为建立分辨率高、重复性好的血清样品双向电泳技术,从血清样品的水化、等电聚焦、胶条的平衡、胶条的染色等几个方面对双向电泳操作条件进行了分析.结果表明采用以下的操作过程可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳结果:样品水化2h(25℃);胶条泡涨12～16h(25℃);17cm胶条的等点聚焦程序采用 250V线性1h/1000V线性1h/4000V线性2h/8000V线性3小时/8000V线性10h/500V快速0.5h,11cm的胶条的等点聚焦程序采用250V慢速4h/1000V快速2h/4000V快速1h/8000V快速2.5小时/8000V快速7h/500V快速30min;两次平衡各15～20min;银染条件为固定两小时或过夜,敏化50～60min,定影30～40min,显影10min左右,终止10min.这一研究对利用双向电泳分析血清蛋白具有很好的参考价值.
血清样本 双向电泳 优化