目的:采用高通量筛选方法筛选出抑制视神经脊髓炎(NMO)-IgG与水通道蛋白4(AQP4)结合的小分子.方法:将FRT-AQP4细胞分为阴性对照组(不加小分子化合物)和筛选组,采用化学发光法检测辣根过氧化物酶(HRP)活性.将V79-AQP4细胞分为抑制剂组(neosutchuenenine)和二甲基亚砜(DMSO)组,采用免疫荧光法检测各组细胞荧光强度,荧光猝灭法检测各组细胞的水通透性,CellTiter-Glo?发光法检测补体依赖的细胞毒性,水溶性四氮唑1(WST-1)法检测细胞活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞凋亡情况.结果:与阴性对照组比较,筛选组HRP活性明显升高(P<0.01).与DMSO组比较,抑制剂组红色荧光强度明显降低,而绿色荧光无明显变化;与DMSO组比较,抑制剂组水通透性无明显变化(P>0.05),补体依赖的细胞毒性明显降低(P<0.01),细胞活性和细胞凋亡无明显变化(P>0.05).结论:成功建立高通量筛选AQP4小分子抑制剂的方法,并筛选出具有阻断作用的小分子抑制剂neosutchuenenine.
水通道蛋白 视神经脊髓炎 小分子抑制剂 高通量筛选