毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白(mutated in ataxia telangiectasia,ATM)是直接感受DNA 双链断裂损伤并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子.已有研究发现,DNA损伤生物学反应中,ATM可通过磷酸化活化p53,继而转录活化细胞周期检查点蛋白p21WAFI/CIPI的表达,而对于ATM是否直接参与p21WAFI/CIPI的早期活化迄今尚无实验证明.通过免疫共沉淀反应,检测到细胞电离辐射(ionizing radiation,IR)反应早期ATM与p21WAFI/CIPI蛋白存在相互作用.将p21WAFI/CIPI蛋白编码基因全长克隆入原核表达载体pGEX4T-2,经诱导表达及亲和层析纯化获取GST-p21融合蛋白作为磷酸化底物.体外磷酸化实验检测证明,IR活化的ATM具磷酸化p21WAFI/CIPI蛋白的功能,并且此磷酸化功能可被PI3K家族特异性抑制剂Wortmannin所抑制.结果揭示了IR后ATM可通过直接磷酸化p21WAFI/CIPI蛋白,在IR致DNA损伤生物学反应早期调控p21WAFI/CIPI蛋白的快速活化过程.
ATM 电离辐射 p21WAFI/CIPl 蛋白磷酸化