目的:寻找前列腺癌中L-plastin启动子的非甾体激素类顺式作用元件序列,并鉴定其相应的转录因子与调控途径.方法:在切除L-plastin启动子中甾体类激素受体位点并建立相应的荧光素酶重组子的基础上,利用外切酶行巢式切除法分段切除L-plastin启动子基因序列,并建立相应的荧光素酶重组子,检测切除各启动子序列片段后有雄激素刺激组和无雄激素刺激组的荧光素酶活性,寻找调控L-plastin表达的非甾体激素类启动子基因序列所在位置,通过Transfect软件分析寻找对应的转录因子,再通过定点突变技术切除转录因子的结合位点并进一步进行荧光素酶活性测定,从而获得调控L-plastin表达的非甾体激素类途径.结果:成功分段切除了L-plastin启动子,并建立了相应的荧光素酶重组子,转染细胞后在有及无双氢睾酮刺激下检测荧光素酶活性,发现在-206～1片段存在明显的非甾体激素受体类的调控途径,通过软件分析发现AP-4和SP-1可以与该片段结合.切除AP-4和SP-1位点后,荧光素酶活性下降,以AP-4尤为明显.结论:在L-plastin启动子中,除了甾体类激素受体途径,仍然存在其他非甾体类调控途径,该调控途径的结合位点主要在-206～1之间,可能是通过AP-4和SP-1与该片段的启动子基因序列结合来上调L-plastin基因表达的.
前列腺癌 L-plastin 荧光素酶 转录因子