微杆菌D-97胞内酶对麦芽糖的水解微弱,并且合成海藻糖的酶反应对磷酸盐无依赖性.采用氨基键合柱HPLC对酶作用的初始底物麦芽寡糖混合物(Ⅰ)、酶作用24 h后未糖化的底物(Ⅱ)及其糖化水解后的底物(Ⅲ)分别进行检测对照,底物Ⅰ麦芽五糖占34.15%,底物Ⅱ海藻糖、三糖和五糖分别占17.68%、37.63%和3.0896,底物Ⅲ的2种主要产物葡萄糖和海藻糖各占77.57%、20.20%.通过上述3种底物二糖至六糖浓度变化的比较,发现DP值＞4的麦芽寡糖为微杆菌D-97胞内酶合成海藻糖的较适底物,并推断麦芽五糖生成海藻糖的基本方式为:麦芽五糖→麦芽三糖+海藻糖.以麦芽五糖为底物的酶反应研究进一步证实了上述作用方式.对于筛选得到的野生菌酶,HPLC对照检测从1个角度为其酶合成海藻糖基本机制研究提供1种方法.
高效液相色谱(HPLC) 海藻糖 麦芽寡糖