目的: 研究SV40大T抗原(LT)基因对人正常皮肤成纤维细胞体外转化作用, 以及转化后细胞生物学特性的改变. 方法: 采用脂质体介导的方法,利用含有LT cDNA的质粒psv3-neo转染人正常皮肤成纤维细胞. G418筛选后,挑选阳性克隆扩大培养,观察基因及蛋白在细胞内的表达,以及对细胞增殖等生物学特性的改变情况. 结果: 分离获得转化细胞克隆,原位杂交显示LT mRNA在转染细胞胞质中表达. 免疫组化结果显示,细胞质中有SV40大T抗原表达. 细胞计数、BrdU、流式细胞仪检测表明,经过一段时间的旺盛生长,在转染后第16代,细胞即进入危机期,以一种比衰老细胞更快的速度死亡. 结论: LT 可以促进正常皮肤成纤维细胞增殖,但这种能力是有限的,在转染后期甚至会促进细胞死亡. 所以要使人的正常皮肤成纤维细胞永生化,单纯利用LT的转染是不够的,还需要结合其它的转化方式.
SV40 大T抗原 皮肤 成纤维细胞