目的:定量分析5个常用的保存温度下,保存时间和反复冻融对沙门菌和志贺菌基因组DNA的影响.方法:将沙门菌和志贺菌基因组DNA分别于室温(20～25℃)、4℃、-20℃、-40℃和-80℃保存10 d,其中3个冻存温度的核酸每天冻融1次;以微滴式数字PCR检测靶标基因拷贝数的变化,以指数回归模型进行曲线拟合,分析靶标拷贝数随冻融次数(或天数)的变化趋势.结果:菌株核酸在4℃存放时,10 d以内靶标拷贝数保持稳定.冻存时,10次冻融后靶标拷贝数仅剩余25.3％～31.7％(沙门菌)和8.6％～18.4％(志贺菌);即使仅1次冻融,靶标拷贝数也会下降到初始值的71.5％～75.4％(沙门菌)和67.5％～76.1％(志贺菌).室温(20～25℃)存放的核酸拷贝数变化趋势与-80℃保存冻融时类似.结论:本研究测定细菌靶标DNA拷贝数随冻融次数的变化趋势,可为研究者选择合适的细菌DNA保存方式和评估冻融对试验结果的影响提供数据依据.
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