利用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白沉降实验(GST pull-down),分别从体内外对N-乙酰氨基半乳糖转移酶(GALNT14)与金属硫蛋白2A(MT2A)之间的相互作用进行了验证.将MT2A全长cDNA片段克隆到pET-DsbA和pCMV-Myc载体上.表达并纯化了His-Dsba-MT2A和GST-GALNT14蛋白,在体外通过GST pull-down技术分析,显示MT2A能与GALNT14结合,证实了二者在体外的直接相互作用.继而,共转染pCMV-Myc-MT2A和pCDNA3.1-Flag-GALNT14到人乳腺癌细胞株MCF-7中,通过免疫共沉淀实验发现抗Myc抗体可以将GALNT14从细胞裂解液中沉淀下来,证实了它们在胞内的相互作用.结果显示了GALNT14和MT2A在体内外条件下能够发生直接相互作用,这为进一步明确GALNT14的功能及作用机制奠定了基础.
N-乙酰氨基半乳糖转移酶14(GALNT14) 金属硫蛋白2A(MT2A) 蛋白沉降实验(GST pull-down) 免疫共沉淀(Co-IP)