本研究旨在通过正交优化得出灰色家鸽的ISSR-PCR反应的最佳体系.以灰色家鸽为试验材料,使用引物ISSR807,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶、模板进行了体系优化,同时对引物的最佳退火温度进行了选择,建立了适合灰色家鸽的ISSR-PCR分析的最佳体系.结果表明,灰色家鸽ISSR-PCR反应的最优体系为:25 μL总体积中包括10×PCR Buffer 2.5μL,Mg2+ 2.6 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.4 μmol/L,Taq DNA聚合酶0.5U,DNA模板1.2 ng/μL,最佳退火温度为56.2℃.通过对ISSR PCR反应体系的优化,能为利用该技术进行灰色家鸽遗传多样性评价、不同种源鉴定及亲缘关系分析奠定基础.
灰色家鸽 正交设计 体系优化 ISSR-PCR体系