为了确定问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性OmpL1s抗原膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型,为OmpL1s用于研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒抗原提供依据.采用显微镜凝集试验(MAT)检测四川地区156份钩体病人血清标本.用PCR和核苷酸序列分析,了解中国流行的钩体主要血清群ompL1基因型.采用常规基因工程技术构建ompL1/1和ompL1/2主要基因型原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物rOmpL1/1和rOmpL1/2.采用胶体金免疫电镜技术,对OmpL1s进行膜定位.建立了基于rOmpL1s的ELISAs,检测钩体病人血清中特异性抗体水平及其类型.试验结果表明,黄疸出血群钩体仍然是四川地区最主要的优势钩体血清群.中国流行的钩体主要血清群ompL1基因可有ompL1/1和ompL1/2两个基因型,两者核苷酸和氨基酸序列相似性之间有较明显的差异.OmpL1s是位于钩体外膜表面的蛋白分子.不同稀释度的156例钩体病人血清标本中,rOmpL1/1和rOmpL1/2特异性IgM阳性率分别为67.9%～79.5%和75.0%～75.6%,特异性IgG阳性率分别为71.8%～79.5%和75.0%～76.9%.上述试验结果提示,OmpL1s是位于钩体表面属特异性蛋白抗原.自然感染钩体时,rOmpL1/1和rOmpL1/2均可诱导机体体液免疫应答并产生IgM和IgG两类血清抗体,且两者之间有广泛的抗原交叉反应.rOmpL1/1和rOmpL1/2可作为研制通用性钩体基因工程疫苗和检测试剂盒的候选抗原.
问号钩端螺旋体 ompL1基因 重组表达 分子定位 免疫应答