目的:用大肠杆菌表达可溶性A型肉毒毒素(BoNT/A)重链.方法:按大肠杆菌偏好密码子设计合成重链N端(HN)编码序列,重叠延伸PCR连接HN和重链C端(HC)构成重链基因;将重链基因构建至pTIG-TrxA载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),厌氧培养与好氧培养分别诱导表达重链;SDS-PAGE比较表达条带,ELISA比较不同表达条件的重链表达水平.结果:测序结果表明正确设计合成了HN编码序列;SDS-PAGE结果显示重链厌氧表达条带的相对分子质量与预期一致,好氧表达条带的相对分子质量比预期小;定性ELISA结果显示静置培养表达的重链活性远远高于摇床培养.结论:BoNT/A重链在大肠杆菌中厌氧条件下表达活性明显高于好氧表达,为厌氧生物蛋白在大肠杆菌中的表达提供了新思路.
A型肉毒毒素 重链 大肠杆菌 厌氧条件