用限制性内切酶酶切的方法把人工合成的GFMcry11B基因编码区克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,构建成重组表达质粒pGC.在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达了GST-GFMCry11B融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的21%,其表达产物主要以包涵体的形式存在.对包涵体蛋白进行可溶性处理,用Glutathione Sephrose 4B纯化出GST-Cry11B融合蛋白.Thrombin酶切后得到Cry11B蛋白,将其作为抗原免疫家兔获得了滴度(ELISA)为1:8000的抗血清,并具有较强的特异性.
GFMcry11B基因 原核表达 融合蛋白 多克隆抗体