以PTPN4为"诱饵",利用酵母双杂交系统筛选人肝cDNA文库,获得了一个与PTPN4相互作用的蛋白:CRKⅠ.从cDNA文库中通过PCR得到CRK家族的3个成员的基因,把这3个基因与PTPN4共转酵母,发现CRKⅠ、CRKⅡ和CRKL均能与PTPN4发生很强的相互作用.通过截断体证实它们之间的相互作用是通过CRKs的SH3结构域与PTPN4的462～468位的脯氨酸富集区介导的.免疫共沉淀以及免疫荧光共定位实验进一步证实了CRKⅠ与PTPN4的相互作用.通过酪氨酸磷酸化特异性抗体检测发现PTPN4可以明显降低CRKⅠ的磷酸化水平.
PTPN4 CRKⅠ CRKⅡ CRKL 酵母双杂交 免疫荧光定位 酪氨酸磷酸化