Rabbit hybridoma
خرگوش ہائبرڈوما ایک ہائبرڈ سیل لائن ہے جو خرگوش بی سیل پیدا کرنے والے اینٹی باڈی کے کینسر والے بی سیل (مائیلوما) کے ساتھ فیوژن سے بنتی ہے۔ خرگوش کے مدافعتی نظام کو زیادہ وابستگی کے ساتھ اینٹی باڈیز تیار کرنے اور فاسفو پیپٹائڈز، کاربوہائیڈریٹ اور امیونوجینز سمیت بہت سے مالیکیولز کی زیادہ متنوع شناخت کے لیے ایک گاڑی کے طور پر دستاویز کیا گیا ہے جو بصورت دیگر چوہے میں امیونوجینک نہیں ہیں۔ تاہم، حال ہی تک، خرگوش سے دستیاب اینٹی باڈیز کی قسم پولی کلونل اینٹی باڈیز تک محدود تھی۔ 1970 کی دہائی میں ماؤس ہائبرڈوما ٹیکنالوجی کی ترقی کے بعد خرگوش مونوکلونل اینٹی باڈیز پیدا کرنے کے لیے کئی کوششیں کی گئیں۔ خرگوش مونوکلونل اینٹی باڈیز بنانے کے لیے ماؤس-ریبٹ ہیٹرو-ہائبرڈوما میں تحقیق کی گئی۔ تاہم، ان ہیٹرو ہائبرڈوما کو بالآخر کلون کرنا مشکل تھا، اور کلون، عام طور پر غیر مستحکم تھے، اور طویل عرصے تک اینٹی باڈی کا اخراج نہیں کرتے تھے۔ ابتدائی فیوژن پارٹنر 1995 میں، کیتھرین نائٹ اور اس کے ساتھی، شکاگو کی لویولا یونیورسٹی میں، امیونوگلوبلین ہیوی اور لائٹ چین بڑھانے والوں کے کنٹرول میں آنکوجینز وی-اے بی ایل اور سی-مائیک کو زیادہ سے زیادہ ظاہر کرنے والا ڈبل ٹرانسجینک خرگوش تیار کرنے میں کامیاب ہوئے۔ خرگوش نے ایک مائیلوما جیسا ٹیومر بنایا، جس سے 240E-1 نامی پلازماسیٹوما سیل لائن کو الگ تھلگ کرنے کی اجازت ملی۔ خرگوش کے لیمفوسائٹس کے ساتھ 240E-1 خلیوں کے فیوژن نے ہائبرڈوما تیار کیے جو خرگوش کے مونوکلونل اینٹی باڈیز کو مستقل انداز میں خارج کرتے ہیں۔ تاہم، 1970 کی دہائی میں تیار ہونے والی ابتدائی ماؤس مائیلوما لائنوں کی طرح، استحکام ایک تشویش تھی۔ ڈاکٹر نائٹ کی لیبارٹری سے 240E-1 سیل لائن حاصل کرنے والی متعدد لیبارٹریوں نے فیوژن سیل لائن 240E-1 کے ساتھ استحکام کے مسائل کی اطلاع دی۔ بہتر فیوژن پارٹنر 1996 میں، یونیورسٹی آف کیلیفورنیا سان فرانسسکو (یو سی ایس ایف) میں ویمین جھو اور رابرٹ پائیٹیلا نے ڈاکٹر نائٹ کی لیبارٹری سے 240 ای-1 حاصل کیا اور خرگوش کا ایک بہتر ہائبرڈوما تیار کرنے کی کوشش کی۔ 240E-1 کی خصوصیات میں بہتری بار بار ذیلی کلوننگ، اعلی فیوژن کی کارکردگی کے لیے انتخاب، مضبوط نمو، اور مورفولوجیکل خصوصیات جیسے فیز کانٹریسٹ خوردبین کے تحت روشن ظہور کے ذریعے حاصل کی گئی۔ منتخب ذیلی کلونوں کی مستحکم ہائبرڈوما اور مونوکلونل اینٹی باڈی سراو پیدا کرنے کی صلاحیت کے لیے مزید جانچ کی گئی۔ ذیلی کلوننگ اور انتخاب کے عمل کے متعدد دوروں کے بعد، 240 ای-ڈبلیو نامی ایک نئی سیل لائن کی نشاندہی کی گئی اور جس نے فیوژن کی بہتر کارکردگی اور استحکام کا اظہار کیا۔ سیل لائن 240E-W کو تحقیق اور تجارتی ایپلی کیشنز کے لیے خرگوش مونوکلونل اینٹی باڈیز کی تیاری کے لیے مزید تیار اور بہتر بنایا گیا ہے۔ عمل خرگوش میں ہائبرڈوما کی تشکیل کے عمل میں سب سے پہلے خرگوش سے بی خلیات حاصل کرنا شامل ہے جسے حفاظتی ٹیکے لگائے گئے ہیں۔ خرگوش کے لیے امیونائزیشن کے متعدد پروٹوکول موجود ہیں، خاص طور پر پولی کلونل اینٹی باڈیز کی نسل کے لیے۔ حفاظتی ٹیکوں کے بعد، بی خلیوں کو ہائبرڈوما بنانے کے لیے ایک امیدوار خرگوش فیوژن پارٹنر سیل لائن کے ساتھ ملایا جاتا ہے۔ ہائبرڈوما سے حاصل ہونے والی اینٹی باڈیز کو ایک اینٹیجن کے لیے اسکرین کیا جاتا ہے جو تشخیصی ٹیسٹ جیسے ELISA، ویسٹرن بلاٹ، امیونو ہسٹو کیمسٹری اور FACS کے ذریعے دلچسپی کے معیار پر پورا اترتا ہے۔ مونوکلونل خصوصیات کو یقینی بنانے کے لیے نتیجے میں پیدا ہونے والے ہائبرڈوما کو ذیلی کلون کیا جا سکتا ہے۔ نیشنل کینسر انسٹی ٹیوٹ (بیتھیسڈا، یو ایس اے) میں خرگوش کے اینٹی باڈیز مچل ہو اور ایرا پاسٹن کی ہیومینائزیشن نے خرگوش کے مونوکلونل اینٹی باڈیز کے ایک گروپ کو الگ کیا (جیسے۔ YP218، YP223) جو کینسر تھراپی کے لیے میسوتھیلن کے نایاب ایپیٹوپس کو پہچانتے ہیں، بشمول C ٹرمینل اینڈ کے قریب ناقص امیونوجینک سائٹس۔ ڈاکٹر ہو کی لیبارٹری نے پروٹین ڈیٹا بینک سے خرگوش کے اینٹی باڈیز کے پیچیدہ ڈھانچوں کا ان کے اینٹی جینز کے ساتھ تجزیہ کیا، اور خرگوش ایف وی پر اس کے اینٹیجن سے 6 اینگسٹروم کے فاصلے کے اندر اینٹیجن سے رابطہ کرنے والے باقیات کی نشاندہی کی۔ انہوں نے "ایچ وی 4" اور "ایل وی 4" کا نام دیا، غیر تکمیل کا تعین کرنے والے خطے (سی ڈی آر) کے لوپس جو ساختی طور پر اینٹیجن کے قریب ہیں اور بالترتیب خرگوش کی بھاری زنجیر اور ہلکی زنجیر کے فریم ورک 3 میں واقع ہیں۔ کمپیوٹیشنل ساختی ماڈلنگ کی بنیاد پر، ہو اور ژانگ نے مشترکہ کبات/آئی ایم جی ٹی/پیراٹوم سی ڈی آر کو انسانی جرملائن فریم ورک کے سلسلے میں جوڑ کر انسانیت کی حکمت عملی تیار کی۔ انسانی خرگوش ایف وی ایس پر مشتمل امیونوٹاکسن (مثال کے طور پر۔ طبی طور پر استعمال ہونے والے ٹاکسن سے جڑے ہوئے ایچ وائی پی 218 نے ٹیومر کے خلیوں کے خلاف ان کے اصل خرگوش ایف وی سے حاصل کردہ امیونوٹاکسن کے مقابلے میں مضبوط سائٹوٹوکسائٹی ظاہر کی۔ ایچ وائی پی 218 اینٹی باڈی پر مبنی سی اے آر ٹی خلیات بھی چوہوں میں ٹیومر کی نشوونما کی موثر روک تھام کو ظاہر کرتے ہیں۔ طریقہ کار (یعنی۔ مشترکہ کبٹ/آئی ایم جی ٹی/پیراٹوم خرگوش سی ڈی آر کو ایک مستحکم انسانی جرملائن فریم ورک میں گرافٹ کرنا) خرگوش کے اینٹی باڈیز کو انسانی بنانے کے عمومی نقطہ نظر کے طور پر تجویز کیا گیا ہے۔ حوالہ جات بیرونی روابط 240 ای-ڈبلیو امیونولوجی بائیوٹیکنالوجی امیون سسٹم مونوکلونل اینٹی باڈیز علاج کے اینٹی باڈیز خرگوش سیل لائنوں کے لیے 240 ای-1 سیلوسورس اندراج کے لیے بیرونی روابط سیلوسورس اندراج