目的评价16 S～23 S rDNA间隔区序列寡核苷酸探针碱性磷酸酶显色与辣根过氧化物酶化学发光法对结核患者痰标本检测的应用价值.方法采用生物素标记5′端18 bp的寡核苷酸探针斑点杂交的碱性磷酸酶显色反应及辣根过氧化物酶化学发光检测90例结核患者和30例非结核患者痰标本.结果痰标本基因组DNA直接与探针杂交,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为22.2%,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为33.3%;痰标本经引物PL1、PL2扩增(扩增产物350 bp,)与寡核苷酸探针杂交,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为77.8%,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为83.3%;痰标本经引物b扩增(扩增产物250 bp)与探针杂交,碱性磷酸酶显色和化学发光检测阳性率分别为75.6%、80.0%,检测的敏感性高于痰涂片.寡核苷酸探针与30例非结核患者痰标本DNA杂交则全为阴性.结论寡核苷酸探针和250 bp PCR扩增产物相结合,经化学发光显色是分枝杆菌检测的一种有效方法.
16 S～23 S rDNA间隔区 寡核苷酸探针 斑点杂交 化学发光法 碱性磷酸酶显色法