目的 探讨利用生物素标记红细胞时测定到的红细胞存活率不随时间下降的原因.方法 体外标记法:将1只C57BL/6供血小鼠用0.1 mL 10％水合氯醛麻醉后开胸从心脏穿刺取血0.8 mL,制备成25％红细胞悬液并用生物素在体外标记后平均分成6份分别输注到6只C57BL/6受血小鼠体内,受血的6只C57BL/6小鼠均分别于输注后1h(基础值)及1、3、7、14、21、28 d尾静脉采血,流式细胞仪测定标记红细胞比例,计算输注到6只C57BL/6受血小鼠体内标记红细胞的存活率和寿命.体内标记法:另外取5只C57BL/6小鼠,直接将1 mg/300μL生物素过尾静脉分别输入这5只C57BL/6小鼠体内做体内标记红细胞,48 h后采集这5只C57BL/6小鼠全血并分别制备成25％标记红细胞悬液,共制备5份标本,从每份标本中取2等份(500 μL/份)标记红细胞悬液分别与荧光染料链霉亲和素-R-藻红蛋白(SA-R-PE,终浓度10 μg/mL)和结合荧光素的亲和素(FITC-AV,终浓度30 μg/mL)反应,得到分别标记上SA-R-PE-生物素的红细胞(PE-RBC)和FITC-AV-生物素的红细胞(FITC-RBC),然后在体外将这2种单染红细胞混合、室温下共同孵育4h后,流式细胞仪检测这5份混合孵育的标本中双染红细胞(PE-FITC-RBC)的比例,并在共聚焦显微镜下直接观察是否存在双染红细胞.结果 输注到6只C57BL/6受血小鼠体内的标记红细胞的24h存活率、半寿命和平均潜在寿命分别(98.9±15.6)％、(17.2±2.4)d和(34.2±4.3)d,标记红细胞的存活率以(2.7±0.4)％/d速率下降,但在83％(5/6)动物体内,标记红细胞的存活率超过基础值100％.5份标本内均出现双染红细胞(PE-FITC-RBC),比例为(0.8±0.5)％,并且共聚焦显微镜结果也证实了双染红细胞的存在.结论 生物素标记红细胞输入动物体内后检测到的寿命在正常范围,但由于存在脱落-再标记现象,生物素标记后检测的红细胞存活率可能有波动.
生物素 标记红细胞 红细胞生存时间 标记物脱落