为探讨大黄鱼(Larimichthys crocea)β-actin 基因(LcActb)作为内参基因进行相关研究的可行性，从转录和翻译水平研究其组织表达谱，作者以大黄鱼肝脏为材料，扩增 LcActb 的开放阅读框序列，并将其亚克隆至原核表达载体 pET32a(+)。酶切、测序结果表明， pET32a-LcActb 构建成功。将pET32a-LcActb转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达，表达蛋白经纯化后进行Western blotting验证；原核表达结果表明， IPTG 可诱导一个分子量约45 ku的特异蛋白，且主要以包涵体的形式存在，优化表达条件为：28℃、0.4mmol/L IPTG、200 r/min诱导表达5 h。用表达蛋白作为抗原，免疫新西兰白兔制备抗LcActb的多克隆抗体；用纯化的多抗进行Western blotting的结果表明，获得了特异性的LcActb抗体；通过实时荧光定量RT-PCR 检测大黄鱼多种组织mRNA的表达，其次，制备了多种组织匀浆蛋白，使用纯化的抗体进行Western blotting分析，结果显示， LcActb在大黄鱼成体各组织中转录和翻译水平的表达差异均不显著，可做为研究大黄鱼成体组织中其他基因表达和翻译水平的内参标准。
大黄鱼(Larimichthys crocea) beta-肌动蛋白 原核表达 抗体 组织表达谱