对小鼠成骨细胞的体外分离培养方法进行了摸索,并对其生物学特性进行了鉴定.手术法分离新生小鼠颅骨骨片,用0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)预消化20~30 min,而后用0.08%胶原酶+0.05%胰蛋白酶+0.004%EDTA的复合酶多次消化(每次10 min)收集细胞,然后接种于细胞培养瓶中进行培养,并通过苏木精-伊红(HE)染色、BCIP/NBT Kit碱性磷酸酶(ALP)染色、Von Kossa法钙结节染色和四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法对培养细胞进行生物学鉴定.结果发现,分离得到的细胞92%为存活细胞,差速贴壁培养后可筛选得到高纯度的成骨细胞,原代培养8 d后可形成单层细胞,传代培养6～7 d后可形成单层细胞.这些细胞有ALP活性,并具有体外钙化能力.结果表明,本研究建立的小鼠成骨细胞分离培养与鉴定方法是可行的.
成骨细胞 分离培养 鉴定 碱性磷酸酶 小鼠