用SDS、CTAB和改良CTAB法分别提取大花蕙兰叶片基因组DNA,发现以改良CTAB法提取的DNA纯度高,产率也较高.以5'-GGTGCTCCGT-3'(BA440)为随机引物,并以大花蕙兰品种‘金杯'(Cymbidium hybridium cv.Hiroshima Golden Cup"Sunny Moon")的DNA为模板,对RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)反应体系进行了优化研究,结果表明,25μl反应体系中,Mg2+、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:2.0 mmol/L、1.0 U、0.20μmol/L、25 ng和0.20 mmol/L.扩增程序优化为:94℃预变性4 min;94℃变性0.5 min,37℃退火1 min,72℃延伸1 min,40个循环;最后72℃延伸7 min.
大花蕙兰 基因组DNA提取 CTAB RApD