建立一种尿酸酶突变体的高通量筛选方法.将野生型苛求芽孢杆菌尿酸酶及其突变体的表达载体转入大肠杆菌,每个克隆诱导培养后超声裂解上清液为样品,全自动酶标仪测定293 nm光吸收,并分析反应启动后8～ 28 min的数据计算酶活性,Bradford法测定总蛋白;ROC比较用酶活性或比活性识别阳性突变体的可靠性.任2种突变体酶活性或比活性比值＞2时,ROC分析曲线下面积接近l;当酶活性或比活性仅增加50％时,分析比活性所得曲线下面积比分析酶活性更大,将ROC分析比活性提高近1倍.突变体敏感度达90％时,比活性为判断阳性突变体阈值,其相当于以起始物比活性均值加1.7倍标准差;此阈值能用于高通量筛选变体库中比活性增加1倍以上的阳性突变体.
尿酸酶 比活性 阳性突变体 通用阈值