目的 旨在细胞外和HEK293细胞中鉴定聚合酶δ相互作用蛋白2(POLDIP2)是否为泛素连接酶E4B的底物,并探究E4B能否介导POLDIP2经由26S蛋白酶体降解.方法 利用BL21表达并纯化POLDIP2蛋白,设置体外E1-E2-E3泛素传递反应,通过western blot检测POLDIP2的泛素化;同时,构建pcDNA-Flag-POLDIP2重组质粒并转染进HEK293细胞、E4B敲减稳转株(shE4B)、E4B过表达细胞株(E4B OE)中,通过免疫共沉淀检测E4B表达量的变化是否影响POLDIP2的泛素化水平;其次,进一步通过CHX Chase实验,以及在HEK293细胞中转染依次增量的pLVX-E4B质粒,通过western blot检测POLDIP2蛋白水平的变化.结论 胞外泛素化反应和胞内泛素化鉴定均证实泛素连接酶E4B可以将POLDIP2泛素化,并且能够介导其通过26S蛋白酶体进行降解.
泛素连接酶 E4B 聚合酶δ相互作用蛋白2 泛素化 降解