本研究旨在对草原红牛A IDA基因进行克隆、生物信息学分析和差异表达研究,并构建真核表达载体,以期在细胞水平上探究A IDA基因对牛前体脂肪细胞分化的影响.应用RT-PCR方法从草原红牛脂肪组织中扩增A IDA基因编码区,测序鉴定后对其核苷酸和氨基酸序列进行生物信息学分析,同时利用实时荧光定量PCR技术研究A IDA基因在草原红牛9个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、肠、肌肉、脂肪)和前体脂肪细胞成脂分化过程中的表达规律;构建真核表达载体pBI-CMV3-AIDA,转染草原红牛前体脂肪细胞,通过实时荧光定量PCR方法检测A IDA基因在mRNA水平上的表达情况.结果显示,A IDA基因编码区全长921 bp,编码306个氨基酸,含有4个潜在的糖基化位点和29个潜在的磷酸化位点;亚细胞定位主要分布于细胞质、细胞核和线粒体上.A IDA基因在草原红牛9个组织中均有表达,其中在肾脏组织中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05).成脂分化结果表明,A IDA基因mRNA表达量在分化的第2天达到最高,随着脂肪细胞的成熟,其表达量逐渐降低;双酶切及测序结果表明,试验成功构建了A IDA基因的真核表达载体pBI-CMV3-AIDA,且过表达组A IDA基因mRNA表达量极显著高于对照组(P<0.01).本试验成功构建了A IDA基因真核表达载体,并在草原红牛前体脂肪细胞中高度表达,该结果为体外研究牛A IDA基因对脂肪合成代谢及其机体代谢的调节机制提供了基础材料.