目的 构建含有可溶性环氧化物水解酶基因特异性的RNA干扰序列pSUPER retro neo质粒栽体,选择性下调小鼠心肌细胞可溶性环氧化物水解酶的表达,筛选出抑制效果最明显的表达质粒.方法 构建2条靶向可溶性环氧化物水解酶基因的特异性小干扰RNA质粒栽体(EH-1和EH-2),以含非特异性小干扰RNA编码序列的质粒栽体为阴性时照(pCN组),用FuGENE HD将质粒特染入原代培养的小鼠心肌细胞,并设空白对照组,转染后通过半定量RT-PCR和Western Blotting法,检测可溶性环氧化物水解酶的mRNA和蛋白表达情况.结果 与空白对照组、阴性对照组和EH-1组相比,质粒EH-2使心肌细胞可溶性环氧化物水解酶mRNA和蛋白的相对表达量明显下调(分别为0.202±0.017和0.212±0.029,P<0.01).结论 构建了特异性小干扰RNA质粒表达栽体,利用RNA干扰技术成功下调了原代培养的心肌细胞中可溶性环氧化物水解酶的表达,为进一步进行心肌细胞的RNA干扰研究奠定了基础.
心肌细胞 可溶性环氧化物水解酶 RNA干扰