Surround optical-fiber immunoassay
سراؤنڈ آپٹیکل فائبر امیونواسے (ایس او ایف آئی اے) ایک انتہائی حساس، وٹرو تشخیصی پلیٹ فارم ہے جس میں ایک سراؤنڈ آپٹیکل فائبر اسمبلی شامل ہے جو پورے نمونے سے فلوروسینس کے اخراج کو پکڑتا ہے۔ ٹیکنالوجی کی وضاحتی خصوصیات اس کا پتہ لگانے، حساسیت اور متحرک رینج کی انتہائی اعلی حد ہیں۔ سوفیا کی حساسیت کو اٹوگرام کی سطح (10−18 گرام) پر ماپا جاتا ہے، جو اسے روایتی تشخیصی تکنیکوں سے تقریبا ایک ارب گنا زیادہ حساس بناتا ہے۔ اپنی بہتر متحرک رینج کی بنیاد پر، سوفیا ایک نمونے میں تجزیہ کی سطح کو شدت کے 10 آرڈرز سے زیادہ فرق کرنے کے قابل ہے، جس سے درست ٹائٹنگ میں آسانی ہوتی ہے۔ ایک تشخیصی پلیٹ فارم کے طور پر، سوفیا کے پاس ایپلی کیشنز کی ایک وسیع رینج ہے۔ کئی مطالعات نے پہلے ہی بیماری کے کیریئرز کے خون اور پیشاب میں قدرتی طور پر پائے جانے والے پریونز کا پتہ لگانے کی سوفیا کی بے مثال صلاحیت کا مظاہرہ کیا ہے۔ توقع ہے کہ اس سے وی سی جے ڈی، بی ایس ای، سکریپی، سی ڈبلیو ڈی، اور دیگر قابل منتقلی سپنجفارم انسیفالوپیتھی کے لیے پہلے قابل اعتماد اینٹی مارٹم اسکریننگ ٹیسٹ کا باعث بنے گا۔ ٹیکنالوجی کی انتہائی حساسیت کو دیکھتے ہوئے، اضافی منفرد ایپلی کیشنز کی توقع کی جاتی ہے، بشمول دیگر نیوروڈیجینریٹو بیماریوں، جیسے الزائمر اور پارکنسنز کی بیماری کے لیے ان وٹرو ٹیسٹ۔ سوفیا کو لاس الاموس نیشنل لیبارٹری اور اسٹیٹ یونیورسٹی آف نیویارک کے درمیان مشترکہ تعاون پر مبنی تحقیقی منصوبے کے نتیجے میں تیار کیا گیا تھا، اور اسے محکمہ دفاع کے نیشنل پرین ریسرچ پروگرام کی حمایت حاصل تھی۔ پس منظر لیزر سے متاثر فلوروسینس انجام دینے کا روایتی طریقہ، نیز دیگر اقسام کی سپیکٹروسکوپک پیمائش، جیسے اورکت، بالائے بنفشی نظر آنے والی سپیکٹروسکوپی، فاسفورسینس وغیرہ، تجزیہ کرنے کے لیے نمونے پر مشتمل ایک چھوٹے سے شفاف لیبارٹری برتن، ایک کیوویٹ کا استعمال کرنا ہے۔ پیمائش انجام دینے کے لیے، کیویٹ کو جانچ پڑتال کے لیے مائع سے بھرا جاتا ہے اور پھر کیویٹ کے چہروں میں سے ایک کے ذریعے مرکوز لیزر سے روشن کیا جاتا ہے۔ لیزر سے چلنے والی فلوروسینٹ روشنی کو جمع کرنے کے لیے ان پٹ ونڈو سے 90 ڈگری پر واقع کیویٹ کے چہروں میں سے ایک کے ساتھ ایک لینس رکھا جاتا ہے۔ کیوویٹ کا صرف ایک چھوٹا سا حجم دراصل لیزر کے ذریعے روشن ہوتا ہے اور ایک قابل شناخت سپیکٹروسکوپک اخراج پیدا کرتا ہے۔ آؤٹ پٹ سگنل نمایاں طور پر کم ہو جاتا ہے کیونکہ لینس ٹھوس زاویے پر غور کرنے کی وجہ سے سپیکٹروسکوپک اخراج کا صرف 10 فیصد اٹھاتا ہے۔ یہ تکنیک کم از کم 75 سالوں سے استعمال ہوتی رہی ہے ؛ لیزر کے وجود سے پہلے بھی، جب روایتی روشنی کے ذرائع کو فلوروسینس کو متحرک کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔ صوفیہ کم جمع کرنے کی کارکردگی کے مسئلے کو حل کرتا ہے، کیونکہ یہ تجزیہ کیے جانے والے نمونے سے پیدا ہونے والی تقریبا تمام فلوروسینٹ روشنی کو جمع کرتا ہے، جس سے فلوروسینس سگنل کی مقدار میں روایتی آلات کے مقابلے میں تقریبا 10 فیکٹر کا اضافہ ہوتا ہے۔ تکنیکی فوائد سوفیا ایک نمونے میں تجزیہ کاروں کے سپیکٹروسکوپک پتہ لگانے کو بڑھانے کے لیے بہتر نظری جیومیٹری کے لیے ایک آلہ اور طریقہ ہے۔ اس ایجاد نے پہلے ہی پریونز اور دیگر نچلے درجے کے تجزیہ کاروں کا انتہائی حساس پتہ لگانے کے لیے ایک آلات اور طریقہ کار کے طور پر اپنی پروف آف کانسیپٹ فعالیت کا مظاہرہ کیا ہے۔ صوفیہ اینٹیجن کیپچر کے لیے مونوکلونل اینٹی باڈیز میں موجود خاصیت کو سراؤنڈ آپٹیکل ڈٹیکشن ٹیکنالوجی کی حساسیت کے ساتھ جوڑتی ہے۔ انتہائی کم سگنل کی سطح کا پتہ لگانے کے لیے، ایک کم شور، فوٹو وولٹک ڈایڈڈ کو نظام کے لیے ڈٹیکٹر کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ صوفیہ نمونے کو تھامے ہوئے مائیکرو کیپلری ٹیوب کو روشن کرنے کے لیے لیزر کا استعمال کرتی ہے۔ پھر، نمونے سے جمع ہونے والی روشنی کو آپٹیکل فائبر سے آپٹکس منتقل کرنے کی ہدایت کی جاتی ہے۔ اس کے بعد، روشنی کا پتہ لگانے کے لیے آپٹیکل طور پر فلٹر کیا جاتا ہے، جسے ڈیجیٹل سگنل پروسیسنگ لاک ان امپلیفائیڈ کے ذریعے شور کے خلاف موجودہ پیمائش کے طور پر انجام دیا جاتا ہے۔ نتائج ڈیٹا کے حصول کے لیے بنائے گئے کمپیوٹر اور سافٹ ویئر پر دکھائے جاتے ہیں۔ اس طرح کے پتہ لگانے والے صف کے بے شمار فوائد ہیں۔ بنیادی طور پر، یہ لیزر سے چلنے والی فلوروسینس تکنیک کا استعمال کرتے ہوئے کم ارتکاز پر بہت چھوٹے نمونوں کے استعمال کی اجازت دیتا ہے۔ فائبر پر مبنی یہ پتہ لگانے کا نظام موجودہ شارٹ پلسڈ ڈٹیکشن ہارڈ ویئر کے لیے موزوں ہے جو اصل میں واحد ڈی این اے مالیکیولز کی ترتیب کے لیے تیار کیا گیا تھا۔ جیومیٹری شارٹ پلس لیزر، سنگل مالیکیول کا پتہ لگانے کی اسکیموں کے لیے تعیناتی کے لیے بھی موزوں ہے۔ سسٹم کی ملٹی پورٹ جیومیٹری ڈیوائس کے ہر بازو سے سگنلز کی موثر الیکٹرانک پروسیسنگ کی اجازت دیتی ہے۔ آخر میں، اور شاید سب سے اہم بات، فائبر آپٹک کیبلز بنیادی طور پر آپٹیکل ٹرانسمیشن میں 100% موثر ہوتی ہیں، جن کی تخفیف 10 ڈی بی/کلومیٹر سے کم ہوتی ہے۔ اس طرح، ایک بار کسی سہولت میں استعمال کے لیے تعینات ہونے کے بعد، فلوروسینس کی معلومات کو فائبر آپٹک طور پر کسی دور دراز مقام پر منتقل کیا جا سکتا ہے، جہاں ڈیٹا پروسیسنگ اور تجزیہ کیا جا سکتا ہے۔ صوفیہ صوفیہ کے اجزاء ایک ملٹی ویل پلیٹ کے نمونے والے کنٹینر پر مشتمل ہوتے ہیں، جو نمونوں کو ملٹی ویل پلیٹ کے نمونے والے کنٹینر سے نمونے ہولڈر کے اندر موجود شفاف کیپلری تک کامیابی کے ساتھ منتقل کرنے کا ایک خودکار ذریعہ ہے، نمونے کے ساتھ آپٹیکل مواصلات میں ایک ایکسائٹیشن ماخذ ہے، جس میں ایکسائٹیشن ماخذ سے تابکاری کیپلری کی لمبائی کے ساتھ ہدایت کی جاتی ہے، اور جس میں تابکاری ایک سگنل کو جنم دیتی ہے جو نمونے سے خارج ہوتا ہے، اور، کم از کم ایک لکیری صف۔ سوفیا جانچ کی تیاری کے مراحل ہدف تجزیہ کو بڑھانے اور پھر توجہ مرکوز کرنے کے بعد، نمونوں کو مخصوص ہونے کے لیے اینٹی باڈی کا استعمال کرتے ہوئے فلوروسینٹ ڈائی کے ساتھ لیبل کیا جاتا ہے اور پھر آخر میں مائیکرو کیپلری ٹیوب میں لوڈ کیا جاتا ہے۔ یہ ٹیوب ایک خاص طور پر تعمیر شدہ آلات میں رکھی جاتی ہے لہذا یہ لیزر کا استعمال کرتے ہوئے رنگ کے پرجوش ہونے کے بعد خارج ہونے والی تمام روشنی کو پکڑنے کے لیے مکمل طور پر نظری ریشوں سے گھرا ہوا ہے۔ آلات کی پروسیسنگ یہ سامان ایک سپیکٹروسکوپک (روشنی جمع کرنے) کا سامان ہے اور نمونے میں تجزیہ کاروں کا تیزی سے پتہ لگانے اور تجزیہ کرنے کے لیے متعلقہ طریقہ ہے۔ نمونے کے ساتھ آپٹیکل مواصلات میں ایک ایکسائٹیشن ماخذ کے ذریعے نمونے کو تابکاری کیا جاتا ہے۔ محرک ماخذ میں لیزر، فلیش لیمپ، آرک لیمپ، روشنی خارج کرنے والا ڈایڈڈ، یا اس طرح کے شامل ہو سکتے ہیں، لیکن ان تک محدود نہیں ہے۔ شکل 1 میں صوفیہ نظام کے موجودہ ورژن کو دکھایا گیا ہے۔ چار لکیری صف (101) ایک نمونہ ہولڈر (102) سے توسیع کرتے ہیں، جس میں ایک لمبا، شفاف نمونہ کنٹینر ہوتا ہے جو دونوں سروں پر کھلا ہوتا ہے، ایک اختتامی بندرگاہ (103) تک۔ اینڈ پورٹ (104) کا فاصلاتی سرے کو اینڈ پورٹ اسمبلی (200) میں داخل کیا جاتا ہے۔ لکیری صف (101) آپٹیکل ریشوں کی کثرت پر مشتمل ہوتی ہے جس کا پہلا سر اور دوسرا سر ہوتا ہے، آپٹیکل ریشوں کی کثرت اختیاری طور پر حفاظتی اور/یا موصلیت والی مٹھی سے گھرا ہوتا ہے۔ نظری ریشے لکیری طور پر ترتیب دیے جاتے ہیں، جس کا مطلب ہے کہ وہ ایک دوسرے کے حوالے سے کافی حد تک ہم آہنگ ہوتے ہیں تاکہ ریشوں کی ایک لمبی قطار بن سکے۔ ایپلی کیشنز دلچسپی کا تجزیہ حیاتیاتی یا کیمیائی نوعیت کا ہو سکتا ہے، اور مثال کے طور پر، صرف کیمیائی موئٹیز (ٹاکسن، میٹابولائٹس، منشیات اور منشیات کے باقیات)، پیپٹائڈز، پروٹین، سیلولر اجزاء، وائرس، اور اس کے امتزاج شامل ہو سکتے ہیں۔ دلچسپی کا تجزیہ یا تو سیال یا معاون میڈیم میں ہو سکتا ہے، جیسے جیل۔ صوفیہ نے ایپلی کیشنز کی ایک وسیع رینج کے ساتھ ایک ڈیوائس کے طور پر اپنی صلاحیت کا مظاہرہ کیا ہے۔ ان میں کلینیکل ایپلی کیشنز شامل ہیں، جیسے بیماریوں کا پتہ لگانا، پیتھولوجیز کی پیش گوئیاں دریافت کرنا، تشخیص قائم کرنا اور تجویز کردہ علاج کی تاثیر کا سراغ لگانا، اور غیر کلینیکل ایپلی کیشنز، جیسے کہ انسانی استعمال کے لیے تیار کردہ مصنوعات میں زہریلے مادوں اور دیگر پیتھوجینک ایجنٹوں کے داخلے کو روکنا: کلینیکل ایپلی کیشنز-سوفیا کا استعمال بیکٹیریا یا وائرس کا پتہ لگانے یا شناخت کرنے کے لیے کوالٹی ٹیسٹ (مثبت یا منفی نتائج)، اور حیاتیاتی مستقل یا مارکر کا پتہ لگانے یا ان کی مقدار کے لیے مقداری ٹیسٹ (مادوں کی پیمائش)، جو جسم کی طرف سے پیدا ہونے والے مادے ہیں، مثال کے طور پر، ایک متعدی بیماری کی موجودگی میں (وائرل لوڈ کا تعین کرنے کی اجازت دینے کے لیے، مثال کے طور پر، ایڈز تھراپی میں، یا غلط استعمال کا پتہ لگانے والی دوائیوں میں زہریلا پن کی سطح)۔ غیر طبی ایپلی کیشنز-ایک امیونواسے کے طور پر، سوفیا کو ممکنہ طور پر کھانے، دواسازی، کاسمیٹکس، یا پانی کے ساتھ ساتھ عمومی ماحولیاتی پیرامیٹرز اور زرعی مصنوعات کے معیار کی نگرانی کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ مصنوعات کی ایک وسیع رینج کے لیے بیکٹیریا اور زہریلے مادوں کا پتہ لگانے اور ان کی جانچ کرنے کی صلاحیت ایک بڑھتی ہوئی اور زیادہ پیچیدہ ضرورت ہے جس کا ثبوت خوراک اور جانوروں سے پیدا ہونے والی بیماریوں، جیسے ای کولی، سالمونیلا، بی ایس ای، ایوین انفلوئنزا وغیرہ کے بڑھتے ہوئے واقعات سے مل سکتا ہے۔ خون یا پیشاب جیسے جسمانی سیالوں کے نمونوں میں پریئن پروٹین (پی آر پی ایس سی) کی غیر معمولی شکل کا تیزی سے پتہ لگانے کے لیے پریئن کی بیماریوں کے لیے اینٹی مارٹم ٹیسٹ سوفیا کا استعمال کیا گیا ہے۔ پی آر پی ایس سی وہ مارکر پروٹین ہے جو متعدی سپنجفارم انسیفالوپیتھیز (ٹی ایس ایز) کی تشخیص میں استعمال ہوتا ہے، جن کی مثالوں میں مویشیوں میں مویشیوں کے سپنجفارم انسیفالوپیتھی شامل ہیں (یعنی۔ "پاگل گائے" کی بیماری)، بھیڑوں میں کھرچنے والی بیماری، اور انسانوں میں کروٹزفیلڈ-جیکب کی بیماری۔ فی الحال، پی آر پی ایس سی کا قبل از مرگ پتہ لگانے کے لیے کوئی تیز رفتار ذریعہ موجود نہیں ہے جس میں یہ عام طور پر جسمانی سیالوں میں ظاہر ہوتا ہے۔ ایس او ایف آئی اے کے فوائد یہ ہیں کہ نمونے کی تیاری میں بہت کم ضرورت ہوتی ہے، اور الیکٹرانک تشخیصی آلات کو کنٹینمنٹ ایریا سے باہر رکھنے کی اجازت دی جاتی ہے۔ پس منظر ٹی ایس ایز، یا پریئن بیماریاں، ممالیہ جانوروں کی متعدی نیوروڈیجینریٹو بیماریاں ہیں جن میں مویشیوں کی سپنجفارم انسیفالوپیتھی، ہرن اور ایلک کی دائمی بربادی کی بیماری، بھیڑوں میں کھرچنے والی بیماری، اور انسانوں میں کروٹزفیلڈ-جیکب بیماری (سی جے ڈی) شامل ہیں۔ ٹی ایس ایز کو میزبان سے میزبان میں متاثرہ بافتوں کو کھا کر یا خون کی منتقلی کے ذریعے منتقل کیا جا سکتا ہے۔ ٹی ایس ایز کی طبی علامات میں انسانوں میں حرکت اور ہم آہنگی کا نقصان اور ڈیمینشیا شامل ہیں۔ ان کے انکیوبیشن کے ادوار مہینوں سے لے کر سالوں تک ہوتے ہیں، لیکن طبی علامات ظاہر ہونے کے بعد، وہ تیزی سے ترقی کرتے ہیں، ناقابل علاج ہوتے ہیں اور ہمیشہ مہلک ہوتے ہیں۔ ٹی ایس ای کے خطرے کو کم کرنے کی کوششوں کی وجہ سے زرعی سامان، ادویات، کاسمیٹکس، خون اور بافتوں کے عطیات، اور بائیوٹیکنالوجی مصنوعات کی پیداوار اور تجارت میں نمایاں تبدیلیاں آئی ہیں۔ کسی جانور یا انسان سے دماغی بافتوں کا پوسٹ مارٹم نیورو پیتھولوجیکل معائنہ ٹی ایس ای تشخیص کا 'گولڈ اسٹینڈرڈ' رہا ہے اور یہ بہت مخصوص ہے، لیکن دوسری تکنیکوں کی طرح حساس نہیں ہے۔ خوراک کی حفاظت کو بہتر بنانے کے لیے، تمام جانوروں کی پریئن بیماریوں کے لیے اسکریننگ کرنا فائدہ مند ہوگا جس میں اینٹی مارٹم، پری کلینیکل ٹیسٹنگ، یعنی علامات ظاہر کرنے سے پہلے ٹیسٹنگ کا استعمال کیا جائے۔ تاہم، پری سمپٹومیٹک میزبانوں میں پی آر پی ایس سی کی سطح بہت کم ہے۔ اس کے علاوہ، پی آر پی ایس سی عام طور پر جسم کے بافتوں میں غیر مساوی طور پر تقسیم ہوتے ہیں، جس میں سب سے زیادہ ارتکاز اعصابی نظام کے بافتوں میں مستقل طور پر پایا جاتا ہے اور خون یا پیشاب جیسے آسانی سے قابل رسائی جسمانی سیالوں میں بہت کم ارتکاز ہوتا ہے۔ لہذا، پی آر پی کی انتہائی کم مقدار کا پتہ لگانے کے لیے اس طرح کے کسی بھی ٹیسٹ کی ضرورت ہوگی اور اسے پی آر پی سی اور پی آر پی ایس سی میں فرق کرنا ہوگا۔ پی آر پی ایس سی کا پتہ لگانے کے موجودہ طریقے وقت طلب ہیں اور مشکوک جانوروں میں بیماری کی ایک یا زیادہ علامات ظاہر ہونے کے بعد پوسٹ مارٹم تجزیہ کا استعمال کرتے ہیں۔ موجودہ تشخیصی طریقے بنیادی طور پر پی آر پی سی اور پی آر پی ایس سی کے درمیان فزیو کیمیکل اختلافات کا پتہ لگانے پر مبنی ہیں جو آج تک ٹی ایس ایز کے لیے واحد قابل اعتماد مارکر ہیں۔ مثال کے طور پر، سب سے زیادہ استعمال ہونے والے تشخیصی ٹیسٹ پی آر پی سی کے پی کے مزاحم حصے کے اینٹی باڈی پر مبنی پتہ لگانے کے ساتھ مل کر پی آر پی سی اور پی آر پی ایس سی کے درمیان فرق کرنے کے لیے دماغ کے نمونوں میں پی آر پی ایس سی کے متعلقہ پروٹیز مزاحمت کا استحصال کرتے ہیں۔ روایتی طریقوں، جیسے پولیمریز چین ری ایکشن، سیرولوجی، یا سیل کلچر اسیسز کا استعمال کرکے پریئن کی بیماریوں کا پتہ لگانا ابھی تک ممکن نہیں ہے۔ ایک ایجنٹ مخصوص نیوکلک ایسڈ کی ابھی تک شناخت نہیں کی گئی ہے، اور متاثرہ میزبان اینٹی باڈی کا ردعمل ظاہر نہیں کرتا ہے۔ پی آر پی سی کی تشخیصی طور پر تبدیل شدہ شکل پی آر پی ایس سی ہے۔ کچھ گروپوں کا خیال ہے کہ پی آر پی ایس سی ٹی ایس ایز میں متعدی ایجنٹ (پریئن ایجنٹ) ہے، جبکہ دیگر گروپ ایسا نہیں کرتے۔ پی آر پی ایس سی بیماری کے عمل کا ایک نیورو پیتھولوجیکل پروڈکٹ، متعدی ایجنٹ کا ایک جزو، خود متعدی ایجنٹ، یا مجموعی طور پر کچھ اور ہو سکتا ہے۔ اس بات سے قطع نظر کہ بیماری کی حالت میں اس کا اصل کام کیا ہے، پی آر پی ایس سی واضح طور پر بیماری کے عمل سے وابستہ ہے، اور اس کا پتہ لگانے سے اس ایجنٹ کے ساتھ انفیکشن کی نشاندہی ہوتی ہے جس سے پریئن بیماریاں ہوتی ہیں۔ ایس او ایف آئی اے دیگر چیزوں کے علاوہ، حیاتیاتی نمونوں میں پی آر پی ایس سی کا پتہ لگا کر ایس او ایف آئی اے پریئن کی بیماریوں کی تشخیص کے طریقے فراہم کرتا ہے۔ نمونے دماغی ٹشو، اعصابی ٹشو، خون، پیشاب، لمفیٹک سیال، دماغی ریڑھ کی ہڈی کا سیال، یا اس کا مجموعہ ہو سکتے ہیں۔ پی آر پی ایس سی کی عدم موجودگی طریقوں کی پتہ لگانے کی حدود تک متعدی ایجنٹ کے ساتھ کسی انفیکشن کی نشاندہی نہیں کرتی ہے۔ پی آر پی ایس سی کی موجودگی کا پتہ لگانا پریئن بیماری سے وابستہ متعدی ایجنٹ کے ساتھ انفیکشن کی نشاندہی کرتا ہے۔ پریئن ایجنٹ کے ساتھ انفیکشن کا پتہ بیماری کے بڑھنے کے ابتدائی اور علامتی دونوں مراحل میں لگایا جا سکتا ہے۔ یہ اور دیگر بہتری صوفیہ کے ساتھ حاصل کی گئی ہیں۔ صوفیہ کی حساسیت اور خاصیت عام اور غیر معمولی پی آر پی آئسوفارم کے درمیان فرق کرنے کے لیے پی کے ہاضمے کی ضرورت کو ختم کرتی ہے۔ خون کے پلازما میں پی آر پی ایس سی کا مزید پتہ لگانے کے لیے محدود پروٹین مس فولڈنگ سائیکلک ایمپلیفکیشن (پی ایم سی اے) کے بعد صوفیہ کا استعمال کیا گیا ہے۔ صوفیہ کی حساسیت کی وجہ سے، پی ایم سی اے سائیکل کو کم کیا جا سکتا ہے، اس طرح بے ساختہ پی آر پی ایس سی کی تشکیل اور غلط مثبت نمونوں کا پتہ لگانے کے امکانات کم ہو جاتے ہیں۔ صوفیہ انتہائی حساس آلات کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کے طریقے فراہم کرکے انسانوں سمیت علامات سے پہلے اور علامات والے ٹی ایس ای سے متاثرہ جانوروں میں پریئن کی بیماریوں کا پتہ لگانے میں حساسیت میں اضافے کی ضروریات کو پورا کرتی ہے، جس کے لیے پی آر پی کے خلاف حال ہی میں تیار کردہ میبس کے ساتھ مل کر پہلے بیان کردہ طریقوں سے کم نمونے کی تیاری کی ضرورت ہوتی ہے۔ صوفیہ کے موجودہ ورژن کا طریقہ دماغ کے بافتوں میں پی آر پی ایس سی کا پتہ لگانے کے لیے کافی حساسیت کی سطح فراہم کرتا ہے۔ جب محدود ایس پی ایم سی اے کے ساتھ مل کر، موجودہ ایجادات کے طریقے خون کے پلازما، ٹشو اور جمع کردہ دیگر سیالوں میں پی آر پی ایس سی کا پتہ لگانے کے لیے کافی حساسیت کی سطح فراہم کرتے ہیں۔ یہ طریقے اینٹیجن کیپچر اور ارتکاز کے لیے میبس کی خاصیت کو سراؤنڈ آپٹیکل فائبر ڈٹیکشن ٹیکنالوجی کی حساسیت کے ساتھ جوڑتے ہیں۔ دماغی ہوموجینیٹس میں پی آر پی ایس سی کا پتہ لگانے کے لیے پہلے بیان کردہ طریقوں کے برعکس، یہ تکنیکیں، جب دماغی ہوموجینیٹس کا مطالعہ کرنے کے لیے استعمال کی جاتی ہیں، تو بیج دار پولیمرائزیشن، امپلیفکیشن، یا انزیمیٹک ڈائجشن (مثال کے طور پر، پروٹینیز کے، یا "پی کے" کے ذریعے) کا استعمال نہیں کرتی ہیں۔ یہ اس لحاظ سے اہم ہے کہ پچھلی رپورٹوں نے مختلف پی کے حساسیت کے ساتھ پی آر پی ایس سی آئسوفارم کے وجود کی نشاندہی کی ہے، جس سے جانچ کی وشوسنییتا کم ہوتی ہے۔ اس جانچ کی حساسیت اسے حیاتیاتی سیالوں میں تیزی سے پریئن کا پتہ لگانے کے جانچ کے لیے ایک پلیٹ فارم کے طور پر موزوں بناتی ہے۔ پریئن کی بیماریوں کے علاوہ، یہ طریقہ انفیکشن اور عوارض کے وسیع میدان عمل کے لیے تیز رفتار، اعلی کارکردگی کی جانچ کے لیے ایک ذریعہ فراہم کر سکتا ہے۔ جبکہ ایلیسا یا ویسٹرن بلاٹنگ کے ذریعے پلازما میں پی آر پی ایس سی کا پتہ لگانے کے لیے امیونوپریسیپیٹیشن کے ساتھ مل کر ایس پی ایم سی اے کے تقریبا 40 چکر ناکافی پائے گئے، پی آر پی ایس سی کو بھی سوفیا طریقوں سے آسانی سے ماپا گیا ہے۔ موجودہ جانچ پلیٹ فارم کے لیے ضروری سائیکلوں کی محدود تعداد عملی طور پر پی ایم سی اے سے متعلق غلط مثبت نتائج حاصل کرنے کے امکان کو ختم کرتی ہے جیسے کہ پہلے رپورٹ کیے گئے (تھورن اور ٹیری، 2008)۔ دیگر طبی ایپلی کیشنز بائیو مارکر ریسرچ کے میدان میں تیزی سے پیش رفت کے ساتھ، بہت سے انفیکشن اور عوارض جن کی تشخیص ان وٹرو ٹیسٹنگ کے ذریعے ممکن نہیں ہے، تیزی سے ممکن ہو رہے ہیں۔ پیش گوئی کی گئی ہے کہ ایس او ایف آئی اے پریون بیماریوں کے دائرہ کار سے باہر انفیکشن اور عوارض کے لیے تشخیصی جانچ کی ترقی میں وسیع تر استعمال کا باعث بنے گا۔ ایک اہم ممکنہ اطلاق دیگر پروٹین کو غلط طریقے سے جوڑنے والی بیماریوں، خاص طور پر الزائمر کے لیے ہے۔ شائع شدہ تحقیق 2011 کے ایک مطالعے میں کلینیکل سکریپی ایجنٹ کے ساتھ قدرتی اور زبانی طور پر متاثرہ بھیڑوں سے پیشاب میں پریون کا پتہ لگانے اور کلینیکل دائمی بربادی کی بیماری (سی ڈبلیو ڈی) کے ساتھ زبانی طور پر متاثرہ پری کلینیکل اور متاثرہ سفید دم والے ہرن کا پتہ لگانے کی اطلاع دی گئی۔ قدرتی طور پر یا پری کلینیکل پریئن سے متاثرہ بیضہ دانی یا گریوا کے پیشاب سے پی آر پی ایس سی کا پتہ لگانے سے متعلق یہ پہلی رپورٹ ہے۔ 2010 کے ایک مطالعے میں پروٹین کی غلط فولڈنگ سائیکلک ایمپلیفیکیشن (پی ایم سی اے) کی ایک اعتدال پسند مقدار کا مظاہرہ کیا گیا جس کے ساتھ ایک نئی سوفیا کا پتہ لگانے کی اسکیم شامل ہے، جس کا استعمال قدرتی اور تجرباتی انفیکشن کے بعد پری کلینیکل اور کلینیکل سکریپی بھیڑوں سے پروٹیز غیر علاج شدہ پلازما میں پی آر پی ایس سی، اور دائمی بربادی کی بیماری کے ساتھ سفید دم والے ہرن کا پتہ لگانے کے لیے کیا جا سکتا ہے۔ پریئن پروٹین (پی آر پی سی) کی بیماری سے وابستہ شکل، جو کہ پریئن پروٹین (پی آر پی سی) کی عام (سیلولر) شکل کی تشکیلی تبدیلی کے نتیجے میں ہوتی ہے، نیورو پیتھوجینسیس کے لیے مرکزی سمجھی جاتی ہے اور پریئن بیماری کی تشخیص کے لیے واحد قابل اعتماد مالیکیولر مارکر کے طور پر کام کرتی ہے۔ اگرچہ پی آر پی ایس سی کی اعلی ترین سطح سی این ایس میں موجود ہوتی ہے، لیکن ایک معقول تشخیصی جانچ کی ترقی کے لیے جسمانی سیالوں کے استعمال کی ضرورت ہوتی ہے جس میں خاص طور پر پی آر پی ایس سی کی انتہائی کم سطح ہوتی ہے۔ پی ایم سی اے ٹیکنالوجی کے ذریعے بیمار جانوروں کے خون میں پی آر پی ایس سی کا پتہ چلا ہے۔ تاہم، کئی دنوں تک بار بار سائیکلنگ، جو خون کے مواد کے پی ایم سی اے کے لیے ضروری ہے، کے نتیجے میں مخصوصیت میں کمی (غلط مثبت) کی اطلاع ملی ہے۔ خون میں پی آر پی ایس سی کے لیے ایک ایسی جانچ تیار کرنے کے لیے جو انتہائی حساس اور مخصوص دونوں ہو، محققین نے صوفیہ کے ساتھ محدود سیریل پی ایم سی اے (ایس پی ایم سی اے) کا استعمال کیا۔ انہوں نے پولیڈینیلک ایسڈ کے اضافے کے ساتھ ایس پی ایم سی اے میں کوئی اضافہ نہیں پایا، اور نہ ہی موثر امپلیفکیشن کے لیے پی آر پی سی اور پی آر پی ایس سی ذرائع کے جینوٹائپ سے ملنا ضروری تھا۔ 2009 کے ایک مطالعے سے پتہ چلا ہے کہ صوفیہ، اپنی موجودہ شکل میں، ہیمسٹر، بھیڑ اور ہرن کے ریکومبیننٹ پی آر پی کے 10 سے بھی کم اٹوگرام (اے جی) کا پتہ لگانے کی صلاحیت رکھتی ہے۔ 263K سے متاثرہ ہیمسٹر کے دماغوں سے تقریبا 10 اے جی پی آر پی ایس سی کا پتہ اسکریپی سے متاثرہ بھیڑ اور ہرن کے دماغوں سے پی آر پی ایس سی کا پتہ لگانے کی اسی طرح کی نچلی حدود کے ساتھ لگایا جا سکتا ہے جو دائمی بربادی کی بیماری سے متاثر ہیں۔ یہ پتہ لگانے کی حدود پروٹیز سے علاج شدہ اور غیر علاج شدہ مواد کو اس مقام سے آگے پتلا کرنے کی اجازت دیتی ہیں جہاں پی آر پی سی، غیر مخصوص پروٹین یا دیگر غیر معمولی مواد پی آر پی ایس سی سگنل کا پتہ لگانے اور/یا خاصیت میں مداخلت کر سکتے ہیں۔ یہ نہ صرف پی آر پی ایس سی کا پتہ لگانے کی خاصیت کے مسئلے کو ختم کرتا ہے، بلکہ حساسیت کو بھی بڑھاتا ہے، کیونکہ جزوی پی آر پی ایس سی پروٹیولیسس کا امکان اب کوئی تشویش کی بات نہیں ہے۔ ایس او ایف آئی اے ممکنہ طور پر ٹرانسمیسمبل انسیفالوپیتھی کا قبل از وقت پتہ لگانے کا باعث بنے گا اور اضافی ٹارگٹ ایمپلیفکیشن پروٹوکول کے ساتھ استعمال کے لیے بھی موزوں ہے۔ صوفیہ بیماری کے پیتھوجینسیس اور/یا تشخیص میں شامل مخصوص پروٹین کا پتہ لگانے کے لیے ایک حساس ذریعہ کی نمائندگی کرتا ہے جو قابل منتقلی سپنجفارم انسیفالوپیتھی کے دائرہ کار سے باہر تک پھیلا ہوا ہے۔ امیونواسے حوالہ جات بیرونی روابط بایونوسس سوفیا ویڈیو تعارف امیونولوجک ٹیسٹ پروٹین کے طریقے سالماتی حیاتیات لیبارٹری تکنیک سالماتی حیاتیات تکنیک پرائنز