目的 利用酵母回转实验和免疫共沉淀实验验证SIAH1和TRB3之间的相互作用并探讨其功能相关性..方法 将全长形式的TRB3基因和SIAH1基因分别克隆入酵母表达载体pDBLeu和pPC86中,共转化至MaV203酵母感受态细胞,验证其相互作用,然后分别构建至真核表达载体pCMV-Myc和pFLAG-CMV-2中,采用免疫共沉淀实验进行进一步验证.通过体内泛素化实验检测SIAH1对TRB3蛋白稳定性及泛素化修饰的影响.结果 通过在酵母细胞中的回转实验和HEK293T 细胞中的免疫共沉淀实验证实了TRB3 与SIAH1 之间的相互作用.通过体内泛素化实验证实了SIAH1介导了TRB3的泛素化修饰和降解.结论 证实了TRB3与SIAH1之间的相互作用并发现SIAH1介导了TRB3的泛素化修饰和降解,为TRB3蛋白的功能研究提供了新的线索.
蛋白-蛋白相互作用 TRB3 SIAH1 泛素-蛋白酶体途径