用酵母双杂交技术筛选与 Itk PH结构域相互作用的蛋白分子,以了解Itk的功能及其在T细胞信号转导中的位置与作用.Itk的PH结构域扩增后克隆入酵母双杂交系统的pLexA载体,转化酵母细胞EGY48(p8op-lacZ),经检测PH结构域无自激活作用,且对酵母细胞无毒性作用.用PH结构域作为"钓饵"蛋白,在酵母双杂交系统中筛选构建于AD载体的T细胞cDNA文库.将PH结构域及筛库所得基因片段分别进行融合表达,用于体外结合实验 ,进一步证实二者的相互作用.经营养缺陷选择、诱导筛选和鉴定确证,筛库所得的插段约1 500 bp的文库质粒为一真阳性克隆.经blast比较分析为骨肉瘤、横纹肌肉瘤等肿瘤组织中高表达的os-9基因.体外结合实验也表明,Itk PH结构域可与该基因表达产物结合.Itk的PH结构域可与OS-9蛋白相互作用.二者结合的意义有待进一步研究.
Itk PH结构域 酵母双杂交系统 OS-9 融合表达 体外结合试验