Hybridization probe
سالماتی حیاتیات میں، ہائبرڈائزیشن پروب (ایچ پی) ڈی این اے یا آر این اے کا ایک ٹکڑا ہے جو عام طور پر 15-10000 نیوکلیوٹائڈ لمبا ہوتا ہے جسے تابکاری سے یا فلوروسینٹ طور پر لیبل کیا جا سکتا ہے۔ تجزیہ شدہ آر این اے یا ڈی این اے میں نیوکلیوٹائڈ کے سلسلے کی موجودگی کا پتہ لگانے کے لیے ایچ پی کا استعمال کیا جا سکتا ہے جو تحقیقات میں ترتیب کی تکمیل کرتے ہیں۔ لیبل شدہ تحقیقات کو پہلے (گرم کرکے یا الکلین حالات جیسے سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ کی نمائش کے تحت) سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے (ایس ایس ڈی این اے) میں تبدیل کیا جاتا ہے اور پھر ہدف ایس ایس ڈی این اے (سدرن بلاٹنگ) یا آر این اے (ناردرن بلاٹنگ) میں ہائبرڈائز کیا جاتا ہے جو جھلی پر یا سیٹو میں متحرک ہوتا ہے۔ تحقیقات کو اس کے ہدف کے سلسلے میں ہائبرڈائزیشن کا پتہ لگانے کے لیے، تحقیقات کو تابکار یا (حال ہی میں) فلوروسینٹ مالیکیولز کے مالیکیولر مارکر کے ساتھ ٹیگ (یا "لیبل") کیا جاتا ہے۔ عام طور پر استعمال ہونے والے مارکر 32 پی (تحقیقات ڈی این اے میں فاسفوڈیسٹر بانڈ میں شامل فاسفورس کا ایک تابکار آاسوٹوپ)، ڈیگوکسجینن، ایک غیر تابکار، اینٹی باڈی پر مبنی مارکر، بائیوٹن یا فلوروسین ہیں۔ ڈی این اے سیکوینس یا آر این اے ٹرانسکرپٹ جن میں تحقیقات سے اعتدال سے لے کر اعلی ترتیب کی مماثلت ہوتی ہے، اس کا پتہ آٹوڈیگرافی یا امیجنگ کی دیگر تکنیکوں کے ذریعے ہائبرڈائزڈ تحقیقات کو دیکھ کر لگایا جاتا ہے۔ عام طور پر، یا تو ایکس رے تصاویر فلٹر سے لی جاتی ہیں، یا فلٹر کو یو وی روشنی کے نیچے رکھا جاتا ہے۔ اعتدال پسند یا اعلی مماثلت کے ساتھ ترتیبات کا پتہ لگانا اس بات پر منحصر ہے کہ ہائبرڈائزیشن کے حالات کتنے سخت تھے-ہائی سختی، جیسے ہائی ہائبرڈائزیشن کا درجہ حرارت اور ہائبرڈائزیشن بفرز میں کم نمک، صرف نیوکلک ایسڈ کے ترتیبات کے درمیان ہائبرڈائزیشن کی اجازت دیتا ہے جو انتہائی مماثل ہوتے ہیں، جبکہ کم سختی، جیسے کہ کم درجہ حرارت اور زیادہ نمک، ہائبرڈائزیشن کی اجازت دیتا ہے جب ترتیبات کم مماثل ہوتے ہیں۔ ڈی این اے مائیکرو ایریز میں استعمال ہونے والے ہائبرڈائزیشن پروبز سے مراد ڈی این اے کوولینٹ طور پر کسی غیر فعال سطح سے منسلک ہوتا ہے، جیسے لیپت شیشے کی سلائیڈز یا جین چپس، جس میں موبائل سی ڈی این اے کا ہدف ہائبرڈائز ہوتا ہے۔ طریقہ کار پر منحصر ہے، تحقیقات کو فاسفورامائڈائٹ طریقہ استعمال کرتے ہوئے ترکیب کیا جا سکتا ہے، یا اسے پی سی آر امپلیفیکیشن یا کلوننگ کے ذریعے تیار اور لیبل کیا جا سکتا ہے (دونوں پرانے طریقے ہیں)۔ ویو میں استحکام کو بڑھانے کے لیے پروب آر این اے کا استعمال نہیں کیا جاتا ہے۔ اس کے بجائے، آر این اے اینالاگس کا استعمال کیا جا سکتا ہے، خاص طور پر مورفولینو مشتقات میں۔ سالماتی ڈی این اے-یا آر این اے پر مبنی تحقیقات باقاعدگی سے جین لائبریریوں کی اسکریننگ، بلاٹنگ کے طریقوں سے نیوکلیوٹائڈ کے سلسلے کا پتہ لگانے، اور دیگر جین ٹیکنالوجیز، جیسے نیوکلک ایسڈ اور ٹشو مائکرواریوں میں استعمال ہوتی ہیں۔ اسکوپیون ® تحقیقات کی مثالیں مالیکیولر بیکن تحقیقات ٹاک مین ® تحقیقات ایل این اے ® (لاکڈ نیوکلک ایسڈ) تحقیقات سائیکلنگ پروب ٹیکنالوجی (سی پی ٹی) مائکروبیل ماحولیات میں استعمال مائکروبیل ماحولیات کے میدان میں، اولیگونیوکلیوٹائڈ تحقیقات کا استعمال مائکروبیل پرجاتیوں، جنرا، یا مائکروجنزموں کی موجودگی کا تعین کرنے کے لیے کیا جاتا ہے جن کی زیادہ وسیع سطح پر درجہ بندی کی جاتی ہے، جیسے بیکٹیریا، آرکیا، اور یوکیریوٹس فلوریسنس ان سیٹو ہائبرڈائزیشن (ایف آئی ایس ایچ) کے ذریعے۔ آر آر این اے تحقیقات نے سائنسدانوں کو ماحول سے براہ راست آر آر این اے ترتیبات کی بازیافت کے ذریعے مائکروجنزموں کا تصور کرنے کے قابل بنایا ہے، جنہیں ابھی تک لیبارٹری کی ترتیبات میں کلچر نہیں کیا گیا ہے۔ اس قسم کے مائکروجنزموں کی مثالوں میں شامل ہیں: نیوسکیا راموسا: این راموسا ایک نیوسٹن بیکٹیریا ہے جو اتلی میٹھے پانی کے رہائش گاہوں کی سطح پر عام، ڈائکوٹومیکل طور پر شاخ دار گلاب بناتا ہے۔ ایکرومیٹیم آکسیلیفرم: یہ بہت بڑا جراثیم (خلیے کی لمبائی 100 مائیکرو میٹر تک، قطر 50 مائیکرو میٹر تک) سلفر گلوبولز اور بڑے پیمانے پر کیلکائٹ کی شمولیت پر مشتمل ہوتا ہے اور میٹھے پانی کی تلچھٹ کی اوپری تہوں میں آباد ہوتا ہے۔ یہ ننگی آنکھوں سے نظر آتا ہے اور اس کی کاشت کے خلاف مزاحمت نے مائیکرو بائیولوجسٹس کی نسلوں کو الجھن میں ڈال دیا ہے۔ حدود بعض صورتوں میں، مماثلت کی وجہ سے 16S rRNA ترتیبات کا استعمال کرتے وقت انواع کے درمیان فرق پریشانی کا باعث بن سکتا ہے۔ ایسی صورتوں میں، 23S rRNA ایک بہتر متبادل ہو سکتا ہے۔ آر آر این اے ترتیبات کی عالمی معیاری لائبریری مسلسل بڑی ہوتی جا رہی ہے اور مسلسل اپ ڈیٹ کی جا رہی ہے، اور اس طرح ایک خاص طور پر ڈیزائن کردہ تحقیقات (ٹیسٹ حیاتیات کی ایک رینج سے مکمل اور موجودہ ڈیٹا پر مبنی) اور ایک ناپسندیدہ/نامعلوم ہدف حیاتیات کے درمیان بے ترتیب ہائبرڈائزیشن ایونٹ کے امکان کو آسانی سے مسترد نہیں کیا جا سکتا۔ اس کے برعکس، یہ قابل فہم ہے کہ ایسے مائکروجنزم موجود ہیں، جن کی شناخت ابھی باقی ہے، جو فایلوجینٹک طور پر پروب ٹارگٹ گروپ کے ممبر ہیں، لیکن جزوی یا قریب کامل ٹارگٹ سائٹس ہیں، جو عام طور پر گروپ مخصوص تحقیقات کو ڈیزائن کرتے وقت لاگو ہوتے ہیں۔ شاید اس تکنیک کی سب سے بڑی عملی حد دستیاب آٹومیشن کی کمی ہے۔ فارنسک سائنس میں استعمال فارنسک سائنس میں ہائبرڈائزیشن تحقیقات کا استعمال کیا جاتا ہے، مثال کے طور پر، شارٹ ٹینڈم ریپیٹس (مائیکرو سیٹلائٹ) کے علاقوں کا پتہ لگانے کے لیے اور پابندی کے ٹکڑے کی لمبائی پولیمورفزم (آر ایف ایل پی) کے طریقوں میں، یہ سب بڑے پیمانے پر ڈی این اے پروفائلنگ تجزیہ کے حصے کے طور پر استعمال ہوتے ہیں۔ سالماتی تحقیقات حوالہ جات جینیاتی تکنیک سالماتی حیاتیات بھی دیکھیں۔