目的:建立POLκ基因表达反义阻断的FL 细胞系研究POLκ(polymerase kappa)在维持细胞遗传稳定性中的作用.方法:将POLκ基因的1 690-1 918片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体pMAMneo-amp-中,将重组表达质粒转染FL细胞,经G418筛选,获得POLκ基因被表达阻断的哺乳动物细胞系FL-POLκ-.采用穿梭质粒pZ189介导的突变实验,观察在POLκ基因表达被阻断细胞系中进行复制时的自发突变频率.结果:成功建立细胞系FL-POLκ- .穿梭质粒pZ189在FL-POLκ-细胞中复制后,其supF tRNA基因的自发突变频率为11.2×10-4, 而对照细胞FL和FL-M分别为4.9×10-4和3.7×10-4.结论:POLκ在维持哺乳类细胞的遗传稳定性中起重要作用.
基因 pol 遗传稳定性 自发突变