为研究平菇疏水蛋白基因Po.hyd的功能,首次构建了Po.hyd的RNAi载体,并通过根癌农杆菌介导获得了平菇转化子.通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增Po.hyd序列,利用Golden Gate克隆法构建了干扰载体p1302-GG-ihyd,将其导入根癌农杆菌GV3101中,并在乙酰丁香酮的诱导下完成根癌农杆菌对平菇幼嫩菌丝的介导转化.转化子经PCR检测、荧光显微镜观察、实时定量荧光PCR技术(real-time PCR)以及Southem杂交等技术进行验证.结果显示,本研究最终获得1株可稳定遗传的平菇转化子,该转化子具有潮霉素抗性,且在荧光显微镜下可检测到绿色荧光信号,Po.hyd基因的表达量为野生型的43％,干扰载体T-DNA片段以单拷贝的形式整合在转化子基因组内.
糙皮侧耳 疏水蛋白 RNAi 根癌农杆菌介导