探究鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC的免疫原性与抗原性,评价其免疫学功能,以期为嗜水气单胞菌亚单位疫苗的开发提供理论依据.采用生物信息学方法预测TolC蛋白的理化性质,分析其菌属间同源性与进化关系,构建TolC蛋白表达菌株并确定其最佳诱导表达条件,包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化TolC蛋白,免疫小鼠制备TolC抗血清,Western blot检测抗血清特异性与效价,免疫酶联法模拟TolC蛋白抗血清对不同鱼类致病菌的体外识别,探究TolC蛋白的抗原性.结果表明,TolC蛋白为孔道蛋白,在气单胞菌属间进化保守.成功表达、纯化了TolC蛋白,其最佳表达条件:菌液OD600为1.0、IPTG浓度0.1 mmol/L、37℃ 诱导8 h.Western blot结果表明,制备获得特异性TolC抗血清,效价达到1:3200;ELISA结果显示,TolC抗血清与嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、溶藻弧菌均存在识别作用.综上,嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC具有较好的免疫原性和抗原性,并可能对不同鱼类致病菌存在交叉免疫保护作用.
嗜水气单胞菌 外膜蛋白TolC 原核表达 诱导条件 多克隆抗血清 抗原性