目的 建立并优化乳液单引物PCR扩增法,高效构建高质量随机ssDNA文库,以提高从随机文库中筛选适配子的几率.方法 构建长90 bp(含52 bp随机序列)寡核苷酸文库,用乳液PCR转换成dsDNA文库,再以dsDNA文库为模板,分别用乳液单引物PCR和常规单引物PCR扩增制备ssDNA文库,并对二者进行比较.通过改变模板、聚合酶、dNTP和引物浓度优化乳液单引物PCR反应条件.结果 乳液PCR能高效扩增出dsDNA文库且无副产物;常规单引物PCR构建ssDNA文库时,15个循环时即有大量副产物产生,且与产物条带混合一起无法分离;而乳液单引物PCR从15 ～35个循环均无副产物生成,且产物量多于常规单引物PCR.在优化乳液单引物PCR时,模板浓度对产物量影响最大,引物浓度对副产物的量影响最大.结论 乳液单引物PCR能显著提高产物量并控制副产物的量,可提高指数富集配体进化(SELEX)技术筛选效率.
乳液PCR 乳液单引物PCR 适配子 指数富集配体进化技术 随机ssDNA文库