目的 利用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,通过同源重组的方法,在酵母菌株Y187中构建人脑全长cDNA文库.方法 利用SMART技术,以人脑总RNA为模板,反转录合成cDNA第一链.再在DNA聚合酶下,通过长距离PCR,扩增双链cDNA.同时构建pGADT7-Rec质粒载体.纯化的ds cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态Y187,经胞内同源重组形成环状文库质粒.应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人脑cDNA文库.结果 所获得的文库容量为1.2×106,重组子不同插入片断大小在0.3～2 kb之间.结论 在酵母菌株Y187成功构建了用于酵母双杂交的人脑cDNA文库.
SMART技术 同源重组 酵母双杂交 人脑cDNA文库