为了适应工业生产的需要,利用fed-batch方法,重组人源性抗HBsAg Fab抗体酵母工程菌在30L发酵罐中进行了高密度发酵,发酵最适温度30℃,pH值范围5.0～5.3,溶氧范围20%～30%.发酵液OD600值达到300时开始诱导,甲醇最佳诱导浓度为10 mL/L.重组人源性抗HBsAg Fab抗体经离子交换层析纯化,纯化产品经SDSPAGE、Western blot进行分析和ELISA方法进行活性测定.结果显示,重组Fab抗体在Fed-batch发酵系统中可高效表达,经过192 h的发酵生产,重组人源性抗HBsAg Fab抗体的表达量可达412mg/L.发酵上清经过离子交换层析纯化,获得纯度为95%的重组Fab抗体,该Fab抗体经ELISA分析具有较高的HBsAg抗原亲和力和特异性.结果证实可以通过高密度发酵毕赤酵母工程菌来高效生产重组人源性抗HBsAg Fab抗体,为后续的工业化生产应用奠定了基础.
HBsAg 重组Fab 发酵 毕赤酵母