目的: 重组表达angiostatin的功能结构域K1-3,并制备抗体,为其作用机理研究打下基础. 方法: 设计引物,通过PCR以人纤溶酶原cDNA为模板扩增出K1-3基因片段,克隆至pGEX-4T-1融合表达载体,IPTG诱导,挑出表达克隆,切下基因片段,克隆至pUC19进行序列测定,保留序列完全正确的克隆并进行诱导表达;从SDS-PAGE上切下表达的蛋白条带作为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体, 并以Western blotting检测抗血清的结合特异性. 结果: DNA电泳结果显示PCR扩增出约780 bp的片段,序列测定表明为K1-3; K1-3可以与GST融合表达,产物存在于包含体中;抗血清与K1-3及煮沸变性的天然angiostatin特异地结合. 结论: 经PCR扩增并克隆到序列正确的K1-3片段,而且能够以融合形式表达,用其免疫家兔获得特异性抗体.
重组融合蛋白质类 血管生成 抑制素