[目的]为建立油茶RAPD分析的最佳反应体系.[方法]分别用改良SDS法和CTAB法从12个油茶品种的新鲜幼叶中提取基因组DNA.通过测定OD260和OD280来比较两种方法提取DNA的纯度.建立油茶的RAPD反应程序,通过优化反应条件获得油茶RAPD分析的最佳反应体系.[结果]CTAB法提取的油茶基因组DNA纯度高于SDS法.油茶RAPD分析的最佳反应体系为:1.0 U Taq DNA聚合酶、1.5 mmol/L MgCl2、200 μmol/L dNTP、10 pmol/L随机引物、20 ng DNA模板、2 μl 10×PCR buffer,加重蒸水至20 μl.油茶的RAPD反应程序为:95 ℃预变性3 min;94 ℃变性1 min,40 ℃退火1 min,72 ℃延伸2 min,40循环;72 ℃延伸7 min.[结论]该研究所用DNA纯度较高,反应条件控制严格,试验中扩增稳定性较好,是适合油茶RAPD分析的最佳反应体系.
油茶 RAPD分析 最佳反应体系