目的构建携载人组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)基因的重组腺病毒载体,为基因治疗提供实验基础.方法利用基因重组技术,将人TFPI基因连接到穿梭质粒pDC316中,然后将腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre以及重组穿梭质粒pDC316-TFPI共转染293细胞,并在其中发生Cre重组酶介导的位点,特异性重组及腺病毒包装,扩增后进行滴度测定.将包装成功的携带人TFPI基因的重组腺病毒(Ad-TFPI)转染兔颈动脉,并用携带LacZ报告基因的重组腺病毒(Ad-LacZ)作为对照,3 d后RT-PCR、ELISA法检测人TFPImRNA、蛋白的表达.结果得到了携带人TFPI基因的重组腺病毒,包装的病毒蚀斑形成单位(plaque formation unit,PFU)滴度为7.6×1012/L.在Ad-TFPI转染兔颈动脉后3 d,RT-PCR法和ELISA法均检测出TFPI表达,Ad-LacZ转染后未测到人TFPI的表达.结论成功构建了人TFPI腺病毒表达载体,为下一步的基因治疗提供了基础.
组织因子途径抑制物 腺病毒 基因疗法