目的:建立一种简便、特异的检测组织血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)受体基因表达变化的半定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT- PCR)技术.方法:采用异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取组织总RNA,用生物素(biotin, B)标记的AngⅡ受体的特异引物进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化后,再与过氧化物酶标记生物素竞争性地结合包被到酶标板上的亲和素(avidin),经过显色反应并测定其吸光度值可反映特异性PCR产物量,从而推断模板核酸中AngⅡ受体基因的相对含量.结果:异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取组织总RNA的质量较高;PCR的最适反应条件为94 ℃变性30 s、59 ℃退火40 s、72 ℃延伸60 s,循环33次,最后72 ℃延伸5 min;酶标仪所测阴性对照和扩增产物光密度之差能够反映不同模板中AngⅡ受体基因的相对含量.结论:该方法是一种简便、特异、可行的半定量RT-PCR基因检测技术.
逆转录 聚合酶链反应 生物素 亲和素 血管紧张素Ⅱ 受体 基因表达