目的:从苦荞麦种子中提取、纯化苦荞凝集素,对其凝血及酶学活性等性质进行初步研究.方法:采用缓冲液抽提、硫酸铵沉淀、透析及DEAE-纤维素阴离子交换层析(DEAE fast flow,DEAEFF)纯化凝集素;高碘酸希夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色鉴定其蛋白种类,硫酸-苯酚法测定糖含量;凝血实验和糖抑制实验检测其凝血活性和结合糖特异性;以对硝基苯磷酸二钠为底物,测定磷酸酯酶活性.结果:从苦荞麦种子中获得了一种具有凝血功能的蛋白质——苦荞凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL).纯化的TBL在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)图谱上显示单一条带,根据SDS-PAGE计算其分子质量约为62 kD.PAS染色证明TBL为糖蛋白,糖含量为5.8％.凝血实验表明TBL对人的O型血红细胞具有特异性凝集作用,效价为15 μg/mL,对其他血型的红细胞没有凝血效应.血凝活性被D-甘露糖和D-葡萄糖抑制,推测其是一种甘露糖结合凝集素.酶学性质鉴定显示,TBL具有磷酸酯酶活性,米氏常数Km=9.86×10-3 mol/L.结论:TBL可能是苦荞麦种子中的一种具有多种酶学功能的甘露糖凝集素.
苦荞 凝集素 糖蛋白 磷酸酯酶