目的 为进一步探讨细胞周期蛋白G2(CCNG2)基因功能奠定基础.方法 以成人脑cDNA文库为模板,PCR扩增人CCNG2基因,In-Fusion技术定向克隆到pENTR1A中,酶切测序鉴定后重组到pcDNA6.2TM/EmGFP-DEST Gateway载体,构建pcDNA6.2-EmGFP-G2.将鉴定正确的质粒瞬时转染人舌鳞癌细胞Tca-8113,24 h后观察,定量PCR检测CCNG2 mRNA表达.结果 扩增得到1 032 bp的基因片段,经测序验证与GenBank中人CCNG2序列相符;pcDNA6.2-EmGFP-G2经酶切和测序鉴定无误.转染Tca-8113后,荧光信号除在胞质中表达外,在部分细胞的胞核DAPI染色弱信号区浓聚.转染该重组质粒后CCNG2 mRNA表达水平显著增高.结论 成功构建了以绿色荧光蛋白作为报告基因的CCNG2表达载体,为进一步研究CCNG2基因功能奠定了基础.
细胞周期蛋白G2 绿色荧光蛋白 基因载体