目的 研究利用基因重组方法生产人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)衍生物的最佳表达及纯化条件.方法 选用大肠埃希菌偏爱密码子,以含人GLP-1的质粒为模板,用重叠PCR方法合成全长人GLP-1衍生物基因,并定向插入到高效表达载体pMFH中,用大肠埃希菌BL21进行表达,融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,用C18 Sep-Pak反相柱脱盐,然后融合蛋白经甲酸水解,水解产物经Ni-NTA柱和高效液相色谱(HPLC)纯化、制备后,目的肽由质谱鉴定.结果 利用载体pMFH在BL21中,GLP-1衍生物的最佳诱导表达温度为37℃、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的最佳浓度为0.6 mmol/L,最佳诱导表达时间为6 h;HPLC分析和制备GLP-1衍生物最佳洗脱条件为:30 min线性梯度洗脱,流动相A(100%乙腈)由10%至70%,流动相B(100%水,0.1%三氟乙酸)由90%至30%;流速1 ml/min;检测波长280 nm;质谱鉴定GLP-1衍生物的分子量为5548Da,与理论值相符合.结论 在最佳表达及纯化条件下可得到高产量和高纯度(＞98%)的GLP-1衍生物.
基因重组 胰高血糖素样肽-1衍生物 高效液相色谱 质谱