用PCR扩增从激活的人中性粒细胞中得到的编码可溶性Fas配体胞外区中第141个到第281个氨基酸的cDNA,将其与hCG-β信号肽片段融合到质粒MB12neo中,随后导入到盘基网柄菌AX3细胞中,得到分泌性表达hFasL的重组菌AX3-H3.为提高shFasL的表达量,对质粒pMB12neo作了改造,得到衍生质粒pMB74.利用质粒pMB74克隆表达shFasL,得到高通量表达shFasL的重组菌AX3-pLu8.在复杂培养基HL-5C中,重组菌的细胞密度可达(1.5～2)×107/mL,AX3-H3及AX3-pLu8分泌的shFasL浓度分别为23.5μg/L及206μg/L.利用合成培养基SIH培养重组菌AX3-H3及AX3-pLu8,细胞密度均达到(4～5)×107/mL,shFasL浓度则分别达到111μg/L和420μg/L.
可溶性人Fas配体 盘基网柄菌 重组蛋白 培养