目的 建立一种可同时、快速检测2型糖尿病患者降糖药相关药物基因多态性的液相芯片检测系统.方法 根据7个目的基因的rs号,在Genbank中查找其靶位点附近碱基序列(目的基因包括磺脲类受体1,转录因子7类似物2,胰岛素受体底物1,过氧化物酶体增殖物激活受体γ,有机阳离子转运蛋白与多药和有毒化合物排出家族,有机阴离子转运蛋白家族成员1B1等),以PrimerPlex软件设计等位基因特异性引物,Primer6.0软件设计含检测位点的PCR引物,通过多重PCR扩增,等位基因特异性引物延伸(ASPE),MagPlex～Tag微球杂交,液相芯片系统Luminex 200检测荧光信号,确定基因型,优化反应体系并以5份代表性标本进行方法学评价.收集2019年1月～12月东莞市厚街医院新诊2型糖尿病患者血液样本115例,采用建立的系统检测上述7个靶位点,并随机选取25例与测序结果比较.结果 7个目标基因经PCR扩增,产物电泳成像后清楚可见7条目标条带,无非特异性条带;经优化ASPE杂交条件,选择退火温度55℃,Biotion～dCTP浓度与dCTP浓度的比值为3:1,37℃孵育45 min时检测效果最佳;临床样本检测结果显示:纯合子荧光强度中位值(median fluorescence intensity,MFI)比率均>0.9或<0.1,杂合子MFI比率在0.4～0.6之间.纯合子MFI比率批内批间CV在0.9％～3.3％和2.1％～4.6％,而杂合子则在2.9％～7.3％和5.2％～11.2％;DNA最低检测限为0.75ng;25例样本的检测结果与测序结果完全一致,准确度100％.结论 该研究成功建立了一种新的液相芯片检测系统,高效便捷,能同时检测7个目的基因型,满足临床的需求.
液相芯片 等位基因特异性引物延伸 2型糖尿病 单核苷酸多态性