目的 研究血清饥饿条件下降钙素基因相关肽(CGRP)对小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡、自噬的影响以及二者之间的关系,以进一步明确CGRP对成骨细胞的保护机制.方法 体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞.采用流式细胞术和蛋白质印迹检测正常血清、无血清(血清饥饿)、3-MA预处理+血清饥饿培养的成骨细胞的凋亡和微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达.采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7 mol·L-1)CGRP培养的成骨细胞的LC3和P62蛋白表达;采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10-8mol·L-1 CGRP培养不同时间(2、6、12、24、48、72 h)的成骨细胞的LC3蛋白表达,流式细胞数检测细胞凋亡,MDC染色检测细胞自噬泡.采用流式细胞术检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10-8mol·L-1 CGRP、3-MA预处理+血清饥饿、3-MA预处理+血清饥饿+10-8mol·L-1 CGRP培养24 h的成骨细胞的凋亡.结果血清饥饿培养时成骨细胞的LC3Ⅱ蛋白表达及细胞凋亡较正常血清时增加,3-MA预处理+血清饥饿培养时成骨细胞的凋亡较血清饥饿时增加(P<0.01).与正常血清相比,血清饥饿、血清饥饿+CGRP培养时LC3Ⅱ蛋白表达增加,P62蛋白表达降低,以血清饥饿+10-8 mol·L-1 CGRP培养24 h时LC3Ⅱ/Ⅰ比值最高;血清饥饿+10-8 mol·L-1 CGRP培养能抑制成骨细胞的凋亡,促进自噬泡的合成.3-MA预处理后MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加,CGRP部分逆转3-MA预处理所增加的成骨细胞凋亡.结论 CGRP能够增强血清饥饿下MC3T3-E1成骨细胞的自噬活性,并可能通过促进自噬抑制成骨细胞的凋亡.
降钙素基因相关肽 成骨细胞 自噬 凋亡