根据GeneBank中人乙醇脱氢酶ADH1B2基因序列设计引物,以人肝脏总RNA为模板,反转录获得人乙醇脱氢酶基因.将克隆基因与表达载体pPICZB连接,测序正确的pPICZB-ADH1B2电转化毕赤酵母GS115;重组毕赤酵母工程菌经0.5％(υ/v)甲醇诱导72 h后目的蛋白以可溶形式表达,经DEAE- Sepharose FF纯化后蛋白酶活性可达8000 U·mg-1.同时构建重组质粒pCDNA3.1-ADHIB2转染HepG2人肝癌细胞,发现细胞内ROS/GSH水平降低,Akt磷酸化水平降低,细胞活性下降.为临床酒精中毒预防和治疗药物的研发以及ADH在肝脏肿瘤方面的研究提供了理论基础.
乙醇脱氢酶 毕赤酵母 酶活性 活性氧化物(ROS) 谷胱甘肽(GSH) Akt