目的 研究Zika病毒NS3蛋白是否具有依赖于ATP水解的dsDNA解链活性.方法 构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21菌株中表达带有His标签的Zika NS3蛋白,并用Ni琼脂糖珠进行纯化;利用ATPase检测试剂盒对NS3的ATP水解活性进行检测;利用荧光共振能量转移(FRET)原理,对NS3的dsDNA解链活性进行实时动力学检测;利用定点突变方法将NS3蛋白的第198位甘氨酸(G)突变为丙氨酸(A),得到G198A突变体,检测其是否影响NS3解旋酶活性.结果 Zika NS3蛋白在体外可以水解ATP,酶解最大反应速率为2.76 μmol/(L· min),Km值为0.11 mmol/L;Zika NS3蛋白在体外可以解链dsDNA;G198A突变体与野生型相比,ATP水解速率和dsDNA的解链速率均明显减弱.结论 Zika NS3蛋白在体外具有ATP水解活性以及dsDNA解链活性,且第198位甘氨酸对于NS3酶活性至关重要.
Zika病毒 NS3蛋白 ATP dsDNA 解旋酶