苹果酸-乳酸酶是苹果酸-乳酸发酵过程中负责苹果酸转化为乳酸的功能酶.在进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因(mleA)克隆测序基础上,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体,构建了重组表达质粒并转化酿酒酵母YS58.酵母转化子用SD/-Ura平板筛选鉴定.斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中,SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了约60kDa的目标蛋白.获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d;取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量,采用t检验进行差异显著性分析,结果表明mleA基因进行了功能性的表达,将L-苹果酸转化成L-乳酸,L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著,苹果酸的相对降低率平均为20.95%.在有选择压力条件下,重组质粒相对稳定,而在无选择压力条件下,传代培养10d后大约有65%的重组质粒丢失.
酒酒球菌 苹果酸-乳酸酶基因 转化 表达