采用生物信息软件系统分析miR-151-3p的保守性,并筛选出与小鼠肌肉发育和肿瘤发生相关靶基因:蛋白激酶3(serine/threonine kinase 3,Akt 3),Twist碱性螺旋-环-螺旋转录因子(twist basic helix-loophelix 1,Twist1)和T型电压依赖性钙通道α1g亚基(calcium channel,voltage-dependent,T type,alpha 1g subunit,Cacna 1 g).采用实时定量PCR及双荧光素酶报告基因检测技术对以上靶基因进行初步验证,结果表明,超表达miR-151-3p显著抑制Akt 3 mRNA表达,而Twist1和Cacna1g mRNA表达变化不显著;双荧光素酶报告系统分析发现,miR-151-3p显著抑制野生型Akt 3报告载体相对荧光素酶活性,突变Akt 3 3'UTR与miR-151-3p结合的位点后,相对荧光素酶活性得到恢复,而Twist1和Cacna 1 g基因双荧光素酶报告载体无此现象,结果证实Akt 3是miR-151-3p的靶基因.
miR-151-3p 靶基因 双荧光素酶报告基因检测系统