Monocyte monolayer assay
مونوسیٹ مونو لیئر اسیس (ایم ایم اے) کا استعمال خون کی منتقلی کے وصول کنندگان کے ذریعہ تیار کردہ ایلوانٹی باڈیز کی طبی اہمیت کا تعین کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ جانچ کا استعمال انٹراوسکولر ہیمولیسس کی صلاحیت کا اندازہ لگانے کے لیے کیا جاتا ہے جب غیر مطابقت پذیر سیلولر خون کی مصنوعات کو خون کی کمی کے مریض میں منتقل کیا جاتا ہے۔ جب عطیہ دہندہ کے خلیات میں ایسے مادے ہوتے ہیں جو وصول کنندہ کے ذریعہ تیار نہیں ہوتے ہیں، تو وصول کنندہ کا مدافعتی نظام مادے کے خلاف اینٹی باڈیز تیار کرتا ہے۔ انہیں ایلوانٹی باڈیز کہا جاتا ہے۔ مخصوص سفید خون کے خلیات، جنہیں مونوسیٹس کہا جاتا ہے، کو غیر ملکی مواد کو کھانے کا کام سونپا جاتا ہے اور بعض سوزش کے واقعات کے دوران فعال ہو جاتے ہیں۔ یہ فعال مونوسیٹس اینٹی باڈی حساس سرخ خون کے خلیوں (آر بی سی) کے ساتھ رابطے میں آتے ہیں اور فیگوسیٹوسس (انجیکشن) کی نمائش کر سکتے ہیں یا نہیں اور عطیہ دہندہ کے سرخ خون کے خلیوں کو تباہ کر سکتے ہیں۔ اگر مونوسیٹس آر بی سی کو تباہ کرتے ہیں، تو ان آر بی سی سے منسلک اینٹی باڈی کو طبی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا ہے۔ پس منظر بلڈ بینکنگ بلڈ بینکنگ کلینیکل لیبارٹری کے اندر ایک ارتکاز ہے جو ممکنہ ٹرانسفیوژن وصول کنندگان کے نمونوں کا تجزیہ کرتا ہے اور اس مریض کی دیکھ بھال کے انچارج صحت کی دیکھ بھال کرنے والی ٹیم کو خون کی مطابقت پذیر مصنوعات فراہم کرتا ہے۔ خون کی ٹائپنگ (اے بی او/آر ایچ کی حیثیت کا تعین)، اینٹی باڈی اسکریننگ، سیرولوجک کراس میچنگ، براہ راست اینٹیگلوبلین ٹیسٹنگ، اور اینٹی باڈی کی شناخت سمیت کئی معمول کے ٹیسٹ کیے جاتے ہیں۔ اے بی او اور آر ایچ (ڈی) بلڈ گروپ اینٹی جینز میں قدرتی طور پر پائے جانے والے اینٹی باڈیز (آئسوہیماگلوٹیننس) کی موجودگی کے علاوہ، اضافی مدافعتی محرک اینٹی باڈیز کو غیر متوقع ایلوانٹی باڈیز سمجھا جاتا ہے۔ غیر متوقع اینٹی باڈیز کی شناخت ایک محنت طلب عمل ہے، اور بعض اوقات اینٹی باڈیز کی مناسب شناخت میں مدد کے لیے خصوصی لیبارٹری تکنیک کے اضافے کی ضرورت ہوتی ہے۔ ان تکنیکوں میں ایلیوشنز، ایڈسورپشنز، اور انزائم ٹریٹمنٹ شامل ہیں۔ کچھ مریض ہائی فریکوئنسی اینٹی جینز کے لیے اینٹی باڈیز تیار کرتے ہیں۔ یعنی سرخ خلیے کے اینٹی جین انسانی آبادی کے ایک اہم حصے میں موجود ہوتے ہیں۔ یہ قابل اعتراض ہو سکتا ہے اور اس بات کا اندازہ لگانا بہت مشکل ہو سکتا ہے کہ اینٹی باڈی کو طبی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا ہے یا نہیں۔ طبی لحاظ سے اہم اینٹی باڈی ایک اینٹی باڈی ہے جو وٹرو ہیمولیسس یا ٹرانسفیوزڈ ڈونر ریڈ بلڈ سیلز کی بقا میں کمی کا سبب بننے کی صلاحیت رکھتی ہے۔ مونوسیٹ مونو لیئر جانچ کا استعمال کرتے ہوئے طبی اہمیت کے لیے ہائی فریکوئنسی اینٹیجنز کے اینٹی باڈیز کا اندازہ لگایا جا سکتا ہے۔ ہیمولیٹک ٹرانسفیوژن رد عمل خون کی منتقلی پر غیر معمولی رد عمل کی بہت سی مختلف قسمیں ہیں۔ ان میں سے، ممکنہ طور پر جان لیوا ردعمل کو ہیمولیٹک ٹرانسفیوژن رد عمل کے نام سے جانا جاتا ہے۔ یہ ایک مدافعتی ثالثی ردعمل ہے جہاں وصول کنندہ اینٹی باڈیز ڈونر ریڈ بلڈ سیل اینٹیجن (ز) پر حملہ کرتی ہیں، جس کی وجہ سے ڈونر خلیوں کا ہیمولیسس ہوتا ہے۔ ردعمل اس کے دوران، فورا بعد، یا 28 دن بعد تک ہو سکتا ہے۔ پہلے 24 گھنٹوں کے اندر ایک شدید ردعمل مشاہدہ کیا جاتا ہے، جبکہ منتقلی کے بعد 24 گھنٹوں اور 28 دنوں کے درمیان ایک تاخیر شدہ ردعمل مشاہدہ کیا جائے گا۔ ایلوانٹی باڈی کی تشکیل اور طبی اہمیت جب اے بی او بلڈ گروپ سسٹم کے بارے میں بات کی جائے تو لینڈسٹینر کا قانون کہتا ہے کہ اگر کسی فرد کے پاس اے اور/یا بی اینٹیجن ہے تو وہ ان اینٹیجنز کے لیے اینٹی باڈیز نہیں بنائیں گے۔ تاہم، اگر کسی فرد میں اے یا بی اینٹی جین نہیں ہیں، تو وہ قدرتی طور پر اینٹی اے اور اینٹی بی اینٹی باڈیز تیار کریں گے۔ انٹرنیشنل سوسائٹی آف بلڈ ٹرانسفیوژن (آئی ایس بی ٹی) کے مطابق، خون کے گروپ کے 43 نظام بیان کیے گئے ہیں جن میں سینکڑوں مختلف سرخ خون کے خلیوں کے اینٹیجن موجود ہیں۔ کچھ مستثنیات کے ساتھ، بہت سے غیر اے بی او بلڈ گروپ سسٹم اینٹی جینز کو اینٹی باڈی کی پیداوار کو تیز کرنے کے لیے ایک حساس واقعہ کی ضرورت ہوتی ہے۔ دوسرے لفظوں میں، غیر قانونی اینٹی باڈی کی پیداوار کے لیے مدافعتی نظام کو اینٹیجن کے سامنے ہونا چاہیے۔ خون کی منتقلی، سٹیم سیل/بون میرو ٹرانسپلانٹ، اور حمل کے ذریعے اینٹی جینز کی نمائش ہو سکتی ہے۔ ایلوانٹی باڈی کی طبی اہمیت کا انحصار عطیہ دہندہ کے سرخ خون کے خلیوں کی بقا میں کمی کا سبب بننے کی اس کی صلاحیت پر ہوتا ہے۔ طبی لحاظ سے اہم ایلوانٹی باڈیز کی خصوصیات میں شامل ہیں: امیونوگلوبلین جی اینٹی باڈی سب کلاس، جسم کے درجہ حرارت پر رد عمل، اور بالواسطہ اینٹیگلوبلین ٹیسٹ میں اینٹی ہیومن گلوبولین (اے ایچ جی) کی موجودگی میں سرخ خون کے خلیوں کو جمع کرنے کی صلاحیت۔ بعض اوقات، اینٹی باڈی کی طبی اہمیت کا تعین کرنا مشکل ہو سکتا ہے۔ زیادہ پھیلاؤ والے سرخ خلیے کے اینٹی جینز کے اینٹی باڈیز بعض اوقات طبی لحاظ سے اہم ایلوانٹی باڈیز کا پتہ لگانے کو نقاب کر سکتے ہیں کیونکہ متعلقہ اینٹیجن زیادہ تر پر موجود ہوتا ہے، اگر سب نہیں تو، ان اینٹی باڈیز کا پتہ لگانے کے لیے استعمال ہونے والے سرخ خون کے خلیوں کی اسکریننگ میں اینٹیجن ہوتا ہے۔ یہی وہ جگہ ہے جہاں مونوسیٹ مونو لیئر جانچ مفید ہو سکتی ہے۔ اصول ایم ایم اے ایک بہت محنت طلب، دستی لیبارٹری ٹیسٹنگ کا طریقہ ہے۔ اس جانچ میں درج ذیل مراحل انجام دیے جاتے ہیں: اینٹیکوگولڈ خون عام، صحت مند افراد سے جمع کیا جاتا ہے۔ ایسڈ سائٹریٹ ڈیکسٹروز کو ترجیح دی جاتی ہے۔ پردیی خون کے مونو نیوکلیئر خلیات (پی بی ایم سی) کو خون کے نمونے سے فکول-پیک ® کثافت میلان کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا جاتا ہے۔ پی بی ایم سی کو فاسفیٹ بفرڈ سیلائن (پی بی ایس) کا استعمال کرتے ہوئے دھویا جاتا ہے اور پھر ٹشو کلچر میڈیا میں معطل کر دیا جاتا ہے تاکہ مونوسیٹس کو قابل عمل رکھا جا سکے۔ پی بی ایم سی-میڈیا مرکب کو پھر ٹشو کلچر چیمبر سلائیڈ میں شامل کیا جاتا ہے۔ مونوسیٹس شیشے کی سلائیڈ پر چپکے رہیں گے جس سے مونوسیٹ مونولیئر بنتا ہے۔ سیرم کو ملایا جاتا ہے اور جسم کے درجہ حرارت (37 ڈگری سیلسیس) پر 5 فیصد گروپ او آر بی سی معطلی کے ساتھ انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ (یہ مرحلہ آر بی سی کو اینٹی باڈی کے ساتھ حساس یا کوٹ کرتا ہے) حساس آر بی سی کو پی بی ایس کے ساتھ دھویا جاتا ہے تاکہ کسی بھی غیر پابند اینٹی باڈی یا مداخلت کرنے والے مادے کو ہٹایا جا سکے۔ دھوئے ہوئے، حساس آر بی سی کو پھر مونوسیٹ مونولیئر ٹشو کلچر چیمبر سلائیڈ میں شامل کیا جاتا ہے۔ 60 منٹ، 37 ڈگری سیلسیس انکیوبیشن کے بعد، سپر نیٹنٹ کو چیمبر سلائیڈز سے ہٹا دیا جاتا ہے اور پی بی ایس سے دھویا جاتا ہے۔ ایک بار جب سلائیڈ مکمل طور پر خشک ہو جاتی ہے، تو اسے رائٹس گیمسا کے داغ سے داغدار کیا جاتا ہے۔ آر بی سی فگوسیٹوسس کے ثبوت کے لیے خوردبین کے نیچے کم از کم 600 (200 اگر مثبتیت 20 فیصد سے زیادہ ہے) مونوسیٹس کا مشاہدہ کیا جاتا ہے۔ معیار کی یقین دہانی کے لیے مریض کے نمونے کے ساتھ مل کر ایک مثبت اور منفی کنٹرول بھی کیا جاتا ہے۔ تشریح اگر مثبت یا منفی کنٹرول ناکام ہو جاتے ہیں، تو جانچ کا پورا طریقہ کار غلط ہے اور اسے دہرایا جانا چاہیے۔ مثبت ایم ایم اے کے لیے معیار لیبارٹری کے لحاظ سے مختلف ہوگا، حالانکہ اصل میں سینڈرا نینس اور دیگر کی طرف سے مقرر کردہ حد 20 ٪ سے زیادہ فیگوسیٹک سرگرمی کا مشاہدہ کیا جاتا ہے۔ طبی لحاظ سے، ایک مثبت ایم ایم اے اس بات کی نشاندہی کرے گا کہ جانچ میں استعمال ہونے والے مریض کے سیرم میں طبی لحاظ سے اہم اینٹی باڈیز ہوتی ہیں جو اینٹی باڈی کی ثالثی والے فگوسیٹوسس کا سبب بننے کی صلاحیت رکھتی ہیں۔ یہ بھی دیکھیں کہ ایکیوٹ ہیمولیٹک ٹرانسفیوژن ری ایکشن اینٹی باڈی اوپسونائزیشن ایلوانٹی باڈیز حوالہ جات ٹرانسفیوژن میڈیسن بلڈ ٹیسٹ