试验旨在探究葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatory protein 78,GRP78)基因的理化性质和结构特点,阐述GRP78在猪流行性腹泻病毒复制中的分子伴侣作用和调控机制.通过RT-PCR方法扩增GRP 78基因,并插入到pMD20-T Simple载体进行克隆测序,利用生物信息学方法对其氨基酸序列、跨膜结构、糖基化位点、磷酸化位点、三级结构等进行预测和分析.将GRP 78基因插入pCDNA 3.1中,然后转染Vero-E6细胞.Western blotting检测Vero-E6细胞中GRP78的表达.生物信息学分析结果表明,GRP 78基因全长1965 bp,编码654个氨基酸,蛋白质分子质量为72.33 ku,理论等电点为5.07,分子式为C3189 H 5153 N865 O1019 S13.遗传进化树分析显示,猴源GRP 78基因与双峰驼、犬、猫、大猩猩、蝙蝠、狒狒、猪、马的氨基酸序列同源性为99.5％～99.8％;遗传进化分析显示,大猩猩和狒狒亲缘关系最为接近.跨膜区和信号肽预测结果显示,该蛋白存在信号肽但不存在跨膜结构.GRP78蛋白无N-糖基化修饰位点,存在6个O-糖基化位点、28个磷酸化位点,表明GRP78可能有与激酶磷酸化有关的PKC、PKA特异性蛋白激酶的结合位点,可能参与己糖代谢和单糖代谢.
GRP78基因 生物信息学分析 真核表达