为获得高表达的人乙酰胆碱受体(human acetylcholine receptor,AchR)α亚基蛋白,根据已知的乙酰胆碱受体α亚基序列,设计并合成了一对引物,以含乙酰胆碱受体a亚基DNA的重组质粒pUC-AchR为模板,应用PCR技术,扩增乙酰碱受a亚基的片段.将该扩增片段与载体pET32 M分别用BamHI/HindIII双酶切,然后在T 4DNA连接酶作用下,将乙酰胆碱受体a亚基片段插入载体pET32 M中,且与载体中的硫氧还蛋白(约14 kD)基因融合.重组质粒pET32 M-AchR含T7启动子,为IPTG诱导型.经双酶切鉴定,序列测定及工程菌初步表达分析,表明获得了正确的重组质粒pET32 M-AchR,且在大肠杆菌BL21中有明显表达,硫氧还蛋白-乙酰胆碱受体融合蛋白的分子量约37 kD,但主要以包涵体形式存在.
AchR pET32 M 克隆 表达 包涵体