从Aspergillus niger NG1306菌株中扩增得到β-木糖苷酶基因anxyl,与pPICZαA连接构建了表达载体pPICZαA-anxyl,进一步在毕赤酵母KM71H中诱导表达获得了目的酶蛋白重组β-木糖苷酶(Anxyl);并将其用于人参皂苷Rb3 及C-Mx的生物转化及催化动力学参数表征.研究结果表明,Anxyl可将人参皂苷Rb3 和C-Mx分别转化为人参皂苷Rd和C-K.酶学性质研究表明,该酶最适反应pH＝2.5,最适反应温度为35 ℃;在pH＝2.0～5.0,20和30℃条件下其具有较好的稳定性,Mg2+对酶活具有促进作用.Anxyl对葡萄糖和乙醇有较好的耐受性,其催化对硝基苯基-β-D-吡喃木糖苷(pNPX)、人参皂苷Rb3 和C-Mx水解的米氏常数(Km)值分别为3.1,1.55和1.04 mmol/L,酶的最大反应速率(Vmax)分别为1.9×102,0.8×103和8×103 mmol/min,酶的转换数(Kcat)值分别为5.55,0.17和1.85 s-1,表明该酶对天然底物Rb3 和C-Mx具有更高的亲和力.
黑曲霉 β-木糖苷酶 人参皂苷转化 酶动力学