目的 基于水母发光蛋白生物发光免疫分析技术,建立一种细胞角蛋白19-mRNA(CK19-mRNA)定量检测技术.方法用生物发光分析技术检测淋巴细胞的CK19-mRNA.利用RT-PCR对CK19-mRNA进行放大,PCR引物的5'端用生物素标记,然后用交联了地高辛寡核苷酸探针与目标生物素化的DNA模板杂交.杂交复合物与包被在微孔板上的链亲合素结合,加入标记了水母发光蛋白的地高辛抗体与地高辛特异结合,再加入钙离子激发水母发光蛋白发光,发光强度正比于CK19-mRNA的量.结果 该技术的线性范围可达5个数量级,标准曲线的直线回归系数r=0.98～0.99.探测灵敏度可达22 amol/L的CK19-mRNA产物.重复性检测中,批间变异系数＜70%,批内变异系数＜6%.结果 生物发光分析技术是一种灵敏可靠、非放射性的微量CK19-mRNA定量方法.
细胞角蛋白19-mRNA 逆转录聚合酶链反应 生物发光