目的 家兔是一种重要的模式动物,然而目前家兔中缺乏外源基因定点整合的相关技术.方法 为了在兔胚胎成纤维细胞水平建立起成熟的H11位点定点整合平台,试验根据文献报道的人和小鼠的H11位点鉴定出家兔的H11位点,并使用CRISPR/Cas9系统和同源重组技术,设计了两对针对H11位点的sgRNA和左右同源臂,构建敲除载体和打靶载体.将两种载体共同转染进兔胚胎成纤维细胞中,在共转染的细胞基因组中依托嘌呤霉素筛选检测外源基因整合.结果 在共转染的兔胚胎成纤维细胞中检测到外源基因插入,并且在敲入后成功表达外源基因.结论 该实验依赖于CRISPR/Cas9技术和同源重组技术在细胞水平上创建高效的位点特异性整合系统,为未来转基因兔的安全和有效制备奠定了基础.
CRISPR/Cas9 定点敲入 兔胚胎成纤维细胞 H11位点