目的:研究人骨肉瘤细胞系(Saos-2,MG-63)中microRNA-150(miR-150)表达水平及其对细胞增殖的作用,并探讨其分子生物学作用机制.方法:采用相对实时定量PCR检测入骨肉瘤细胞系Saos-2,MG-63和正常成骨细胞系NHOst中miR-150表达差异.采用慢病毒转染过表达miR-150,实时定量PCR检测过表达组miR-1S0水平.细胞增殖实验采用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法.Western印迹检测Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)及内参β-actin蛋白水平.双荧光素酶反应检测miR-150与RUNX2 3'-UTR结合对上游基因表达抑制率.结果:MiR-150在Saos-2和MG-63细胞系中表达低于正常成骨细胞系NHOst,分别为0.23±0.02,0.32±0.03和1.00±0.02,差异具有统计学意义(P＜0.01).Saos-2细胞系空载体对照组和miR-150过表达组分别为1.00±0.08和4.17±0.19,差异具有统计学意义(P＜0.01),MG-63细胞系空载体对照组和miR-150过表达组分别为1.00±0.07和3.43±0.10,差异具有统计学意义(P＜0.01).过表达miR-150后,Saos-2和MG-63细胞增殖率明显下降(P＜0.01),RUJNX2蛋白量明显降低(P＜0.01).Saos-2细胞系中,miR-150结合RUNX2 3'-UTR区抑制69％上游荧光素酶活性(P＜0.05);MG-63细胞系中,miR-150抑制59％上游荧光素酶活性(p＜0.05).在过表达miR-150的Saos-2和MG-63细胞中,补充外源性RNX2蛋白,可恢复骨肉瘤细胞的增殖水平(P＜0.01).结论:MiR-150具有抑制骨肉瘤细胞增殖的作用,直接结合RUNX2 3'-UTR抑制转录因子RUNX2合成是其重要的作用机制.
miR-150 骨肉瘤 RUNX2