[目的] 研究白蜡窄吉丁气味结合蛋白 AplaOBP2 在触角中的表达定位,解析 AplaOBP2 重组蛋白的配体结合特性及配体活性,旨在通过气味结合蛋白筛选白蜡窄吉丁新的信息化合物.[方法] 原核表达白蜡窄吉丁气味结合蛋白 AplaOBP2,采用免疫组织化学技术研究 AplaOBP2 在白蜡窄吉丁触角中的表达定位,通过荧光竞争结合试验分析 AplaOBP2重组蛋白与 58 种化合物的结合特性,并进一步通过触角电位仪和" Y"型嗅觉仪测定AplaOBP2的配体对白蜡窄吉丁成虫的活性.[结果] 在原核表达系统中成功表达 AplaOBP2重组蛋白.免疫定位结果显示 AplaOBP2在触角嗅觉感器——锥形感器Ⅰ的淋巴液表达.荧光竞争结合试验结果表明,AplaOBP2蛋白能够与反-2-己烯醛、反-2-庚烯醛、苯甲醛、4′-乙基苯乙酮、3′,4′-二甲氧基苯乙酮和 β-紫罗兰酮6种配体结合,其解离常数 KD 值分别为4. 44,4. 17,5. 20,2. 91,3. 45 和 0. 63 μmol·L-1.白蜡窄吉丁雌雄成虫对 10 mg·mL-1的 6种配体均有触角电位反应.行为学试验表明,在10 mg·mL-1刺激剂量条件下, 反-2-己烯醛对雌成虫有显著引诱作用,β-紫罗兰酮对雌虫表现出明显的趋避作用.[结论] 白蜡窄吉丁气味结合蛋白 AplaOBP2在嗅觉感器表达,能够选择性结合醛类和酮类物质,推测其在嗅觉识别中发挥功能.气味结合蛋白可作为靶蛋白,鉴定对白蜡窄吉丁具有吸引或趋避活性的信息化合物.
白蜡窄吉丁 气味结合蛋白 嗅觉感器 荧光竞争结合 EAG反应 行为反应