通过SDS-PAGE电泳,从提取液的倍数、提取时间、Triton X-100的浓度、SDS的有无等4个方面对提取条件进行优化,确定栉孔扇贝精子膜蛋白的最佳提取条件是:将精液150 g离心去除精原细胞,0.1 mol/L PBS缓冲液清洗两次,0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液清洗两次,3 000 g离心10min(4℃)得精子悬液;然后向精子悬液中加入3倍体积含1%Triton X-100和0.1%SDS的膜蛋白提取液中冰浴振摇1.5 h;4℃,50 000 g离心15 min,收集上清精子膜蛋白溶液.SDS-PAGE电泳后,考马斯亮蓝R-250染色检测出22种膜蛋白,分子量在23～156 kDa之间,PAS染色检测出糖蛋白有13种,苏丹黑B染色检测出脂蛋白有12种,其中既为糖蛋白又为脂蛋白的有8种.此研究结果可为以后进一步分离纯化栉孔扇贝的精子膜蛋白,研究其在精子发生和受精过程中的功能及作用提供基础资料.
栉孔扇贝 精子膜蛋白 糖蛋白 脂蛋白