目的:鉴定成年小鼠Toll途径进化保守信号介导因子(evolutionarily conserved signaling intermediate in Toll path-ways,ECSIT)的3'非翻译区(3'-untranslatedregion,3'-UTR)序列,并在细胞中验证非编码RNA对ECSIT表达的影响.方法:采用RACE技术克隆得到小鼠ECSIT3'-UTR序列,并与基因组数据库进行比对;预测ECSIT3'-UTR可能结合的微小RNA(mi-croRNA,miRNA),并针对ECSIT的全长序列设计小干扰RNA(siRNA);通过Western blot分别检测使用不同miRNA和siRNA干扰后,细胞中ECSIT的表达.结果:成功鉴定了346bp的小鼠ECSIT3'-UTR,与NCBI上序列一致率达到99％;在细胞中miR-7-5p和siRNA1、2可以干扰ECSIT的表达.结论:成功鉴定得到成年小鼠心脏ECSIT mRNA3'-UTR序列,该非编码区可作为非编码RNA的调控区域,为进一步从分子水平探明ECSIT在小鼠生长发育及疾病中的作用提供科学依据.
3’非翻译区 3’RACE ECSIT microRNA siRNA