目的 构建人2型大麻素受体(hCB2R)基因真核表达载体,探讨hCB2R在细胞中的表达、定位以及hCB2R对宫颈癌Caski细胞的生长的影响及机制.方法 构建GV230-hCB2R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HEK293细胞和Caski细胞,Western blot法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测CB2R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法及实时荧光定量PCR检测hCB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达.结果 双酶切获得1128 bp的目的片段,测序结果与hCB2R基因注册序列(NM_001841.2)的同源性为99％;转染HEK293细胞后,可表达相对分子质量(Mr)40 000的hCB2R蛋白,HEK293细胞膜和细胞质中均有CB2R表达;过表达的CB2R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,促进宫颈癌Caski细胞凋亡.结论 上调Caski细胞hCB2R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡.
人2型大麻素受体 HEK293细胞 宫颈癌细胞 细胞凋亡