以实验室选育的Mitsuaria sp.1412菌株发酵产壳聚糖酶,采用硫酸铵分级沉淀,表明沉淀饱和度为60％ ～90％效果较好,壳聚糖酶纯化倍数达1.85倍.然后依次采用离心超滤、离子交换层析和Sephadex G-200凝胶柱层析进行纯化.SDS-PAGE凝胶电泳检测表明,产物仅有一条清晰的条带,显示该壳聚糖酶的分子量为33.6 kD.酶学性质结果表明,该酶的最适反应pH和温度分别为5.5、50℃,并且该酶在pH5.0～8.0和35～45℃范围内,稳定性良好.酶最大反应速度Vmax为2.8μmol/min,常数Km为168.4 mmol/L.对该酶的酶解产物进行分析发现其酶解产物为壳二糖和壳三糖.
壳聚糖 壳聚糖酶 分离纯化 酶学性质 SephadexG-200凝胶柱层析 SDS-PAGE凝胶电泳