本研究旨在建立西门塔尔牛牙龈间充质干细胞(gingival mesenchymal stem cells,GMSCs)体外分离培养体系,并对其生物学特性进行探讨,为细胞治疗、再生医学等提供种子细胞.取14周龄西门塔尔牛牙龈,采用0.1％ Ⅳ型胶原酶消化法分离GMSCs,进行体外培养和冷冻保存,测定冻存前后细胞活率,MTT检测法绘制GMSCs生长曲线;通过免疫荧光、流式细胞术和PCR等方法鉴定西门塔尔牛GMSCs特异性标记物(CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166和STRO-1),并通过体外成脂、成骨诱导检测其多向分化潜能.结果表明,西门塔尔牛GMSCs折光性强、贴壁后呈长纺锤形;冻存前和复苏后细胞的活率检测结果显示,细胞复苏后的活率均小于冻存前的活率,但均维持在85％ 以上,细胞生长曲线呈典型的"S"型;免疫荧光结果显示,西门塔尔牛GMSCs表达CD29、CD105和STRO-1,不表达CD31;PCR结果显示,西门塔尔牛GMSCs表达CD44、CD73、CD90和CD166,不表达CD34和CD45;流式细胞术结果显示,西门塔尔牛GMSCs高表达CD73(99.94％)、CD90(99.87％)和CD105(99.90％),几乎不表达CD34(1.16％)和CD45(1.18％);成脂诱导分化后,可见大小不一的脂滴,脂滴可被油红O染色,且PCR检测结果表明其表达成脂关键基因过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ(PPAR-γ)和脂蛋白酶(LPL);成骨诱导分化后,可见被茜素红染色的矿化结节,且PCR检测结果表明其表达成骨关键基因Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和骨桥蛋白基因(OPN).综上,本研究成功分离出西门塔尔牛GMSCs,建立了西门塔尔牛GMSCs体外分离、培养体系,并通过成脂和成骨诱导分化证明其具有多向分化潜能,结果可为再生医学和牙齿修复等研究提供参考.
西门塔尔牛 牙龈间充质干细胞 分离培养 诱导分化