为筛选血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblast, AF)与肌成纤维细胞(myofibroblast, MF)间表型转化有关的基因, 实验建立了大鼠胸主动脉AF和MF两种细胞模型, 用差异显示聚合酶链反应(DD-PCR)技术获得表达差异片段, 对差异片段进行克隆和测序分析, 并用定量PCR和Northern blot对差别显示结果进行验证.用反义核酸转染技术观察骨桥蛋白(osteopontin, OPN)对AF迁移的影响. 结果表明, 两种表型细胞存在明显的基因表达差异, 其中一个在MF下调的差异片段与GenBank 中NADH脱氢酶亚单位5 (NADH dehydrogenase subunit 5, Nd5)基因高度同源.另一个在MF上调的差异片段与OPN基因同源.上述差异表达结果被定量PCR及Northern blot证实.此外还有4个表达序列标志(expressed sequence-tag, EST)在GenBank中未查到同源序列.反义OPN寡脱氧核苷酸可抑制AF的迁移活动. 结果提示, AF转化为MF可能与ND5基因下调、 OPN上调及其它未知基因的表达改变有关.应用反义技术适度抑制OPN表达在防治血管重塑中具有重要作用.
血管外膜 成纤维细胞 肌成纤维细胞 差异显示聚合酶链反应 反义技术