目的 通过分子克隆表达人脂联素基因球型结构域(gAd),为进一步研究提供实验基础.方法 应用RT-PCR方法从人大网膜脂肪组织总RNA中扩增出gAd cDNA,克隆人载体pMD18-T,pET32a(+)中,形成重组质粒gAd.pET32a(+).筛选出阳性克隆,通过限制性内切酶酶切、PCR和测序进行鉴定,并在体外进行小量表达.结果 从脂肪组织总RNA中扩增得到412 bp片段gAd基因,其cDNA序列与GenBank人gAd基因序列相同,并在体外表达得到相对分子质量为34000的重组蛋白.结论 成功构建了gAd基因原核表达质粒并实现体外的小量表达.
脂联素球型结构域 分子克隆 pET32α(+)质粒