为探讨脊髓背角内5-HT发挥作用的受体类型及其胞内信号转导机制,本研究首先利用免疫荧光技术对胎鼠脊髓背角神经元的产率进行了观察,再利用反转录PCR方法观察了5-HT受体14种亚型mRNAs在原代培养神经元中的表达.原代培养的背角神经元生长状态良好,存活时间达到14～21 d.对培养的背角细胞用神经元特异性标志物-神经细胞核蛋白(NeuN)进行免疫荧光检测的结果表明,神经元的产率超过90%;用PCR方法在培养的背角神经元中检测到了5-HTiA、5-HT1B、5-HT1D、5-HTiF、5-HT2A、5-HT2c、5-HT3、5-HT4、5-HT5A、5-HT5B、5-HT6和5-HT7等受体亚型mRNAs的表达.但上述各受体亚型的表达水平存在差异,未检测到5-HT1E和5-HT 2u受体亚型mRNAs的表达.结果表明,本研究建立的实验方法可满意地获得原代培养脊髓背角神经元;这些神经元不但表达多种受体亚型,而且表达类型与以往在成年大鼠脊髓背角观察到的表达状况基本一致.上述结果为进一步开展5-HT作用机制的体外研究奠定了基础.
5-HT受体 原代培养 免疫荧光染色 反转录PCR 脊髓背角神经元 大鼠