为了探讨特异性降低Toll样受体9(TLR9)表达后.小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cell,DC)对CpG刺激的应答反应,我们合成了特异性干扰TLR9表达的小干扰RNA(small-interference RNA,siRNA),用Lipofectamine2000转入DC,利用Block-iT检测评估了转染效率;RT-PCR方法检测了干扰效果;Annexin Ⅴ和Pl双染检测了细胞凋亡率.进一步在CpG作用后,用流式细胞术分析了DC表面标志CD40和MHC Ⅱ的表达以及DC吞噬FITC-dextran(右旋糖酐)的能力.结果显示,siRNA转染效率较高,TLR9表达被显著下调.干扰TLR9后DC在CpG作用下,表面标志CD40和MHCⅡ表达未被上调,但吞噬功能维持较强的水平,DC表现出未成熟状态.这些结果提示,我们建立的RNA干扰(RNA in-terference,RNAi)方法能够有效阻断TLR9的表达,为进一步研究CpG信号刺激对DC成熟和功能变化的影响提供了一种有效工具.
树突状细胞 iRNA干扰 TLR9 CpG