利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管反应器的最佳技术路线.为建立基于Cre/loxp系统的鸡卵清蛋白基因(Ovalbumin gene,OV)位点的双交换打靶载体系统,本研究克隆了鸡的OV基因7.8 kb片段,并与克隆的内部核糖体进入位点(IRES)、人工合成的含有Cre重组酶识别位点变异体交换盒m2/loxp71-EGFP-loxp66,一起构建了含有Hsv-tk负筛选标记的针对鸡卵清蛋白基因位点的敲入型共表达基因打靶载体pSSC-m2/71EGFP66IRES-OV7.8;以猪β干扰素基因(βInterferon,IFN-β)为目的基因构建了穿梭载体pMD-m2/66-MCS-IFN-MCS-Loxp71,经过限制酶酶切及部分测序鉴定,所构建载体结构正确.进一步将它们共转化组成性表达Cre的细菌BM25.8,验证了loxp突变位点对重组反应的有效性
基因打靶 胚胎干细胞 OV Cre重组酶 RMCE