目的 对DNA电转化条件进行优化,以达到高的转化效率.方法 测定不同生长阶段的大肠杆菌TG1、不同电压、不同外源基因(噬菌体质粒pCANTAB5e与驼源VHH片段的连接产物)质量、T4 DNA连接酶去除前后及转化孵育后不同培养温度等条件下的电转化效率,寻找最适电转化条件.结果 当大肠杆菌TG1处于生长对数期(OD600为0.4左右)时制备电感受态细胞,取用乙醇沉淀法去除T4 DNA连接酶后的0.7μg连接产物,在电压2.3 kV、电容25μF、电阻200Ω的条件下,采用0.2 cm的电击杯进行电转化,将获得高的转化效率,达7.9×107 CFU/μg DNA,而转化后的培养温度(30℃和37℃)对电转化效率并没有明显影响.结论 经优化电转化条件后得到了高的电转化效率,为构建抗体库奠定基础.
噬菌体抗体库 电转化 转化效率