目的:探索C57.BL/6J小鼠肝星状细胞(HSCs)分离、纯化的可行方案,并评价该法所得HSCs的生物学特性.方法:经肝门静脉,先用不合钙镁离子的D-Hanks液充分灌注肝脏,再以适宜浓度的链霉蛋白酶和Ⅳ型胶原酶顺序灌注,随后Percoll非连续密度梯度离心分离、纯化HSCs,台盼蓝拒染法检测HSCs活性,光镜观察体外培养的HSCs的形态学变化,免疫细胞化学鉴定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结蛋白的表达,Western印迹检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:纯化后每只小鼠获得HSCs约5.5×105个,纯度及存活率均大于95％;免疫细胞化学技术证实培养的HSCs分别表达α-SMA和结蛋白;Western印迹显示原代HSCs体外培养7d时,α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达量达到峰值.结论:建立的分离、纯化方案可获得高纯度、高活率、功能正常的小鼠原代HSCs,为进一步研究肝纤维化的发病机制提供了技术保障.
肝星状细胞 原代培养 细胞分离 小鼠