目的:克隆大肠杆菌锰超氧化物歧化酶基因(sodA)并在保加利亚乳杆菌(L6032)中表达,以提高该菌对氧的耐受性,同时为SOD发酵奶的研制奠定实验室基础.方法:PCR扩增大肠杆菌sodA,将其克隆入乳酸菌表达载体pMG36e中,并将该重组质粒pMG36e-sod电转入L6032中表达.用SOD测试盒测定SOD的表达活性,同时对L6032及其重组子在MRS平板上的生长情况及其在有氧条件下的存活情况进行比较,初步探讨SOD在L6032中的活性表达对其氧耐受性的影响.结果:构建了重组质粒pMG36e-sod,经酶切和PCR鉴定与预期完全吻合.核酸测序显示插入的sodA片段能正确编码SOD氨基酸序列.利用电转化成功地将重组质粒导入L6032中,SOD的表达活性约590.5NU/mg prot.SOD的活性表达,能增强保加利亚乳杆菌对氧的耐受性,在有氧条件下重组子的生长和存活率都优于原菌.结论:SodA在保加利亚乳杆菌中获得了成功表达,增强了该菌对氧的耐受性,有利于该菌的开发应用.同时也为下一步SOD发酵奶的研制奠定了实验室基础.
保加利亚乳杆菌 超氧化物歧化酶 基因克隆与表达