目的 应用双向电泳和质谱技术研究丹参酮Ⅱ A对ox-LDL诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞蛋白质组的影响,探讨丹参酮Ⅱ A调脂和抗动脉粥样硬化作用的分子机制.方法 分离纯化获得人血清低密度脂蛋白(LDL),用CuSO4进行氧化得到ox-LDL,与RAW264.7细胞共孵育,形成的泡沫细胞用含20 mg/L丹参酮Ⅱ A继续培养24h作为丹参酮组,不合丹参酮Ⅱ A的溶液培养24h作为对照组,经超声破碎细胞,离心,取上清进行蛋白质定量,丹参酮Ⅱ A组和对照组蛋白质等量上样,进行双向电泳,电泳完毕后用硝酸银染色得到不同样品的蛋白质组图谱.经Labscan软件进行差异蛋白质组分析,选取蛋白质表达量差异超过2倍的蛋白质作为差异蛋白.经胶内酶解及质谱分析,得到肽质量指纹图谱,通过Mascot数据库搜索,结合2-D图谱上蛋白质的分子量、等电点信息鉴定蛋白质.结果 丹参酮组钙网蛋白、波形蛋白、过氧化物酶2、CuZn-超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)、亮氨酸拉链蛋白、stabilin-1、造血细胞系特异性蛋白表达量增加,而GTP蛋白、ATP合酶、mimitin、IL-5、热休克蛋白70(HSP70)、翻译控制肿瘤蛋白、氯离子通道蛋白1表达量降低.结论 丹参酮Ⅱ A通过降低GTP蛋白和HSP70表达以及提高钙网蛋白表达改善泡沫细胞对脂代谢的调控功能;通过提高stabilin-1表达和降低ATP合酶表达调节细胞的吞噬能力;通过提高亮氨酸拉链蛋白和波形蛋白表达促进脂与脂蛋白的代谢;通过提高过氧化物酶2和CuZn-SOD表达起到清除氧自由基和抗脂质过氧化作用;通过降低mimitin和IL-5表达以及提高造血细胞系特异性蛋白表达而具有抗炎和抗细胞凋亡作用;通过降低氯离子通道蛋白1和翻译控制肿瘤蛋白表达具有抗肿瘤作用.因此可以认为丹参酮Ⅱ A可能具有调节血脂和抗动脉粥样硬化作用,在临床上可以用于心脑血管疾病的治疗.
蛋白质组 丹参酮Ⅱ A 氧化型低密度脂蛋白 巨噬细胞源性泡沫细胞