克隆Streptomyces maritimus来源的苯丙氨酸变位酶(SmPAM)基因,并进行异源表达,制备了重组SmPAM,用于一步合成高附加值的β-芳香丙氨酸.提取S.maritimus的基因组,设计1对特异性引物,采用PCR扩增编码SmPAM的结构基因pam,与表达载体pET28a连接,构建重组表达质粒pET28a-pam,转入E.coli BL21中表达,采用亲和层析柱分离纯化重组酶SmPAM.结果表明,克隆得到编码523个氨基酸长度的SmPAM基因pam,并在大肠杆菌中实现了高效表达,制得电泳纯的重组SmPAM.该酶在最适温度30℃,pH=9.0条件下活力达到2.5 U/mg,具有较高的热稳定性和pH稳定性,在60~70℃下保持3 h未见活性下降,在pH=9~11保持24 h,残余酶活力达到98%.SmPAM具有较宽的底物谱,可催化苯环上携带不同基团的3-芳香丙烯酸合成β-芳香丙氨酸,当苯环上携带吸电子基团时催化反应更易完成,其中2-硝基-β-苯丙氨酸的产率最高,达到93%.
苯丙氨酸变位酶 β-芳香丙氨酸 基因克隆 异源表达