目的:利用大肠杆菌系统表达重组RC-RNase融合蛋白,并对其表达产物进行初步纯化.方法:以PCR方法扩增出RC-RNase基因,插入到融合蛋白原核表达载体PET32a中,构建重组表达载体PET-RC-RNase,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)plyS,利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.工程菌经超声碎菌,离心后,采用Ni亲合层析法在变性条件下进行初步纯化.结果:经IPTG诱导后,SDS-PAGE和免疫印迹分析显示,工程菌在相对分子质量为3.1×104处出现一条新生蛋白带,目的蛋白占菌体总蛋白的34%,主要以包涵体形式存在.所得包涵体经纯化,纯度可达90%以上.结论:重组融合蛋白RC-RNase在大肠杆菌中获得成功表达,纯化效果令人满意,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了良好的基础.
核糖核酸酶 融合蛋白 表达 纯化