超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的主要抗氧化酶家族.基于原核表达系统,成功表达了拟步甲科Tenebrionidae小胸鳖甲Micordera punctipennis胞外铜锌SOD的重组蛋白(本文定义为Trx-His-MpecCu/Zn-SOD).经Ni2+亲和层析法纯化重组蛋白后,研究了重组蛋白的部分酶学性质.通过足垫加皮下注射法3次免疫小鼠后,分别用ELISA和Western blot的方法检测抗体效价和抗体特异性.结果 表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白浓度为1.33 mg· mL-1,酶活力为27.52 U·mg-1.Trx-His-MpecCu/Zn-SOD在25 ～ 45℃具有比较稳定的酶活性,在35℃最高,同时表现出比较广泛的酸碱耐受性(pH3 ～12),最适pH为9.0,表明重组蛋白的酶活性相对比较稳定.蛋白免疫法制备的鼠抗MpecCu/Zn-SOD多克隆抗体滴度高于1∶819 200.Western blot结果显示,该抗体能免疫结合重组蛋白Trx-His-MpecCu/Zn-SOD和小胸鳖甲体内天然MpecCu/Zn-SOD,但不能与黄粉虫Tenebrio molitor的总蛋白结合,说明制备的抗体效价较高且特异性较好.本研究结果为小胸鳖甲ecCu/Zn-SOD功能的深入研究奠定了基础.
小胸鳖甲 胞外铜锌超氧化物歧化酶 原核表达 多克隆抗体