为研究血红铆钉菇中克隆的一种新型真菌免疫调节蛋白基因以及其在毕赤酵母GS115中进行高效重组表达,采用同源克隆的方法从血红铆钉菇菌丝体基因组DNA中扩增得到一个新的真菌免疫调节蛋白基因——FIP-cru,构建FIP-cru真核表达重组载体,并在毕赤酵母GS115中进行FIP-cru重组表达.利用硫酸铵沉淀、琼脂糖镍纳米磁珠纯化目的重组FIP-cru蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot验证重组FIP-cru表达情况.利用体外血细胞凝集实验与MTT法检测rFIP-cru生物学活性.结果表明:FIP-cru属于真菌免疫调节蛋白家族,包含342bp,编码113个氨基酸,经生物信息学分析发现,FIP-cru与其他真菌免疫调节蛋白有较高的同源性.SDS-PAGE和Western blot检测表明FIP-cru在毕赤酵母GS115中正确重组表达,粗蛋白表达水平为148.5mg·L-1.纯化后的rFIP-cru可以在体外凝集小鼠和羊的血细胞而不凝集人血细胞,MTT法表明rFIP-cru可明显刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖.FIP-cru为一种新型真菌免疫调节蛋白,毕赤酵母高效重组表达的rFIP-cru具有良好的生物学活性.
血红铆钉菇 真菌免疫调节蛋白 毕赤酵母GS115 重组蛋白 琼脂糖镍纳米磁珠 血细胞凝集