采用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测HaCaT细胞的增殖水平.Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测HaCaT细胞的凋亡率和死亡率.单丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverine,MDC)荧光染色和二氯荧光黄二乙酸酯(Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针标记后,用激光共聚焦显微镜进行扫描,分别检测HaCaT细胞内自噬体和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平变化.Western blot检测HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ、磷酸化AKT(p-AKT)和总AKT蛋白表达变化.结果显示:经10~80 J/cm2 UVA照射后,HaCaT细胞的增殖水平随受照剂量的增加逐渐降低(p<0.05);白藜芦醇预处理能显著促进UVA照射后HaCaT细胞增殖(p<0.01),降低其凋亡率和死亡率(p<0.05);经20 J/cm2 UVA照射后3~24 h,HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ蛋白表达增强(p<0.01);白藜芦醇预处理能使UVA照射后HaCaT细胞内自噬增强(p<0.01),ROS水平降低(p<0.01),p-AKT蛋白表达增强(p<0.01).提示白藜芦醇可能通过促进细胞自噬和AKT蛋白磷酸化,以及降低细胞内ROS水平,拮抗UVA导致的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡.
白藜芦醇 HaCaT细胞 UVA 防护效应