目的 构建小RNA193前体(pre-miR-193b)重组腺病毒,观察miR-193b对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响.方法 化学合成miR-193b cDNA序列,克隆进入pAdTrack-CMV穿梭质粒;重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,获得pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经PacⅠ线性化后转入HEK293细胞包装、扩增.倍比稀释法测定病毒滴度.实时荧光定量PCR检测K562细胞中miR-193b表达水平,MTT法检测K562细胞增殖能力.结果 pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经限制性内切酶鉴定和测序分析显示构建成功,并能够高效转染K562细胞;与对照组相比,荧光定量PCR检测显示重组腺病毒载体感染K562细胞后,miR-193b基因表达明显增加;同时高表达miR-193b基因的K562细胞增殖水平低于对照组.结论 K562细胞高效表达的miR-193b可抑制K562细胞的增殖.
腺病毒 微小RNA193前体 K562细胞