将克隆得到的杜氏盐藻DCA1和CA基因的启动子区与bar基因和NOS polyA终止子片段融合,分别构建成pMDDC-B和pMDC-B转基因杜氏盐藻表达载体.用基因枪法将两种表达载体转化入杜氏盐藻细胞,通过除草剂草丁膦筛选培养获得转化藻株,对转化藻株进行分析.对转化杜氏盐藻藻株的筛选培养结果表明:pMDDC-B和pMDC-B载体中的外源bar基因能在杜氏盐藻细胞中稳定或瞬时表达.同时在氦气压力为690 kPa条件下,微弹轰击2次比微弹轰击1次或3次的效果更好.对pMDDC-B转化杜氏盐藻得到的稳定表达的转化藻株进行的PCR和Southern印迹分析的结果表明:外源的bar基因确已整合到杜氏盐藻基因组中.Northern印迹分析表明:DCA1基因启动子驱动bar基因在杜氏盐藻细胞中的表达效率受氯化钠浓度梯度调控.推测首次克隆得到的DCA1基因启动子可能是一种活性高、安全性好的高渗诱导性启动子;杜氏盐藻DCA1和CA基因启动子区的GT高度重复序列,可能与杜氏盐藻高度耐盐的分子机制有关.
杜氏盐藻 双拷贝碳酸酐酶 碳酸酐酶 启动子 bar基因 转化