以青海‘蕨麻4号’诱导培养的愈伤组织为材料,采用4因素3水平L9(34)正交实验,研究酶类组合、酶解时间、甘露醇浓度及离心速度等主要因素对蕨麻原生质体分离的影响,建立高效、稳定的蕨麻原生质体分离体系,为进一步通过原生质体融合、基因工程等方法对蕨麻进行品种改良奠定基础.结果表明:各因素对蕨麻原生质体产量的影响顺序为:酶类组合＞酶解时间＞甘露醇浓度＞离心速度;青海‘蕨麻4号’愈伤组织原生质体的最适酶解条件为:2.0％纤维素酶+0.75％果胶酶,40 r/min振荡酶解10h,甘露醇浓度为0.5 mol/L,离心转速为1 000r/min时原生质体的产量达最大(8.96×105 cells/g),活力为92.77％.
蕨麻 正交实验设计 原生质体 分离 纯化