采用PCR方法扩增猪肥胖基因编码的成熟蛋白cDNA序列,并在5＇端加上BamHⅠ位点,3＇端加上EcoR Ⅰ位点,将5＇端密码子CCC转变为大肠杆菌常见密码子CCG,扩增得到459 bp的片段,克隆于融合表达载体pGEX-2T BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ位点,酶切、测序正确,经0.1 mmol/L IPTG诱导表达出一条约42 kD的融合蛋白,其中26 kD为pGEX-2T中带有的谷胱苷肽转移酶,16 kD是猪肥胖基因表达产物瘦蛋白.利用非融合表达产品制备抗血清,检测融合表达的重组蛋白,Western-blot为阳性.
猪 肥胖基因 大肠杆菌 表达