背景与目的:支气管上皮细胞的癌变是一个多基闲参与、多阶段的复杂过程,但癌变机理仍不清楚,应用蛋白质组学技术研究此过程有可能识别癌变相关蛋白质,对揭示肺鳞癌癌变机制具有重要的意义.本研究的目的是优化支气管上皮组织的蛋白质样品制备方法,建立人支气管上皮癌变各阶段组织的2-DE图谱并进行差异分析,为鉴定肺鳞癌癌变相关蛋白质奠定基础.方法:收集、筛选人支气管正常上皮、鳞状上皮化生、不典型增生和上皮浸润癌组织标本.改良的脱氧胆酸-三氯醋酸(deoxycholate-trichloroaetic acid,DOC-TCA)法提纯支气管上皮总蛋白质,应用固相pH梯度双向凝胶电泳分离各阶段组织的总蛋白质,凝胶经银染显色后,用lmageMaster 2D软件分析图谱,比较差异表达蛋白质.应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质.结果:应用改良的DOC-TCA法提纯总蛋白质进行双向电泳,获得了分辨率高、重复性好的人支气管上皮组织的双向电泳图谱,支气管正常上皮、鳞状上皮化生、不典型增生和上皮浸润癌组织凝胶的平均蛋白质点数依次为1 189.50±39.89、1227.00±37.90、1273.00±43．31和1326．00±66.63.重复性实验表明,同一例鳞状化生组织3块凝胶的平均点数为1216±75,平均匹配点数为1 082±67,匹配率达89.3％,且3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不胶间蛋白质点在IEF方向的偏差是(0．865±O．247)am,在SDS-PAGE方向上的偏差为(0．971±O．104)mm.比较32例组织的双向凝胶电泳图谱发现,四阶段的平均总蛋白质点数存在明显差异(P<0．05),且前一阶段与后一阶段间的差异蛋白质点数分别为31.50±7.67.41.00±9.7.56.00±8.96.在不型增生与上皮浸润癌的差异点中,随机取23个蛋白质点进行肽质指纹图分析,鉴定出一些与细胞增生、分化、周期调控、信号转导或肿瘤发生等有关的蛋白质.结论:(1)改良的DOC-TCA沉淀法是一种较好的支气管上皮组织蛋白质样品制备法;(2)建立了分辨率较高且重复性好的人支气管上皮组织癌变各阶段的2．DE图谱,鉴定了一些可能与支气管上皮癌变相关的差异表达蛋白质,为进一步探讨肺鳞癌癌变机理及筛选肺鳞癌的特异性分子标志物奠定了基础.
人类 支气管上皮 癌前病变 双向凝胶电泳 蛋白质表达谱 差异蛋白质