对前期设计的来源于淀粉液化芽孢杆菌DSM 1061的3种中性植酸酶突变体(D148E/H149R、Q67E/N68R、D191E)的稳定性及催化效率等进行研究,并对影响其性质的结构因素进行分析.结果表明:与野生酶相比,在85℃条件下,突变体D191E半衰期延长了4.3 min,但催化效率下降为野生酶的48.9％;突变体D148E/H149R催化效率为野生酶的229％,半衰期与野生酶基本一致;突变体Q67E/N68R催化效率为野生酶的93％,半衰期延长了0.7 min.圆二色光谱分析结果显示,D148E/H 149R催化效率提高最为显著,α-螺旋含量由野生酶中11.79％降至2.90％,无规卷曲含量增加;Q67E/N68R性质与野生酶接近,其二级结构变化最小;D191E催化效率降低,α-螺旋含量增加至24.59％.对野生酶和突变酶的同源模型分析发现,残基D191具有较大的B因子值,不利于酶的热稳定性,各突变残基周围的氢键有所变化.同源模型的分析也将为植酸酶的进一步改良提供理论依据.
中性植酸酶 定点突变 催化效率 圆二色光谱