采用改进的重叠延伸聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,简便、快速地制备DNA分子质量标准.首先,利用普通PCR技术扩增5′和3′两端序列一致的DNA片段.随后,在重叠延伸PCR的变性和退火过程中,2个单链的3′端互补序列可形成双链,且这些单链片段可同时作为模板和引物,在PCR延伸过程中延长片段.随着反应循环数的增加,小片段产物逐渐减少,大片段产物逐渐增多.取不同循环数的重叠延伸PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,根据电泳结果选择最佳的PCR循环数或不同循环数的最佳组合,无须回收纯化,即可得到分子质量相差100 bp的DNA分子质量标准.经琼脂糖凝胶电泳检测,所制备的DNA分子质量标准条带清晰、分子质量准确、条带均一性好,可用于标记DNA分子质量大小.总之,本研究用于DNA分子质量标准制备的方法操作简单,周期短,成本低,无副产物,且能够根据具体需求定制DNA分子质量标准的大小.
DNA分子质量标准 重叠延伸聚合酶链式反应 DNA电泳