目前工业生产VC的方法为二步发酵法,但该法涉及两步3种微生物,存在操作工序繁琐、需要消耗大量原材料及能源等缺点.一步发酵法被认为能够降低生产成本并对VC的工业化生产起到革命性的改变.为了克服重组质粒易丢失及需要添加抗生素等不利因素,将普通生酮基古龙酸菌(K.vulgare WSH-001)中的山梨糖脱氢酶基因(sdh)和山梨酮脱氢酶基因(sndh)整合到氧化葡萄糖酸杆菌(G.oxydansWSH-003)基因组,得到一步发酵生产菌株G.oxydans-ss.将其在1L的罐中发酵,72 h时2-KLG产量达到最高,为37.6 g/L.为了进一步提高2-KLG的产量,还采用了辅因子工程.吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline quinone,PQQ)是SDH和SNDH的辅酶,通过在G.oxydans-ss中过量表达来自K.vulgare WSH-001的pqqABCDE基因,得到重组菌G.oxydans-ss/pqq ABCDE.将其在1L的罐中发酵,84 h时2-KLG产量达到最高,为44.5 g/L.以上结果对VC的一步发酵起到了一定的促进作用,使一步发酵法生产VC的工业化生产有望实现.
维生素C 山梨糖脱氢酶 山梨酮脱氢酶 吡咯喹啉醌