肾上腺是人体重要的内分泌器官.由于缺乏肾上腺皮质束状带特异性表达Cre酶的工具鼠,目前对肾上腺皮质束状带细胞中特异表达基因的功能缺乏深入的解析.CYP11B1基因编码类固醇11β-羟化酶,该酶是糖皮质激素合成的关键酶,在肾上腺皮质束状带中特异性表达.本研究旨在利用CYP11B1基因在束状带特异性表达的特点,构建在肾上腺皮质束状带中特异性表达Cre重组酶的转基因动物.采用CRISPR/Cas9技术在CYP11B1基因终止密码子位点定点敲入2A-GfpCre表达框,获得CYP11B1-2A-GfpCre同源重组载体,进而构建CYP11B1Cre小鼠,并通过mTmG和LacZ染色确定Cre酶主要表达在小鼠肾上腺皮质束状带.在此基础上,本研究还用该工具鼠与胱硫醚γ-裂解酶(cystathionine γ-lyase,CTH)条件性敲除鼠交配,获得了肾上腺皮质束状带CTH特异性敲除的小鼠,并证实了该动物肾上腺皮质束状带中CTH表达缺失.以上结果充分说明肾上腺皮质束状带特异性表达Cre重组酶小鼠构建成功.该工具鼠的成功构建,为深入研究肾上腺皮质束状带相关功能提供了有力工具.
肾上腺皮质细胞 束状带 Cre重组酶 转基因小鼠