目的:观察培养的原代大鼠肝细胞形态学和功能的动态变化,探讨其短期培养内的最佳功能状态.方法:采用Seglen胶原酶二步灌流法分离肝细胞.光镜、透射电镜和免疫组化方法观察细胞形态学改变;并收集不同时期培养上清监测生化指标的改变.结果:平均每只大鼠肝获取1.21×108个肝细胞,平均活力为93.6%.光镜下见肝细胞生长良好,可存活3周,电镜下可见丰富的细胞器,细胞连接及胆小管,细胞角蛋白18强阳性表达.肝细胞功能检测白蛋白分泌及尿素合成功能在第3,4天时较好.结论:肝细胞的形态和功能具有一致性,原代肝细胞在培养第3,4天功能较好,可能为肝细胞移植和生物人工肝应用的最佳时机.
肝细胞 原代培养 功能 形态学