分子质量相对小的DNA结合蛋白Sso7d可以帮助蛋白折叠,提高蛋白表达量并有助于晶体生长.为解决金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)脱水鲨烯脱氢酶(dehydrosqualene desaturase,CrtN)蛋白较难在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行可溶表达的问题,借助小分子DNA结合蛋白Sso7d,将其与CrtN基因通过重叠PCR(Overlapping PCR)连接起来,连至pET-46 Ek/LIC载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行带有6-His标签的融合表达.通过核酸电泳及序列测定进而确定所连接基因的正确性,经Ni-NTA亲和层析与凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)对目的蛋白进行确证.通过对CrtN-Sso7d以及Sso7d-CrtN进行分析比较,发现CrtN-Sso7d的表达量较高且能得到较多高纯度蛋白,这将被用来进行后续蛋白结晶和结构解析工作.
脱水鲨烯脱氢酶 DNA结合蛋白 金黄色葡萄球菌 融合表达 纯化