从黑豆种子中分离纯化1种黑豆脂氧合酶——bsLOX,对其酶学活性及降解花色苷等性质进行初步研究.采用缓冲液抽提、硫酸铵沉淀、透析、阳离子交换层析及凝胶层析等方法纯化出具有β-葡萄糖苷酶活性的bsLOX;分别以亚油酸钠和对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl β-D-glucopyranoside,pNPG)为反应底物鉴定bsLOX的脂氧合酶活性和β-葡萄糖苷酶活性.从黑豆种子中纯化获得的bsLOX在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)图谱显示单一条带,分子质量约为95 kD.酶活性分析表明,纯化的bsLOX以亚油酸钠为底物时,酶活力为13 U/mL;当以pNPG为底物在405 nm波长处检测到了对硝基苯酚的生成,从而推测bsLOX具有β-葡萄糖苷酶活性.高效液相色谱实验结果表明bsLOX可以降解花色苷(矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷)为花色素(矢车菊素、矮牵牛素).由于降解作用不完全,继而发现花色素能抑制bsLOX的酶活性.bsLOX是黑豆中的一种兼具β-葡萄糖苷酶功能的蛋白质,而花色素可能是天然的bsLOX抑制剂.
黑豆 脂氧合酶 β-葡萄糖苷酶活性 花色苷 花色素