目的 制备非协调性分子5同源蛋白B (UNC5B)的单克隆抗体(mAb),分析其功能.方法 将UNC5B基因片段与原核表达载体pET-32a连接,连接产物转化大肠杆菌BL21 (DE3),进行原核诱导表达并纯化重组蛋白.用UNC5B重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选可稳定分泌抗UNC5B的杂交瘤细胞株,并用Western blot法、ELISA和流式细胞术鉴定.利用细胞划痕实验观察UNC5B mAb对黑素瘤细胞迁移能力的影响.结果 表达并纯化了UNC5B重组蛋白;筛选出1株高效价的2C9 mAb,通过ELISA、Western blot法和流式细胞术证实该mAb特异性识别UNC5B;划痕实验证明在netrin-1存在的条件下,UNC5B mAb可促进黑素瘤细胞迁移.结论 成功制备了UNC5B的特异性mAb,在netrin-1存在时,该抗体可促进黑素瘤细胞迁移.
非协调性分子5同源蛋白B(UNC5B) 蛋白纯化 单克隆抗体 细胞迁移