CD3单抗通过多种途径有效地影响机体的免疫状态,在临床应用中具有极大的潜力.为克服鼠源单抗用于临床的局限性,拟采用抗体工程技术研制抗人CD3改形单链抗体.首先,将鼠源CD3单抗OKT3轻重链CDRs分别移植到人源抗体LS1轻链和Nd重链的框架中,经计算机模拟其空间构象,进行残基替换,确定CD3改形VL、VH氨基酸序列,化学合成改形VL、VH基因,将其分别插入至载体pROH80中,构建成抗人CD3改形单链抗体(scFv)基因.再将scFv基因克隆至构建的表达载体pALM中诱导表达,产物主要为包涵体.对包涵体进行变性和复性,用IMAC法纯化,FACS法测定CD3改形scFv与抗原的结合活性,显示其竞争抑制率为18%.
CD3 改形抗体 表达载体 构建 表达