用PCR法从质粒pHB3中扩增了人红细胞带3蛋白胞质片段(CDB3)基因. PCR产物经限制性内切酶切割后与多克隆位点处带有编码6个组氨酸序列的高效表达载体pET28b连接, 构建为重组子pCDBHistag. 重组子经酶切及序列测定后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达, 可溶性目的蛋白占菌体总蛋白的40%左右. C端带有6个连续组氨酸的带3蛋白胞质片段作为融合蛋白不仅可以降低宿主菌蛋白酶对其水解程度, 而且简化了目的蛋白的纯化过程. 经一步螯合Ni2+的亲和层析获得了电泳纯的带3蛋白胞质片段融合蛋白. 活性测定结果表明, 带3蛋白胞质片段融合蛋白能够抑制醛缩酶(Aldolase)活性的70%, 与文献报道的人红细胞内带3蛋白胞质片段具有相同的功能.
带3蛋白胞质片段 融合蛋白 亲和层析