利用DNA聚合酶进行DNA体外复制时,模板上的多种回文结构可能导致复制跳跃,表现为较大的片段缺失.本文在研究黑斑侧褶蛙抗菌肽Temporin基因结构时,对一个1126 bp的内含子片段进行PCR扩增、扩增产物的T-A克隆和Sanger测序,在这3个阶段都遇到了在同一位置出现564 bp的缺失.根据实验数据和文献报道,我们推测这一复制跳跃的产生与一段6 bp的同向重复单元有关,并提出跳跃可能发生的机制:模板上两个重复单位下相互靠近,形成特定的高级结构,使DNA聚合酶脱落下来,新链延伸被阻断.下一个循环中新链的第一个重复单位与模板第二个重复单位互补配对并退火,形成引物,DNA聚合酶结合后继续延伸,形成缺失的PCR产物.这一发现显示,复制跳跃不仅可以发生在PCR和Sanger测序等体外复制过程中,而且可以发生在细菌体内质粒复制的过程中.如果研究中不能准确判定跳跃的发生,DNA上丢失一个片段就会被误读为新的等位基因.
聚合酶链式反应 克隆 复制跳跃 Temporin基因 黑斑侧褶蛙