用L-山梨糖诱导绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711纤维素酶基因的转录,提取其总RNA反转录获得cDNA.PCR扩增葡聚糖内切酶Ⅰ(EG Ⅰ)和葡聚糖内切酶Ⅲ(EG Ⅲ)的cDNA基因,将其克隆到酵母载体中,构建产生纤维素酶的酿酒酵母工程菌.重组菌株能够识别EG Ⅰ和EG Ⅲ自身携带的信号肽而将表达产物分泌到胞外,故可采用刚果红平板染色法筛选具有羧甲基纤维素酶(CMCase)活性的重组转化子.重组菌株表达的EG Ⅰ酶活在诱导70h时达到最高(为0.08U/ml),表达的EG Ⅲ酶活在诱导60h时达到最高(为0.03U/ml).
绿色木霉 葡聚糖内切酶 酿酒酵母