采用pGEX-4T-1融合表达载体高效表达所得的金属硫蛋白及其结构域突变体,包括α结构域,β结构域,d-KKS-d和β-KKS-β(KKS为金属硫蛋白结构域之间的天然连接区氨基酸),经纯化和纯度鉴定后,利用紫外和圆二色光谱进行结构研究.在脱金属的上述蛋白中,固定pH为中性,改变加入Cd2+的比例,或固定Cd2+浓度,逐渐调节pH至中性,观察紫外和圆二色光谱中镉硫金属簇吸收峰的形成.研究结果表明:镉硫金属簇的形成依赖于加入金属的比例和pH值,所有蛋白均于pH3.15以上开始形成明显的吸收峰.紫外图谱中的吸收峰位于254 nm附近,但在圆二色图谱中不同蛋白形成的峰的位置不同,MT,α结构域和α-KKS-α在225 nm和258 nm处有吸收,β结构域在260 nm处有吸收,而β-KKS-β在245 nm处有吸收;向d结构域,β结构域,MT,α-KKS-α和β-KS-β中分别加入4eq,3eq,7eq,8eq和6eq(eq:equivalent,当量)的Cd2+时,吸收峰可达到最大值.同时发现d结构域的吸收峰强于β结构域,而且双结构域突变体的镉硫金属簇则明显强于相应的单结构域突变体,这表明吸收峰的强弱与金属结合力的大小相关,而且结构域之间存在相互作用,从而影响与金属的结合.
金属硫蛋白 结构域 紫外和圆二色光谱