pEGFP-N1质粒分别转染5只绵羊卵巢原代颗粒细胞, G418筛选后, 各取1株阳性转基因细胞作供体, 进行绵羊的体细胞核移植(克隆). 共352枚体外成熟的去核卵母细胞与转基因的颗粒细胞进行电融合, 得到的329枚核移植胚胎(93.5%), 用Ionomycin/6-DMAP激活, SOFaaBSA液滴体外培养7 d. 结果显示, 312枚核移植胚胎发生卵裂(94.8%), 其中63枚发育至囊胚阶段(19.1%). 随机抽检发现, 克隆胚胎在早期发育的各个阶段均表达GFP基因. 4株0.5%FCS饥饿细胞克隆胚胎的囊胚率为19.6%(55/280), 与另外1株未饥饿细胞克隆胚胎的囊胚率(16.3%, 8/49)没有显著差异(P＞0.05). 结果表明, 体细胞基因转移和克隆技术的结合, 可以有效地生产绵羊的转基因囊胚.
绵羊 颗粒细胞 核移植 转基因 囊胚