从地鳖虫(Eupolyphaga sinesis Walke)中分离纯化出纤溶活性蛋白组分--地鳖虫纤溶活性蛋白(Fibrinolyric protein of Eupolyphage sinesis, EFP),研究其对血管生成的抑制作用.以新鲜地鳖虫为原料,采用硫酸铵分段盐析,经DEAE-纤维素和SephadexG-75柱等方法分离纯化EFP, 用不同浓度的EFP作用于人微血管内皮细胞(MVEC),用MTT法测定EFP对MVEC增殖的影响,用单细胞凝胶电泳和AnnexinV-FITC/PI双荧光染色观察细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测EFP对MVEC细胞周期的影响,并采用鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管模拟肿瘤的新生血管,检测EFP对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的作用.结果表明: 1)MTT法测得EFP可抑制MVEC细胞增殖,增殖抑制率达46%;2)EFP可诱导MVEC细胞凋亡,且成剂量依赖关系,用单细胞凝胶电泳法检测细胞凋亡,随着EFP浓度的增大,拖尾细胞增多;用AnnexinV-FITC/PI进行双荧光染色发现,当EFP处理浓度达2 μg/ml时,出现了大量凋亡晚期细胞;3)EFP可干扰MVEC的细胞周期,出现S期和G2/M期阻滞;4)用鸡胚尿囊膜实验观察到EFP剂量为0.06 mg/egg即可抑制鸡胚尿囊膜血管生成,最高抑制率可达35.8%.提示地鳖虫纤溶活性蛋白组分具有抑制血管生成的作用.
地鳖虫纤溶活性蛋白组分 血管生成 人微血管内皮细胞 细胞凋亡