以亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)为材料,经Sephdex-G75、DEAE-Sepharose Fast Flow、还原型谷胱甘肽(GSH)为配基的亲和层析,分离纯化得到玉米螟谷胱甘肽转硫酶(GST).以2,4-二硝基氯苯(CDNB)为底物测得其比活为1 070 U/mg蛋白,收率为22.9%,提纯1 138倍.经SDS-PAGE和PAGE鉴定,得到的GST为一条带,亚基的分子量为25 kD,经凝胶过滤测得其全酶分子量为50 kD,说明该酶是由两个相同亚基组成的.IEF测得主带等电点为8.2.该酶最适温度为41℃,最适pH范围为6.3～6.9.经动力学测定该酶双底物反应机制为序列机制,对CDNB的Km值为0.15 mmol/L,对GSH的Km值为0.35 mmol/L,两种底物的kcat均为783 s-1.Cl-对底物CDNB有竞争性抑制作用,对GSH是非竞争性抑制作用;3,5-二硝基苯甲酸(DNB)对CDNB有竞争性抑制作用,对GSH是反竞争性抑制作用.
谷胱甘肽转硫酶(GST) 玉米螟 还原型谷胱甘肽(GSH) 2 4-二硝基氯苯(CDNB) 动力学