目的:对人内毒素结合肽(endotoxin binding peptide,EBP)进行改良,获得突变体mEBP(mutate of endotoxin binding peptide,mEBP)基因并进行原核表达,纯化获得高纯度的mEBP.方法:应用PCR定点诱变方法获得mEBP基因,构建PinpointXa-3/mEBP融合表达载体,在BL21(DE3)pLysS宿主菌进行表达,溶菌酶裂解法提取包涵体,融合蛋白经PinpointTMXa纯化后,由factorXa酶切,获得目的肽,RP-HPLC纯化获得高纯度的mEBP.结果:应用PCR定点诱变技术完成了EBP第5,18位谷氨酰胺→赖氨酸的定点突变,且通过原核表达,色谱纯化获得了高纯度的mEBP.结论:成功获得高纯度的mEBP,为下一步的抗内毒素功能检测奠定基础.
内毒素结合肽 突变 表达 纯化