为减轻逆转录病毒介导的外源基因的沉默,进一步提高逆转录病毒MFG载体介导的转移基因的表达,将人β-INF基因上游800 bp的核骨架基质结合区(S/MAR)分别反向和正向克隆至MFG载体3′LTR上游,以egfp为报告基因观察S/MAR对egfp基因表达水平以及对病毒滴度的影响.结果显示:反向和正向的S/MAR在瞬时表达的情况都不能提高egfp的表达,但在稳定整合的情况下反向S/MAR可明显提高egfp在NIH3T3细胞内的表达,而正向的S/MAR作用不明显,另外反向S/MAR可明显提高MFG逆转录病毒载体的滴度约5倍;因此改造后的MFG逆转录病毒载体将能更好地用来介导外源治疗基因的表达.同时还观察到,同一个载体骨架在稳定表达的情况下,磷酸钙介导较逆转录病毒载体介导的表达水平高.提示逆转录病毒的生活史可能参与其介导的外源基因的沉默.
核骨架基质结合区 逆转录病毒载体 基因沉默