为了提高传统的盲吸法牛体细胞核移植去核效率,将0.5 mL离心管底部截掉,在截口处蒙上一层400目的细胞筛网,再与1 mL的离心管套在一起.实验1,将成熟的卵母细胞置于改造过的离心管内膜上,分别以1,000 r/min、2,000 r/min及3,000 r/min离心10 min,Hoechst 33342染色后,在荧光显微镜下计算第一极体与染色体的位置关系及去核效率;实验2,将卵母细胞以2,000 r/min离心后去核做受体,颗粒细胞做供体进行核移植,检查重构胚胎的早期发育情况.结果表明:以2,000 r/min将卵母细胞离心10 min后,有86.6%卵母细胞的极体与染色体之间夹角在20°以内,此时去核效率最高(87.4%);将卵母细胞离心后,对随后的重构胚发育无影响.因此,采用离心辅助去核的方法可以显著提高牛卵母细胞的去核效率.
牛 离心 核移植 卵质内注射