为构建一株高效表达内切β-1,3-葡聚糖酶的毕赤酵母菌株,并用于水解热凝胶生产β-1,3-葡寡糖.作者首先对哈茨木霉来源内切β-1,3-葡聚糖酶基因进行随机突变,并构建BGN13.1a突变库;然后采用高通量技术及刚果红平板筛选高表达菌株;最后采用TLC薄层色谱和MALDI-TOF MS分析热凝胶水解产物,并分析了酶学性质.结果表明,本研究成功筛选得到毕赤酵母突变株K827,酶活较初始菌株提高了 25％;其水解产物聚合度为2～10,且寡糖产量为1.492 g/L;其最适pH与最适温度分别为5.5和50℃;相较亲本酶,突变株K827的pH稳定性与温度稳定性都有明显提高.本研究为内切β-1,3-葡聚糖酶的工业化生产及应用提供依据.
内切β-1,3-葡聚糖酶 毕赤酵母 易错PCR 酶学性质