目的:探讨从小鼠H22肝癌细胞中提纯的热休克蛋白gp96(HSPgp96)对小鼠腹腔巨噬细胞(PEMψ)NO释放的影响及其与细胞内外游离钙的关系.方法:(1)用亲和层析和离子交换层析等方法从小鼠H22肝癌细胞中获得纯化的HSPgp96.(2)用细胞内NO荧光探针DAF-FM-DA监测HSPgp96作用于小鼠PEMψ过程中,单个细胞NO信号的动态变化.(3)使用细胞膜和细胞内钙通道抑制剂及钙离子载体后,再观察HSPgp96作用后PEMψ内NO信号的变化.结果:小鼠PEMψ受Gp96刺激后显示NO的荧光强度立即上升,120s时达峰值87.58%±18.17%,在830s时降低接近正常水平.当分别抑制细胞外钙的内流和阻断细胞内钙库释放功能时,NO荧光值高峰明显降低.钙离子载体A23187可迅速诱导PEMψ内NO的合成,120s时达峰值196.02%±28.68%,随后轻度下降后又逐渐升高,20分钟观察结束时增幅达峰值216.38%±38.39%.如同时阻断胞外钙的内流及胞内钙库释钙功能时,PEMψ受Gp96刺激后NO荧光值高峰几乎消失.结论:Gp96可促使小鼠PEMψ的NO生成快速增加,并与细胞内钙的浓度升高有关.
热休克蛋白gp96 一氧化氮 游离钙 激光共聚焦扫描显微镜 巨噬细胞