研究大鼠L-PGDS在毕氏酵母中的表达,探讨L-PGDS在大鼠精子中的分布.以大鼠睾丸mRNA为模板,经逆转录获得L-PGDS全长和成熟基因片段.将该基因片段克隆到pPIC9载体上,将重组表达质粒转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,筛选mut+表型,经甲醇诱导实现L-PGDS的分泌表达.用SDS-PAGE分析L-PGDS的分子量,用PAS反应鉴定糖链,用免疫组织化学法研究L-PGDS的分布,用Western blot分析重组L-PGDS与精浆中L-PGDS.筛选出4株表达水平较高的酵母工程菌株,SDS-PAGE分析表明,产物分子量约为27kD;L-PGDS主要分布在精子的头部以及尾部的上段.
前列腺素D合成酶 毕赤酵母 分布