背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型.材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH和SK-SY-5Y cDNA中分别经PCR扩增出635 bp和429 bp DNA片段,测序证实635 bp片段是NRDR,而429 bp片段是选择性剪接新亚型.再用快速cDNA末端扩增(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法得到429 bp片段cDNA全长序列.用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位.结果:得到新亚型全长并命名为human NRDR A2(humNRDRA2)(AY616182).已知NRDR有8个外显子,而新亚型humNRDRA2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失,从第5外显子开始读码框架前移1 bp,导致随后的编码区框码漂移(frameshift),同时蛋白翻译终止信号提前出现,产生仅有188个氨基酸的蛋白,其中第137氨基酸以后的序列相对于NRDR完全发生改变,同时C-末端的过氧化物酶体定位信号-SRL丢失,却在160～176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号.我们在ESTs库中未找到与其相同的剪接形式,提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种NRDR剪接亚型.用GFP-NRDRA2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位,发现发绿色荧光的细胞均已悬浮,但悬浮状态不佳,而作为对照的NRDR另一亚型则能定位成功,提示NRDRA2蛋白可能具有一定的细胞毒性.结论:人神经母细胞瘤NRDRA2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列;该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白.
NADP(H)-依赖的视黄醇脱氢酶 选择性剪接 框移突变