为了探讨瑶山亚种树鼩原代肝细胞分离、培养及鉴定方法,试验对传统的两步原位胶原酶灌注法进行了优化,先将持续灌注法改为间断夹闭下腔静脉快速灌注法,再通过严格控制胶原酶的消化时间来分离提取树鼩肝细胞,最后应用percoll分离液梯度低速离心纯化树鼩肝细胞,采用PAS染色法和免疫细胞化学方法对树鼩肝细胞进行综合鉴定.结果表明:分离得到的树鼩肝细胞产量高、活力好;经PAS染色鉴定,发现树鼩肝细胞内糖原被染成紫红色颗粒或片状;免疫细胞化学染色观察到树鼩肝细胞胞浆内被染成棕黄色.说明成功分离培养树鼩肝细胞并对其进行鉴定,可用于进一步研究.
树鼩 肝细胞 分离 纯化 培养 PAS染色 免疫细胞化学