利用CRISPR/Cas9技术敲除hbae1.1基因,获得缺失hbae1.1基因的纯合突变体,并研究缺失hbae1.1基因对斑马鱼血红蛋白生成的影响.根据斑马鱼hbae1.1基因设计敲除靶点,并制备相应gRNA,将gRNA与Cas9蛋白以一定比例混合后通过显微注射注入斑马鱼受精卵一细胞期的动物极.通过T7E1核酸内切酶酶切、测序和序列比对后检测到成功敲除了hbae1.1基因,并通过与WT交配和内交,成功获得F2代纯合突变体.将hbae1.1基因缺失的纯合突变体与野生型斑马鱼WT所产受精卵一起进行固蓝(o-Diansidine)染色,结果显示,与对照组WT相比,突变体的血红蛋白含量明显减少.研究表明,hbae1.1基因的缺失会对斑马鱼血红蛋白的生成造成一定影响.同时hbae1.1基因的研究为了解鱼类血红蛋白的发生发育提供一定基础.
斑马鱼 血红蛋白 hbae1.1基因 CRISPR/Cas9 固蓝染色