目的 克隆Ⅰ型咪唑啉受体(I1R, Nischarin)新的可变剪接体,并对其进行表达特征和亚细胞定位研究,探索其表达与I1R的差异,从而为解释I1R药理学作用多样性奠定基础.方法 在本课题组前期研究基础上设计引物,通过RT-PCR从大鼠肝组织中克隆新的可变剪接体,将其克隆到pcDNA3.1、pEGFP-N1和PCMV-myc 3个真核表达载体中,并通过细胞转染探索其在293T细胞中的分布,应用Western印迹测定其在真核细胞中表达蛋白的相对分子质量特征.结果 成功克隆获得一个新的I1R可变剪接体(命名为I1R-ISO-472),编码472个氨基酸,与GenBank中序列号AK036043.1的新基因的序列完全一致.生物信息学分析表明,该基因染色体定位于14号染色体14B,含有磷酯酰肌醇结合位点(PX_domain superfamily)与亮氨酸富集重复(LRR-RI superfamily)两个重要的功能结构域.I1R-ISO-472在293T细胞中表达的蛋白相对分子质量约为52×103,与预测基本一致.细胞免疫荧光结果表明,其在293T细胞内呈均匀弥散分布.结论 成功克隆一个新的I1R可变剪接体,其表达特征及亚细胞分布提示其药理学作用可能与已知的I1R不同.
Ⅰ型咪唑啉受体 可变剪接体 克隆 细胞定位