通过RNAi策略转化小麦,以降低小麦种子中直链淀粉的含量.小麦中直链淀粉合成的合型淀粉合成酶(Granule-bound starch synthase l,GBSSI,即WAXY蛋白),通过RT-PCR方法从小麦种子中分离出Waxy基因.Southern杂交分析表明,在基因组中存在3个Waxy基因.Northern杂交分析显示出在授粉后的小麦种子中检测到Waxy mRNA.利用RNA沉默策略,将Waxy编码区683 bp的正向和反向片段以及150 bp内含子,连接于表达载体pCAMBIA 3300中玉米ubi1启动子下游.以扬麦10号授粉后15 d的幼胚为外植体,利用农杆菌介导的方法进行转化.通过PCR、RT-PCR和叶片离体褪绿实验鉴定出4株转基因植株.小麦胚乳l2-Kl染色和直链淀粉含量测定表明这4株转基因植株直链淀粉含量明显下降.研究结果表明Waxy基因的RNA沉默使转基因小麦种子直链淀粉的含量下降.
小麦 Waxy RNA干涉 农杆菌介导的转化 直链淀粉