从土壤中筛选得到一株氨肽酶产生菌,经生理生化和分子生物学鉴定被命名为铜绿假单胞杆菌N J-814(Pseudomonas aeruginosa N J-814).在已考察知其所产氨肽酶是一种耐热赖氨酸氨肽酶的基础上,运用PCR技术从基因组中克隆获得该氨肽酶基因(kap),构建其表达载体pET-28a-kap,并最终实现在大肠杆菌BL21(DE3)中部分融合表达.kap基因全长1 500 bp,编码499个氨基酸.氨基酸序列同源性分析发现,其与脱叶链霉菌和糖多孢红霉菌的同源性较高.通过生物信息学方法对其理化性质和功能分析以及kap在大肠杆菌中实现异源表达,将为进一步研究该氨肽酶的耐热机制及功能创造基础.
铜绿假单胞杆菌 耐热氨肽酶 筛选 基因克隆