对第7 d的牛体细胞克隆囊胚进行体外增殖培养,分离筛选类ES细胞,并对其进行了传代培养.接种在饲养层上的体细胞克隆囊胚细胞,在传代的24h内增殖形成小集落,2～3 d有雀巢状的集落出现,筛选形态相同的细胞集落进行传代培养,4～5代后,皿底出现多个大小不等的多细胞单层集落.将传4～5代的细胞集落接种到无饲养层的4孔培养皿中培养,24 h出现多细胞单层集落,4～7 d长满皿底,并形成上皮样细胞,呈网状,将其作为核供体细胞进行核移植实验.结果有80%(40/50)核-质融合的移核重构胚发生卵裂,5%(2/40)发育至桑椹胚期,2.5%(1/40)发育至囊胚期,92.5%(37/40)停止在2～4细胞期.结果表明:采用牛体细胞克隆胚胎的类ES细胞进行核移植,具发育形成早期胚胎的潜能.
牛体细胞 克隆胚胎 类ES细胞 核移植