अपेक्षाकृत हाइड्रोफोबिक एन-टर्मिनल अनुक्रम, अर्थात्, Ala-Leu-Trp-Gln-Phe-Arg, सीधे लिपिड-पानी इंटरफ़ेस के साथ बातचीत में शामिल है। हाइड्रोफोबिक के अलावा शायद ध्रुवीय बातचीत भी बंधन प्रक्रिया में योगदान देती है। तटस्थ या एसिड पीएच पर, एन-टर्मिनल अल्फा-एनएच 3+ समूह और एक नकारात्मक चार्ज वाली साइड चेन के बीच एक नमक पुल की उपस्थिति इंटरफ़ेस पहचान साइट को स्थिर करती है और एंजाइम को मिसिलर सतहों में प्रवेश करने की अनुमति देती है, यहां तक कि धातु आयन की अनुपस्थिति में। अल्कोहल पीएच पर, मिसिलर इंटरफेस के साथ एंजाइम के बातचीत में Ca2+ (Ba2+) आयनों की उपस्थिति की आवश्यकता होती है।
Phospholipase A2 erythrocyte membranes में phospholipid वितरण का एक sonde के रूप में। प्रतिक्रिया की स्पष्ट विशिष्टता को प्रभावित करने वाले कारक। हथियार जहर फॉस्फोलिपेस ए 2 का संक्रमित मानव erythrocytes में कार्य विस्तार से जांच की गई थी। Agkistrodon halys blomhifii से आधार फॉस्फोलिपेस को माना जाता है कि कुछ प्रयोग की शर्तों के तहत मेम्ब्रेन फॉस्फोलिपिड हाइड्रोलिसिस और कुल कोशिका हेमोलिसिस दोनों को उत्तेजित करता है। बुनियादी एंजाइम का हाइड्रोलिक कार्य दो अनुक्रमित घटनाओं में शामिल होने के लिए पाया गया था: (a) कुल कोशिका ph के 70% का हाइड्रोलिसिस बिना किसी स्पष्ट हेमोलिसिस के; और (b) शेष फॉस्फेटिडिलकोलिन का पूर्ण हाइड्रोलिसिस, विस्तारित फॉस्फेटिडिलथेनोलैमिन हाइड्रोलिसिस और अंततः हेमोलिसिस की शुरुआत के साथ, फॉस्फेटिडिलसेरिन पर हमला। पीएच 7.4 और 10 एमएम Ca2+ पर केवल चरण (ए) हुआ। हालांकि, इंक्यूबेशन के पीएच को pH 8.0 तक थोड़ा बढ़ाया और / या प्रतिक्रिया मिश्रण में 40 mM Ca2 + को शामिल किया गया, जिससे दोनों घटनाएं (ए) और (बी) होती हैं। ग्लूकोज की खुराक किसी भी प्रतिक्रिया की स्थितियों में एंजाइम के कार्य को चरण (ए) तक सीमित करती है। एक जांच से पता चला कि एंजाइम-इंडुक्वेड हेमोलिसिस उन स्थितियों में होता है जहां इंट्रासेल्युलर एटीपी के स्तर को कम किया जाता है। डेटा प्रस्तुत किए जाते हैं जो सुझाव देते हैं कि चरण (बी) को एटीपी के स्तर कम होने पर सेल में Ca2+ के प्रवाह द्वारा मध्यस्थ किया जाता है। दिलचस्प बात यह है कि Naja naja जहर (पाकिस्तान) से फॉस्फ्ललिपेज ने Agkistrodon जहर से बुनियादी एंजाइम के साथ देखे गए परिणामों के समान परिणाम दिए। हालांकि, Crotalus adamanteus से एंजाइम और Agkistrodon जहर में भी मौजूद एसिड एंजाइम ने अध्ययन किए गए किसी भी स्थितियों में केवल हल्के हाइड्रोलिसिस या हेमोलिसिस का उत्पादन किया। अन्य प्रकार के erythrocytes, उदाहरण के लिए, गीनू सूअर, बंदर, सूअर, और चूहों, परीक्षण किया गया था, लेकिन केवल गीनू सूअर से उन लोगों ने मानव कोशिकाओं के समान व्यवहार किया। सूअर, बंदर, और चूहों के erythrocytes बहुत सीमित हाइड्रोलिसिस और हेमोलिसिस के अधीन थे। यह स्पष्ट है कि एरिट्रोसाइट झिल्ली में फॉस्फोलिप्ट्स के स्थानीयकरण का निरीक्षण करने के लिए इन फॉस्फोलिपैसों का उपयोग सावधानी से किया जाना चाहिए। इस समस्या के कुछ पहलुओं पर चर्चा की जा रही है।
जीवाश्म glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase में Subunit बातचीत। जीवाश्म glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase की स्वचालित अस्थिरता एक साधारण दो राज्य मॉडल में pH 8.5 और 25 डिग्री में फिट होने के लिए पाया गया था। पहला कदम tetramer की तुलना में तेजी से विघटन है dimers के साथ संतुलन काफी तेजी से tetramer के पक्ष में है। एनएडी + की अनुपस्थिति में, डिमर अपरिवर्तनीय रूप से निष्क्रिय हो जाता है। एपोइंजाइम काफी स्थिर है और पूर्ण गतिविधि हानि के लिए आधा जीवन एंजाइम की वर्ग जड़ एकाग्रता के अनुपात के साथ है। प्रोटीन संरचना के विकार (पीएच, आयन ताकत, और विशिष्ट नमकों द्वारा), जो अणु के टेट्रैमेरिक राज्य पर कोई प्रभाव नहीं रखते हैं, एनएडी + बंधन की सहभागिता, सक्रिय साइट सल्फहाइड्रिल समूह की प्रतिक्रियाशीलता और एंजाइम की कैलाइटिक गतिविधि में बदलाव का कारण बनते हैं। चार सक्रिय साइट सल्फहाइड्रेल समूहों में से दो के कोवेंट परिवर्तन में एंजाइम गतिविधि पर गहन प्रभाव होता है जो उप-यूनिट बातचीत में परिवर्तनों द्वारा मध्यस्थ होते हैं। sedimentation विश्लेषण और hybridization अध्ययन से पता चलता है कि साउंडयूनिट के बीच बातचीत covalent परिवर्तन के बाद मजबूत रहता है। सामान्य शारीरिक और संतुलन डायलिसिस स्थितियों में, प्रोटीन एक टेट्रैमर है। 8.5 और 25 डिग्री के पीएच पर एंजाइम से जुड़े NAD + के संतुलन डायलिसिस अध्ययन एक मिश्रित सहयोगीता पैटर्न प्रकट करते हैं। इन अवलोकनों और देखे गए आधे-द-से-स्थलों की प्रतिक्रियाशीलता के साथ संगत एक मॉडल लिगैंड-इंडुडेड सिग्नल कॉन्फ़िगरेशनल परिवर्तनों का है जो मजबूत रूप से बातचीत करने वाले उप-यूनिट डोमेनों पर स्थानांतरित होते हैं। नकारात्मक सहयोगी बंधन पैटर्न को denatured एंजाइम और कई प्रजातियों के मिश्रणों से अलग करने के तरीकों पर चर्चा की जाती है।
Lumbricus terrestris से हेमोग्लोबिन के विघटन के बारे में सिनेटिक प्रकाश फैलाव अध्ययन। Lumbricus terrestris से 3 X 10(6) mol wt हेमोग्लोबिन के pH-induced dissociation के किनिटिक का अध्ययन किया गया है (मृत्युमक्खियों) एक रोशनी को फैलाने-स्टॉप-प्रवाह उपकरण में किया गया है। लिगैंड निर्भर विघटन डेटा एक सरल अनुक्रमिक मॉडल द्वारा अच्छी तरह से फिट थे। सीओ और ऑक्सीहेमोग्लोबिन के लिए डेटा Hb12 के साथ संगत है 2Hb6 12Hb के लिए नेतृत्व करता है। पीएच 7 पर मेथोमोग्लोबिन हेक्सैमेरिक दिखता है और विघटन मॉडल के अनुरूप है: एचबी 6 6एचबी का कारण बनता है। एक अनुक्रमिक विघटन योजना में, जिसके लिए प्रकाश-प्रसार परिवर्तनों की निगरानी की जाती है, तेजी से और धीरे-धीरे चरणों की अपेक्षाकृत मात्रा को दर निरंतरों द्वारा निर्धारित किया जाता है, साथ ही साथ मध्यवर्ती प्रजातियों के आणविक वजन। हेक्सैमेरिक मध्यवर्ती के वितरण को मध्यवर्ती के अणु वजनों के लिए सैद्धांतिक चयापचय Curves की संवेदनशीलता की एक जांच द्वारा समर्थित किया जाता है। यह आवृत्ति आगे निम्नलिखित द्वारा समर्थित है: (1) एक ही मॉडल सभी तीन तापमानों पर ऑक्सीजन और सीओ-हेमोग्लोबिन के लिए डेटा को फिट करेगा (24-29 गुना दर स्थिरों में परिवर्तन), (2) इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी से सबूत हेक्सैमेरिक रूप दिखाता है, और (3) मैथेमोग्लोबिन स्पष्ट रूप से pH 7 पर एक हेक्सैमर के रूप में स्थिर है। जब CO O2 को लिगैंड के रूप में बदलता है, तो विघटन दर चार के साथ बढ़ जाती है। मीट प्रारंभिक ऑक्सीहेमोग्लोबिन विघटन दर से लगभग 20 गुना तेजी से होता है, लेकिन शायद हेक्सामर के विघटन की तुलना के लिए अधिक प्रासंगिक, मीट दर सीओ- और ऑक्सी-हेमोग्लोबिन के मान्यतागत हेक्सामेरिक रूपों की तुलना में 100 गुना और 500 गुना तेजी से होता है। डोडकैमर के लिए एक्टिवेशन ऊर्जा हेक्सामर विघटन और छोटे रूपों में हेक्सामर के विघटन के लिए ऑक्सी-, CO-, और मेथोमोग्लोबिन के लिए लगभग 30 kcal / mol था।
ट्रांस-1,2-diaminocyclohexane-N,N,N,n-tetraacetate के लोहे (II) परिसर द्वारा घोड़े मेथियोग्लोबिन के पुनर्स्थापित कमी। ट्रांस-1,2-diaminocyclohexane-N,N,N'N'-tetraacetate (FeCDTA2-) के लोहे (II) परिसर द्वारा मेटाइोग्लोबिन की कमी का अध्ययन किया गया है। संतुलन निरंतर, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मापा जाता है, 0.21 है, जिसके परिणामस्वरूप Mb0 के लिए 0.050 V की कमी संभावना है। कमी के लिए दर निरंतर 28 M-1 sec-1 है, जिसमें 13 kcal M-1 के deltaH ++ और -11 eu के deltaS ++ है। दोनों सीएन- और ओएच- कटौती को प्रतिबिंबित करते हैं क्योंकि सायनोमीयोग्लोबिन (Mb+CN-) और आयनशील मेथिग्लोबिन (Mb+OH-) की अपेक्षाकृत कम प्रतिक्रियाशीलता है। FeCDTA2- द्वारा Mb+CN- की कमी के लिए दर निरंतर 4.0 X 10(-2) M-1 sec-1 है और Mb+OH- की कमी के लिए यह 4.8 M-1 sec-1 है। मेटाइोग्लोबिन के नाइट्रिक ऑक्साइड परिसर को 10 एम-1 सेकंड-1 की दर निरंतरता के साथ कम किया जाता है। FeCDTA- द्वारा oxymyoglobin के ऑक्सीकरण की गतिशीलता का अध्ययन किया गया था। डेटा एक तंत्र के साथ संगत है जहां ऑक्सीकरण पूरी तरह से deoxy रूप के माध्यम से होता है। FeCDTA द्वारा deoxymyoglobin के ऑक्सीकरण के लिए 1.45 X 10(2) M-1 sec-1 की दर स्थिर की गणना की गई, संतुलन स्थिर और कमी दर के लिए स्थिर। उपरोक्त डेटा को एक सरल बाहरी क्षेत्र कमी प्रतिक्रिया के संदर्भ में चर्चा की जाती है।
क्रिस्टेटिक तंत्रिकाओं की एक्सोनल मेम्ब्रेन की संरचना और गुण। क्रिस्टेज़ियों की एक्सेनल मेम्ब्रेन की शुद्धि को [3H] टेट्रोडॉटॉक्सिन बंधन क्षमता और Na+, K+-ATPase गतिविधि में समृद्धता का मापने के साथ-साथ किया गया था। इन दीवारों की एक विशेषता उनके उच्च लिपिड सामग्री और अन्य प्रकार के प्लाज्मा दीवारों की तुलना में उनके कम प्रोटीन सामग्री है। ऑक्सोनल झिल्ली में मायोसिन जैसी, एक्टिन जैसी, ट्रोपोमोयोसिन जैसी, और ट्यूबिलिन जैसी प्रोटीन होते हैं। इसमें Na+, K+-ATPase और Acetylcholinesterase भी होते हैं। विलासिता के बाद इन दो एंजाइमों के अणु वजन अनुरूप 280,000 और 270,000 हैं। एटीपीएज के लिए कैलाइटिक उप-यूनिटों का अणु वजन 96,000 है और एसीटीएलकोलिनेस्टेरस के लिए 71,000 है। हमने lobster के एक्सनोनल झिल्ली में एक निकोटीन बंधन घटक की उपस्थिति की पुष्टि की है, लेकिन हम [3H] निकोटीन को क्रैब एक्सनोनल झिल्ली के लिए बाध्य नहीं पाया है। सोडियम चैनल के एक्सेनल मेम्ब्रेन के लिए बंधन og, विस्तार से अध्ययन किया गया है। [3H]टेट्रोडॉटॉक्सिन को ऑक्सोनल मेम्ब्रेन रिसेप्टर के साथ बंधन के लिए विघटन स्थिरता pH 7.4 पर 2.9 nM है। क्रिस्टेनिक झिल्ली में टेट्रोडॉटॉक्सिन रिसेप्टर की एकाग्रता लगभग 10 pmol / मिलीग्राम मेम्ब्रेन प्रोटीन है, एसीटीएलकोलिनेस्टेरास से 7 गुना कम, Na+, K+-ATPase से 30 गुना कम, और lobster झिल्ली में निकोटीन बंधन घटक से 30 गुना कम। एक उचित अनुमान से पता चलता है कि लगभग 1000 में केवल एक पेप्टाइड श्रृंखला ऑक्सोनल झिल्ली में सोडियम चैनल के टेट्रोडॉटॉक्सिन बंधन का हिस्सा बनाती है। वेराट्रिडिन, जो आरामदायक सोडियम पारदर्शिता पर चुनिंदा रूप से कार्य करता है, एक्सोनल झिल्ली के फॉस्फोलिपिड भाग से जुड़ता है। [3H]मैंब्रेनों के लिए वेराट्रिडिन बंधन इलेक्ट्रोफिशिएलॉजिकल प्रभाव के साथ समानांतर है। Veratridine और tetrodotoxin के पास अलग-अलग रिसेप्टर साइटें हैं। हालांकि टेट्रोडॉटॉक्सिन वेराट्रिडिन द्वारा depolarized एक विशाल एक्सन के उत्तेजक झिल्ली को repolarize कर सकता है, वेराट्रिडिन शुद्ध एक्सनोनल झिल्ली के लिए [3H] टेट्रोडॉटॉक्सिन के बंधन को प्रभावित नहीं करता है। इसी तरह, टेट्रोडोटोक्सिन [3H] वेराट्रिडिन के एक्सोनल झिल्ली से जुड़ने को प्रभावित नहीं करता है। स्कॉर्पियन न्यूरोटॉक्सिन I, एक presynaptic विषाक्त पदार्थ जो दोनों Na+ और K+ चैनलों को प्रभावित करता है, [3H] tetetrodotoxin या [3H]veratridine के एक्सोनल झिल्ली से जुड़ने के लिए हस्तक्षेप नहीं करता है। टेट्रोडोटॉक्सिन, वेराट्रिडिन, और स्कॉर्पियन न्यूरोटॉक्सिन I, जिनके पास सोडियम चैनल के सामान्य कार्य को बाधित करने के लिए आम है, तीन अलग-अलग प्रकार के रिसेप्टर साइटों पर कार्य करते हैं।
नाइट्रोजन फिक्सिंग के नियम। Klebsiella pneumoniae के नाइट्रोजेनजास दबाए गए उत्परिवर्तन। Brenchley et al. (Brenchley, J.E., Prival, M.J. और Magasanik, B. (1973) J. Biol. Chem) के विधि के आधार पर नाइट्रोजेनाज़ दबाए गए उत्परिवर्तनों का चयन करने के लिए एक नया प्रक्रिया का वर्णन किया गया है। 248, 6122-6128) एक गैर-एन 2 फिक्सिंग बैक्टीरिया के हिस्टिडास-संस्करण mutants को अलग करने के लिए। एनएच 4 + की उपस्थिति में नए उत्परिवर्तनों के नाइट्रोजेनस स्तर एनएच 4 + 3 की अनुपस्थिति में पता लगाए गए नाइट्रोजेनस गतिविधि के 100% के रूप में उच्च थे। इन नाइट्रोजन फिक्सिंग (नीफ) derepressed mutants के जैव रसायन विशेषताओं से पता चलता है कि वे तीन वर्गों में शामिल हैं। तीन उत्परिवर्तन (एसके-24, 28 और 29 स्ट्रैंड), जो विकास के लिए ग्लूटामाइट की आवश्यकता होती है, नाइट्रोजेनास और ग्लूटामाइन सिंथेटेस को संरचनात्मक रूप से संश्लेषित करते हैं (एनएच 4 + की उपस्थिति में)। दूसरी कक्षा के उत्परिवर्तन (एसके-27 और 37) जो विकास के लिए ग्लूटामाइन की आवश्यकता होती है, नाइट्रोजेनस गतिविधि के स्तर को दबाते हैं और प्रतिरक्षात्मक रूप से निर्धारित के रूप में संश्लेषित अक्रिय ग्लूटामाइन सिंथेटेस प्रोटीन को संश्लेषित करते हैं। ग्लूटामाइन की आवश्यकता वाले, नाइट्रोजेनास-अवरुद्ध mutants (स्ट्रेन SK-25 और 26) का एक तीसरा वर्ग न तो एक कैलिटिल रूप से सक्रिय ग्लूटामाइन सिंथेटेस एंजाइम और न ही एक प्रतिरक्षा रूप से क्रॉस- reactive ग्लूटामाइन सिंथेटेस प्रोटीन को संश्लेषित करता है। एफ-प्रिम पूरकता विश्लेषण से पता चलता है कि ग्लूटामाइन सिंथेटेस के लिए कोडिंग क्षेत्र के अनुरूप क्लेबीसेला क्रोमोसोम के एक खंड में mutant स्ट्रेट्स SK-25, 26, 27, 37 नक्शे। चूंकि स्के -27 और स्के -37 म्यूटेंट स्ट्रेट्स निष्क्रिय ग्लूटामाइन सिंथेटेस प्रोटीन का उत्पादन करते हैं, इसलिए यह निष्कर्ष निकाला गया है कि ये परिवर्तन ग्लूटामाइन सिंथेटेस संरचनात्मक जीन के भीतर नक्शे बनाते हैं।
सुपरऑक्साइड एनीओन रेडिकल और सायटोक्रोम सी के बीच प्रतिक्रिया 1. सुपरऑक्साइड एनीओन रेडिक (O2-) ferricytochrome c के साथ ferrocytochrome c बनाने के लिए प्रतिक्रिया करता है. कोई मध्यवर्ती जटिलताएं देखी जा सकती हैं. O2- और ferrocytochrome c. 2 के बीच कोई प्रतिक्रिया का पता लगाया जा सकता है। 20 डिग्री सेल्सियस पर, पीएच 4.7 से 6.7 पर प्रतिक्रिया के लिए दर निरंतर 1.4-10(6) M-1 है। S -1 और जैसा कि पीएच 6.7 से ऊपर बढ़ता है, दर निरंतर लगातार कम हो जाता है। पीएच पर निर्भरता ट्यून दिल और घोड़े दिल सायटोक्रोम सी के लिए समान है. O2- और सायटोक्रोम सी के रूप के बीच कोई प्रतिक्रिया प्रदर्शित नहीं की जा सकती है जो लगभग 9.2 पीएच से ऊपर मौजूद है. पीएच पर दर निरंतर की निर्भरता को समझाया जा सकता है यदि सायटोक्रोम सी में 7.45 और 9.2 के पीके हैं, और O2- k = 1.4-10(6) M-1 - S-1 के साथ pH 7.45 के नीचे मौजूद रूप के साथ प्रतिक्रिया करता है, pH 7.45 के ऊपर के रूप के साथ k = 3.0- 10(5) M-1 - S-1, और pH 9.2 के ऊपर मौजूद रूप के साथ k = 0.3। रिएक्शन में 20 kJ mol-1 की सक्रियण ऊर्जा होती है और पीएच 7.45 से ऊपर और नीचे दोनों 18 kJ mol-1 की 25 डिग्री सेल्सियस पर सक्रियण की एंटाल्पी होती है। यह सुझाव दिया गया है कि O2- स्टीटोक्रोम सी को aromatic amino acids से बना एक ट्रैक के माध्यम से कम कर सकता है, और सक्रिय जटिल के गठन के लिए थोड़ा प्रोटीन पुनर्गठन की आवश्यकता होती है। PH 1.2-6.2 पर HO2 कणों द्वारा ferricytochrome c का कोई कमी प्रदर्शन नहीं किया जा सकता है, लेकिन pH 5.3 पर HO2 कण ferrocytochrome c को लगभग 5-10(5)-5-10(6) M-1 - S-1 के अनुपात स्थिर के साथ ऑक्सीकरण करते हैं।
स्पाइनन chloroplasts और subchloroplasts में देर से फ्लोरोसेंस के विघटन में 120 माउस चरण की पहचान intrinsic backreaction के रूप में। इस चरण के स्तर को thylakoids आंतरिक pH पर निर्भर करता है। 500 माउस लेजर फ्लैश के बाद, देरी से फ्लोरोसेंस के विघटन में एक 120 माउस चरण विभिन्न परिस्थितियों में स्पैनिश क्लोरोप्लास्ट्स और डिजिटोनिन के माध्यम से तैयार फोटोसिस्टम II में समृद्ध उप-क्लोरोप्लास्ट कणों में दिखाई देता है। इस चरण का स्तर Photosystem II के दानक पक्ष पर ऑक्सीजन के विकास के अवरोध के मामले में उच्च है। Babcock and Sauer (1975) Biochim. Bio-phys के परिणामों के साथ तुलना। Acta 376, 329-344, इंगित करता है कि उनके ईपीआर सिग्नल IIf, जिसे वे Z+ के कारण होने का अनुमान लगाते हैं, फोटोसिस्टम II के ऑक्सीकृत पहला माध्यमिक दानक, हमारे 120 माउस चरण की एक बड़ी amplitude के साथ अच्छी तरह से जुड़ा हुआ है। हम अपने 120 माउस चरण को Z+ की उपस्थिति में उत्तेजित प्रतिक्रिया केंद्र की अंतर्निहित वापसी प्रतिक्रिया से समझाते हैं, जैसा कि वान गोर्कोम और डोन्ज़ (1973) द्वारा भविष्यवाणी की गई थी। 17, 333-342 के बीच Z+ का रेडॉक्स राज्य thylakoids के आंतरिक पीएच पर निर्भर करता है। माउस क्षेत्र में पीएच के प्रभाव पर परिणाम माउस क्षेत्र में प्राप्त परिणामों के साथ तुलना की जाती है।
छोटे फोटोसिस्टम II कणों में अवशोषण और इलेक्ट्रॉन स्पिन रिज़ोनेशन के प्रकाश-उत्पन्न परिवर्तन। फोटोसिस्टम II प्रतिक्रिया केंद्र घटकों को डिजिटोनिन के साथ तैयार किए गए छोटे सिस्टम II कणों में अध्ययन किया गया है। रोशनी पर, प्राथमिक स्वीकारकर्ता में कमी को एक प्लास्टॉक्विनोन को सेमीक्विन एनीओन में कम करने के कारण अवशोषण परिवर्तनों और 545 एनएम (C550) और 685 एनएम के करीब अवशोषण बैंडों के छोटे नीले स्विच द्वारा इंगित किया गया था। विभिन्न तैयारी में सेमीक्विनोन और क्लोरोफिल का अनुपात 1/20 और 1/70 के बीच था। इस प्रतिक्रिया में टर्मिनल इलेक्ट्रॉन दानक ने बड़े अवशोषण परिवर्तनों का कारण नहीं बनाया, लेकिन इसके ऑक्सीकरणित रूप को अब तक अज्ञात इलेक्ट्रॉन स्पिन रिज़ोनेशन (ईएसआर) सिग्नल द्वारा प्रकट किया गया था, जिसमें ज्ञात सिग्नल II के कुछ गुण थे, लेकिन लाइन चौड़ाई और जी-मान सिग्नल I के उन लोगों के बहुत करीब थे। दानकर्ता अंधेरे में ferricyanide द्वारा ऑक्सीकरण किया जा सकता है। ferricyanide की उपस्थिति में प्रकाश अवशोषण और ESR परिवर्तन, जल्दी से अंधेरे होने पर बदल दिया, जो क्लोरोफिल एक dimer, संभवतः photosystem II के प्राथमिक इलेक्ट्रॉन दानक के ऑक्सीकरण के लिए जिम्मेदार हो सकता है। इसके अलावा, 15 से 20 गॉस लाइन चौड़ाई के साथ एक ESR सिग्नल और एक धीमी अंधेरी विघटन का निरीक्षण किया गया था, जो एक माध्यमिक दानकर्ता द्वारा पैदा किया जा सकता है।
आलू ट्यूब निकालने में वसा एसिड हाइड्रोपेरोक्साइडों की एंजाइमिक प्रतिक्रियाएं II. 9- और 13-hydroperoxy-octadecadienoic एसिडों को monohydroxydienoic एसिड, epoxyhydroxy- और trihydroxymonoic एसिड उत्प्रेरकों में परिवर्तित करना। कच्चे निष्कर्षों और आंशिक रूप से शुद्ध एंजाइम तैयारी, पाउडर ट्यूमर से, पीएच 5-7, लिनोलिक एसिड हाइड्रोपेरोक्साइडों को ऑक्सीजन किए गए फैटी एसिड डेरिवेट्स की एक श्रृंखला में परिवर्तित करते हैं। 9-D- और 13-L-हाइड्रोपेरोक्साइड इज़ोमर समान दरों पर समान (इज़ोमरिक) उत्पादों में परिवर्तित होते हैं। 13-हाइड्रोपेरोक्साइड इज़ोमर से मुख्य उत्पादों को संबंधित मोनोहाइड्रोक्साइडियोनिक एसिड डेरिवेटिव, थ्रेओ-111-हाइड्रोक्सी-ट्रांस12,13-इपॉक्सी-ऑक्टाडेक-सिस9-एनोक एसिड और 9,12,13-ट्रिहाइड्रोक्सा-ऑक्टाडेक-ट्रांस10-एनोक एसिड के रूप में पहचाना गया था। 9-हाइड्रोपेरोक्साइड से संबंधित उत्पाद मोनोहाइड्रोक्साइडियोनिक एसिड, 9.10-इपॉक्सी-111-हाइड्रोक्सा-ऑक्टाडेक-12-एनोिक एसिड और 9.10,13-ट्रिहाइड्रोक्सा-ऑक्टाडेक-11-एनोिक एसिड थे। विभिन्न उत्पादों को बनाने वाली गतिविधियों का कोई विभाजन एंजाइम निष्कर्षों के आंशिक शुद्धिकरण द्वारा प्राप्त नहीं किया गया था। उत्पाद गठन EDTA, सीएन, सल्फिड्रिल रिएजेंट या ग्लूटाथियोन द्वारा प्रभावित नहीं किया गया था, लेकिन निष्कर्षों को उबालकर कम किया गया था। यह सिस्टम 9 हाइड्रोपेरोक्साइड-विशिष्ट एंजाइम गठन के साथ तुलना की जाती है divinyl ईथर उत्प्रेरकों के द्वारा आलू निकालने।
चूहे के लिवर से microsomal phosphatidate phosphohydrolase के आंशिक शुद्ध और गुण। Microsomal phosphatidate phosphohydrolase (phosphatidate phosphatase EC 3.1.3.4) को कम से कम दो अलग-अलग एंजाइमिक रूप से सक्रिय फ्रैक्चर प्राप्त करने के लिए घुलनशील और विभाजित किया गया था। एक, एएफ को दर्शाया गया था, गैर-विशिष्ट था, फॉस्फेटिडिक एसिड के लिए एक अपेक्षाकृत उच्च Km था और डायसिल्ग्लिसरोल द्वारा अवरुद्ध करने के लिए असहज था। दूसरा फ्रैक्चर, FB, फॉस्फेटाइट्स के लिए विशिष्ट था, कम Km था, और diacylglycerol द्वारा गैर प्रतिस्पर्धी रूप से अवरुद्ध था। एफए ने सिग्मोइड substrat-activity curve का प्रदर्शन किया। इन्सुलेटेड FB नमक की अनुपस्थिति में लगभग 10(6) की कणों में एकत्र किया गया था और 0.4-0.6 के आयन ताकत पर monovalent कैटियन्स को जोड़कर लगभग 2-10(5) डाल्टन में विभाजित किया जा सकता था और इस प्रकार इसकी गतिविधि दोगुनी हो गई। विघटन समय और तापमान पर निर्भर था। F - inhibitory होता है। Divalent आयन FA या FB की गतिविधि के लिए आवश्यक नहीं थे और 1 mM से अधिक एकाग्रताओं पर अवरुद्ध थे।
एलर्जी के फायदे. XLVII. 12अल्फा-हाइड्रोक्साइलेशन खरगोश हेपेट माइक्रोसॉम द्वारा अल्फा गैल एसिड के पूर्ववर्तियों। 0.1 mM NADPH के साथ मजबूत खरगोश यकृत माइक्रोसॉमिक तैयारी प्रभावी ढंग से [3beta-3H]- या [24-14C]allochenodeoxycholic एसिड या [5alpha,6alpha-3H2]5alpha-cholestane-3alpha,7alpha-diol के अपने संबंधित 12alpha-hydroxyl उत्प्रेरकों के लिए उत्पादन में लगभग 25 या 65% 60 मिनट में। खरगोश जिगर microsomal 12alpha-hydroxylase की गतिविधि के लिए आवश्यकताएं चूहों के जिगर microsomes के समान हैं। अध्ययन किए गए कई एंजाइम अवरोधकों में से, केवल p-chloromercuribenzoate ने या तो ट्रिटेटेड substrat के साथ प्रतिक्रिया को अवरुद्ध करने की एक उल्लेखनीय क्षमता दिखाई। Tritiated एसिड या 14C लेबल एसिड से उत्पाद की मात्रा में कोई अंतर नहीं था। एंजाइम की गतिविधि में कोई स्पष्ट लिंग अंतर नहीं पाया गया था, न ही परिपक्व और अपरिपक्व जानवरों के बीच एंजाइम की गतिविधि में एक उल्लेखनीय अंतर देखा गया था।
चूहे के लिवर के एक फेनोबार्बाइटल-इंडुक्वाइड aldehyde dehydrogenase के आंशिक शुद्धिकरण और गुण। phenobarbital-induced cytoplasmic aldehyde dehydrogenase (EC 1.2.1.3) के गुणों का अध्ययन किया गया है चूहों के जिगर में। रिएक्टर में phenobarbital उपचार के बाद cytoplasmic गतिविधियों में 7-12 गुना अधिक स्तरों असीटेलडेहाइड (18 mM) और propionaldehyde (9 mM) के उच्च एकाग्रताओं के साथ गैर-रिएक्टर जानवरों की तुलना में देखा गया था। 0.12 mM acetaldehyde, 2 mM glycolaldehyde, 6 mM formaldehyde या 0.5 mM betaine aldehyde के साथ कोई अंतर नहीं पाया गया था। रिएटर समूह में एसीटेलडेहाइड और प्रोपिओलडेहाइड की उच्च एकाग्रताओं के साथ मिटोकॉन्ड्रियाल फ्रैक्शंस में थोड़ा अधिक गतिविधि भी थी। माइक्रोसोम फ्रैक्शंस में, गतिविधियों ने किसी भी सब्सट्रेट एकाग्रता में कोई अंतर नहीं दिखाया। एक प्रेरित aldehyde dehydrogenase 70 गुना chromatographic तकनीकों द्वारा शुद्ध किया गया था। इसके अलग-अलग अणु और एंजाइम गुण थे जो कि चूहों के जिगर साइटोप्लाज्म में सामान्य रूप से मौजूद मुख्य हाई-केएम एंजाइम से होते थे। उत्प्रेरित एंजाइम का पीआई isoelectric focusing द्वारा मापने के रूप में लगभग 7.0 था। यह कई aliphatic और aromatic aldehydes के साथ सक्रिय था लेकिन formaldehyde, glycolaldehyde या D-glyceraldehyde के साथ नहीं था। propionaldehyde और acetaldehyde के लिए Km-मूल्य Millimolar सीमा में थे। एरोमेटिक एल्डेहाइड्स की मिलीमोलर एकाग्रताओं ने एक मजबूत सब्सट्रेट अवरोध का कारण बनाया। एंजाइम disulfiram के submicromolar एकाग्रताओं द्वारा अवरुद्ध किया गया था। एस्ट्रोन, deoxycorticosterone, प्रोजेस्टेरोन और diethylstilbestrol भी एंजाइम गतिविधि को प्रभावित करते थे।
फसलों से जुड़े अन्य समाचार » VI. VI. Solanum melongena L. और Zea mays L. से एंजाइमों का प्रारंभिक वर्णन एंजाइमों thiocholine एस्टर हाइड्रोलिज़िंग करने में सक्षम हैं Solanum melongena L. (अंडे पौधे) और Zea Mays L. (बूट) के निष्कर्षों में परीक्षण किया गया है। दोनों प्रजातियों के एंटी-कोलिनेस्टेरस neostigmine, physostigmine, और 284c51 और AMO-1618 द्वारा अवरुद्ध होते हैं, एक पौधे के विकास में रुकावट है और दोनों के पास पीएच ऑप्टिमा 8.0 के पास है। अंडे पौधे से एंजाइम 0.15 mM एसीटीएलटीओकोलिन के एक सब्सट्रेट एकाग्रता पर अधिकतम सक्रिय है और उच्च सब्सट्रेट एकाग्रताओं पर अवरुद्ध होता है। इस आखिरी संपत्ति के आधार पर, विभिन्न अवरोधकों द्वारा अवरोध की मात्रा, और सब्सट्रेट विशिष्टता, हम निष्कर्ष निकालते हैं कि अंडे पौधे से एंजाइम, लेकिन अनाज से नहीं, एक कोलिनेस्टेरास है।
हाइड्रो-ऑर्गेनिक मीडिया में घुलनशील और अस्थिर एसिड फॉस्फेटेस के व्यवहार। गेहूं बीज एसिड फॉस्फेटेस (orthophosphoric monoester phosphohydrolase, EC 3.1.3.2) द्वारा p-nitrophenyl phosphate के हाइड्रोलिसिस का अध्ययन किया गया है acetone, dioxane और acetonitrile के साथ पानी के बफर के मिश्रणों में। एंजाइम या तो मुक्त समाधान में था या एक pellicular समर्थन पर अस्थिर किया गया था जो ठोस ग्लास गेंदों पर एक क्षैतिज कार्बोनेस परत से बना था। उच्चतम एंजाइम गतिविधि एसीटोन और एसीटोनिट्रिल में प्राप्त की गई थी, जिसे एक व्यापक सीमा पर कार्बनिक सॉल्वेंट एकाग्रता के साथ मिलाया गया था। 50% (v / v) एसीटोन में, अस्थिर किए गए एंजाइम के दोनों V और Km लगभग स्वच्छ पानी के बफर में आधे मूल्यों के थे, लेकिन अनियमित फॉस्फेट के लिए कि परिवर्तन नहीं हुआ। विभिन्न सॉल्वेंट्स और अलग-अलग पीएच के citrate बफरों के 50% (v/v) मिश्रणों में, एंजाइम गतिविधि को ग्लास-कैलोमेल इलेक्ट्रोड के साथ मापा गया हाइड्रो-ऑर्गेनिक मिश्रण के पीएच के बजाय पानी के बफर घटक के पीएच पर निर्भर किया गया था। उच्च कार्बनिक सॉल्वेंट एकाग्रताओं में भी ग्लूकोज की उपस्थिति में p-nitrophenol रिलीज की अपेक्षाकृत उच्च दरों से पता चलता है कि कम पानी गतिविधि में ट्रांसफॉस्फोरिलेशन की सुविधा होती है।
Bacillus R-4 से chitosanase की शुद्धिकरण और कुछ एंजाइम गुण जो Rhizopus कोशिकाओं की दीवारों को लाइज़ करता है। Bacillus sp (Bacillus R-4) का एक स्टेम एक प्रोटेस और एक कार्बोहाइड्रोलास का उत्पादन करता है जिनमें से दोनों Rhizopus कोशिकाओं की दीवारों को उज्ज्वल करने की क्षमता है। एंजाइमों में से, कार्बोहाइड्रोलास को एक अल्ट्रासेंटीफुगल और इलेक्ट्रोफोरेटिक समलैंगिक राज्य में शुद्ध किया गया है, और एक चिटोसानास के रूप में पहचाना गया है। एंजाइम glycol chitosan और chitosan पर सक्रिय था। शुद्ध एंजाइम का अणु वजन 31 000 और isoelectric बिंदु 8.30 के रूप में अनुमानित किया गया था। एंजाइम सबसे अधिक सक्रिय था pH 5.6 और 40 डिग्री सेल्सियस पर या तो Rhizopus सेल दीवार या glycol chitosan के रूप में सबस्ट्रा के साथ, और 3 घंटे के लिए 40 डिग्री सेल्सियस पर pH 4.5 से 7.5 की सीमा पर स्थिर था। प्रतिक्रिया मिश्रण की विस्कोसता में एक अचानक गिरावट ने इस एंजाइम द्वारा किटोजेन के टुकड़े होने का सुझाव दिया।
अल्फा-मैनोसिडासिस पर विशिष्टता के अध्ययन मैनोसिडोसिस मूत्र से ओलिगोसैकरिड का उपयोग करने के रूप में substrates के रूप में। Oligosaccharides containing terminal non-reducing alpha(1 leads to 2)-, alpha(1 leads to 3)-, and alpha(1 leads to 6)-linked mannose residues, human and bovine mannosidosis urines से अलग किया गया था, एसिड alpha-mannosidases के विशिष्टताओं का परीक्षण करने के लिए substrates के रूप में उपयोग किया गया था इंसान और bovine जिगर से अलग किया गया था। इन एंजाइमों ने प्रत्येक ओलिगोसाक्रिड से सभी अल्फा-लिंकित मैनोस अवशेषों को रिलीज किया और सबसे छोटे आधार पर सबसे प्रभावी थे। एंजाइम ए प्रत्येक मामले में अल्फा-मैनोसिडास बी 2 की तुलना में ओलिगोसाक्रिड पर कम सक्रिय था, हालांकि सब्सट्रेटों के लिए स्पष्ट Km मूल्य प्रत्येक एंजाइम के साथ समान था। मानव एसिड अल्फा-मैनोसिडासास भी मछली के मैनोसिडोसिस मूत्र की तुलना में मनुष्यों से अलग substrates पर अधिक सक्रिय होने के लिए पाया गया। मानव अल्फा-मैनोसिडास सी, जिसका एक तटस्थ पीएच इष्टतम होता है जब एक सिंथेटिक आधार के साथ परीक्षण किया जाता है, ने तटस्थ पीएच पर किसी भी ओलिगोसाक्रिड का हाइड्रोलिस नहीं किया, लेकिन एसिड पीएच पर सक्रिय होने के लिए पाया गया।
कैल्शियम-प्रोत्साहित एडेनोसिन ट्राइफोस्फेटेस सूअर के भ्रूण से दांत के जीवाणु के माइक्रोसॉमाइल फ्रैक्चर में। एक Ca(2+)-ATPase (ATP फॉस्फोहाइड्रोलास, EC 3.6.1.3) की विशेषता और स्थानिकता सूअर भ्रूण के दांत जीवाणु में रिपोर्ट की गई है। यह एंजाइम, एक माइक्रोसोम फ्रैक्शंस, Ca(2+) द्वारा प्राथमिकता से सक्रिय किया जाता है। 0.5 mM एटीपी की उपस्थिति में, अधिकतम एंजाइम गतिविधि 0.5--1.0 mM CaCl2 पर प्राप्त होती है। एटीपी हाइड्रोलिसिस की अधिकतम दर प्रति घंटे प्रति मिलीग्राम प्रोटीन के बारे में है क्योंकि एंजाइम तैयारी का उपयोग यहां किया जाता है। आदर्श Ca(2+) एकाग्रता पर, Mg(2+) में एक अवरोधक प्रभाव होता है। एंजाइम को Ca(2+) द्वारा सक्रिय होने के लिए Na+ और / या K+ की आवश्यकता नहीं होती है। अन्य न्यूक्लियोटाइड ट्राइफोस्फेट्स सब्सट्रेट के रूप में कार्य कर सकते हैं, लेकिन एटीपी के लिए वी सबसे अधिक है। एटीपी के लिए किलोमीटर 8.85 - 10(-5) M. एंजाइम के Ca(2+) सक्रियण के लिए इष्टतम पीएच लगभग 9.2 है। अच्छी तरह से ज्ञात अवरोधक (Na+ + K+)-ATPase, mitochondria ATPase और Ca(2+)-ATPase erthrocyte में एंजाइम को अवरुद्ध नहीं करते हैं। उपसेल्युलर क्रम में, एंजाइम को एक चिकनी एंडोप्लाज्म रिटिक्युल्यूम फ्रैक्शंस में स्थित होने का मान लिया जा सकता है जिसमें सेल और गोल्गी के शरीर के मलबे के टुकड़ों को शामिल किया जाता है और एक ameloblast परत, stratum intermedium और stellate reticulum को शामिल करने वाले इमेलिक अंग में ऊतक क्रम में।
एंजाइमेटिक रूप से सक्रिय मायोसिन अवयव की तैयारी और वर्णन। शुद्ध शुक्राणु मांसपेशियों के मायोसिन (ईसी 3.6.1.3) को सायनोजेन ब्रोमाइड प्रक्रिया के माध्यम से से सेफोरोसिस 4 बी से कोवेलेंट रूप से बाध्य किया गया है। परिणामस्वरूप जटिल, सेफोरोस-मायोसिन, एडेनोसिन ट्रिफोस्फेटेस गतिविधि रखता है और लंबे समय तक अपेक्षाकृत स्थिर है। इष्टतम बंधन परिस्थितियों के तहत, बंधक मायोसिन की विशिष्ट एटीपीएज गतिविधि का लगभग 33% बनाए रखा जाता है। Polyacrylamide gel polypeptide electrophoresis denatured Sepharose-Myosin से रिलीज से संकेत देता है कि 85% मायोसिन भारी श्रृंखलाओं के माध्यम से agarose गेंदों के साथ जुड़ा हुआ है और शेष हल्के श्रृंखलाओं के माध्यम से, बंधन और रिलीज के पूर्वानुमानों के अनुसार या तो lysine सामग्री या themyosin उपयूनिट के अणु वजन पर आधारित है। अडेनोसिन ट्राइफोस्फेटेस की अस्थिर मायोसिन में परिवर्तनशील पीएच, आयन शक्ति, और कैशनिक एकाग्रता की स्थितियों के तहत जांच की गई है। अस्थिर मायोसिन के एटीपीएज प्रोफाइल मुक्त मायोसिन के साथ काफी समान हैं, हालांकि सूक्ष्म अंतर पाए जाते हैं। सेफोरोस-मायोसिन एटीपीएज नमक एकाग्रता में परिवर्तनों के लिए मायोसिन के रूप में संवेदनशील नहीं है और स्पष्ट सीएम मायोसिन की तुलना में लगभग दो गुना अधिक है। ये अंतर संभवतः agarose गेंदों के लिए जोड़ने के स्थान(s) के क्षेत्र में रासायनिक परिवर्तन और polymeric agarose मैट्रिक्स द्वारा लगाए गए हाइड्रेशन और diffusion प्रतिबंधों के कारण हैं।
तेजी से, धीरे-धीरे और हृदय मांसपेशियों से मायोसिन में विशिष्ट टिओल समूहों के विकिरण लेबलिंग और स्थान। रेडियोएक्टिव लेबल किए गए एन-ईथेलमाइमिड के एकीकरण के आधार पर, तेजी से, धीरे-धीरे और हृदय मांसपेशियों से इन्सुलेटेड मायोसिन (ईसी 3.6.1.3) के आसानी से प्रतिक्रियात्मक थियोल समूहों को 3 प्रकारों में वर्गीकृत किया जा सकता है। सभी 3 मायोसिन में 2 thiol-1, 2 thiol-2 और प्रति अणु thiol-3 समूहों की एक परिवर्तनीय संख्या होती है। दोनों thiol-1 और thiol-2 समूह जो K+-प्रोत्साहित एटीपीएज के कार्य के लिए आवश्यक हैं, सभी 3 मायोसिन प्रकारों में भारी श्रृंखलाओं में स्थित हैं। Mg(2+) - ATP हाइड्रोलिसिस के स्थिर राज्य स्थितियों के तहत 3 thiol समूह वर्गों पर N-ethylmaleimide के एकीकरण पैटर्न में परिवर्तन कुछ प्रतिक्रिया मध्यस्थों के विभिन्न संस्करणों को वर्णित करने की अनुमति देता है। सभी 3 प्रकार के मायोसिन में Mg(2+) - ATP के हाइड्रोलिक चक्र को 25 डिग्री सेल्सियस पर एक ही चरण द्वारा नियंत्रित किया गया था। मिओसिन लाइट चेन के लिए रासायनिक रूप से निर्धारित अणु वजन का उपयोग करते हुए, उनके स्टॉइकोमेट्री को सोडियम डोडेसिल सल्फेट इलेक्ट्रोफोरेसिस के आधार पर 1.2 : 2.1 : 0.8 के रूप में पाया गया था लाइट चेन-1: लाइट चेन-2: लाइट चेन-3 प्रति तेजी से मिओसिन के अणु, 2.0 : 1.9 के रूप में लाइट चेन-1: लाइट चेन-2 प्रति धीमी मिओसिन के अणु और 1.9 : 1.9 के रूप में लाइट चेन-1: लाइट चेन-2 प्रति हृदय माओसिन के अणु। तेजी से और धीरे-धीरे मायोसिन के दो प्रकार के बीच हल्के उपयूनिट संरचना में इस गुणवत्तात्मक अंतर को अलग-अलग मायोसिनों द्वारा प्रदर्शित विशेषताओं के छोटे परिवर्तनों में प्रतिबिंबित नहीं किया जाता है, बल्कि इसके बजाय उनके संबंधित मायोफिब्रिलर एटीपीएज गतिविधियों से जुड़ा हुआ लगता है।
ग्लूटाथियोन रेड्यूक्टेज का उपयोग करें पीएच और नमक एकाग्रता के रूप में एंजाइम की गतिशीलता और स्थिरता का अध्ययन। ऑक्सीकरण ग्लूटाथियोन के लिए स्पष्ट माइकलिस निरंतर के पीएच पर निर्भरता और जड़ी बूटी ग्लूटाथियोन रेडक्टाज़ (ईसी 1.6.4.2) के स्पष्ट परिचालन संख्या को pH सीमा 4.5-8.0 में 0.1 mM NADPH की स्थिर एकाग्रता पर निर्धारित किया गया है। पीएच 5.5 और 7.6 के बीच, ये दोनों पैरामीटर अपेक्षाकृत स्थिर हैं। एंजाइम-कथाइजित प्रतिक्रिया की गतिशीलता पर कम पीएच का मुख्य प्रभाव ऑक्सीकरण ग्लूटाथियोन द्वारा pH पर निर्भर substrat inhibition का निरीक्षण है, जो pH 7 से कम या बराबर है, जो ऑक्सीकरण ग्लूटाथियोन को एंजाइम के ऑक्सीकरण के रूप में बंधन के साथ संदर्भित करने के लिए दिखाया गया है। पीएच 5.5 पर हर्बल ग्लूटाथियोन रेडुक्टास की कैलाइटिक गतिविधि सोडियम एसीटेट बफर एकाग्रता से प्रभावित होती है। bovine serum albumin की अनुपस्थिति में pH 5.5 और 25 डिग्री सेल्सियस पर एंजाइम के ऑक्सीकरण और कम किए गए रूपों की स्थिरता को सोडियम एसीटेट एकाग्रता के एक फ़ंक्शन के रूप में अध्ययन किया गया था। परिणामों से पता चलता है कि कम सोडियम एसीटेट एकाग्रता पर एंजाइम के उत्प्रेरक गतिविधि का सक्रियण एंजाइम के एक कम रूप पर सोडियम एसीटेट के प्रभाव से संबंधित है। इसके विपरीत, उच्च सोडियम एसीटेट एकाग्रता पर एंजाइम की उत्प्रेरक गतिविधि का अवरोध एंजाइम के ऑक्सीकरण रूप पर सोडियम एसीटेट के प्रभाव से संबंधित है।
चूहे के जिगर से शुद्ध फॉस्फोरिलास के डिफोस्फोस्फोरिलेटेड रूप की विशेषताएं और कच्चे जिगर तैयारी में इसकी गतिविधि का माप। लिवर ग्लाइकोजन फॉस्फोरेलास (अल्फा-1,4-ग्लकैन : ऑर्थोफोस्फेट अल्फा-ग्लकोसिल ट्रांसफेरास, ईसी 2.4.1.1) (फॉस्फोरेलास ए) सक्रिय है और आसानी से मापा जाता है, जबकि डेफोस्फोरोलास बी, मांसपेशियों एंजाइम के विपरीत, एएमपी की उपस्थिति में भी मूल रूप से निष्क्रिय होने की सूचना दी गई है। हमने चूहों के जिगर से दो रूपों के फॉस्फोरिलास को शुद्ध किया है और प्रत्येक की विशेषताओं का अध्ययन किया है। Phosphorylase b गतिविधि हमारे परीक्षण स्थितियों के साथ मापा जा सकता है। हमने प्राप्त किया phosphorylase b सल्फेट की उच्च एकाग्रताओं द्वारा उत्तेजित किया गया था, और मांसपेशियों phosphorylase kinase के लिए एक आधार था जबकि phosphorylase a सल्फेट द्वारा अवरुद्ध किया गया था, और यकृत phosphorylase phosphatase के लिए एक आधार था। phosphorylase b के लिए substrat binding कम था (KM glycogen = 2.5 mM, glucose-1-P = 250 mM) phosphorylase a (KM glycogen = 1.8 mM, KM glucose-1-P = 0.7 mM) की तुलना में। एएमपी की अनुपस्थिति में फेफड़ों phosphorylase b सक्रिय था। हालांकि, एएमपी ने ग्लूकोज-1-पी के लिए सीएम को शुद्ध फॉस्फोरिलास बी के लिए 80 एमएम और कच्चे निकालने में एंजाइम के लिए 60 एमएम (के = 0.5 एमएम) तक कम कर दिया। उपयुक्त सब्सक्रेट, बफर और एएमपी एकाग्रताओं का उपयोग करके, परीक्षण स्थितियों को विकसित किया गया है जो जिगर निष्कर्षों में फॉस्फोरिलास ए और 90% फॉस्फोरिलास बी गतिविधि का निर्धारण करने की अनुमति देता है। इन दो रूपों का इंटरकोर्वर्शन in vivo (अगली उत्तेजना के तहत) और in vitro में कुल गतिविधि में थोड़ी बदलाव के साथ दिखाया जा सकता है। लंबे समय तक भूख लगने के बाद और मधुमेह में कुल फॉस्फोरिलास गतिविधि में कमी का निरीक्षण किया गया है।
खरगोश erythrocytes से कैसीन किनास के कई रूप। दो खरगोश erythrocyte casein kinases, GTP:casein kinase I और GTP:casein kinase II, 29 000- और 47 000-बहुत साफ किया गया है। चीक्रोस घनत्व ग्रेडेंट सेंटीफुगेशन का उपयोग करने वाले अध्ययनों से पता चलता है कि चीनास I के पास लगभग 9.5 - 10(5) (25 एस) और चीनास II के बारे में 1.4 - 10(6) (32 एस) की एक अणुसाला वजन है। ये एंजाइम एटीपी या जीटीपी को फॉस्फोरल दानकर्ता के रूप में उपयोग कर सकते हैं। परीक्षण किए गए विभिन्न प्रोटीन सब्सट्रेटों में से, इन किनासों ने 50% से अधिक dephosphorylated phosvitin से 50% dephosphorylated casein से अधिक phosphorylation को कैटलिस किया। Histones, protamine और bovine serum albumin खराब phosphoryl acceptors हैं। संवैधानिक डेटा से पता चलता है कि दोनों एंजाइमों को उच्च कैसीन सबस्ट्राट एकाग्रताओं द्वारा अवरुद्ध किया जाता है जिन्हें NaCl द्वारा आंशिक रूप से कम किया जा सकता है। दोनों फॉस्फोट्रान्सेरास गतिविधि के लिए Mg(2+) की आवश्यकता होती है और pH 9.0 पर इष्टतम रूप से सक्रिय होते हैं। एंजाइमों के पास GTP के लिए 2.5 - 10(-5) M के स्पष्ट Km मान हैं, ATP के लिए 2 - 10(-5) M और कैसीन के लिए 0.4--0.6 mg / ml। एटीपी, आईटीपी, एडीपी, और जीडीपी द्वारा इन एंजाइमों द्वारा उत्प्रेरित के रूप में जीटीपी के टर्मिनल फॉस्फेट को कैसिन में शामिल करना अलग-अलग डिग्री तक अवरुद्ध होता है लेकिन यूटीपी, सीटीपी, जीएमपी, एडेनोसिन 3':5'-क्रिलिक मोनोफोस्फेट, और गुआनोसिन 3':5'-क्रिलिक मोनोफोस्फेट द्वारा नहीं। इसके अलावा, NaF और 2.3-diphosphoglyceric एसिड दोनों kinases की गतिविधि को रोकने के लिए भी पाया गया है। 2.3-diphosphoglycerate का प्रभाव दिलचस्प है और यह सुझाव देता है कि यह चयापचय लाल रक्त कोशिकाओं में कैसीन किनेज की गतिविधि को विनियमित कर सकता है।
रिसस बंदर (Macaca mulatta) के स्केलेट मांसपेशियों से क्रिएटिन फॉस्फोकिनेस पर एनीओन के चयापचय अध्ययन और प्रभाव। एक क्रिएटिन किनाज (ईसी 2.7.3.2) के लिए मांसपेशियों से माइक 35-170 muequiv H+ / मिलीग्राम प्रोटीन प्रति मिनट 30 डिग्री सेल्सियस पर और लगभग 0.5 ग्राम / किलोग्राम मांसपेशियों का उत्पादन। संतुलन किनिटी को मानते हुए, एक कैलाइटिक साइट पर सब्सट्रेटों के साइनेर्जिस्टिक बंधन दोनों आगे और पीछे प्रतिक्रियाओं के लिए पाया जाता है। मुक्त एंजाइम और एंजाइम-दूसरे substrat complex के लिए प्रत्येक सब्सट्रेट से जुड़ने के लिए सिनेटिक स्थिरों को निर्धारित किया जाता है और अन्य प्रजातियों से एंजाइम के लिए उन लोगों के साथ तुलना की जाती है। छोटे एनीओन द्वारा अवरोध को सॉफ्टवेयर और उत्पादों के विभिन्न संयोजनों की उपस्थिति में निर्धारित किया जाता है। SO4(2-) सरल प्रतिस्पर्धी अवरोध के माध्यम से अवरुद्ध करता है और संभवतः स्थानांतरित फॉस्फोरल समूह के स्थान पर बाध्य होता है। NO3-, NO2-, SCN- और Cl- द्वारा अवरोध अधिक जटिल है और इन आयनों को एक फ्लैनेर संक्रमण-स्थिति जटिल में स्थानांतरण योग्य फॉस्फोरल समूह की नकल करने के लिए सुझाव दिया जाता है। ये एनीओन्स मृत अंत जटिल, एंजाइम-क्रेएटिन-MgADP को स्थिर करते हैं, जिसके पास स्थानांतरित फॉस्फोरल समूह की कमी है। एनीओन के इन एनीओनों के एंजाइम-सुस्ट्राट परिसरों के विघटन स्थिरों पर प्रभाव की रिपोर्ट की जाती है और उपरोक्त अनुमान के अनुरूप है। एनीओन की अनुपस्थिति में डैड-एंड जटिल आवश्यक टाइओल समूह को आयोडोएसेटामाइड द्वारा अवरुद्ध होने से बचाता नहीं है। NO3- या Cl- को मृत अंत जटिल या बिना एनीओन के आधार संतुलन मिश्रण में जोड़ना सुरक्षा प्रदान करता है। आवश्यक टाइओल समूह को iodoacetamide द्वारा एक दर से अवरुद्ध किया जाता है जो एंजाइम की सामान्य स्थिरता सीमा के ऊपर मूल रूप से पीएच से स्वतंत्र है। हमारे पिछले रिपोर्ट के विपरीत, यह पीएच स्वतंत्रता मृत अंत जटिल, क्रिएटिन प्लस MgADP की उपस्थिति, एनीओन की उपस्थिति या अनुपात मिश्रण की उपस्थिति के द्वारा नहीं बदली जाती है। यह निष्कर्ष निकाला जाता है कि बंदर एंजाइम के "अवश्यक" thiol समूह में मूल रूप से खरगोश एंजाइम के समान गुण होते हैं। नतीजतन, बंदर एंजाइम पर हमारे पिछले काम के आधार पर इस समूह की भूमिका के बारे में किए गए निष्कर्ष अब वैध नहीं हैं। वर्तमान निष्कर्ष आवश्यक thiol समूह के साथ संगत हैं जो कैलाइटिक प्रक्रिया में एक अनुकूलन भूमिका निभाते हैं।
चूहे की रेनल कॉर्टिकल सेल kallikrein पर अध्ययन। I. विभाजन और माप। एक तकनीक विकसित की गई है कि अलगाव में चूहों की गुर्दे की कोरिका कोशिकाओं के एक अनौपचारिक आबादी में kallikrein को अलग करने और मापने के लिए। नशीली चूहों में चूहों की गुर्दे को in situ पारित करने के बाद, संभव, गिनती हुई कोरिका कोशिका निलंबन प्राप्त की गई थी। कोशिकाओं को 0.5% deoxycholate, homogenized, centrifuged, dialysed, और Sephadex G-25 पर गैल फ़िल्टर किए गए सेक्रोसिस / ट्रिस बफर में निलंबित किया गया था। DEAE-सेल्युलोस पर कॉलम क्रोमेटोग्राफी ने 0.20 से 0.25 M NaCl / सोडियम फॉस्फेट बफर के बीच एस्टरैस गतिविधि का एक एकल पिक परिणाम दिया। बाद में एल्यूशन ने एक अल्केल एस्टरैस का उत्पादन किया जो चूहों के मूत्र से अलग किए गए कैलिक्रेन के समान था, जब तक कि इष्टतम पीएच, अवरोधकों के प्रभाव, जैव परीक्षण गतिविधि और प्रतिरक्षात्मक गुणों को संबोधित किया गया था। अनुमानित उत्पादन मातृ कोशिका homogenates में मौजूद कुल esterase गतिविधि का लगभग 70% था। कोशिका homogenates, DEAE-सेल्युलोस कॉलम, या कॉलम से eluates में जोड़ा गया एक शुद्ध चूहों के मूत्र kallikrein की वसूली 83-108% (सामान्य 96%) के बीच थी। इस तकनीक का उपयोग करते हुए, यह पाया गया कि गैर-इंक्यूबेड रेनल कॉर्टिक कोशिका कोशिकाओं में मौजूद कैलिक्रेन गतिविधि की मात्रा 0.6-10(-2) से 4.6 - 10(-2) अल्फा-एन-टोज़ाइल-एल-आर्जिनिन मेथाइल एस्टर (टॉस-एर्ग-ओएमई) एस्टेरास यूनिट प्रति 10(8) कोशिकाओं में होती है। हालांकि, 3-8 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक पोषक तत्व मीडिया में इक्विड किए गए कोशिकाओं में कोई माप योग्य कैलिक्रेन गतिविधि नहीं थी, जबकि आसपास के मीडिया में कैलिक्रेन गतिविधि थी जो अलडोस्टेरोन द्वारा काफी बढ़ाया जा सकता था और स्पिरोनोलैक्टोन द्वारा कम किया जा सकता था।
हाइपोप्रोटीन और हाईकोर्टिक इलेक्ट्रोड के बीच इलेक्ट्रॉन ट्रांसफर के अध्ययन। ferricytochrome c, metmyoglobin और methemoglobin के इलेक्ट्रोकेमिक व्यवहार का अध्ययन डीसी, एसी, और डिफेंसियल पल्स पॉलेराोग्राफी का उपयोग करके किया गया था, और नियंत्रित संभावित इलेक्ट्रोलिसिस। तीन हेमोप्रोटीन डी.सी. पॉलेराोग्राफिक चरणों का उत्पादन करते हैं, और डिफेंसियल पल्स पॉलेराोग्राम में चमकते हैं, जिनकी ऊंचाई एकाग्रता के अनुपात में होती है। लोड ट्रांसफर को मजबूत adsorption द्वारा प्रभावित किया जाता है। A.c. polarograms की एकाग्रता निर्भरता adsorbed molecules में संरचनात्मक परिवर्तनों को इंगित करता है। मेथियोग्लोबिन और मेथियोग्लोबिन के नियंत्रित संभावित इलेक्ट्रोलिसिस के कमी उत्पादों के अवशोषण स्पेक्ट्रम मूल नियंत्रण नमूने के समान होते हैं। ऑक्सीजन और हेमोग्लोबिन में सहयोगीता को इलेक्ट्रोड पर प्रतिक्रिया से प्रभावित नहीं होता है। चार्ज हस्तांतरण adsorbed, पहले से ही कम किया गया, अणुओं के माध्यम से मुक्त रूप से फैलने वाले प्रोटीनों में होता है।
मानव मेटाहेमोग्लोबिन ए के लिए कार्बनिक फॉस्फेटों के बंधन A. प्रैक्टर्स द्वारा प्रोटीनों के पॉलिमरेशन के विकार। एक सिद्धांत प्रस्तुत किया गया है जो संतुलन में एक प्रोटीन स्वीकारकर्ता के दो राज्यों से एक प्रभावकार को बाध्य करने के संबंध में है। समस्या को चार संभावित मामलों के संदर्भ में संबोधित किया जाता है जो बंधन साइटों की संख्या और स्वीकारकर्ता राज्यों के लिए प्रासंगिक अंतर्निहित बंधन निरंतरों के बीच संबंधों को निर्दिष्ट करते हैं। यह दिखाया गया है कि इन मामलों के बीच एक अंतर अविश्वसनीय प्रभावकारी एकाग्रता के एक प्लॉट के रूप के आधार पर संभव हो सकता है, जो प्रोटीन घटकों के निचले स्तर के अनुपात से गणना की जा सकती है। इस संबंध में विशेष रूप से उल्लेखनीय यह निष्कर्ष है कि ऐसे सिस्टम के साथ परिभाषित परिस्थितियों के लिए इस टुकड़े में एक मोड़ बिंदु मौजूद हो सकता है जिसमें पॉलिमर गठन पर बंधन साइटों को संरक्षित नहीं किया जाता है (और बंधन संबद्धताओं को बदल दिया जाता है)। बाद के प्रकार के सिस्टम का उदाहरण 0.25 एम सोडियम एसीटेट, पीएच 5.4 में मेटाहेमोग्लोबिन ए पर अध्ययन द्वारा किया जाता है। अतिरिक्त कार्बनिक फॉस्फेट प्रभावकारियों की अनुपस्थिति में, एक डिमर-टेट्रामर संतुलन 4.15 +/- 0.06 X 10(3) 1/mol का एक संघ निरंतर द्वारा नियंत्रित काम करता है, जो निचले स्तर के संतुलन के परिणामों से निर्धारित होता है। sedimentation गति और संतुलन परिणामों के संदर्भ से पता चलता है कि adenosine 5'-triphosphate (ATP) के जोड़ने के परिणामस्वरूप प्रत्येक dimeric (अल्फा बीटा) और tetrameric (अल्फा बीटा) 2 प्रजातियों में से प्रत्येक पर एक साइट पर इसकी बंधन होती है 1.03-10(3)-1.20-10(3) और 1.1-10(4)-2.1-10(4) 1/mol, अनुरूप रूप से। यह भी दिखाया गया है कि 2.3-diphosphoglycerate एटीपी के समान तरीके से dimer-tetramer संतुलन को विकृत करता है।
हेमोग्लोबिन, लिगैंड और पीएच पर निर्भरता के N-टर्मिनल स्पिन लेबल अध्ययन। मानव हेमोग्लोबिन को 4-isothiocanate-2,2,6,6-tetramethyl-piperdinooxyl के साथ लेबल किया गया था, जिसे विशेष रूप से प्रोटीन के एन-टर्मिनल अल्फा-एमिनो समूहों और थोड़ा सक्रिय सल्फहाइड्रिल समूहों से जुड़ने के लिए जाना जाता है। इलेक्ट्रॉन स्पिन रिज़ोनेशन (ESR) विश्लेषण ने एक आंशिक रूप से हल पांच लाइन स्पेक्ट्रम इंगित किया, जिसका सुझाव है कि लेबल को कम से कम दो अलग-अलग बंधन साइटों से जोड़ा गया था। स्पिन लेबलिंग से पहले विशिष्ट अवरोधक रिएक्टरों का उपयोग करके, दो बंधन साइटों को बीटा-93 (अमुक्त) के सल्फहाइड्रिल समूह और एन-टर्मिनल वैलिन (मोबाइल) के अल्फा-एमिनो समूह के लिए जिम्मेदार ठहराया गया। एक संग्रह साइटों के एक सेट पर स्पिन के अपेक्षाकृत आंदोलन को गठबंधन और पीएच की स्थिति के बावजूद प्रतिबंधित किया गया था, जबकि दूसरे साइट पर आंदोलन इन मापदंडों पर निर्भरता दिखाया, उदाहरण के लिए स्पिन-मार्गीकृत एन-टर्मिनल अंतों deoxyhemoglobin के सभी पीएच सीमाओं में आंदोलन को प्रतिबंधित किया गया है अध्ययन किया, जबकि ऑक्सीहेमोग्लोबिन के लोग मूल पीएच सीमा पर आंदोलन करने के लिए अपेक्षाकृत स्वतंत्र हैं, लेकिन एसिड पीएच सीमा में अधिक प्रतिबंधित हो जाते हैं।
कम पीएच पर bovine superoxide dismutase के होलो- और एपो-फॉर्म के व्यवहार। bovine erythrocytes से होलो-सुपरऑक्साइड dismutase 3-5 पीएच रेंज में एक पुनर्स्थापित संरचनात्मक परिवर्तन का सामना करने के लिए दिखाया गया है। तटस्थता से पीएच 2 में परिवर्तन पर देखा गया स्पेक्ट्रल परिवर्तन थे: 680 एनएम अवशोषण की एक हल्की कमजोरी; 450 एनएम कंधे के नुकसान, मूल प्रोटीन के ऑप्टिकल स्पेक्ट्रम में स्पष्ट; और 330 एनएम पर एक नया बैंड दिखाई दिया। 600 एनएम पर सर्कल डाइक्रोज्म मूल रूप से खो दिया गया था जबकि लगभग 380 एनएम पर एक कमजोर नकारात्मक बैंड और 310 एनएम पर एक सकारात्मक बैंड दिखाई दिया। ईपीआर स्पेक्ट्रम को भी मूल से कम पीएच रूप में बदलने पर संशोधित किया गया था: एक पारंपरिक लगभग 130 से लगभग 150 जी तक बढ़ गया, g पारंपरिक लगभग 2.27, और gm लगभग 2.09 से लगभग 2.08 तक गिर गया। प्रभावी रूप से प्रभावी रूप से प्रभावी रूप से प्रभावी रूप से प्रभावी रूप से प्रभावी रूप से प्रभावी है। हाई रिज़ॉल्यूशन (220 MHz) होलो- और एपोप्रोटीन के पीएमआर स्पेक्ट्रेस ने खुलासा किया कि धातुएं प्रोटीन की तीन आयामी संरचना को प्रभावित करती हैं। पीएमआर अध्ययनों से पता चला कि पीएच 3 पर, एपोप्रोटीन लगभग पूरी तरह से एक यादृच्छिक स्लॉट रूप में मौजूद था और यह तटस्थ पीएच पर लौटने पर एक कॉम्पैक्ट अच्छी तरह से व्यवस्थित संरचना का मान लिया। होलोप्रोटीन ने पीएच 3 पर भी एक कॉम्पैक्ट, स्पष्ट रूप से dimeric संरचना बनाए रखी।
हेमोग्लोबिन कोलन का यांत्रिक निचोड़ Hb कोलोन (बेटा 98 Val Met तक जाता है) यांत्रिक झटके के दौरान तेजी से गिरावट पाया गया था। एचबी कोलोन के निकास की दर एचबी एस की तुलना में 5-6 गुना तेजी से होती है। रोगी के हेमोलिसेट के निकास की किनिटिक, जो एचबी कोलोन और एचबी ए के मिश्रण है, ने एक द्विफैसिक Curve दिखाया है जो इंगित करता है कि एचबी कोलोन एचबी से स्वतंत्र रूप से निकास करता है। यांत्रिक झटका का उपयोग हेमोग्लोबिन कोलोन और अन्य अस्थिर हेमोग्लोबिन का पता लगाने और मात्रा निर्धारण करने के लिए एक नए तरीके के रूप में किया जा सकता है।
Haemopis grandis erythrocruorin की भौतिक विशेषताएं और उप-यूनिट। लीच Haemopis grandis का erythrocruorin एक S20,w के 57 S पर एक तटस्थ पीएच, pH 6.0 पर अपने isoelectric बिंदु और n लगभग 2.1 और पीएच 7.4 पर P50 = 11.2 मिमी के साथ एक थोड़ा सिग्मोइड ऑक्सीजन कवरेज प्रदर्शित किया। हेम समूह के लिए न्यूनतम अणु वजन 24000 +/- 1500 को लोहे और हेम सामग्री, 0.22 +/- 0.01 और 2.73 +/- 0.14 वजन प्रतिशत के आधार पर निर्धारित किया गया था। erythrocruorin के उप-यूनिट संरचना का अध्ययन सोडियम dodecyl sulfate में गैल फ़िल्टरिंग और polyacrylamide गैल electrophoresis में सोडियम dodecyl sulfate में तटस्थ पीएच के साथ किया गया था। Haemopis erythrocruorin सोडियम dodecyl sulfate की उपस्थिति में चार उप-यूनिट (1 से 4) में विघटित होता है, जिनमें लगभग 27000, 23000, 21000 और 13500 के अणु वजन होते हैं। जब एरिट्रोक्रूरोरिन को सोडियम डॉडेसिल सल्फेट इलेक्ट्रोफोरेसिस से पहले मेक्रप्टोएथेनॉल के साथ कम किया गया था, तो तीन उप-यूनिटों को देखा गया था, जिनके पास लगभग 13000 (I), 16500 (II) और 28000 (III) के अणु वजन थे। इन्सुलेटेड उप-यूनिट 1 से 4 के सोडिय्यूल सल्फेट इलेक्ट्रोफोरेसिस से पता चला कि उप-यूनिट I उप-यूनिट 1 और 4 द्वारा प्रदान किया गया था, उप-यूनिट II उप-यूनिट 1 द्वारा प्रदान किया गया था, और उप-यूनिट III दोनों उप-यूनिट 2 और उप-यूनिट 3 द्वारा प्रदान किया गया था। इस प्रकार, Haemopis erythrocruorin कम से कम पांच अलग-अलग पॉलीपेप्टिड श्रृंखलाओं से बना था। यह संभावना है कि सभी संरचनात्मक पॉलीपेप्टाइड श्रृंखलाओं को हर एक हेम समूह से जुड़ा नहीं था। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा देखा गया Haemopis erythrocruorin का आकार annelid erythrocruorins और chlorocruorins के दो-स्तरीय हेक्सागोनल रेंज की विशेषता के साथ संगत दिखता था।
एंटीरियल चिकनी मांसपेशियों से मायोसिन: एक्टिन depolymerization के बाद इन्सुलेशन। एंटीरियल चिकनी मांसपेशियों से संकुचित प्रोटीन अत्यधिक घुलनशील हैं, और I = 0.05 पर निकाला जा सकता है। हालांकि, उन्हें पीएच 6 पर लंबे समय तक डायलिसिस द्वारा एक उच्च, हालांकि परिवर्तनीय, एक्टिन:मायोसिन अनुपात के साथ एक एक्टोमोसिन प्रदान करने के लिए precipitated किया जा सकता है। उच्च आयन ताकत पर इस actomyosin के निचोड़ व्यवहार की जांच की गई थी PH, प्रोटीन एकाग्रता और संरचना के कार्य के रूप में तैयारी उल्ट्रासेंटीफुगेशन द्वारा। समान संरचना वाले सिंथेटिक स्केलेट मांसपेशियों के actomyosins के साथ तुलना इन दो प्रणालियों के व्यवहार में महत्वपूर्ण अंतर दिखाई दिया। यह पाया गया कि बहुत अधिक चिकनी मांसपेशियों actomyosin सामान्य रूप से आराम की स्थितियों द्वारा विघटित नहीं होता है, और यह F-actin की तुलना में धीरे-धीरे निचोड़ता है। 0.2 M K Cl (pH 7) में supernatant प्रोटीन (Myosine-enriched actomyosin) की घुलनशीलता centrifugation के दौरान पीएच पर निर्भर करती थी। कम घुलनशीलता केवल supernatant में एक उच्च एक्टिन एकाग्रता से जुड़ी हुई थी, जो एक्टिन repolymerization पर एक निर्भरता का सुझाव देता है। शुद्ध मायोसिन को पॉलिएथेलन ग्लाइकोल-6000 द्वारा Supernatant से चयनित किया गया था, लेकिन केवल तब जब प्रोटीन कम आयन ताकत पर घुलनशील था। शुद्ध मायोसिन की घुलनशीलता स्ट्रीट मांसपेशियों से मायोसिन के समान थी। depolymerized एक्टिन की उपस्थिति और चिकनी मांसपेशियों संकुचित प्रोटीन की उच्च घुलनशीलता के बीच एक संबंध सुझाव दिया जाता है।

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TransCorpus-bio-hi

TransCorpus-bio-hi is a large-scale, parallel biomedical corpus consisting of Hindi synthetic translations of PubMed abstracts. This dataset was created using the TransCorpus framework and is designed to enable high-quality Hindi biomedical language modeling and downstream NLP research.

Dataset Details

Source: PubMed abstracts (English)
Target: Hindi (synthetic, machine-translated)
Translation Model: M2M-100 (1.2B) using TransCorpus Toolkit
Size: 22 million abstracts, 34.6GB of text
Domain: Biomedical, clinical, life sciences
Format: one abstract per line

Motivation

Hindi is a low-resource language for biomedical NLP, with limited availability of large, high-quality corpora. TransCorpus-bio-hi bridges this gap by leveraging state-of-the-art neural machine translation to generate a massive, high-quality synthetic corpus, enabling robust pretraining and evaluation of Hindi biomedical language models.

from datasets import load_dataset

dataset = load_dataset("jknafou/TransCorpus-bio-hi", split="train")

print(dataset)
# Output:
# Dataset({
#    features: ['text'],
#    num_rows: 21567136
# })

print(dataset[0])
# {'text': '[ कैमोमाइल घटक / III पर जैव रसायन अध्ययन। (--)-अल्फा-बिसाबोलोल के एंटीपेप्टिक गतिविधि के बारे में in vitro अध्ययन (संपादक का अनुवाद)]. (--)-अल्फा-बिसाबोलोल में खुराक के आधार पर एक प्राथमिक एंटीपेप्टिक कार्रवाई होती है, जो पीएच-मान में परिवर्तन के कारण नहीं होती है। पेप्सिन की प्रोटीओलिस्टिक गतिविधि 1/0.5 के अनुपात में bisabolol जोड़ने के माध्यम से 50 प्रतिशत कम होती है। Bisabolol का एंटीपेप्टिक प्रभाव केवल सीधे संपर्क के मामले में होता है। सब्सट्रेट के साथ पिछले संपर्क के मामले में, अवरोधक प्रभाव खो जाता है। '}

Benchmark Results in our French Experiment

TransBERT-bio-fr pretrained on TransCorpus-bio-fr achieve state-of-the-art results on the French biomedical benchmark DrBenchmark, outperforming both general-domain and previous domain-specific models on classification, NER, POS, and STS tasks. See TransBERT-bio-fr for details.

Why Synthetic Translation?

Scalable: Enables creation of large-scale corpora for any language with a strong MT system.
Effective: Supports state-of-the-art performance in downstream tasks.
Accessible: Makes domain-specific NLP feasible for any languages.

Citation

If you use this corpus, please cite:

@misc{knafou-transbert,
    author = {Knafou, Julien and Mottin, Luc and Ana\"{i}s, Mottaz and Alexandre, Flament and  Ruch, Patrick},
    title = {TransBERT: A Framework for Synthetic Translation in Domain-Specific Language Modeling},
    year = {2025},
    note = {Submitted to EMNLP2025. Anonymous ACL submission available:},
    url = {https://transbert.s3.text-analytics.ch/TransBERT.pdf},
}

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