为提高胰高血糖素样肽-2 (GLP-2)生产效率以适应畜牧生产应用的需求,本试验利用基因工程技术表达出定点诱变的p[Gly2]GLP-2.用甘氨酸取代GLP-2氨基末端第2位的丙氨酸后,再根据大肠杆菌的偏好性对p[Gly2]GLP-2序列进行优化并在目标肽序列N-端添加肠激酶识别位点,合成基因序列,通过Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点连接到pET-40b(+)构建原核重组表达载体p[Gly2]GLP-2-pET-40b(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达重组蛋白.优化后最适表达条件为:菌液D600nm值为0.6时,用0.2 mmol/L IPTG在37℃诱导培养5h;最终得到p[Gly2]GLP-2重组蛋白表达量较高的基因工程菌株.通过镍离子亲和层析柱纯化及分梯度洗脱获得纯度较高的p[Gly2]GLP-2融合蛋白,本结果为后续p[Gly2]GLP-2功能性的研究及其在畜牧生产的应用奠定了基础.
胰高血糖素样肽-2 (GLP-2) 原核表达 诱导条件优化 亲和层析 梯度洗脱