利用PCR点突变的方法对烟草硫氧还蛋白基因(NtTRX)进行点突变,得到3个突变克隆和突变蛋白.把N端第13位半胱氨酸(Cysteine,C)残基(13-C)以及第68位、并位于WCGPC中的半胱氨酸残基(68-C)分别用苏氨酸(Threonine,T)加以替换,得到突变蛋白C13T和C68T;用T对13-C和68-C进行双突变,得到突变蛋白C13TC68T.通过原核表达体系表达产生了相应的蛋白质,并分别进行了纯化.利用硫氧还蛋白能催化胰岛素二硫键还原的性质.比较了C13T、C68T、C13TC68T和NtTRXh的活性.结果表明,只有NtTRXh显示活性,3个突变蛋白都失去了还原二硫键的能力.可见,除了WCGPC中的C外,NtTRXh氮末端的C残基也是催化反应所必需的.
硫氧还蛋白 活性位点 点突变 二硫键