Adherent culture
مستقل سیل کلچر سیل کلچر کی ایک قسم ہے جس میں نشوونما کے لیے خلیوں کو کسی سطح سے منسلک کرنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ زیادہ تر ریڑھ کی ہڈی والے خلیات (ہیماٹوپوئیٹک خلیوں کے استثناء کے ساتھ) کو کلچر کیا جا سکتا ہے اور خلیوں کے چپکنے اور پھیلاؤ کو آسان بنانے کے لیے 2 جہتی مونو لیئر کی ضرورت ہوتی ہے۔ خلیوں کے نمونے ٹشو ایکسپلانٹس یا سیل سسپنشن کلچرز سے لیے جا سکتے ہیں۔ غذائی اجزاء پر مشتمل نمو کے ذریعہ کی زیادتی کے ساتھ مستقل سیل کلچر اس وقت تک بڑھتے رہیں گے جب تک کہ وہ دستیاب سطح کے رقبے کا احاطہ نہ کر لیں۔ ٹرپسین جیسے پروٹیز عام طور پر خلیوں سے فلاسک تک چپکنے کو توڑنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔ متبادل طور پر، سیل سکریپرز کو میکانکی طور پر چپکنے کو توڑنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے اگر پروٹیسیس متعارف کرانے سے سیل کلچرز کو نقصان پہنچ سکتا ہے۔ سسپنشن کلچرز کے برعکس، سیل کلچر کی دوسری اہم قسم، ایڈرینٹ کلچرز کے لیے مکینیکل یا اینزیمیٹک ڈس ایسوسی ایشن کا استعمال کرتے ہوئے باقاعدگی سے گزرنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ کلچر کو الٹا خوردبین کا استعمال کرتے ہوئے دیکھا جا سکتا ہے، تاہم مستقل کلچر کی نشوونما دستیاب سطح کے رقبے پر منحصر ہے۔ اس وجہ سے، مستقل سیل کلچرز عام طور پر خلیوں کی زیادہ پیداوار حاصل کرنے کے لیے استعمال نہیں ہوتے ہیں، اس کے بجائے معطلی کلچرز کے استعمال کو ترجیح دی جاتی ہے۔ طریقے اور دیکھ بھال الگ تھلگ خلیات مستقل کلچر کے لیے استعمال ہونے والے بنیادی خلیات کو الگ تھلگ کیا جانا چاہیے اور کسی موضوع سے علاج کیا جانا چاہیے، یا پہلے سے موجود سیل لائنوں سے منتقل کیا جا سکتا ہے۔ مستقل خلیوں کو پہلے کسی سطح سے منسلک یک پرت میں منتقل کیا جانا چاہیے، اور ان کی درجہ بندی ان کے مورفولوجیکل اختلافات کے مطابق کی جاتی ہے۔ فائبربلاسٹ جیسے چپکنے والے خلیات کی ایک لکیری اور پھیلی ہوئی شکل ہوتی ہے، اور یک پرت سے منسلک ہونے پر منتقل ہو جاتے ہیں۔ ایپیٹیلیل جیسے چپکنے والے خلیات کی شکل وسیع اور کثیر الاضحی ہوتی ہے، اور یک پرت سے منسلک ہونے پر منتقل نہیں ہوتے ہیں۔ ایک بار جب خلیات اپنے منبع سے مناسب طریقے سے الگ ہو جاتے ہیں اور میڈیا میں منتقل ہو جاتے ہیں، تو سیل پاسجنگ کی جا سکتی ہے۔ لیبارٹریوں کے لیے مستقل سیل کلچر کی دیکھ بھال مستقل سیل کلچرز کو منتقل کرتے ہوئے، خرچ شدہ میڈیا کو بار بار پائپ آؤٹ کیا جانا چاہیے اور تازہ میڈیا کے ساتھ تبدیل کیا جانا چاہیے۔ کلچر برتن کو بار بار ٹیپ بھی کیا جا سکتا ہے، جسے خلیوں کی علیحدگی کو آسان بنانے کے لیے مکینیکل یا انزیمیٹک طریقوں کے ساتھ جوڑا جانا چاہیے۔ کلچر برتن کو سینٹری فیوج بھی کیا جا سکتا ہے، جس سے ایک سپر نیٹنٹ بنتا ہے جسے پائپیٹ کا استعمال کرتے ہوئے نکالا جا سکتا ہے۔ خلیوں کو ہفتے میں 2 سے 3 بار کھلایا جانا چاہیے، اور خلیوں کے زیادہ سے زیادہ پھیلاؤ کو یقینی بنانے کے لیے مناسب درجہ حرارت، نمی، روشنی اور پی ایچ پر کلچر کیا جانا چاہیے۔ گزرتے ہوئے (ذیلی ثقافت) خلیے اگرچہ متقی ثقافتیں معطلی ثقافتوں کے ساتھ مماثلت رکھتی ہیں، لیکن ان کی ثقافت اور گزرتے ہوئے طریقے میں بہت سے اہم اختلافات ہیں۔ مستقل کلچر گزرنے کے لیے، خرچ شدہ میڈیا کو پہلے فضلہ کی مصنوعات کے طور پر خلیوں پر مشتمل فلاسک سے باہر نکالا جاتا ہے۔ خلیوں کو میڈیا سے چپکا دیا جاتا ہے جسے کلچر برتن میں نہیں ہٹایا گیا تھا، اور پھر خلیوں کو الگ کرنے کے لیے دھونے اور انکیوبیشن کے مراحل کا ایک سلسلہ ضروری ہوتا ہے۔ دھونے کے مراحل کے لیے، سیل کلچر کے مخالف جانب ایک متوازن نمک کا محلول ڈالا جاتا ہے، اور پھر متوازن نمک کے محلول کو نکالنے سے پہلے کلچر برتن کو ہلا دیا جاتا ہے۔ انکیوبیشن کے مراحل کے لیے کلچر برتن پر حرارت لگائی جاتی ہے، جس کی وجہ سے پروٹین کی انحطاط اور خلیات کو میڈیا سے بتدریج الگ کیا جاتا ہے۔ اسی طرح معطلی ثقافتوں کے لیے، ہیموسیٹومیٹر اور ٹرپین بلیو کا استعمال کرتے ہوئے خلیوں کی کل تعداد کا حساب لگایا جا سکتا ہے۔ کمرشل ایپلی کیشنز اینڈ لمیٹیشنز ایڈرینٹ کلچرز سب سے زیادہ عام طور پر سائٹولوجی اور چھوٹے پیمانے پر سیلولر مصنوعات کی کٹائی کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔ چونکہ ان کی نشوونما 2 ڈی تک محدود ہے، اس لیے ان ویو سیل ڈھانچے اور فنکشن کا مطالعہ کرنے کے لیے مستقل ثقافتوں کا استعمال کرنا مشکل ہے۔ اس حد سے بچنے اور منشیات کی جانچ کے لیے مستقل سیل کلچرز کا استعمال کرنے کے لیے تھری ڈی مائیکرو کیریئرز کا استعمال کرتے ہوئے مستقل سیل کلچرز کو بڑھانے کے لیے تحقیق کی جا رہی ہے۔ پیروکار ثقافتوں کے تجارتی استعمال میں شامل ہیں: پیروکار خلیات تیار کرنا جو ویکسین کی نشوونما کے لیے استعمال ہونے والے دلچسپی کے پروٹین بناتے ہیں۔ سیل اور جین تھراپی کے لیے وائرل ویکٹرز کے ساتھ مل کر استعمال ہونے والے مستقل خلیات۔ مائکرو اور نینو ٹیکنالوجی کو وٹرو میں مستقل خلیوں تک پہنچانا۔ کینسر سیل اسکریننگ کے لیے ایڈرینٹ سیل مورفولوجی کو ایڈجسٹ کرنا۔ حوالہ جات سیل کلچر