高保真PCR克隆青鱼β-actin基因开放阅读框和5'端侧翼序列,DNA测序结果表明:青鱼β-actin基因开放阅读框编码一段含375个氨基酸的蛋白,与其他物种actin家族相比较具有高度保守性.青鱼β-actin与鲤鱼、草鱼及斑马鱼的同源性均为100%,而与人和Norway鼠β-actin的同源性均为99.2%,与鸡和Kenyan爪蟾β-actin的同源性分别为98.9%和98.1%.将青鱼β-actin基因5'端启动调控区插入不含启动子的pEGFP1载体构建青鱼β-actin启动子/EGFP表达载体,与第一次卵裂之前显微注射该重组质粒入泥鳅受精卵,同时也用该重组质粒转染HeLa细胞系.观察结果表明:GFP在50%的泥鳅胚胎和2/3的HeLa细胞有所表达.GFP在泥鳅胚胎的各个部分均有表达,且在某些胚胎中GFP的表达遍布全身.因此,以EGFP为报告基因证实了青鱼β-actin基因启动子为一种非特异性表达的启动子.
青鱼 β-肌动蛋白 启动子 显微注射