为了弥补常规基因转化法存在的缺点,本研究采用琼脂糖凝胶电泳分析法探讨了细胞穿膜肽(cell penetrating peptides,CPPs)与DNA的最适比例,用转化率探讨了CPPs-DNA复合物的制备条件、保存条件和解冻条件等对CPPs基因转化的影响,再用CPPs基因转化法进行了牛瑟氏泰勒虫p33基因的克隆与原核表达,进一步验证CPPs基因转化的可行性.结果 表明,CPPs与质粒pMD19-T最适电荷比为16∶1;CPPs-DNA复合物的最适制备条件为室温孵育30 min;将培养液D600约为0.6的大肠杆菌菌液在-20℃冰箱保存3月的转化率为(5.58±0.19)×105 CFU/μg,仍符合常规转化要求.按照所优化的条件成功地克隆与表达了牛瑟氏泰勒虫p33基因.本研究结果将为基因转化提供一种新方法.
细胞穿膜肽(CPPs) 基因转化 牛瑟氏泰勒虫 p33基因