[目的]以腺病毒携带的人内皮抑素基因-Endostatin基因(Ad/hEnd)感染舌癌细胞株Tca8113和人脐静脉内皮细胞株ECV304,观察其在舌癌细胞和静脉内皮细胞株中的表达.[方法]用293细胞扩增Ad/hEnd,并抽提、纯化.以10 MOI的Ad/GFP感染ECV细胞,观察细胞中表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例.采用免疫组化法检测Endostatin蛋白在感染了Ad/hEnd的Tca细胞和ECV细胞中的表达.Ad/hEnd感染Tca细胞后收集细胞培养液上清,ELISA检测上清中Endostatin蛋白含量.Western-blot检测Endostatin蛋白在Tca和ECV细胞中的表达.[结果]扩增的Ad/hEnd通过空斑形成试验准确测定其滴度可达1×1010～8×1010 PFU/mL.表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例为31%.实验显示感染Ad/hEnd后,在Tca细胞和ECV细胞胞浆内有Endostatin蛋白合成.细胞培养液上清中Endostatin蛋白表达浓度呈时间剂量依赖关系,最高达到597 μg/L.Western-blot检测显示Endostatin蛋白可在两种细胞中高效表达,相对分子质量与自然Endo-statin蛋白一致,无杂合蛋白,呈剂量依赖关系,且持续到第7天仍呈明显的Endostatin蛋白质条带.[结论]本实验制备的重组腺病毒Ad/hEnd能在舌癌细胞和血管内皮细胞中有效表达Endostatin蛋白,可用于抗肿瘤血管生成的Endostatin基因治疗的实验研究.
口腔肿瘤 癌 鳞状细胞 腺病毒 血管内皮抑素 基因治疗