研究A型γ-氨基丁酸受体(γ-aminobutyric acid type A,GABAAreceptor)α1亚基Cys166-Leu296片段的苯并二氮杂蕈(benzodiazepine,BZ)结合位点及其结构特性,了解该片段结构与功能的关系.利用Pfu DNA多聚酶依赖的点突变技术将该片段的每一残基用丙氨酸替代,通过E.coli体系过表达,纯化得到各种突变蛋白.运用圆二色性(circular dichroism,CD)技术测定突变蛋白的二级结构,借助荧光各向异性(fluorescence anisotropy,FA)、荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术测定其与BZ荧光配基Bodipy-FL Ro-1986(BFR)的结合强弱.通过与野生型的比较,确定其残基是否与结构和或结合相关.结果显示,突变体R191A、G212A、S213A、R214A及V279A的结合能力减弱2～3倍,除V279A显著增加α螺旋外均无二级结构的改变.E193A、S278A、V279A和P280A的α螺旋显著增多,N275A和R276A的α螺旋则显著减少.推测Cys166-Leu296的Arg191,Gly212,Ser213和Arg214可能位于BZ的结合袋,其第4个环区(Glu210-Asn216)与结合密切相关.Glu193、Ser278和Pr0280参与维持β折叠结构,而Asn275和Arg276参与维持α螺旋结构.CyS166-Leu296的第9个环区(Asn275-pr0280)对其结构有重要影响.