用谷氨酸脱氢酶(GDH)提高植物氮肥利用率是国际上生物工程研究的热点之一. 通过RT-PCR方法克隆了真菌中间脉孢霉(Neurospora intermedia, 简称Ni), 好食脉孢霉(N. sitophila), 粗糙脉孢霉(N. crassa)的gdh基因, 进行序列测定. 前两种gdh基因的序列为首次报道. 分别将上述gdh基因克隆入pET30a质粒在大肠杆菌中表达, 纯化后进行酶活性及米氏常数(Km)测定, 结果发现大肠杆菌表达的Ni-GDH具有更高的酶活性, 其Km值在0.3~0.45 mmol/L左右. 选择Ni-GDH基因转化烟草, 发现它能促进烟草在低氮水平下的生长.
中间脉孢霉 谷氨酸脱氢酶 基因序列 米氏常数 酶活性 转基因烟草