目的 检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)对MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞增殖的影响及神经酰胺(Cer)的介导作用.方法 首先确定TNF-α的最佳处理剂量和时间,免疫荧光细胞化学染色结合共聚焦显微镜技术检测细胞Cer含量的变化,采用50 ng/mL TNF-α单独或联合ASM抑制剂地昔帕明(Des)、神经鞘氨醇激酶1(SPHK1)抑制剂N,N,-二甲基鞘氨醇(DMS)处理乳腺癌细胞,检测其在TNF-α所致细胞增殖变化中的作用.采用MTT法检测细胞增殖;Westem blot法检测酸性鞘磷脂酶(ASM)、SPHK1及凋亡与增殖相关蛋白Bcl2、Bax、增殖细胞核抗原(PCNA)表达.结果 TNF-α可抑制MCF-7细胞增殖,促进MDA-MB-231细胞增殖,且具剂量和时间依赖性;在MCF-7细胞,TNF-α可显著增加ASM蛋白表达,对SPHK1蛋白表达无明显影响,而在MDA-MB-231细胞,可同时增加ASM和SPHK1蛋白表达;TNF-α作用后,MCF-7细胞Cer含量显著增加,ASM抑制剂Des预处理可抑制此作用;TNF-α作用可降低MDA-MB-231细胞Cer含量,此作用可被SPHK1抑制剂DMS所阻止;Des可抑制TNF-α作用所导致的MCF-7细胞增殖降低、Bcl2表达降低、Bax表达增加;DMS可抑制TNF-α作用所导致的MDA-MB-231细胞PCNA和细胞增殖指数的高表达.结论 TNF-α通过调节ASM和SPHK1蛋白的表达水平调控Cer生成,影响MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞的增殖.
乳腺癌 神经酰胺 肿瘤坏死因子α(TNF-α) 细胞增殖