应用一种简单的方法构建出一株大肠杆菌脂肪酸降解基因B(fadB)缺陷型菌株KM32B(fadB∷Tet).该方法不需克隆和第二轮PCR,只需要一对各70个碱基的引物.引物的前45个碱基分别与大肠杆菌目的基因的3′和5′互补,后25个碱基分别与抗性(四环素Tet)基因的3′和5′互补.将PCR产物,即抗性基因两侧各带与目的基因3′和5′互补的45个碱基的片段,通过高频电转化入大肠杆菌KM32菌株.重组子经PCR验证整个fadB基因区域因被四环素基因置换而敲除.将两种Burkholderia caryophylli AS 1.2741聚羟基脂肪酸酯合成酶基因, phaC1Bc和phaC2Bc,在此缺失突变株中进行了表达.结果表明聚羟基脂肪酸酯的合成能力较相同条件下的野生型大肠杆菌有所提高.
缺失突变株 聚羟基脂肪酸酯 大肠杆菌 fadB PHA合成酶