目的 永生化ABRO1基因敲除(KO)小鼠骨髓来源的巨噬细胞系(BMDM),并确定缺失ABRO1对巨噬细胞LPS/TLR4通路活化的影响.方法 用pCDH-SV40LT-puro慢病毒分别感染野生型(WT)及ABRO1 KO小鼠的BMDM,连续传代培养>50代,得到永生化细胞系.利用MTS法和EdU掺入法检测细胞增殖,AnnexinⅤ/7-AAD双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡.脂多糖(LPS)刺激细胞后,Western印迹法检测NF-κB及MAPK信号通路,并用流式微球阵列(CBA)检测细胞产生IL-6、TNF-α的水平.结果 成功构建了ABRO1 WT和KO的永生化BMDM(iBMDM).正常培养下,WT及KO iBMDM细胞增殖能力和细胞凋亡均无明显差异,但撤除血清后,KO iBMDM细胞凋亡明显高于WT.LPS刺激后,NF-κB、MAPK信号通路激活及IL-6、TNF-α的产生无明显差异.结论 ABRO1缺失不影响LPS/TLR4信号通路.敲除ABRO1促进血清撤除诱导的iBMDM凋亡.
ABRO1 小鼠 基因敲除 骨髓 巨噬细胞 永生化 细胞增殖 细胞凋亡 LPS/TLR4信号通路 Toll样受体4