目的：构建稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系，探讨SidT2基因过表达与细胞转运双链RNA （dsRNA）能力的关系。方法：根据人SidT2基因序列设计引物，克隆其编码区序列，经双酶切后与pEGFP-N3载体连接，构建其真核表达载体，分别瞬时转染BHK及MDCK细胞，并使用G418筛选稳定表达细胞系；在此基础上，体外转录合成绿色荧光蛋白（GFP）dsRNA，以GFP基因为报告基因，进一步分析过表达人SidT2基因对BHK及MDCK细胞转运dsRNA能力的影响。结果：经基因克隆、酶切、连接后，构建了人SidT2基因真核表达载体pEGFP-SidT2；经瞬时转染及G418筛选，获得稳定过表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系，实时荧光定量RT-PCR分析表明，其SidT2基因转录水平分别提高71、64.5倍；稳定表达SidT2基因后，在培养液中添加GFP dsRNA，GFP荧光强度较对照细胞分别降低88.1%、73.7%，表明稳定表达SidT2基因的BHK、MDCK细胞转运dsRNA的能力显著增强。结论：构建了稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系，SidT2基因过表达可显著提高外源性dsRNA的转运能力。
SidT2基因 真核表达 BHK细胞系 MDCK细胞系 细胞转运 双链RNA