目的构建人TIMP-2基因真核表达质粒,使其在真核细胞中稳定表达.方法利用RT-PCR方法获得人TIMP-2基因cDNA,以pcDNA3为载体构建真核表达质粒pcDNA3/TIMP-2,采用脂质体介导基因转染技术将重组质粒DNA导入CHO细胞中,加入G418对转染细胞进行筛选获得稳定转染细胞,采用Western blot对重组质粒的表达进行检测.结果酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3/TIMP-2构建正确,在转化细胞中检测到人TIMP-2的表达.结论成功构建人TIMP-2真核表达质粒并获得稳定表达人TIMP-2的CHO细胞株.
金属蛋白酶2组织抑制剂 基因表达 肿瘤细胞 培养的 转染 逆转录聚合酶链反应 质粒/遗传学 真核细胞