通过优化影响茶树ISSR-PCR的主要参数,确立了适用于茶树的ISSR反应体系和扩增条件.结果表明在20?μl反应体系中,模板DNA、引物、Mg++、dNTP 和Taq DNA聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为10?ng、150?nmol/L、1.5?mmol/L、150?μmol/L、0.5?U.在扩增过程中,引物的适宜退火温度比其Tm值平均高4.5℃,扩增出足量产物至少需要30个热循环.利用该优化反应体系和扩增条件,对13份不同茶树种质资源进行ISSR-PCR扩增,扩增产物的多态性为77.6%.引物TRI18构建的ISSR指纹图谱,可以区分13份茶树资源中的12份,分辨率达92.3%.
茶树 ISSR PCR反应体系