目的 分析转染siat7e基因的MDCK细胞(MDCK-siat7e)的悬浮特性,并建立相关质控方法.方法 将MDCK-siat7e细胞接种无血清培养基BD001,37 ℃,130 r/min振摇培养11d,显微镜观察不同培养时间细胞形态,并检测细胞生长浓度、活力及代谢状况.提取MDCK-siat7e细胞的mRNA,采用RT-PCR法扩增siat7e基因片段并测序.通过Real time PCR法检测不同代次(原代、10、20、30代)MDCK-siat7e细胞siat7e基因的表达量.结果 MDCK-siat7e细胞在无血清培养基中呈悬浮生长状态,细胞接种培养初期生长较慢,但活力较好;然后细胞生长经停滞期进入生长期,细胞生长加快且活力大于98％,细胞浓度达峰点后生长进入平台期;培养后期细胞浓度降低且活力下降.原代与传代细胞siat7e基因序列测定结果与GenBank公布的ST6GalNacV序列(AJ507292.1)一致.MDCK-siat7e细胞传至30代,仍可表达siat7e,表明外源siat7e基因整合入MDCK细胞基因组中,并随MDCK细胞传代持续地转录和表达.结论 本实验对siat7e基因的定性及表达量的分析可用于MDCK-siat7e细胞悬浮性的检测,为其作为疫苗用细胞基质的质量监控提供了依据.
MDCK-siat7e细胞 悬浮 siat7e基因