本文以甘油、二甲亚砜(DMSO)为冷冻保护剂,采用两步降温法,以精子存活率和DNA损伤程度为检验其冷冻效果的评价指标,研究了冷冻保护剂和预冷时间对河蟹Eriocheir sinensis精子冷冻保存效果的影响.胰蛋白酶消化法获得河蟹游离精子.液氮冷冻保存8h以上,精子保存密度为107个/mL,伊红染色法检测精子存活率,单细胞凝胶电泳(SCGE)检测精子DNA损伤.实验共设置10个组,分别为不同浓度的单一冷冻保护剂(每种保护剂的体积百分比分别为5%、10%、12.5%、15%)和两种保护剂组合(两种保护剂在同一实验组中的体积百分比含量均为5%、10%).结果显示,12.5%甘油的保存效果最佳,精子存活率达到62.60%.在此基础上,以10%甘油作为冷冻保护剂,设置5、10、20、30、40min 5个时间梯度,研究了预冷时间对精子冷冻保存效果的影响.结果显示预冷时间的长短对精子冷冻保存效果的影响显著,当预冷时间低于20min时,精子大量死亡,且精子DNA严重损伤;当预冷时间超过30min时,精子存活率明显提高,精子DNA损伤明显减弱.
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