目的 构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响.方法 合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ对pcDNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA双链连接,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α,扩增后提取质粒,经DNA测序和BLAST比对,验证其是否构建成功;将成功构建的pcDNATM6.2-GW-miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞,采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平,Western blot法检测细胞分裂周期蛋白6(CDC6)蛋白,MTT法检测细胞增殖的变化.结果 通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体;瞬时转染MKN-45细胞后,实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加;Western blot结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达,MTT法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖.结论 过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖.
miR-26b 真核表达载体 胃癌 MKN-45细胞 细胞增殖