聚合酶链式反应(PCR)作为一项非常成熟的技术可以用于基因组序列的扩增.普通的PCR技术只适合于短片段DNA的扩增,一般在6kb以下.对于6kb至十几kb甚至几十kb以上的DNA片段的扩增就非常困难.通过添加不同化学物质,发现甜菜碱对长片段PCR的扩增有非常有效的增强作用.通过对玉米总DNA以及质粒DNA的扩增,发现1mol/L到2.5mol/L甜菜碱对改进PCR扩增效果明显.通过添加甜菜碱,可以从玉米基因组中扩增出9kb以上的单拷贝片段,从质粒中扩增出16kb以上片段.经过试验,发现不同GC含量的引物需要使用不同浓度的甜菜碱.甜菜碱可以减少甚至消除长片段PCR中的非特异性扩增.同时,我们发现其它的添加物,如DMSO,甘油,甲酰胺对长片段PCR的作用不明显.
甜菜碱 长片段PCR