在某种酶的反应体系中加人一种小分子抑制剂, 发现酶活性受到抑制。请用两种实验来判断该小分子是可逆抑制剂还是不可逆抑制剂。要求写出实验设计的依据和实验方法,预测实验结果并得出实验结论
抑制剂常常被分为可逆抑制剂和不可逆抑制剂。不可逆抑制剂通常是通过共价键或者非共价键与酶蛋白分子紧密结合, 不易分离; 可逆抑制剂与酶蛋白质结合是依靠非共价链,通过一定的方法可以将两者分开。
判定小分子抑制剂是可逆抑制剂还是不可逆抑制剂, 简单的方法就是分离抑制剂和酶蛋白。
透析、超滤以及凝胶过滤层析等方法均能够将小分子抑制剂与酶蛋白有效分离开来。
通过上述三种方式对酶和排制剂的混合物进行分离, 分别测定无抑制剂的醇、酶和抑制剂混合物、分离抑制剂后的酶三类样品的酶活性, 之后对比三者的酶活性就可以确定抑制剂的类型。如果分离抑制剂后样品与酶和抑制剂混合的样品, 其酸活性没有差别, 那么抑制剂就是不可逆抑制剂; 如果分离抑制剂后样品与酶和抑制剂混合样品, 前者酶活性高于后者,而且与无抑制剂酶样品的酶活性近乎一致,那么抑制剂就是可逆抑制剂。