将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶.人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在pBluescript SK的Xho I-Sal I位点.通过连续4次克隆获得10拷贝核酶基因的载体.体外转录单体核酶和10体核酶后,37℃温育15 min,至少85%的10体核酶发生自切割,并释放出单体核酶.反式切割研究表明,10体核酶表现出极高的催化活性.尽管10体核酶的浓度不到单体核酶的十分之一,在反应初始25 min内,10体核酶的催化产物平均超过单体核酶13.31%.10体核酶一级反应速度常数是单体核酶的1.86倍.从这些数据可以推断,10体核酶比单体核酶在体内系统中可能具有更大的潜在应用价值.
锤头型核酶 自切割 猴免疫缺陷病毒 动力学分析 速度常数