目的 本研究对噬菌体展示进行改良,拟获取对Nanodiscs组装即体外膜蛋白模拟后的CD44v6具有结合力及特异性的多肽配体序列.方法 对真核来源CD44v3-v10蛋白进行Nanodiscs包被,采取SDS-PAGE、分子排阻色谱验证.以Nano-discs组装后的CD44v3-v10蛋白为靶蛋白,采用液相筛选磁珠吸附及抗体特异性竞争洗脱的方法获得针对于CD44v6的候选噬菌体,测序获得多肽配体序列.用ELISA法以及噬菌体洗脱试验验证并选择最佳序列.结果 SDS-PAGE显示Nanodiscs包被后出现新增条带,分子排阻色谱提示产物峰形成.噬菌体筛选过程中出现明确的富集效应,测序后发现30个克隆包含6条序列.噬菌体ELISA结果显示待测克隆和靶蛋白结合的OD值,与待测克隆和对照蛋白结合、对照克隆和靶蛋白结合的OD值的差异存在统计学意义(P<0.05).选取OD值最高的3个克隆进行噬菌体洗脱试验.待测克隆与CD44v6阳性的SGC-79细胞结合数量,与待测克隆与CD44v6阴性的HEK-293细胞结合,对照克隆与SGC-7901细胞结合数量间差异存在统计学意义(P<0.05).选取与阳性细胞结合数量最多、阴性细胞结合数量少的噬菌体克隆(携带多肽序列HNTYVTSFHRNY)为最佳克隆.结论 本研究成功对CD44进行Nanodiscs包装,并利用其筛选出CD44v6特异性多肽序列.
CD44 纳米磷脂盘 噬菌体展示 多肽探针