融合基因BCR/ABL在慢性粒细胞白血病的恶性转化过程中起着主导作用.针对融合基因的3＇端构建了一个定点基因打靶质粒,pF2.neo.abl(1-4),将一段可引发核内RNA降解的.元件,URE,定点整合到融合基因poly(A)位点的上游.打靶质粒经脂质体转染K562细胞后,在96孔板上进行400μg/ml G418筛选,neor克隆进一步在24孔板上扩增.以特异性引物经基因组PCR及Southern印迹分析对阳性克隆进行检测.研究发现阳性克隆在96孔板内3周其增殖状况良好,但在24孔板内扩增一周后迅速发生死亡现象.观察单个阳性克隆在正常培养液增殖情况,发现5 d后其细胞周期被完全阻抑.研究结果说明,在转录后期mRNA水平控制BCR/ABL融合基因的表达可以抑制慢性粒细胞白血病的恶性转化.
慢性粒细胞白血病 费城染色体 RNA降解 基因打靶