Chi58是Sanguibacter sp.strain C4产生的一种胞外几丁质酶.通过chiA的特异性PCR引物探测到菌株C4中存在几丁质酶,并将扩增到的几丁质酶基因片段(chiA-F)克隆、测序后,提交GenBank数据库进行同源性搜索.对从GenBank中获得的高同源性序列进行比对,并根据保守区域设计2对PCR引物进行嵌套PCR,扩增出Chi58基因的开放阅读框(ORF).测序结果表明该酶的ORF由1692个核苷酸组成,编码563个氨基酸,在N端有23个氨基酸的信号肽,其成熟蛋白的分子量应为58.544 kDa.对其推导氨基酸的序列分析表明Chi58与沙雷氏菌的几丁质酶(chiA)有高度同源性(88.9%～99.6%),其结构主要包括信号肽序列、PKD结构域和18家族糖苷水解酶结构域.将该基因克隆到pET32a(+)载体构建重组质粒pChi58,转入大肠杆菌BL-21(DE3)进行融合表达.经IPTG诱导后,可见分子量约81.1 kDa的融合蛋白的表达.
几丁质酶 克隆 表达 pET32a Chi58 融合蛋白