目的 观察瞬时及稳定转染的RNA干扰法对水通道蛋白5(AQP5)的抑制效果,并观察AQP5抑制后细胞株黏蛋白合成、分泌的变化.方法 用化学合成siRNA和质粒介导的shRNA分别转染SPC-A1细胞,并在转染后7 d内的不同时点收集细胞,检测AQP5 mRNA和蛋白的变化.用G418筛选稳定转染细胞株,用Western blot法检测稳转株AQP5蛋白的抑制情况.用ELISA法检测AQP5抑制后各时点及稳定转染细胞株MUC5AC表达量的变化.结果 siAQP5及shAQP5转染24 h对AQP5 mRNA的抑制率分别为65%、79%.对蛋白的抑制在转染后第7 d最明显,分别为93%,98%.稳转株(5株)对AQP5蛋白的抑制率为45%～64%.ELISA显示瞬转第5 d,MUC5AC的合成和分泌分别增加 57.9%、85.3%.在5株稳定转染细胞中(shAQP5-G1,G2,G3,A1,A5)MUC5AC的合成和分泌分别增加 59%～156%及33%～166%.结论 化学合成及质粒介导的RNA干扰法均能有效抑制SPC-A1细胞AQP5的表达,后者较前者更经济,抑制效应更优.与瞬时转染比较,稳定转染可长时间抑制特定基因的表达.AQP5抑制后,细胞株黏蛋白的合成、分泌增高.
RNAi siRNA shRNA AQP5 黏蛋白 稳定转染