为了构建一种能快速表达人EPO蛋白的真核表达系统,本研究运用的方法是构建基于TNF-α跨膜段(transmembrane,TM)的pcDNA3.1-TM-FactorXa-EPO真核表达载体.把构建好的载体瞬时转染CHO-K1细胞,用FactorXa消化TM-FactorXa-EPO融合蛋白,rhEPO从FactorXa位点处切割下来,达到高效表达和可控酶切.结果本研究构建的表达系统能高效快速表达人EPO.ELISA检测到转染24h的细胞:经FactorXa酶消化总蛋白,rhEPO浓度为285.21 μg/mL;经FactorXa酶消化胞外rhEPO,rhEPO浓度为298.65μg/mL.
促红细胞生成素 TNF-α CHO-K1 FactorXa