为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测.结果显示,最佳检测条件为捕获抗体质量浓度0.125 μg/mL,包被酶标板,37℃孵育1h后4℃静置过夜,检测样品37℃孵育1.5 h,检测抗体质量浓度6.25 μg/mL,37℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/mL,大豆蛋白体系中为8 ng/mL;重复性变异系数小于3％.利用上述检测条件,对实验建立的转Bar基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测,成功地在根、茎、花、叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达.
Bar 双抗夹心酶联免疫吸附 大豆 检测