目的 探讨SD大鼠骨骼肌脱细胞的优化处理方法.方法 SD大鼠16只,雌雄不限,体重180～200 g.取其中10只大鼠36条骨骼肌肌束,随机分为3组,正常组(A组,n=4):不作脱细胞处理;时间组(T组)及浓度组(C组)按照低渗.去垢剂方法 进行脱细胞处理(n=16),其中T组十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)浓度均为1.0%,根据处理时间不同(24、48、72、96 h),分为T1、T2、T3、T4组(n=4);C组处理时间均为48 h,根据SDS浓度不同(0.5%、1.0.%、1.5%、2.0%)分为C1、C2、C3、C4组(n=4).取各组材料行HE染色观察及羟脯氨酸含量检测,并根据结果 筛选最优脱细胞处理条件.另取6只SD大鼠14条完整肌束,随机取7条按照最优条件进行脱细胞处理(实验组),余7条作为正常对照(对照组),对肌束行大体观察、Masson染色及生物力学检测.结果 HE染色显示T1、T2、C1、C2、C3组肌纤维与A组无差异;CA组肌纤维部分脱除:T3组肌纤维完全脱除且基膜结构保留完整;T4组肌纤维完全脱除但基膜结构部分被破坏.羟脯氨酸含量检测:A组与C1、C2、C3、T1及T2组比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组与CA、T3和T4组比较,差异有统计学意义(P<0.05);CA组与T3、T4组比较,差异有统计学意义(P<0.05);T3组和T4组比较,差异无统计学意义(P>0.05).根据HE染色及羟脯氨酸含量检测实验结果 筛选出最优脱细胞处理条件为4℃、1.0%SDS、72 h.大体观察:实验组与对照组比较肌束颜色变浅,呈半透明状,且结构相对较松散.Masson染色观察:实验组胶原纤维连续性良好,较对照组结构疏松.生物力学测试:实验组及对照组最大破坏载荷分别为(1.38±0.35)N及(1.98±0.77)N,最大拉伸位移分别为(3.19±3.23)mm及(3.56±2.17)mm,两组以上指标差异均无统计学意义(P>0.05).结论 应用1.0%SDS,于4℃条件下对大鼠骨骼肌经震荡处理72 h可得到完全去除肌纤维且ECM保留完好的脱细胞基质.
骨骼肌 脱细胞 羟脯氨酸 生物力学 大鼠