为进一步研究TACO(tryptophan-aspartate-containing coat protein)的性质、功能及它与肌动蛋白之间的相互关系,利用逆转录PCR技术扩增出TACO的cDNA序列,并将其克隆到pGEX-2T表达质粒上.重组表达质粒pGEX-2T-TACO在宿主菌BL21中得到稳定表达.表达产物经(Glutathione-SepharoseTM亲和纯化得到融合蛋白GST-TACO.肌动蛋白纤维(F-actin)结合共沉淀实验证明,融合蛋白GST-TACO保持了天然TACO蛋白的F肌动蛋白结合活性.利用肌动蛋白纤维交联(F-actin cross-linking)实验和电镜技术发现,纯化后的GST-TACO蛋白具有交联肌动蛋白纤维并将其捆聚成束的能力.实验结果表明TACO很可能起组织者的作用,通过与肌动蛋白纤维的交联,将肌动蛋白纤维捆聚成束从而形成新的肌动蛋白细胞骨架.
TACO 克隆与表达 肌动蛋白纤维交联