目的 探讨微小RNA-383(miR-383)在小鼠卵泡不同发育阶段的表达规律以及对颗粒细胞增殖的影响.方法 取健康雌性受孕昆明小鼠不同小鼠出生后12、21、21 d[腹腔注射10 IU孕马血清促性腺激素(PMSG) 48 h后]和21 d[腹腔注射10 IU PMSG 48 h和10 IU人绒毛膜促性腺激素(hCG)6 h后]的卵巢组织、卵泡和颗粒细胞,通过实时定量PCR法检测miR-383的表达情况.取小鼠出生21 d的颗粒细胞,分别转染miR-383模拟物(miR-383 mimics)或miR-383抑制物(miR-383 inhibitor),另外设置阴性对照组.通过噻唑蓝(MTT)法检测颗粒细胞增殖情况,流式细胞术检测颗粒细胞的细胞周期变化.采用Westernblot法检测细胞周期相关蛋白细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、cyclin B、细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)、CDK2、CDK4的蛋白水平.结果 与小腔前卵泡相比,大腔前卵泡中miR-383的含量降低,但是在腔较小的有腔卵泡中含量升高,成熟卵泡中的含量又进一步降低.与小腔前卵泡颗粒细胞相比,大腔前卵泡和腔较小的有腔卵泡颗粒细胞中miR-383的含量降低,但是在成熟卵泡颗粒细胞中的含量却有所上调.与空白组相比,miR-383 mimics组颗粒细胞的增殖速度减慢,且G0/G1期比例升高,G2/M期比例降低,cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平降低;而miR-383 inhibitor组颗粒细胞的增殖速度加快,G0/G1期比例降低,G2/M期比例升高,且cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平增加.结论 miR-383可通过抑制细胞周期相关蛋白的表达,将颗粒细胞周期阻滞在G0/G1期,进而抑制卵泡颗粒细胞的增殖.
miR-383 卵泡 颗粒细胞 增殖 细胞周期