芽胞杆菌(Bacillus)在自然界中广泛存在,是一类重要的生防资源.以芽胞杆菌为对象建立简便高效的遗传学操作技术有助于相关分子机制研究的开展.本研究采用分子生物学手段构建可简便高效地用于芽胞杆菌基因敲低的重组质粒pBD1.为了验证pBD1在芽胞杆菌中基因敲低效率,进一步设计杀线虫芽胞杆菌(Bacillus nematocida)B16丝氨酸蛋白酶基因bace16的单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),将其插入重组质粒pBD1,构建bace16低水平表达载体,电转入B16后比较突变株与野生株的bace16表达差异.结果显示,本研究基于dCas9成功构建了用于芽胞杆菌的可逆型基因敲低重组质粒pBD1,利用qRT-PCR和酶活性测试方法,成功获得了B16中bace16基因表达水平降低的突变株;将异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)移除后,bace16表达基本回复到野生型水平.本研究构建了适用于芽胞杆菌的可逆型基因敲减重组质粒,建立了芽胞杆菌基因敲低及互补系统,为研究芽胞杆菌基因功能提供了基础资料.
基因敲低 可逆 芽胞杆菌 CRISPR/dCas9