目的:以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主,构建纤维素酶基因整合表达载体,获得能够表达纤维素酶并且降解纤维素的工程菌.方法:通过聚合酶链式反应(polymerasc chain reaction,PCR)从B.subtilis LN 基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段,以质粒pGEM-T为载体,将同源片段M1、M2、启动子P43和葡萄糖苷酶基因CelKg连接在一起构建整合载体pGEM-Kmpgmt,并采用双交换同源重组的方式将其转化进入B.subtilis LN 基因组中.结果:通过PCR和双酶切验证整合载体构建完成,并成功整合到野生型B.subtilis LN中,获得重组菌B.subalis Kpg.刚果红染色结果显示重组菌对羧甲基纤维素钠有降解作用.改良培养基37℃条件下摇瓶培养,重组菌B.subtilis Kpg生长至18h时上清液中纤维素酶活力比野生型B.subtilisLN提高了115％.
同源重组 纤维素酶基因 枯草芽孢杆菌