目的:利用高效液相色谱法测定叶酸-青霉素G酰化酶(PGA)对N-苯乙酰化阿霉素(DOXP)的催化活性,为叶酸导向的酶催化前体药物的肿瘤治疗(FDEPT)研究奠定理论基础.方法:色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水,用85%磷酸调节pH至2.4;梯度程序:0～3 min为24%乙腈,3～15min为80%乙腈;紫外检测波长:495 nm;流速:1 mL/min.结果:DOXP和酶解产物阿霉素的tR分别为5.5 min和12.3 min,原酶PGA和叶酸-PGA偶联酶对DOXP的Km和vmax分别为15μmol/mL,0.094μmol/(min·mg)和19μmol/mL,0.086μmol/(min·mg).结论:DOXP为PGA的较好底物,叶酸与PGA偶联对酶的催化活性的影响较小.
叶酸 青霉素G酰化酶 N-苯乙酰化阿霉素 催化活性 高效液相色谱法