目的:基于冷冻透射电镜电子断层成像和子断层平均技术,比较不同厚度样本中原位解析的核糖体超微结构分辨率,探究样品厚度与颗粒数量对解析原位结构分辨率的影响.方法:通过300 kV冷冻透射电镜对快速冷冻制备的PC12+细胞样本进行连续断层扫描和三维重构,根据三维重构后的神经膨起厚度分为四组(100+nm、200+nm、300+nm和400+nm),采用EMAN2.3实现核糖体在胞内的可视化、数量分布与类型表征.用子断层平均重构技术计算各组核糖体分辨率,并采用Chimera软件对核糖体结构进行模型拟合.结果:各组间以200+nm核糖体颗粒分辨率最高,达到1.67 nm(11781个颗粒)和1.78 nm(6000个颗粒),100+nm组其次.研究还发现,在400 nm样品厚度范围内,核糖体颗粒数量越多,解析出的核糖体结构分辨率越高.结论:对于经NGF诱导分化的PC12+细胞膨起来说,<400 nm厚度的断层扫描数据均可用于核糖体结构的原位高分辨解析,且以200～300 nm最为合适.
PC12+细胞 核糖体 冷冻透射电镜电子断层成像 子断层平均技术 样品厚度