目的 建立Kcnj5基因敲除小鼠模型,构建病理生理或药理实验平台,以确定钾通道和东莨菪碱等药物和心衰治疗的关系.方法 用细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)载体构建了Kcnj 5打靶载体,电穿孔到129/S6/SvEv品系雄性小鼠的胚胎干细胞SCR012后,用300 μg/ml G418、2μmol/L GanC筛选克隆8 d.打靶后的干细胞显微注射到囊胚后,生育嵌合体再交配繁育杂合子及纯合子.用PCR方法结合片段克隆后基因测序鉴定基因型.免疫组化法证实基因型的表达.结果 挑取抗性克隆96个中正确同源克隆数20个,阳性率为20.8%.显微注射C57BL/6J囊胚180枚.14只受体出生12只小鼠中得到4只大于50%嵌合率雄鼠.配育获得29只 Kir3.4+/-F1代杂合子.现繁育F4后代获得Kir3.4-/-纯合子约百只.用单抗对敲除鼠心进行免疫组化鉴定,提示纯合子敲除鼠心为阴性.结论 用同源重组法敲除了干细胞靶基因,成功建立Kir 3.4-/-建立鼠系.成功建立Kir 3.4钾通道分子病动物模型.该基因的完全缺如模型有利于隔离了该基因的作用,对与之相关的基因的进一步阻断、拮抗或激活等药物研究,也是一个很好的模型.
心衰 乙酰胆碱敏感性钾通道 基因打靶 胚胎干细胞 转基因小鼠 模式动物