雄烯二酮是甾体药物生产的重要中间体,其C9位羟基化产物9-羟基雄烯二酮也是多种重要甾体药物的合成前体,具有重要的临床药用价值.微生物转化生产9-羟基雄烯二酮具有重要的经济价值.将维吉尼亚链霉菌IBL14中svu005与pET28a质粒融合,导入大肠杆菌BL21(DE3).使用优化的自诱导培养基诱导表达其产物细胞色素P450-105D1(CYP105D1)蛋白,以雄烯二酮等多种甾体作为底物进行微生物羟化.结果显示,构建的重组质粒pET28a-svu005在大肠杆菌中成功表达,使用ZYM培养基,自诱导表达的活性蛋白产量(0.0916 nmol/L)显著高于传统的IPTG诱导方式的产量(0.0367 nmol/L).表达产物CYP105D1可以羟化雄烯二酮,经HPLC检测,产物为9-羟基雄烯二酮.发现了微生物转化合成9-羟基雄烯二酮的新途径,具有很好的工业应用前景.
9-羟基雄烯二酮 微生物转化 细胞色素P450-105D1 自诱导表达