从4 spergillus pseudoglaucus基因组中克隆酸性蛋白酶App基因,分别将其自身前导肽基因pro、来自Candida tropicalis的candidapepsin前导肽基因CP、Saccharomyces cerevisiae的proteinase A前导肽基因PP、Rhizomucor miehei的proteinase前导肽基因RP、Candida alb ic ans的aspartic proteinase 2前导肽基因SP导入基因的5'端,获得含不同前导肽的App基因片段,于Escherichia coli中表达.SDS-PAGE结果显示,不加前导肽时,蛋白质不表达;酶活测定结果显示,加入自身前导肽时,蛋白质proApp在55℃、pH 2.8条件下有最大酶活质903 U/mg.而其他前导肽能使蛋白质表达但蛋白质无酶活.圆二色谱结果显示,前导肽能够改变蛋白质二级结构组成,使其无法正确折叠.乳蛋白水解结果显示,在55℃,pH 2.2条件下,proApp有最大水解活力252 U/mg.该研究表明特定前导肽对蛋白酶异源表达与水解功能的重要性,同时为酸性蛋白酶水解乳蛋白提供了良好的研究基础.
酸性蛋白酶 前导肽 异源表达 蛋白质折叠 假灰绿曲霉