本工作旨在探讨褪黑素(melatonin,MLT)抑制17-β-雌二醇(17-β-estradiol,E2)诱发的Sprague-Dawley大鼠垂体催乳素(prolactin,PRL)瘤增生的分子机制.结果表明,每只大鼠每日定时皮下注射一定剂量的MLT(0.25、0.50 mg)能显著抑制E2诱发的大鼠垂体PRL瘤的增生;偏低(0.05 mg)或过高剂量(1.00、2.00 mg)的MLT也抑制PRL瘤的增生,但无统计学意义.采用PCR和DNA直接测序显示,与正常垂体对照组比较,PRL瘤中PRL基因增强子出现五处突变,-1885 bp位点由C突变为G,-1 857～-1 855由ACA替换为G,-1792～-1791插入G,-1 383～-1 382插入GGTGTGTG片段,-1265～-1250缺失GTGTGTGTGTGTGTGT片段.0.25 mg/d MLT处理组,PRL瘤中的PRL基因增强子上述个别突变部位仍然存在(-1 885由C突变为G),突变消失(-1792～-1791无插入G),大部分表现为突变减弱(-1856～-1 855缺失AC,-1385～-1384缺失TG,-1250～-1253缺失GTGT).采用荧光素酶报告基因检测PRL基因增强子活性显示,正常垂体、PRL瘤和0.25 mg/d MLT处理的PRL瘤三组中,PRL基因增强子的活性分别为(13448.17±3012.74)、(161831.67±60996.01)和(10212.17±2634.71)OD单位.PRL瘤组增强子活性较正常垂体升高11倍(P＜0.001),MLT处理组增强子活性较PRL瘤组降低93.69%(P＜0.001).上述三组PRL基因增强子空间结构的分析表明,PRL基因增强子DNA的曲折程度为PRL瘤组＞MLT处理组＞正常垂体.以上结果证实,MLT抑制大鼠垂体PRL瘤增生的重要分子机制之一可能是减弱PRL基因增强子的突变,也提示MLT可减弱PRL基因增强子的突变,从而下调PRL基因的高表达,可能与降低DNA的曲折程度有关.
褪黑素 催乳素瘤 增强子 突变