在N-糖基化途径中,双功能型的甘露糖转移酶Alg2蛋白催化两个甘露糖分别以α-1,3/1,6连键组装到多萜醇寡糖Man1GlcNAc2-PP-Dol上,形成Man3GlcNAc2-PP-Dol.作者探究人来源的Alg2蛋白(hAlg2)在酿酒酵母中的体内功能和在大肠杆菌中表达并纯化后的体外活性.构建酿酒酵母w303a-GAL1pr-ALG2,并利用该菌株的生长被葡萄糖抑制的特点,发现过表达hALG2基因能够回补其生长缺陷,证实了hALG2和ScALG2的功能同源性.作者利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化了 TrxA-hAlg2,并以Man1GlcNAc2-PP-Phy(PPGn2M1)代替hAlg2的天然底物,测定了其体外活性.结合液质联用的方法,检测发现TrxA-hAlg2具有催化PPGn2M1生成PPGn2M2和PPGn2M3的甘露糖基转移酶活性,为建立基于大肠杆菌表达纯化的hAlg2体外反应体系奠定了基础.
N-糖基化 Alg2蛋白 甘露糖基转移酶 液质联用