目的:对LexA蛋白复性方法进行优化,对复性后的LexA蛋白的生物学活性进行分析.方法:采用含有GSH/GSSG的缓冲液,一步稀释法对变性LexA蛋白进行复性,用镍离子亲合柱及阳离子柱层析法对复性后的LexA蛋白进行纯化,再以Sephadex G-25凝胶柱脱盐,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和RP-HPLC法检测复性效果,Western blot分析复性前后及经DTT处理后的LexA蛋白的免疫反应性,凝胶滞留电泳试验检测复性LexA蛋白与DNA的特异性结合能力.结果:复性后的LexA蛋白出现单体和多聚体的形式,多聚体是由单条肽链聚合而成.LexA单体和多聚体与兔抗LexA多克隆抗体均有较好的反应性.复性后的LexA蛋白能与SOS盒序列发生特异性结合.
铜绿假单胞菌 LexA 复性