根据已有的资料显示LBP与LPS的结合位点位于其氨基末端的第91～100个氨基酸残基.在体外构建含有人LBP与LPS结合活性部分的穿梭质粒pBacmidtLBP,并且带上6×his的标签,用此穿梭质粒转染sf21昆虫细胞,获得重组病毒.然后用重组病毒液感染对数生长期的sf21昆虫细胞,72h后收获含有这种截断型人源化氨基末端LBP(NH-LBP)的培养上清.用金属亲和树脂纯化后,采用SDS-PAGE电泳以及Western-Blot鉴定所得到的纯化物.成功获得相对分子质量约为30000的NH-LBP.为进一步研究LBP在介导LPS活化靶细胞中的作用机制奠定了基础.
NH-LBP 杆状病毒表达系统 金属亲和层析 鉴定