为探讨KK-42提高感染嗜水气单孢菌的日本沼虾幼虾成活率的机制,实验首次克隆了α2M部分序列,研究了α2M基因的时空表达以及KK-42对其表达和活力的影响.将体长3.5～5.0 cm的日本沼虾幼虾随机分为2组,分别用1.95×10-4 mol/L的KK-42溶液和不含KK-42的溶液浸泡处理1 min,12h后,每组再分为2个亚组,分别向虾腹部注射嗜水气单胞菌菌悬液(菌攻毒实验组和菌攻毒对照组)或生理盐水(实验组-1和对照组-1),于不同时间点测定幼虾的成活率、α2M基因表达水平和活力的变化.结果显示,KK42预处理可显著提高感染嗜水气单胞菌的日本沼虾幼虾成活率.经BLAST比对,克隆的α2M部分mRNA序列与罗氏沼虾α2M具有90％以上同源性.实时荧光定量PCR实验显示,α2M基因表达水平在血细胞中最高,且以蜕皮前期最为显著.KK-42处理的幼虾血细胞α2M基因的表达无显著性差异;嗜水气单胞菌刺激使血细胞α2M mRNA水平在3h比0h提高了580％,其活力在24 h增幅为47.5％;而菌攻毒实验组mRNA水平在6～48 h明显高于菌攻毒对照组,尤其在12h,增幅为511％,其活力水平也呈同样的变化趋势.研究表明,KK-42预处理能上调感染嗜水气单胞菌的幼虾血细胞α2M基因的转录水平,诱导α2M活力增强,这可能增强了幼虾的免疫水平,从而提高成活率.
日本沼虾 嗜水气单胞菌 KK-42 α2-巨球蛋白(α2M) 基因表达