笔者在前期研究中已从嗜热菌Dictyoglomus thermophilum中克隆并异源表达了 一种β-木糖苷酶Xln-DT,通过获得高酶活、酶学性质优异的β-木糖苷酶Xln-DT突变体,进而提高其在生物燃料、食品和医药等行业中的应用价值.基于提高比酶活的目的,通过生物信息学方法确定了 β-木糖苷酶Xln-DT可突变的关键氨基酸位点,在161、202和231位点处分别引入HIS/LEU、PHE/LEU和TRP,获得Xln-DT比酶活明显提高的突变型酶Xln-DT-202PHE和Xln-DT-202LEU,并分析比较突变前后的酶学性质.突变型酶Xln-DT-202PHE和Xln-DT-202LEU的酶活较Xln-DT分别提高了 3.28和2.97倍,比酶活分别提高了 2.86和2.54倍.Xln-DT-202PHE和Xln-DT-202LEU的最适pH下降明显,由6.0分别下降至4.5和5.0.Xln-DT-202LEU在75℃下保温2 h酶活维持不变,较Xln-DT在75℃下的温度稳定性相比有明显提高.Xln-DT-202PHE和Xln-DT-202LEU在pH 4.0～7.0的范围内保温24 h,仍能保持80％以上的剩余酶活力.突变型酶不但显著提高了酶的活力,而且热稳定性得到了极大的改善,为其在食品热加工等领域中的应用奠定了基础.
β-木糖苷酶 分子生物学 定点突变 酶活 热稳定性