谷氨酰胺转氨酶(EC2.3.2.13,Transglutaminase,TGase)是一种重要的食品酶.基于N-端酶原区对折叠的重要影响,TGase通常以无活性的酶原(pro-TGase)形式在异源宿主中表达.以茂源链霉菌(Streptomyces mob-araensis)pro-TGase为基因来源,重组解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica po1h)为研究对象,通过在pro-TGase插入宿主Kex2蛋白酶识别位点(策略1)和共表达pro-TGase与谷氨酰胺转氨酶激活金属蛋白酶(TAMEP,策略2),使pro-TGase在Y.lipolytica中表达后被切除酶原区,而直接转化为活性TGase.摇瓶发酵结果显示,策略1和策略2构建得到的重组菌的TGase活力分别为5.26 U/mL和6.77 U/mL.酶学性质研究表明,策略1和策略2得到的重组菌的TGase比酶活、Km及kcat/Km均明显优于S.mobaraensis TGase.基于Y.lipolytica食品安全性,研究结果为TGase的工业化生产提供了新型高产菌种.
谷氨酰胺转氨酶 Yarrowia lipolytica 活性表达 蛋白酶识别位点 活化蛋白酶