目的为降低鼠源抗体对人体的免疫原性,构建表达了VmD11的单链抗体.方法用overlap PCR构建出单链抗体的基因,克隆入表达载体pKpL-3a,在大肠杆菌pop2136中表达,采用抗原结合ELISA和竞争抑制ELISA测定活性.结果经SDS PAGE检测,诱导后的细菌表达了26kD的蛋白;Western Blot证实该蛋白为表达的单链抗体.经变性、复性后,该单链抗体可特异结合人VEGF1 65抗原,并与VmD11具有相同的抗原结合位点.结论成功构建和表达了抗人VEGF165单链抗体,可望进一步应用于肿瘤复发转移的诊治研究.
人VEGF165 单链抗体 原核表达