目前,由于肿瘤特异性抗原难预测以及这些新抗原能否通过激活性通路被抗原呈递细胞有效摄取等问题还未解决,使得现有肿瘤疫苗的临床治疗并没有达到预期效果,同时,肿瘤细胞抗原的高度唾液酸化修饰会诱发机体产生抑制性免疫应答.因此,本研究尝试利用链霉亲和素(Streptavidin,SA)与生物素(Biotin)之间几乎不可逆的非共价结合原理,将生物素标记至肿瘤细胞抗原的唾液酸修饰位点,然后与结合有SA的激活性内吞受体的配体进行交联来制备肿瘤疫苗.首先,构建并表达能靶向树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的重组蛋白SA-mIgG1Fc.其次,叠氮修饰的非天然糖通过代谢掺入途径标记CT26.WT结肠癌细胞抗原的糖基化修饰位点,利用生物正交反应使肿瘤抗原的叠氮修饰位点共价缀合生物素,获得生物素化广谱肿瘤抗原(Biotinylated broad-spectrum tumor antigen,Biotin-TAg).最后,将SA-mIgG1Fc与Biotin-TAg按最佳交联比进行交联,从而获得结肠癌肿瘤疫苗,并对其含有的特异性抗原进行检测.结果 显示,利用基因工程方法成功表达出SA-mIgG1Fc,并获得能与SA结合的Biotin-TAg,将SA-mIgG1Fc与Biotin-TAg按最佳交联质量比为1:48进行交联,从而制备出具有靶向性和稳定性的结肠癌肿瘤疫苗,同时检测出制备的肿瘤疫苗中有特异性抗原胰岛素样生长因子1受体(Insulin-like growth factor 1,IGF-1R).本研究在方法学上为研制新型肿瘤疫苗奠定了基础.
树突状细胞 结肠癌 肿瘤疫苗 链霉亲和素 生物素