利用 RACE 及克隆等方法获得了异育银鲫(Carassius auratus gibelio)c 型溶菌酶基因全长cDNA 序列.序列分析表明,所克隆的异育银鲫溶菌酶的 cDNA 全长 751 bp,包括溶菌酶基因开放阅读框(ORF)438 bp,5'非编码区(UTR)为 109 bp 和 3'UTR 为 204 bp.438 bp ORF 共编码146个氨基酸,其成熟肽的分子量预测值为 14 543.6,理论等电点为 8.86.通过 ClustalW 软件,将异育银鲫和其它多个物种 c 型溶菌酶的氨基酸序列进行多序列比对发现,所克隆的异育银鲫溶菌酶编码的氨基酸序列中存在 c 型溶菌酶的活性中心(Glu53 和 Asp69),且与活性位点相邻的氨基酸序列高度保守.同时,8个保守的半胱氨酸残基也与其它物种的 c 型溶菌酶相一致.结合 BLASTN 分析的结果,可以确认所获得的异育银鲫溶菌酶 cDNA 序列属于 c 型溶菌酶.异育银鲫 c 型溶菌酶和人 c 型溶菌酶(pab 1at6-)在蛋白质序列上有 50% 相似性,其三维(3-D)结构非常类似.通过氨基酸空间位置比较发现,两者具有类似的酶活中心,异育银鲫 c 型溶菌酶只能形成3个二硫键,比人少1个.荧光定量RT-PCR 检测和溶菌酶活性测定显示,异育银鲫头肾和脾脏 c 型溶菌酶 mRNA 的表达量约为肝胰脏的 2.9 倍和 1.7 倍,异育银鲫头肾和脾脏的溶菌酶活性约为肝胰脏的 6.2 倍和 4 倍.
异育银鲫 c 型溶菌酶 序列分析 蛋白结构预测 mRNA 表达 溶菌酶活性