目的:构建GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1(G3BP1)的真核表达载体pEGFP-C3-G3BP1,并观察其在人食管癌EC109细胞中的表达及定位.方法:采用RT-PCR法从EC109细胞中扩增G3BP1 cDNA全长序列,用限制性内切酶HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切PCR产物后克隆至pEGFP-C3载体,转化大肠杆菌DH5α后,挑取阳性克隆提取质粒,经双酶切及测序鉴定;将重组质粒用脂质体法转染EC109细胞,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测G3BP1的表达,荧光显微镜观察G3BP1的定位.结果:目的基因G3BP1的序列完全正确,并在EC109细胞中获得表达,荧光显微镜观察显示G3BP1定位于细胞质.结论:构建了pEGFP-C3-G3BP1真核表达载体,并在EC109细胞中过表达,G3BP1蛋白定位于细胞质,形成应激颗粒(stress granules,SGs).为进一步探讨G3BP1在食管癌细胞中的功能及其与SGs的相关性奠定了基础.
GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白Ⅰ(G3BP1) EC109细胞 细胞定位 应激颗粒(SGs)