目的 通过生物信息学分析筛选新月柄杆菌中潜在的类脱乙酰化酶编码基因,对其结构和理化特性进行注释,并克隆该编码基因.方法 利用ClustalⅩ软件对脱乙酰化酶相关家族基因进行比对分析,寻找其特定保守结构域.通过BioSun软件对已公布的新月柄杆菌全基因组序列进行分析和功能域筛选,并对其理化特性和二级结构进行注释.以新月柄杆菌基因组DNA为模板,利用PCR方法 扩增目的基因,将其插入到pBV220载体中,进行酶切和测序鉴定,并将构建的重组质粒转入E.coli BL21plysS中进行温度诱导表达.结果 生物信息学分析表明,筛选获得的类脱乙酰化酶含227个氨基酸,相对分子质量约24.2×103,等电点为6.80,为不含信号肽及跨膜区,二级结构主要以α-螺旋及不规则卷曲为主的亲水性稳定蛋白.双酶切和测序结果 表明,克隆的目的基因和表达载体构建成功.温敏诱导表达结果 表明,重组蛋白主要分布在上清中.结论 通过生物信息学分析发现,新月柄杆菌中存在类脱乙酰化酶编码基因,成功克隆并表达了该基因,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
新月柄杆菌 脱乙酰化酶 功能类似物 生物信息学 分子克隆