Proximity extension assay
قربت توسیع جانچ (پی ای اے) حیاتیاتی نمونے جیسے سیرم یا پلازما میں موجود بہت سے مخصوص پروٹین کی مقدار کا پتہ لگانے اور اس کی مقدار کا تعین کرنے کا ایک طریقہ ہے۔ یہ طریقہ پروٹومکس کے تحقیقی شعبے میں استعمال ہوتا ہے، خاص طور پر افینیٹی پروٹومکس، جہاں ایک میں بائیو مارکر کے طور پر استعمال کرنے کے لیے خون میں بہت سے مخصوص پروٹین کی کثرت میں فرق تلاش کیا جاتا ہے۔ بائیو مارکر اور بائیو مارکر کے دستخطی امتزاج، بیماری کی حالت اور دوا کی افادیت کا تعین کرنے کے لیے مفید ہیں۔ پروٹین کا پتہ لگانے کے زیادہ تر طریقوں میں پہلے پروٹین اینالائٹ کو پکڑنے اور متحرک کرنے کے لیے ایک ٹھوس مرحلے کا استعمال شامل ہوتا ہے، جہاں ایک یا چند پروٹینوں کی مقدار مقرر کی جاتی ہے، جیسے ELISA۔ اس کے برعکس، پی ای اے ایک یکساں ون ٹیوب ری ایکشن حل میں ٹھوس مرحلے کے بغیر انجام دیا جاتا ہے جہاں اینٹی باڈیز کے سیٹ میں منفرد ڈی این اے سیکوینس ٹیگز کے ساتھ مل کر، جسے قربت تحقیقات کہا جاتا ہے، ہر ہدف پروٹین کے لیے مخصوص جوڑوں میں کام کرتے ہیں۔ پی ای اے اکثر اینٹی باڈیز کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا جاتا ہے اور یہ امیونواسے کی ایک قسم ہے۔ قربت کی تحقیقات کے ذریعہ ٹارگٹ بائنڈنگ ڈی این اے ٹیگز کے ان کے مقامی نسبتا موثر ارتکاز کو بڑھاتا ہے جو ایک دوسرے کے لیے کمزور تکمیل کی ہائبرڈائزیشن کو قابل بناتا ہے جو پھر ڈی این اے پولیمرس ثالثی توسیع کو قابل بناتا ہے جو ہر ہدف پروٹین کے لیے مخصوص متحدہ ڈی این اے ترتیب تشکیل دیتا ہے۔ 3 'ایکسونوکلیز کے ماہر پولیمرس کا استعمال پس منظر کے شور کو کم کرتا ہے اور ہائپر تھرموسٹیبل پولیمرس قدرتی ہاٹ اسٹارٹ رد عمل کے ساتھ ایک سادہ جانچ میں ثالثی کرتے ہیں۔ ڈی این اے ترتیب کی توسیعی مصنوعات کا یہ پول پی سی آر کے ذریعے بڑھائے گئے ایمپلیکنز کی تشکیل کرتا ہے جہاں ہر ایمپلیکن ترتیب ہدف پروٹین کی شناخت سے مطابقت رکھتی ہے اور مقدار اس کی مقدار کی عکاسی کرتی ہے۔ اس کے بعد، ان امپلیکنز کا پتہ لگایا جاتا ہے اور ڈی این اے ٹیگ گنتی کے ذریعے یا تو ریئل ٹائم پی سی آر یا اگلی نسل کے ڈی این اے سیکوینسنگ کے ذریعے ان کی مقدار طے کی جاتی ہے۔ پی ای اے بیک وقت بہت سے پروٹینوں کا پتہ لگانے کے قابل بناتا ہے (جسے ملٹی پلیکسنگ کہا جاتا ہے) کیونکہ توسیع کے رد عمل سے پتہ لگانے کے قابل ڈی این اے ترتیب پیدا کرنے کے لیے فی پروٹین دو صحیح طریقے سے پابند اینٹی باڈیز کے امتزاج کی ضرورت ہوتی ہے۔ سیکوینس کے صرف علمی جوڑوں کا پتہ حقیقی سگنل کے طور پر لگایا جاتا ہے، جو ایک وقت میں تقریبا 30 پروٹینوں پر محدود ٹھوس فیز کیپچر طریقوں سے آگے ملٹی پلیکسنگ کو فعال کرتا ہے۔ ڈی این اے امپلیفیکیشن پاور ایک مائکرو لیٹر سے نیچے بھی منٹ کے نمونے کی مقدار کو قابل بناتی ہے۔ پی ای اے کو 1000 سے زیادہ تحقیقی اشاعتوں میں استعمال کیا گیا ہے۔ ڈویلپمنٹ پی ای اے قربت لائیگیشن اسیسے (پی ایل اے) سے ماخوذ ہے جو ڈی این اے پولیمرس کے بجائے قربت تحقیقات کے سلسلے کو متحد کرنے کے لیے ڈی این اے لیگیز انزائم کا استعمال کرتا ہے۔ پی ایل اے ملٹی پلیکسنگ کے لیے بھی موزوں ہے، لیکن سیرم اور پلازما کے نمونوں کے اجزاء سے لیگیز انزائموں کی انزیمیٹک نمونہ متغیر روک تھام کا شکار ہے۔ ڈی این اے پولیمریز انزائموں کو ایک ہی رکاوٹ کا سامنا نہیں کرنا پڑتا ہے اور یہ آسانی سے ملٹی پلیکس ایبل بھی ہوتا ہے اور اسے 384 پروٹین تک ملٹی پلیکس کیا گیا ہے۔ پی ای اے کی کارکردگی درجہ حرارت کے لیے حساس ہے کیونکہ یہ ڈی این اے ہائبرڈائزیشن پر مبنی رد عمل ہے۔ لہذا کمرے کے درجہ حرارت پر بغیر کسی سرگرمی کے ہائپر تھرموسٹیبل پولیمریز کا استعمال بینچ ٹاپ ری ایکشن اسمبلی کی حمایت کرتا ہے۔ حوالہ جات پروٹومکس بائیو کیمسٹری کا پتہ لگانے کے طریقے