目的探讨基于荧光共振能量转移的杂交探针熔解曲线的实验影响因素,优化此法检测基因的实验条件.方法利用荧光共振能量转移的原理,设计检测人葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因的荧光杂交探针,在熔解曲线模式下,设定不同模板量、Mg2+浓度,观察熔解曲线峰面积及其Tm值.结果在设定的反应体系中,随着模板量从10 ng渐次上升至100 ng,熔解曲线峰面积亦逐渐增大;随着Mg2+终浓度的增加,峰面积也增加,而且熔解曲线的Tm值也呈升高趋势.结论探针熔解曲线法准确、迅速、操作简单,在应用中应考虑到模板量及Mg2+浓度的影响以便获得理想的结果.
基因突变 荧光共振能量转移 熔解曲线