目的构建含幽门螺杆菌(H.pylori)hpaA基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗.方法应用PCR方法从H.pylori标准菌株基因组DNA中扩增hpaA基因,克隆入pUCmT载体,检测hpaA基因序列,经过酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入大肠杆菌,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应鉴定.重组载体pIRES-hpaA转化入减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,再转化入SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性.重组载体pIRES-hpaA通过脂质体法转染COS-7细胞,SDS-PAGE及Western印迹法检测pIRES-hpaA表达HpaA蛋白的免疫原性.结果成功扩增出长约750bp的hpaA基因,测序结果表明扩增出的hpaA基因与H.pylori hpaA序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实hpaA基因克隆入真核表达载体pIRES,成功构建了含hpaA基因的幽门螺杆菌核酸疫苗pIRES-hpaA,并成功构建了幽门螺杆菌hpaA基因的减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,重组核酸疫苗稳定,Western印迹法.检测到了特异性的蛋白条带.结论构建了具有免疫反应性的H.pylori hpaA减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,为进一步探索其免疫作用奠定了基础.
幽门螺杆菌 疫苗 载体 鼠伤寒沙门菌