LeY是一种双岩藻糖化寡糖,在大多数上皮来源的肿瘤细胞(包括乳腺癌、卵巢癌等)中高表达.岩藻糖基转移酶Ⅳ( fucosyltransferase Ⅳ,FUT4)是合成LeY的关键酶.前期工作发现,FUT4通过增加LeY糖的合成来促进细胞的增殖.但有关FUT4的转录调控机制尚不清楚.本文通过对人FUT4基因近端启动子进行生物信息学分析,并构建不同长度启动子序列荧光虫荧光素酶报告基因表达载体,分析其转录活性.使用First EF程序分析并获得FUT4近端启动子序列,采用PCR法扩增FUT4基因近端不同长度的启动子序列,定向克隆,获得不同长度的启动子重组质粒.重组质粒经双酶切及测序鉴定正确.荧光素酶活性分析不同长度的FUT4基因启动子片段的转录活性.结果显示,pGL6-FUT4-1.2 kb在MCF-7和MDA-MB-231细胞中转录活性明显升高(P＜0.05).说明FUT4基因启动子区域定位于转录起始位点上游的-800～-1 600 bp的区域内.
岩藻糖基转移酶Ⅳ 转录调控 启动子 报告基因