为了发展优良的链霉菌宿主系统,以带有硫链丝菌素抗性的同源重组葡萄糖异构酶(GI)缺陷型菌株M1033XW78,M1033XW194为出发菌株,利用摇瓶、影印和负筛的方法,获得一株既无GI活性又对硫链丝菌素敏感的回复菌株,命名为淀粉酶链霉菌M53.通过染色体PCR检测、酶切图谱鉴定、序列分析等方法,确认M53含有和M1033一致的1.2kb葡萄糖异构酶基因,但在结构基因345～1095 bp片段内有17个碱基发生突变.这说明在染色体内自发同源重组过程中,有低频率的突变位点引入.酶活力测定和SDS-PAGE分析表明,该突变的GI基因不表达42.5 KD葡萄糖异构酶,这为M53菌株发展成为优良的链霉菌宿主提供了足够的表达空间.一系列的转化实验也证明了M53菌株很可能是一种新型链霉菌克隆受体.
葡萄糖异构酶 链霉菌 同源重组 克隆受体