为确定杂合抗菌肽Mg基因的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体pPICZαA-MgJ经Sac Ⅰ线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)扩增验证,甲醇诱导表达.优化杂合抗菌肽MgJ诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度、初始菌体浓度表达条件.结果表明杂合抗菌肽MgJ的最佳表达条件为:28℃、250 r/min诱导培养,每24 h添加体积分数0.5％的甲醇,诱导时间120 h,MgJ表达量可达11.9 mg/L.纯化后获得的表达产物MgJ对Saureus ATCC 29213有较好的抑菌活性,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为10 μg/mL.
杂合抗菌肽MgJ 毕赤酵母 表达条件优化