利用荧光光谱、SDS-PAGE和NMR方法,考察308nm XeCl准分子激光辐照对溶菌酶结构与活性的影响.使用能量密度为0.3 mJ/mm2的激光辐照溶菌酶,脉冲数分别为25、50、100、200、600、1200、1800、3600和7200.结果表明,用低强度激光辐照(低于200个脉冲)时,溶菌酶的活性出现增高趋势.随着激光辐照脉冲数的进一步增大,溶菌酶的活性又开始逐步降低.激光辐照处理后,溶菌酶的荧光强度发生了与生物活性相对应的先增高再降低现象,说明溶菌酶的高级结构发生了显著变化.SDS-PAGE结果显示,经激光辐照后,溶菌酶出现了分子间的聚合.分析溶菌酶的1H-NMR谱发现,辐照后,溶菌酶色氨酸(Trp) 111、Trp63和Trp62的化学位移发生了变化,此结果进一步说明,激光辐照使溶菌酶的高级结构发生了变化.该实验可为激光辐照诱导蛋白质去折叠的研究提供参考.
激光辐照 溶菌酶 荧光光谱 活性 SDS-PAGE 核磁共振