以重组质粒pUC-BMP2为模板PCR扩增人BMP-2成熟肽编码序列,将该序列克隆入pGEM-T载体进行DNA序列分析后亚克隆入分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9K中.重组质粒pPIC9K-BMP2经BglⅡ酶切后回收线性化片段,聚乙二醇法转染毕赤酵母菌株GS115.PCR筛选整合有人BMP-2基因的酵母细胞重组子,以甲醇进行诱导表达,于酵母细胞培养基中可检测到rhBMP-2.体外培养条件下,所得rhBMP-2可增加2T3小鼠成骨细胞内碱性磷酸酶活性;体内实验,rhBMP-2冻干粉可于小鼠骨四头肌肌袋中诱导软骨细胞群产生.
人骨形态发生蛋白2(BMP-2) 毕赤酵母 分泌表达