目的 利用CRISPR/Cas9技术构建Atg7基因敲除的人脑微血管内皮细胞,为Atg7在脑血管的发育和参与血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究提供体外细胞模型.方法 针对人Atg7第1外显子区域设计2对引导RNA序列(sgRNA),通过慢病毒转染人脑微血管内皮细胞,嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选成功转染细胞.分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blotting法检测敲除靶基因的mRNA和蛋白,显微镜下观察细胞形态变化.结果 构建了靶向Atg7的CRISPR/Cas9质粒;通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光染色检测,结果表明单克隆筛选获得了Atg7稳定敲除的人脑微血管内皮细胞系;光镜下观察未发现Atg7敲除后细胞形态出现明显改变.结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Atg7基因稳定敲除的人脑微血管内皮细胞,将有利于脑血管的发育和血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究.
人脑微血管内皮细胞 Atg7基因 CRISPR/Cas9技术 基因敲除