用PCR方法从毕赤酵母(Pichia pastoris)基因组DNA扩增甲酸脱氢酶(FDH)基因,通过定点突变密码子TAG(649-651位碱基)为GAG,突变后的基因片段插入表达载体pET-22b(+)构建质粒pET-FDH,转化E.coli BL21(DE3).基因工程菌在IPTG诱导下高效表达可溶性的FDH融合蛋白,蛋白的表达量占基因工程菌株总蛋白的30%.工程菌破壁上清液采用一步亲和层析分离,得到比活力为6.45U/mg的重组FDH.
毕赤酵母 甲酸脱氢酶 基因表达 分离纯化