为进一步探究KK-42缩短蜕皮周期的分子机制,本研究以日本沼虾幼虾为材料,通过RACE技术克隆了几丁质降解途径中的限速酶基因NAGase cDNA全长序列,定量测定了KK-42处理不同时间对头胸甲表皮组织中NAGase mRNA相对表达量和对应酶活力的影响.序列分析结果显示,NAGase cDNA全长2536 bp,编码617个氨基酸.同源性分析显示,NAGase基因保守性较低,与凡纳滨对虾的相似度最高,仅为68%.系统进化分析显示,日本沼虾、三疣梭子蟹、凡纳滨对虾、中国明对虾聚为一个大类,凡纳滨对虾和中国明对虾亲缘关系更为接近,日本沼虾单列一个分支.Real-time PCR分析表明,NA-Gase相对表达量在蜕皮前D0期达到峰值;KK-42处理后3 h,D4期的相对表达量是对照组的253%,处理后6 h,C期和D0期较对照组分别提高了226%和187%.NAGase酶活力从C期到D4期逐渐提高,KK-42处理能明显提高C和D0期NAGase酶活力,尤其对C期的影响最为显著,在处理后3、6和12 h分别提高了11.26、5.99、7.15倍.结果提示,KK-42对日本沼虾表皮NAGase的诱导效应可能是其缩短蜕皮周期的分子机制之一.
日本沼虾 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 克隆 KK-42