通过RT-RCR的方法从高山被孢霉W15菌株中扩增到完整的△5去饱和酶基因,其全长为1341bp,编码446个氨基酸.对推导的氨基酸序列进行分析表明,其N末端存在细胞色素b5结构域,在序列中还存在3个保守的组氨酸富集区.将该基因连接到表达载体pPIC3.5K上,转化毕赤酵母细胞,利用G418筛选高拷贝数的转化子.以双高y-亚麻酸为底物,在甲醇诱导的条件下,△5去饱和酶可催化底物脱氢生成花生四烯酸,其含量占总脂肪酸含量的2.85％.说明克隆的△5去饱和酶基因能在毕赤酵母中进行功能性的表达.
高山被孢霉 5去饱和酶基因 毕赤酵母 花生四烯酸