采用硫酸铵盐析、Phenyl Sepharose CL-4B 疏水层析、DEAE-Sepharose 阴离子交换层析、Sephacryl S-200 凝胶过滤层析等步骤,从黑曲霉的发酵液中获得了凝胶电泳均一的两种β-葡萄糖苷酶.其中一种为耐高糖的β-葡萄糖苷酶,葡萄糖抑制系数(Ki)为 41.01 mmol/L,纯化倍数和得率分别为56.7倍和 22.66%.耐高糖β-葡萄糖苷酶单亚基分子质量为 114.6 ku,以对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物时,米氏常数(Km)值和酶促反应的最大速率(vmax)分别为 0.904 mmol/L 和 1.08 μmol/min.该酶最适反应温度 60 ℃,最适反应pH值为4.0;在 60 ℃以下及pH值3～7范围内均能保持稳定.所测定的化学试剂中,Ag+对酶具有较强的抑制作用,其它金属离子及乙二胺四乙酸对酶的活性影响不大.甲醇、正丁醇有明显激活酶活性的作用,但乙腈、丙酮对酶的抑制作用明显.
β-葡萄糖苷酶 耐高糖 提纯 黑曲霉