目的:探讨低浓度过氧化氢(H2O2)对小鼠表皮干细胞(mESCs)体外促增殖作用及其机制.方法:以酶消化法分离培养mESCs.免疫荧光技术鉴定第3代mESCs β1整合素和角蛋白19 (K19)表达,流式细胞术鉴定CD34的表达;以不同低浓度H2O2(0、25、50、100、150和200 μmol/L)处理mESCs 48 h和72h.同时,另一组实验中在用不同浓度H2O2刺激的同时加入或不加入雷帕霉素(50 ng/ml)培养48 h.甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Western Blot法检测H2O2刺激小鼠mESCs 48 h Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、P70s6k、eIF4E、4E-BP1、p-mTOR、p-Akt、p-P70s6k、p-eIF4E、p-4E-BP1和细胞增殖相关蛋白CyclinD1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:免疫荧光技术检测分离培养的mESCs细胞100％表达β1整合素和K19;流式细胞术检测99.8％的mESCs表达CD34;MTT检测结果显示,48 h和72 h时25 μ mol/L和50 μ mol/L的H2O2可以有效地促进mESCs的增殖(P＜0.05),而雷帕霉素能拮抗这一效应;但当H2O2浓度为200 μ mol/L时,则显著抑制mESCs增殖(P＜0.05);免疫印迹结果显示低浓度H2O2处理mESCs 48 h后,Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、eIF4E、4E-BP1水平及其磷酸化水平(p-mTOR、p-eIF4E、p-4E-BP1)显著增加(P＜0.05或P＜0.01),当H2O2浓度为200 μ mol/L时则抑制其表达(P＜0.05或P＜0.01).此外,50 μ mol/L的H2O2能上调细胞周期蛋白Cyclin D1和PCNA的表达,而雷帕霉素能拮抗这一作用.结论:低浓度的H2O2对mESCs有明显的促增殖作用,并且能激活Akt/mTOR通路.而低浓度H2O2对mESCs的促增殖作用至少部分是通过活化Akt/mTOR信号通路介导的.
表皮干细胞 过氧化氢 Akt/mT0R信号通路 细胞增殖