以陆地棉'CRI36'的叶片为材料,使用RACE技术克隆到了棉花叶绿体Cu/Zn-SOD酶基因.基因序列全长共1 043 bp,含有完整的开放阅读框.推导的氨基酸序列分析显示含有叶绿体信号肽,和已知植物的叶绿体Cu/Zn-SOD酶蛋白的氨基酸残基的同源性在66%～74%之间.基因的表达谱分析显示:棉花叶绿体Cu/Zn-SOD酶基因主要在叶片、茎中表达,根、花和下胚轴中没有检测到信号,即基因的表达主要在棉花的绿色组织.不同生育期的表达谱结果证实:该基因主要在苗期表达,以后表达逐渐减少.用pET-21a(+)构建了原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)的表达结果显示:表达后得到一个29.0 kD的新蛋白,其分子量与预期目标一致.对SOD酶活性的分析证实,重组菌的酶活性显著增加,证明克隆的基因具有活性.
棉花 铜锌超氧化物歧化酶 cDNA末端快速扩增 基因表达