已有研究表明雌二醇刺激小鼠胚胎干细胞(mouse embryomc stem cells,mES cells)的增殖,为了探讨另一种甾体激素-孕酮对mES细胞增殖的影响,本研究分别采用MTT实验和BrdU掺入实验获得增殖曲线,克隆形成实验(clone forming assay)检测孕酮对单细胞存活能力和增殖能力的影响,Western blot检测胚胎干细胞特异的标志基因Oct-4的表达,流式细胞术(fluorescence activated cell sorting,FACS)检测细胞周期,以及real-time PCR检测细胞周期有关的基因和部分原癌基因的表达.结果显示,和雌激素一样,孕酮也具有促mES细胞增殖的作用.在孕酮处理组,克隆数目比对照组显著增多.Western blot结果显示在孕酮处理组,Oct-4表达变化不大,mES仍处在干细胞状态.FACS结果显示:加入孕酮后,和对照组相比,mES处在S+G_2/M期的细胞比例增多.Real-time PCR结果显示孕酮处理使细胞周期蛋白(cyclins)、细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶(cyclin-dependent kinases)、c-myc、c-fos基因表达上调.以上结果提示,孕酮促进mES细胞增殖和存活能力,孕酮促增殖的作用可能和上述细胞周期有关基因的表达上调有关.
孕酮 胚胎干细胞 细胞周期蛋白 细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶 原癌基因