根据莱茵衣藻密码子偏好性对源于油菜的溶血磷脂酸酰基转移酶基因(lpaat)和酵母的甘油3-磷酸酰基转移酶基因(gpd1)进行优化,获得适合莱茵衣藻表达的c-lpaat和c-gpd1基因,将其连接到pH124质粒中,构建相应的衣藻表达载体.通过珠磨法进行遗传转化,经Zeomycin抗性筛选和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证,获得导入c-lpaat和c-gpd1的转基因藻.利用半定量反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术筛选高效表达c-lpaat和c-gpd1的转基因藻,目的基因的转录水平分别提高了56.38％和75.95％,其藻细胞的脂肪酸含量也得到相应增加,与基因表达情况一致.证明莱茵衣藻可以有效表达外源高等植物的基因,利用半定量RT-PCR可以快速筛选出潜在的高油脂含量转基因工程藻株.
基因工程 转基因藻 莱茵衣藻 lpaat基因 gpd1基因 三酰甘油合成