为获得遗传稳定的单倍体酵母菌株,本实验以二倍体酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae W5为出发菌株,优化单倍体制备和分离的条件,获得单倍体细胞;利用随机孢子分析法和MAT-聚合酶链式反应法对单倍体菌株进行分离和鉴定,通过连续传代培养的方式验证单倍体菌株的稳定性,并从代谢水平分析单倍体菌株的发酵性能.研究表明:S.cerevisiae W5在改良SPM培养基中30℃条件下培养8 d,产孢率最高为(35.57±0.82)%.经30 mg/mL蜗牛酶液处理2 h后,菌悬液的孢子释放率达到(47.06±0.23)%.本实验共分离出7 株单倍体菌株,其中菌株S.cerevisiae H14(MAT-a)遗传性能最稳定.当以葡萄糖为底物,30 ℃、150 r/min发酵30 h,乙醇质量浓度达到最大,为(40.46±1.06)g/L,较S.cerevisiae W5发酵24 h乙醇最大质量浓度(51.65±2.39)g/L下降了21.67%,乙酸、乙偶姻的产量分别提高了12.7%和57.14%,获得理想的单倍体菌株.本实验为S.cerevisiae单倍体的制备提供了一定研究经验,也丰富了酵母遗传学研究的理论基础.
酿酒酵母 单倍体制备 验证 代谢分析