[目的]针对翻白草ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR分子指纹标记反应体系,为进一步研究翻白草的居群差异奠定基础.[方法]通过筛选引物并设定影响翻白草ISSR反应的诸因子的不同浓度,检测ISSR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立翻白草ISSR稳定可靠的反应体系.[结果]首次建立了可用于翻白草ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系,确定了25 μl PCR反应体系中各试剂终浓度:1×Buffer缓冲液,1 U Taq DNA聚合酶,2.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTP,0.4 μmol/L引物,DNA模板约20～30 ng,退火温度在50～56 ℃;实验表明:Taq 酶质量、DNA模板品质、退火温度、Mg2+浓度、dNTP浓度均对ISSR 反应结果具有较大影响.[结论]所建立的翻白草ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可以较好地应用于翻白草的居群鉴别及居群分子生态的研究.
翻白草 总DNA提取 ISSR-PCR 体系优化