凋亡抑制蛋白-2(inhibitor of apoptosis protein-like protein-2,ILP-2)是新发现的凋亡抑制蛋白质,其抑制肿瘤细胞凋亡促进其生长的分子机制有待阐明,而细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)所介导的信号通路与肿瘤细胞的生长密切相关.本研究通过免疫共沉淀法,检测到乳腺癌MCF-7细胞中ILP-2与ECM1(P85)存在相互作用.分别用化学合成的ILP-2-siRNA及ECM1-siRNA干扰处理MCF-7细胞.以未转染的MCF-7细胞和转染阴性对照siRNA的细胞分别作为空白和阴性对照,利用蛋白质印迹法,检测ILP-2-siRNA干扰后ECM1、FAK、Akt蛋白的表达,以及ECM 1-siRNA干扰后ILP-2蛋白的表达.其结果显示,与空白对照组相比,ILP-2-siRNA-5(0.32±0.095)及ECM1-siRNA-1 (0.42±0.024)干扰效率较高(均P＜0.001);ILP-2-siRNA-5组待测蛋白质的相对表达量均显著下调(ECM1,0.19±0.013,P＜0.001),FAK (0.64±0.069,P＜O.O1),Akt (0.35±0.120,P＜0.01)),ECM1-siRNA-1组ILP-2 (0.48±0.060)蛋白表达也显著下调,表明ILP-2与ECM1-mTOR信号通路联系密切.分别在ILP-2-siRNA和ECM1-siRNA转染24、48和72 h时,使用CCK-8法检测乳腺癌细胞的增殖,并用TUNEL标记荧光法和吖啶橙/溴化乙啶双荧光染色法(AO/EB)检测其凋亡.结果 显示,与空白对照组相比,ILP-2-siRNA-5组和ECM1-siRNA-1组的存活率均显著下降(P＜0.001),凋亡率均明显升高(P＜0.001).利用共转染技术同时敲低ILP-2和ECM1表达,检测细胞的凋亡情况.结果 显示,在干扰处理后24 h(0.55±0.122),48 h(0.80±0.107)和72h(0.73±0.091)的凋亡率显著均高于阴性对照组(P＜0.05).但与只敲低ILP-2或ECM1相比,无显著性差异(P＞0.05).表明ILP-2可能是通过与ECM1作用激活FAK-mTOR信号通路,影响MCF-7细胞的增殖和凋亡,对乳腺癌细胞MCF-7的生长发挥了积极的作用.
凋亡抑制蛋白-2 细胞外基质蛋白1 乳腺癌细胞MCF-7