目的:构建人肝细胞生长因子(HGF)基因慢病毒载体pNL-HGF-增强绿色荧光蛋白(EGFP)并转染骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测HGF基因在BMSCs中的表达.方法:采用基因重组技术,利用限制性内切酶酶切获取HGF基因序列并克隆到慢病毒载体pNL-EGFP上,构建重组慢病毒质粒pNL-HGF-EGFP;将慢病毒载体质粒pNL-EGFP和重组慢病毒质粒pNL-HGF-EGFP分别与慢病毒辅助包装质粒共转染人胚肾293T细胞,包装慢病毒并测定慢病毒滴度.将感染pNL-EGFP的BMSCs作为对照组,感染pNL-HGF-EGFP的BMSCs作为实验组.RT-PCR法和ELISA法检测对照组和实验组BMSCs中HGF mRNA表达水平和蛋白水平.结果:酶切电泳和测序检测,重组慢病毒质粒的目的基因序列与GenBank公布的HGF基因序列完全一致.对照组包装的慢病毒滴度为1.2×107 TU·mL-1,实验组慢病毒滴度为1.5×106 TU·mL-1;RT-PCR法检测,实验组BMSCs中HGF mRNA表达水平较对照组明显升高(P<0.05);ELIAS法检测,实验组BMSCs上清中HGF蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05).结论:成功构建了pNL-HGF-EGFP慢病毒载体,且BMSCs中HGF mRNA表达水平和蛋白水平明显升高.
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