为了简化纯化步骤,节约生产成本,笔者构建了能够胞外分泌鼠羧肽酶原B(proCPB)的重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-OmpA-proCPB,并进行发酵优化.结果表明:在信号肽OmpA的引导下,proCPB成功分泌至胞外,激活后的羧肽酶B(carboxypeptidase B,CPB)比酶活为131.22 U/mg.通过单因素及正交试验对发酵工艺进行优化,得出最佳培养基组合为甘油7 g/L、复合氮源15 g/L、MgSO4 4 mmol/L、山梨醇0.3 mol/L、NaCl 10 g/L;最佳发酵条件为诱导温度30 ℃,诱导时间24 h.优化后,胞外proCPB的相对表达量为6.35(优化前的相对表达量为1).首次实现了鼠羧肽酶原B在大肠杆菌中的胞外分泌表达,为羧肽酶B的工业化直接应用提供了一定的技术支持.
羧肽酶B 分泌表达 大肠杆菌 发酵优化