本研究旨在克隆犏牛前列腺素D合成酶(prostagland D synthase,L-PGDS)基因序列,并检测其在不同组织及不同发育时期睾丸中的表达水平,从而为深入研究L-PGDS基因在犏牛睾丸发育过程中的作用机制提供依据.采集成年健康犏牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、胃、大脑及不同发育时期犏牛睾丸组织:胎牛期(5～6月)、幼年期(1～2岁)、青春期(2.5～4岁)、老年期(7～9岁),Trizol法提取各组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增、克隆L-PGDS基因序列并利用相关生物学软件进行分析,利用实时荧光定量PCR检测犏牛各组织及4个不同发育阶段睾丸中L-PGDS基因mRNA的表达水平.结果显示,L-PGDS基因序列全长624 bp,包括完整的开放阅读框576 bp,编码191个氨基酸.同源性比对发现,犏牛与黄牛和绵羊的同源性最高,分别为99.28％和94.0％.系统进化树分析结果显示,犏牛与黄牛亲缘关系最近,其次是绵羊、马.L-PGDS蛋白为不稳定疏水蛋白,分子质量为21.229 ku,分子式为C953 H1471 N251 O281S9,等电点为6.43,不稳定指数为47.25,不含跨膜区及信号肽,蛋白质二级结构预测显示α-螺旋、无规则卷曲、延伸链分别占25.65％、53.40％和20.94％.实时荧光定量PCR检测结果显示,L-PGDS基因在犏牛睾丸组织中特异性高表达,极显著高于其他组织(P＜O.01);随着年龄增长L-PGDS基因mRNA在犏牛睾丸中呈先上升后下降趋势,其中在青春期相对表达量最高,极显著高于其他时期(P＜0.01).本研究结果为深入探究L-PGDS基因在犏牛睾丸发育过程中的作用机制提供了基础资料.
L-PGDS基因 犏牛 睾丸 组织表达谱