目的:将人生长激素基因构建至pHSS6-mTn-3×HA/lacZ转座文库载体中,利用酿酒酵母同源重组稳定高效表达人生长激素. 方法:通过两步PCR获得带有信号肽的目的基因,插入到文库载体的Sse8387I位点中,NotI酶切,酵母同源重组,SC-Ura筛选,酵母菌落PCR及lacZ基因表达初步鉴定阳性重组子. 结果:酵母菌落PCR初步鉴定,筛选出目的基因正确插入的重组子,其中两株有lacZ基因高表达. 结论:对阳性重组子进行lacZ显色反应,筛选出可高水平表达x-gal的菌株,以此推测重组位点前有强启动子,为目的基因的稳定高效表达奠定基础.
酿酒酵母 人生长激素基因 同源重组 菌落多聚酶链反应