目的:利用酵母双杂交系统筛选KGF-2的相互作用蛋白,为阐明其分子作用机制提供有益线索.方法:通过聚合酶链反应从人胎肝cDNA文库中钓取KGF-2 cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-KGF-2,并对其自身转录激活活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝cDNA文库,挑选双阳性克隆.将KGF-2和候选蛋白分别克隆至哺乳动物细胞双杂交的BD、AD质粒中,共同转染COS-7细胞,通过CAT分析验证KGF-2和候选蛋白之间的相互作用.结果:VDNA序列分析和同源检索显示所获候选蛋白为PRO2605.以KGF-2和PRO2605 cDNA共转化酵母宿主Y190后可激活报道基因,但共转染COS-7细胞后,CAT分析结果阴性.结论:KGF-2和PRO2605在酵母体内存在相互作用,但在COS-7细胞中未能检测到两者的相互作用.
角质细胞生长因子 相互作用蛋白 酵母双杂交 PRO2605蛋白