背景与目的 : 变性高效液相色谱 ( denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC) 是最近发展起来的一种灵敏而高通量的基因突变检测技术 , 在工作中我们发现某些因素 , 尤其是 DNA聚合酶干扰 DHPLC分辨力 . 本文详细地分析了具校正功能和非校正功能的 DNA聚合酶对变性高效液相色谱在基因突变检测中的影响 , 旨在寻找更适合 DHPLC分析的 DNA聚合酶 . 方法 : 选择长度为 268 bp、 317 bp、 590 bp的 3个代表性的片段用于 DHPLC分析 . 选择 6种品牌的 Taq DNA聚合酶 , 1种 Ampli-Taq gold DNA聚合酶 , 4种具校正功能的 DNA聚合酶 ( Pfu和 Vent) , 用这 11种酶扩增同一 DNA片段 , 并进行 DHPLC检测 , 分析并鉴定它们对 DHPLC峰型的影响 . 结果 : Taq DNA聚合酶对 DHPLC分析产生两种明显的负面影响 . 一是在 DHPLC图谱的主峰前 , 形成一个额外小峰 , 影响 DHPLC对杂合双链的分辨能力 . 另一种影响是难以形成正常的 DHPLC色谱图 , 导致 DHPLC检测的失败 . 具校正功能的 DNA聚合酶和 Taq gold DNA聚合酶对 DHPLC几乎不产生这些负面影响 . 结论 : 具校正功能的 DNA聚合酶比 Taq聚合酶更适合于 DHPLC突变或 SNP分析 , 尤其是 GC含量高的小片段或其它容易受干扰的片段应首选 Pfu DNA聚合酶用于 DHPLC分析 .
变性高效液相色谱技术 DNA聚合酶 基因突变筛查