将实验室克隆得到的E.coli BL21/pET28a-bgaB-18重组菌株在IPTG的诱导下进行表达,对其表达的β-半乳糖苷酶性质进行研究.首先,通过离心收取重组菌菌体;其次,通过超声破碎菌体细胞,再用镍柱对重组蛋白质进行亲和层析;最后,收集层析液,再利用紫外分光光度计测定重组β-半乳糖苷酶活性,并研究其酶学性质.结果表明:该酶的最适反应温度为37℃,最适pH值为7.5;在温度30～50℃、pH 6.0～8.0范围内酶稳定性较好;Mg 2+、Mn 2+为其激活剂,Cu 2+为其抑制剂;测得K m=0.816 mmol/L,V max=45.87 mmol/(L·min).
β-半乳糖苷酶 诱导表达 分离纯化 酶学性质