对牛小脑膜区肌醇磷脂激酶进行了11 500倍纯化,过程包括:TritonX-100抽提,硫酸铵沉淀,阳离子交换层析(phosphocellulose),亲和层析(Heparin Sepharose CL-6B)和阴离子交换层析(DEAE10,FPLC)等.纯化程度可达95%以上,对SDS-PAGE电泳结果进行扫描分析测其分子质量为56 ku.纯化的肌醇磷脂激酶的特异活性为450 nmol/mg.min, 动力学性质表现为ATP的表观Km值为7.9×10-7 mol/L,PI的表观Km值为6.6×10-7 mol/L. 腺嘌呤核苷是该酶的有效抑制剂,3.5×10-7 mol/L腺嘌呤核苷可使该酶活力降低约50%,而TritonX-100对该酶活力具有刺激作用,0.5% TritonX-100可使该酶表现为最高活力.
信号传导 牛小脑 肌醇磷脂激酶 纯化方法