Recombinant AAV mediated genome engineering
ریکومبیننٹ اڈینو سے وابستہ وائرس (آر اے اے وی) پر مبنی جینوم انجینئرنگ ایک جینوم ایڈیٹنگ پلیٹ فارم ہے جو ریکومبیننٹ اے اے وی ویکٹرز کے استعمال پر مرکوز ہے جو زندہ ممالیہ خلیوں کے جینوم میں ڈی این اے کے سلسلے کو داخل کرنے، حذف کرنے یا تبدیل کرنے کے قابل بناتا ہے۔ یہ تکنیک ماریو کیپیچی اور اولیور اسمتھز کی نوبل انعام یافتہ دریافت پر مبنی ہے کہ ہومولوگس ریکومبینیشن (ایچ آر)، جو کہ ایک قدرتی ہائی فیڈلٹی ڈی این اے مرمت کا طریقہ کار ہے، کو چوہوں میں عین مطابق جینوم تبدیلیاں انجام دینے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ آر اے اے وی ثالثی شدہ جینوم ایڈیٹنگ اس تکنیک کی کارکردگی کو بہتر بناتی ہے تاکہ کسی بھی پہلے سے قائم اور مختلف انسانی سیل لائن میں جینوم انجینئرنگ کی اجازت دی جا سکے، جس میں، ماؤس ای ایس خلیوں کے برعکس، ایچ آر کی شرح کم ہوتی ہے۔ اس تکنیک کو وسیع پیمانے پر انسانی خلیوں کی انجینئرنگ لائنوں میں آئزوجینک انسانی بیماری کے ماڈل تیار کرنے کے لیے استعمال کیا گیا ہے۔ اس کا استعمال پروٹین ویکسین اور علاج معالجے کی بائیو مینوفیکچرنگ کے لیے بائیو پروڈیوسر سیل لائنوں کو بہتر بنانے کے لیے بھی کیا گیا ہے۔ اس کے علاوہ، آر اے اے وی کی غیر پیتھوجینک نوعیت کی وجہ سے، یہ زندہ مریضوں میں جین تھراپی انجام دینے کے لیے ایک مطلوبہ ویکٹر کے طور پر ابھرا ہے۔ آر اے اے وی ویکٹر آر اے اے وی جینوم سنگل اسٹرینڈڈ ڈی آکسی ریبونوکلک ایسڈ (ایس ایس ڈی این اے) سے بنایا گیا ہے، جو مثبت یا منفی احساس والا ہے، جو تقریبا 4.7 کلو بیس لمبا ہے۔ ان سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے وائرل ویکٹرز میں ٹرانسڈکشن کی شرح زیادہ ہوتی ہے اور ان میں جینوم میں ڈبل اسٹرینڈ ڈی این اے ٹوٹنے کے بغیر اینڈوجینس ایچ آر کو متحرک کرنے کی ایک منفرد خاصیت ہوتی ہے، جو کہ ہومنگ اینڈو نیوکلیز میڈیٹڈ جینوم ایڈیٹنگ کے دیگر طریقوں کی خصوصیت ہے۔ صلاحیتیں صارفین کسی بھی ٹارگٹ جینومک لوکس کے لیے آر اے اے وی ویکٹر ڈیزائن کر سکتے ہیں اور ممالیہ سومیٹک سیل کی اقسام میں مجموعی اور ٹھیک ٹھیک اینڈوجینس جین کی تبدیلیاں انجام دے سکتے ہیں۔ ان میں فنکشنل جینومکس کے لیے جین ناک آؤٹ، یا زندہ خلیوں میں جسمانی سطح پر منتقلی کے واقعات کو ٹریک کرنے کے لیے پروٹین ٹیگ کے اندراج کا 'ناک ان' شامل ہے۔ سب سے اہم بات یہ ہے کہ آر اے اے وی ایک وقت میں ایک واحد ایلیل کو نشانہ بناتا ہے اور اس کے نتیجے میں کوئی غیر ہدف شدہ جینومک تبدیلیاں نہیں ہوتی ہیں۔ اس کی وجہ سے، یہ ٹھیک ٹھیک ایس این پیز یا پوائنٹ میوٹیشنز کی وجہ سے ہونے والی جینیاتی بیماریوں کو معمول کے مطابق اور درست طریقے سے ماڈل کرنے کے قابل ہے جو کہ نئے منشیات کی دریافت کے پروگراموں کا تیزی سے ہدف ہیں۔ آج تک، آر اے اے وی ثالثی جینوم انجینئرنگ کا استعمال 2100 سے زیادہ ہم مرتبہ جائزہ لینے والے سائنسی جرائد میں شائع ہوا ہے۔ آر اے اے وی پر مبنی جینوم ایڈیٹنگ کا ایک اور ابھرتا ہوا اطلاق مریضوں میں جین تھراپی کے لیے ہے، جس کی وجہ درستگی اور نقطہ نظر کے ذریعہ فراہم کردہ آف ٹارگیٹ ریکومبینیشن ایونٹس کی کمی ہے۔ یہ بھی دیکھیں حیاتیاتی انجینئرنگ ہومنگ اینڈو نیوکلیز ہومولوگس ریکومبینیشن میگنوکلیز زنک فنگر نیوکلیز آئسوجینک انسانی بیماری کے ماڈل Cas9 حوالہ جات ذرائع آنکوجینک PI3K اتپریورتن کا اینڈوجینس ایکسپریشن فعال PI3K سگنلنگ کی طرف لے جاتا ہے اور AACR/EORTC مالیکیولر ٹارگیٹس اینڈ کینسر تھیراپیوٹکس، بوسٹن، USA، نومبر 2009 میں پیش کیا گیا ایک انویسیو فینوٹائپ پوسٹر۔ آنکوجینک PI3K اتپریورتن کا اینڈوجینس ایکسپریشن مائٹوکونڈریا پوسٹر میں اینٹی اپوپٹوٹک پروٹین کے جمع ہونے کا باعث بنتا ہے جو AACR 2010، واشنگٹن، D. C.، USA، اپریل میں پیش کیا گیا۔ 2010 PI3-کینیز انفیکٹر سرگرمی پروفائلز کی وضاحت کے لیے 'X-MAN' آئزوجینک سیل لائنوں کا استعمال پوسٹر اے اے سی آر 2010، واشنگٹن ڈی سی، یو ایس اے، اپریل میں پیش کیا گیا۔ 2010 'ایکس-مین' اتپریورتن پی آئی 3 سی اے کا استعمال انفرادی ٹیوبلین آئسوفارم کے اظہار کو بڑھاتا ہے اور اے اے سی آر 2010، واشنگٹن ڈی سی، یو ایس اے، اپریل میں پیش کردہ اینٹی مائٹوٹک کیموتھراپی دوائیوں کے پوسٹر کے خلاف مزاحمت کو فروغ دیتا ہے۔ 2010 بائیو کیمسٹری ریکومبیننٹ پروٹین