目的获得人源受体相关蛋白(RAP),对表达条件进行优化.方法 RAP cDNA被插入到原核表达质粒pT7-PL和pET-28a(+)中,分别构建成RAP重组表达载体,转化两种BL21菌株后,转化菌用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,选择pT7-PL-RAP质粒进行表达条件的优化,采用镍离子亲和层析纯化所获得的RAP,通过检测与巨噬细胞的结合能力评估其生物活性.结果两个重组质粒均获得了RAP的高表达,对于pT7-PL-RAP质粒,RAP在BL21(DE3,plysS)菌株中的表达显著高于在BL21(DE3)菌株的表达; 有氯霉素存在时表达高于无氯霉素时;诱导表达的RAP大部分为可溶性的;镍离子亲和层析树脂纯化所获得的RAP,可与富含低密度脂蛋白受体(LDLR)家族受体的小鼠巨噬细胞系RAW264.7结合.结论本实验获得了有生物学功能的RAP,为进一步开发生产此蛋白打下良好的基础.
受体相关蛋白 基因产物 RAP 纯化