开发一种新型的基于DNA荧光探针的T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)活性检测方法.先设计了可以形成发卡结构的DNA探针(PNK-Tb),再通过引入T4 PNK、ATP和λ核酸外切水解酶(λexo),打开发卡结构,释放发卡结构3'末端富含G的碱基序列,随后与Tb3+结合形成G-四链体产生显著的荧光信号.通过反应前后荧光信号的变化实现T4 PNK的高灵敏检测.实验结果表明:成功制备了新的免标记DNA荧光探针,创新性地将Tb3+应用到T4 PNK活性的检测中;本荧光法定量检测的线性范围为0～100 U/mL,检测下限为2 U/mL;该策略具有良好的特异性并且可用于评估ADP对T4 PNK活性的抑制作用.基于免淬灭标记DNA荧光探针构建的T4 PNK活性检测新策略反应快速(不超过60 min)、成本低廉、灵敏度高,在药物开发以及生物化学研究中具有广阔的应用前景.
荧光探针 多聚核苷酸激酶 抑制剂