以4-硝基邻苯二甲酸为原料,衍生合成4种结构类似物,并分别通过重氮化法和活泼酯法与载体蛋白牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)偶联制得人工抗原.利用紫外光谱扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electroporesis,SDS-PAGE)检测鉴定人工抗原,并用4种与BSA偶联的人工抗原作免疫原免疫新西兰大白兔.利用酶联免疫吸附实验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体灵敏度和特异性.经紫外光谱和SDS-PAGE证实人工抗原偶联成功,经免疫分析法检测抗体效价,4-氨基邻苯二甲酸二丁酯-BSA(dibutyl 4-aminophthalate-BSA,DBAP-BSA)抗体效价达到1:64 000,4-戊二单酰邻苯二甲酸二丁酯-BSA(dibutyl 4-carboxylphthalte-BSA,DBCP-BSA)、4-氨基邻苯二甲酸二异丁酯-BSA(diisobutyl 4-aminophthalate-BSA,DiBAP-BSA)和4-氨基邻苯二甲酸二环己酯-BSA(dicyclohexyl 4-aminophthalate-BSA,DCHAP-BSA)抗体效价均达到1:128 000.DBAP-BSA、DBCP-BSA、DiBAP-BSA和DCHAP-BSA分别对邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)、DBP、邻苯二甲酸二异丁酯(diisobutyl phthalate,DiBP)和邻苯二甲酸二环己酯(dicyclohexyl phthalate,DCHP)4种抗体的IC50值为0.305、0.268、0.104、0.247 μg/mL.四者之间交叉反应率低,反应特异性较好.
邻苯二甲酸酯 人工抗原 抗体