DNA损伤效应激酶Chkl是一种在进化过程中高度保守的蛋白激酶,它是联系DNA完整监控器和细胞周期引擎的关键介导蛋白.通过对一系列GFP标记的Chkl调控结构域缺失突变体细胞核定位变化分析,发现Chkl C末端调控结构域中的34个氨基酸残基(334～368)参与了调控损伤诱导的Chkl核积累.同时通过构建Chkl及不同Chkl调控结构域缺失突变体的pXJ41重组质粒,并与报告质粒pEGFP-N2共转染HeLa细胞,研究不同Chkl调控结构域缺失突变体的DNA损伤修复能力,同时检测了不同Chkl调控结构域缺失突变体对细胞周期的影响,并通过Western blot检测Chkl下游靶标Cdc25C的磷酸化情况进行了Chkl缺失突变体激酶活性分析.结果显示,C末端缺失108个氨基酸残基(368～476)的C△368活性高于全长Chkl,并且其过表达可诱导细胞G1/S期阻滞,延迟细胞周期进程.C末端缺失142个氨基酸残基(334～476)的C△334活性与全长Chkl相当,C末端缺失188个氨基酸残基(288～476)的C△288几乎没有酶活性,说明调控结构域包括抑制和激活元件.通过本研究对Chkl的功能有了新的更为深入的认识.
Chkl 核积累 结构域 DNA损伤 修复 细胞周期