将扩增得到的黄鳍棘鲷Acanthopagrus latus白细胞介素1β(Interleukin 1β, IL-1β)基因克隆到表达载体pQE30,并转化到大肠杆菌M15中进行表达.采用Ni2+-Chelating Sepharose FF层析对重组蛋白进行纯化,并用梯度透析对纯化蛋白进行复性.经SDS-PAGE和Western Blot分析,获得了分子量为21kD的重组白细胞介素1β (Recombinant Interleukin 1β, rIL-1β).采用Percoll不连续密度梯度离心分离黄鳍棘鲷头肾白细胞,在分离液密度1.080 g/ml的界面上可以有效富集白细胞.用不同终浓度的rIL-1β和5μg/ml脂多糖(LPS)刺激培养的黄鳍棘鲷头肾白细胞,23℃培养4h后提取细胞的总RNA,经RT-PCR半定量检测,当培养基中rIL-1β的浓度达到20 ng/ml时可以提高IL-1β基因的转录水平,与5 μg/ml LPS的刺激效果相当,表达的重组蛋白表现出很好的生物学活性.
黄鳍棘鲷 rIL-1β Percoll不连续密度梯度离心 细胞培养 RT-PCR