目的 探讨炎症环境下Wnt信号通路对人结肠癌干细胞侵袭的影响.方法 以人结肠癌细胞系HT29细胞为材料,用流式细胞荧光分选技术(FACS)分选CD44+ CD133+的人结肠癌干细胞;流式细胞术及单细胞克隆形成实验对分选出的干细胞进行鉴定;肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理CD44+ CD133+ HT29细胞建立炎症细胞模型,噻唑蓝(MTT)实验筛选TNF-α作用的最适剂量及最佳作用时间;Wnt信号通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1(DKK1)作用于CD44+ CD133+ HT29炎症细胞,实验分为空白组、TNF-α处理组、加DKK1的TNF-α处理组.MTT实验检测各组细胞增殖情况,Western blot法检测Wnt信号通路中相关蛋白β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、c-Myc及上皮间质转化(EMT)相关蛋白上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达情况,TranswellTM侵袭实验检测各组细胞侵袭情况.结果 流式细胞分选术成功分选出结肠癌CD44+CD133+ HT29干细胞.MTT实验筛选出TNF-α作用的最适剂量为10 ng/mL,最佳作用时间为48h.与空白组相比,TNF-α处理组中CD44+ CD133+ HT29细胞的相对存活率增加,TranswellTM穿膜的细胞数增加,β-catenin、cyclin D1、c-Myc表达升高,E-cadherin表达降低、vimentin表达升高;与TNF-α处理组相比,加DKK1的TNF-α处理组CD44+ CD133+ HT29细胞的相对存活率降低,TranswellTM穿膜细胞数减少,β-catenin、cyclin D1、c-Myc表达降低,E-cadherin表达升高、vimentin表达降低.结论 TNF-α通过激活Wnt信号通路促进结肠癌干细胞的侵袭能力.
结肠癌干细胞 肿瘤坏死因子α(TNF-α) Wnt信号通路 HT29细胞 上皮间质转化(EMT)