通过小鼠卵母细胞自发成熟体外培养模型研究了褪黑素(MT)对外源性H2O2刺激的小鼠卵母细胞体外成熟及其孤雌发育的影响.结果表明:(1)随着H2O2剂量依赖性的增加,卵母细胞PB1的排出率下降,当增加H2O2(＞250μmol·L-1)时,显著下降(19.4％ vs.92.0％,P＜0.05)；(2)培养液中添加MT(0.1、1.0、10.0 ng·mL-1)后均能阻止H2O2的抑制作用,其中10.0 ng·mL-1的MT作用效果显著(P＜0.05)；(3)取GV期卵母细胞经H2O2(500 μmol·L-1)和MT(0.000、0.001、0.010、0.100 ng·mL-1)联合培养后孵育在2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCF-DA)中,荧光显色表明,MT清除了由于H2O2引起的细胞内大量的活性氧(Reactive oxygen species,ROS),其中0.100 ng·mL-1的MT效果最显著(P＜0.05),极大程度的降低了氧化应激损伤,提高了成熟率；(4)统计卵母细胞孤雌激活后的发育情况,MT浓度为10-9～10-3 mol·L-1组培养的孤雌胚2-细胞发育情况无显著差异(88.2％、91.4％、91.8％、88.8％ vs.88.1％,P＞0.05),MT浓度为10-7～10-3mol· L-1组的4～8-细胞率差异显著(58.8％、73.8％、43.6％ vs.23.4％,P＜0.05),MT浓度为10-9～10-5 mol· L-1均明显促进囊胚发育(24.6％、46.6％、49.2％vs.8.0％,P＜0.05).氧化应激对卵母细胞的成熟是不利的,MT保护了卵母细胞免受氧化应激的影响,MT浓度为10-5 mol·L-1为卵母细胞孤雌发育能力的最适浓度.由此可推出MT作为细胞内的自由基清除剂,可能是提高卵母细胞和胚胎质量的重要条件之一.
褪黑素 卵母细胞 H2O2 抗氧化剂 孤雌发育