为了研究ATP6AP2的生物学功能,利用NCBI数据库确定了人源ATP6AP2基因的CDS序列,设计上游及下游引物.采用TRIZOI法提取293T细胞RNA并反转录合成cDNA,PCR扩增ATP6AP2基因全长序列并将得到的PCR产物经双酶切后与载体连接,转化大肠杆菌.通过PCR菌液鉴定和酶切验证,获得融合ATP6AP2基因序列的真核表达载体.用脂质体包裹该重组质粒转染293T细胞后,Western blot检测ATP6AP2的表达.结果表明,通过基因克隆成功构建了人源ATP6AP2重组真核表达载体,转染后的293T细胞高效表达EGFP-ATP6AP2融合蛋白,为进一步探究ATP6AP2基因的生物学功能提供了研究基础.
ATP酶转运辅助蛋白 真核表达载体 基因克隆