应用化学合成的20 nt寡核苷酸引物,诱导高粱psbA基因启动子"-35"元件(TTGACA)中的第1位T碱基和第3位G碱基发生突变,获得3个突变体ATTACA,GTGACA和ATGACA. 在菠菜叶绿体蛋白质提取物系统中,检测突变的及野生型的高粱psbA基因启动子与蛋白质的结合能力. 凝胶阻滞实验结果表明,野生型的具有很强的蛋白质结合条带,单碱基突变体ATGACA和GTGACA的蛋白质条带的强度明显下降,而双碱基突变体ATTACA的蛋白质结合条带的强度反而比野生型增强. 由此可见"-35"元件在调控psbA基因启动子与叶绿体特异蛋白质的结合反应中,具有重要的作用,其中个别碱基的突变便会显著地影响启动子与蛋白质的结合能力.
高粱 psbA基因 5’-非编码区 定点突变 表达调控