Affinity chromatography
افینیٹی کرومیٹوگرافی ایک حیاتیاتی سالمے کو مرکب سے الگ کرنے کا ایک طریقہ ہے، جو حیاتیاتی سالمے اور دوسرے مادے کے درمیان انتہائی مخصوص میکرو مالیکیولر بائنڈنگ تعامل پر مبنی ہے۔ بائنڈنگ تعامل کی مخصوص قسم کا انحصار دلچسپی کے بائیو مالیکیول پر ہوتا ہے۔ اینٹیجن اور اینٹی باڈی، انزائم اور سبسٹریٹ، ریسیپٹر اور لگینڈ، یا پروٹین اور نیوکلک ایسڈ بائنڈنگ تعاملات کو اکثر مختلف بائیو مالیکیولز کی علیحدگی کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ افینیٹی کرومیٹوگرافی دیگر کرومیٹوگرافک طریقوں کے مقابلے میں اس کی اعلی انتخاب اور علیحدگی کے حل کے لیے مفید ہے۔ اصول وابستگی کرومیٹوگرافی میں دلچسپی کے تجزیہ کار (عام طور پر موبائل مرحلے میں تحلیل)، اور بائنڈنگ پارٹنر یا لگینڈ (اسٹیشنری مرحلے پر متحرک) کے درمیان مخصوص بائنڈنگ تعاملات کا فائدہ ہوتا ہے۔ ایک عام وابستگی کرومیٹوگرافی کے تجربے میں، لگینڈ ایک ٹھوس، اگھلنشیل میٹرکس سے منسلک ہوتا ہے-عام طور پر ایک پولیمر جیسے اگروز یا پولی ایکریلامائیڈ-کیمیائی طور پر رد عمل والے فعال گروپوں کو متعارف کرانے کے لیے تبدیل کیا جاتا ہے جس کے ساتھ لگینڈ رد عمل ظاہر کر سکتا ہے، اور مستحکم کوولینٹ بانڈ تشکیل دے سکتا ہے۔ اسٹیشنری فیز کو پہلے ایک کالم میں لوڈ کیا جاتا ہے جس میں موبائل فیز متعارف کرایا جاتا ہے۔ وہ مالیکیول جو لگینڈ سے جڑے ہوتے ہیں وہ مستحکم مرحلے سے وابستہ رہیں گے۔ اس کے بعد غیر ہدف شدہ حیاتیاتی سالمات کو ہٹانے کے لیے ایک واش بفر لگایا جاتا ہے جس سے ان کے مستحکم مرحلے کے ساتھ کمزور تعاملات میں خلل پڑتا ہے، جبکہ دلچسپی کے حیاتیاتی سالمات پابند رہیں گے۔ اس کے بعد ٹارگیٹ بائیو مالیکیولز کو نام نہاد ایلیوشن بفر لگا کر ہٹایا جا سکتا ہے، جو باؤنڈ ٹارگیٹ بائیو مالیکیولز اور لگینڈ کے درمیان تعاملات میں خلل ڈالتا ہے۔ اس طرح ہدف کے مالیکیول کو ایلیوٹنگ حل میں بازیافت کیا جاتا ہے۔ افینیٹی کرومیٹوگرافی میں دلچسپی کے تجزیے کے سالماتی وزن، چارج، ہائیڈروفوبیسیٹی، یا دیگر جسمانی خصوصیات کو جاننے کی ضرورت نہیں ہے، حالانکہ اس کی بائنڈنگ خصوصیات کا علم علیحدگی پروٹوکول کے ڈیزائن میں مفید ہے۔ وابستگی کرومیٹوگرافی کے طریقہ کار میں عام طور پر استعمال ہونے والے بائنڈنگ تعاملات کی اقسام کا خلاصہ نیچے دیے گئے جدول میں کیا گیا ہے۔ بیچ اور کالم سیٹ اپ ٹھوس مرحلے کے لیے بائنڈنگ کالم کرومیٹوگرافی کے ذریعے حاصل کی جا سکتی ہے جس کے ذریعے ٹھوس میڈیم کو ایک کالم پر پیک کیا جاتا ہے، ابتدائی مرکب کالم کے ذریعے چلتا ہے تاکہ آباد ہونے کی اجازت دی جا سکے، کالم کے ذریعے ایک واش بفر چلتا ہے اور بعد میں ایلیوشن بفر کالم پر لگایا جاتا ہے اور جمع کیا جاتا ہے۔ یہ اقدامات عام طور پر ماحول کے دباؤ پر کیے جاتے ہیں۔ متبادل طور پر، بیچ ٹریٹمنٹ کا استعمال کرتے ہوئے بائنڈنگ حاصل کی جا سکتی ہے، مثال کے طور پر، برتن میں ٹھوس مرحلے میں ابتدائی مرکب کو شامل کرکے، ملا کر، ٹھوس مرحلے کو الگ کرکے، مائع مرحلے کو ہٹا کر، دھونے، دوبارہ سینٹرفیوگنگ، ایلیوشن بفر کو شامل کرکے، دوبارہ سینٹرفیوگنگ اور ایلیوٹ کو ہٹا کر۔ بعض اوقات ایک ہائبرڈ طریقہ اس طرح استعمال کیا جاتا ہے کہ بائنڈنگ بیچ طریقہ سے کی جاتی ہے، لیکن ٹارگٹ مالیکیول باؤنڈ کے ساتھ ٹھوس مرحلے کو کالم پر پیک کیا جاتا ہے اور کالم پر دھونے اور نکالنے کا کام کیا جاتا ہے۔ افینیٹی کرومیٹوگرافی میں استعمال ہونے والے لگینڈ نامیاتی اور غیر نامیاتی دونوں ذرائع سے حاصل کیے جاتے ہیں۔ حیاتیاتی ذرائع کی مثالیں سیرم پروٹین، لیکٹن اور اینٹی باڈیز ہیں۔ غیر نامیاتی ذرائع مورونک ایسڈ، دھاتی چیلیٹس اور ٹرائزن ڈائز ہیں۔ ایک تیسرا طریقہ، توسیع شدہ بستر جذب، جو اوپر بیان کردہ دو طریقوں کے فوائد کو یکجا کرتا ہے، بھی تیار کیا گیا ہے۔ ٹھوس مرحلے کے ذرات کو ایک کالم میں رکھا جاتا ہے جہاں مائع مرحلے کو نیچے سے پمپ کیا جاتا ہے اور اوپر سے باہر نکلتا ہے۔ ذرات کی کشش ثقل اس بات کو یقینی بناتی ہے کہ ٹھوس مرحلہ مائع مرحلے کے ساتھ کالم سے باہر نہ نکلے۔ دلچسپی کے ذرات کو حل کرنے کے لیے نمک کے ارتکاز، پی ایچ، پی آئی، چارج اور آئنک طاقت کو براہ راست یا میلان کے ذریعے تبدیل کر کے وابستگی کے کالموں کو ختم کیا جا سکتا ہے۔ حال ہی میں، سیریز میں ایک سے زیادہ کالموں کو استعمال کرنے والے سیٹ اپ تیار کیے گئے ہیں۔ سنگل کالم سیٹ اپ کے مقابلے میں فائدہ یہ ہے کہ رال کے مواد کو مکمل طور پر لوڈ کیا جا سکتا ہے کیونکہ غیر بائنڈنگ پروڈکٹ کو براہ راست تازہ کالم کے مواد کے ساتھ لگاتار کالم میں منتقل کیا جاتا ہے۔ ان کرومیٹوگرافک عمل کو پیریڈک کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی (پی سی سی) کے نام سے جانا جاتا ہے۔ اس طرح پیدا شدہ مصنوعات کی فی مقدار رال کی لاگت کو کافی حد تک کم کیا جا سکتا ہے۔ چونکہ ایک کالم کو ہمیشہ خارج کیا جا سکتا ہے اور دوبارہ تخلیق کیا جا سکتا ہے جبکہ دوسرا کالم بھرا ہوا ہے، پہلے سے ہی دو کالم فوائد کا مکمل استعمال کرنے کے لیے کافی ہیں۔ اضافی کالم اضافی سازوسامان اور رال کے اخراجات کی قیمت پر ایلیوشن اور تخلیق نو کے اوقات کے لیے اضافی لچک دے سکتے ہیں۔ مخصوص استعمال افینیٹی کرومیٹوگرافی کو متعدد ایپلی کیشنز میں استعمال کیا جا سکتا ہے، بشمول نیوکلک ایسڈ پیوریفکیشن، سیل فری ایکسٹریکٹس سے پروٹین پیوریفکیشن، اور خون سے پیوریفکیشن۔ افینیٹی کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے، کوئی بھی پروٹین کو الگ کر سکتا ہے جو کسی خاص ٹکڑے سے جڑا ہوتا ہے اور پروٹین سے جو اس مخصوص ٹکڑے کو نہیں باندھتا ہے۔ چونکہ طہارت کی یہ تکنیک ضروری پروٹین کی حیاتیاتی خصوصیات پر منحصر ہے، اس لیے یہ ایک مفید تکنیک ہے اور پروٹین کو ایک قدم میں کئی گنا صاف کیا جا سکتا ہے۔ مختلف وابستگی میڈیا مختلف قسم کے ممکنہ استعمال کے لیے بہت سے مختلف وابستگی میڈیا موجود ہیں۔ مختصر طور پر، وہ (عمومی) فعال/فعال ہوتے ہیں جو ایک فعال سپیسر، سپورٹ میٹرکس کے طور پر کام کرتے ہیں، اور زہریلے ریجینٹس کو سنبھالنے کو ختم کرتے ہیں۔ امینو ایسڈ میڈیا کا استعمال مختلف قسم کے سیرم پروٹین، پروٹین، پیپٹائڈز، اور انزائم کے ساتھ ساتھ آر آر این اے اور ڈی ایس ڈی این اے کے ساتھ کیا جاتا ہے۔ ایویڈن بائیوٹن میڈیا بائیوٹن/ایویڈن اور ان کے مشتقات کی صفائی کے عمل میں استعمال ہوتا ہے۔ کاربوہائیڈریٹ بانڈنگ اکثر گلائکوپروٹینز یا کسی دوسرے کاربوہائیڈریٹ پر مشتمل مادہ کے ساتھ استعمال ہوتی ہے۔ کاربوہائیڈریٹ کو لیکٹنس، گلائکوپروٹینز، یا کسی دوسرے کاربوہائیڈریٹ میٹابولائٹ پروٹین کے ساتھ استعمال کیا جاتا ہے۔ ڈائی لگینڈ میڈیا غیر مخصوص ہے لیکن حیاتیاتی سبسٹریٹس اور پروٹین کی نقل کرتا ہے۔ گلوٹاتھیون جی ایس ٹی ٹیگ شدہ ریکومبیننٹ پروٹین کو الگ کرنے کے لیے مفید ہے۔ ہیپرین ایک عمومی وابستگی والا لگینڈ ہے، اور یہ پلازما کوگولیشن پروٹین کی علیحدگی کے لیے سب سے زیادہ مفید ہے، ساتھ ہی نیوکلک ایسڈ انزائمز اور لیپیسز ہائیڈروفوبک انٹرایکشن میڈیا عام طور پر مفت کاربوکسیل گروپوں اور پروٹین کو نشانہ بنانے کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔ امیونوافینیٹی میڈیا (نیچے تفصیل سے) اینٹی جینز اور اینٹی باڈیز کی اعلی خاصیت کو الگ کرنے کے لیے استعمال کرتا ہے۔ متحرک دھات کی وابستگی کرومیٹوگرافی کو مزید ذیل میں تفصیل سے بیان کیا گیا ہے اور دھات کے آئنوں اور پروٹین (عام طور پر خاص طور پر ٹیگ کیے گئے) کے درمیان تعاملات کو الگ کرنے کے لیے استعمال کرتا ہے۔ نیوکلیوٹائڈ/کوینزیم جو ڈی ہائیڈروجنیز، کنیز اور ٹرانسامینسیس کو الگ کرنے کا کام کرتا ہے۔ نیوکلک ایسڈ ایم آر این اے، ڈی این اے، آر آر این اے، اور دیگر نیوکلک ایسڈ/اولیگونیوکلیوٹائڈز کو پھنسانے کے لیے کام کرتے ہیں۔ امیونوگلوبلن کو صاف کرنے کے لیے پروٹین اے/جی طریقہ استعمال کیا جاتا ہے۔ اسپیشلٹی میڈیا ایک مخصوص کلاس یا قسم کے پروٹین/کو انزائم کے لیے ڈیزائن کیا گیا ہے۔ اس قسم کا میڈیا صرف ایک مخصوص پروٹین یا کوینزیم کو الگ کرنے کے لیے کام کرے گا۔ امیونوافینیٹی اس طریقہ کار کا ایک اور استعمال خون کے سیرم سے اینٹی باڈیز کی افینیٹی پیوریفکیشن ہے۔ اگر سیرم میں کسی مخصوص اینٹیجن کے خلاف اینٹی باڈیز موجود ہیں (مثال کے طور پر اگر سیرم کسی ایسے جاندار سے آتا ہے جسے متعلقہ اینٹیجن کے خلاف حفاظتی ٹیکے لگائے گئے ہیں) تو اسے اس اینٹیجن کی وابستگی کو صاف کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ اسے امیونوافینیٹی کرومیٹوگرافی بھی کہا جاتا ہے۔ مثال کے طور پر، اگر کسی جاندار کو جی ایس ٹی فیوژن پروٹین کے خلاف حفاظتی ٹیکے لگائے جاتے ہیں تو یہ فیوژن پروٹین کے خلاف اینٹی باڈیز پیدا کرے گا، اور ممکنہ طور پر جی ایس ٹی ٹیگ کے خلاف بھی اینٹی باڈیز تیار کرے گا۔ اس کے بعد پروٹین کو ایک ٹھوس سپورٹ جیسے اگروز کے ساتھ مشترکہ طور پر جوڑا جا سکتا ہے اور مدافعتی سیرم سے اینٹی باڈی کی صفائی میں وابستگی لگینڈ کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ مکمل طور پر، جی ایس ٹی پروٹین اور جی ایس ٹی فیوژن پروٹین میں سے ہر ایک کو الگ الگ جوڑا جا سکتا ہے۔ سیرم کو ابتدائی طور پر جی ایس ٹی وابستگی میٹرکس سے منسلک کرنے کی اجازت ہے۔ یہ فیوژن پروٹین کے جی ایس ٹی حصے کے خلاف اینٹی باڈیز کو ہٹا دے گا۔ اس کے بعد سیرم کو ٹھوس سپورٹ سے الگ کیا جاتا ہے اور اسے جی ایس ٹی فیوژن پروٹین میٹرکس سے منسلک ہونے دیا جاتا ہے۔ یہ کسی بھی اینٹی باڈیز کو اجازت دیتا ہے جو اینٹیجن کو پہچانتے ہیں ٹھوس سپورٹ پر پکڑے جا سکتے ہیں۔ دلچسپی کے اینٹی باڈیز کا ایلیوشن اکثر کم پی ایچ بفر جیسے گلائسین پی ایچ 2.8 کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا جاتا ہے۔ ایلیویٹ کو غیر جانبدار ٹرس یا فاسفیٹ بفر میں جمع کیا جاتا ہے، تاکہ کم پی ایچ ایلیوشن بفر کو بے اثر کیا جا سکے اور اینٹی باڈی کی سرگرمی کے کسی بھی انحطاط کو روکا جا سکے۔ یہ ایک اچھی مثال ہے کیونکہ افینیٹی پیوریفکیشن کا استعمال ابتدائی جی ایس ٹی فیوژن پروٹین کو صاف کرنے، سیرم سے ناپسندیدہ اینٹی جی ایس ٹی اینٹی باڈیز کو ہٹانے اور ٹارگٹ اینٹی باڈیز کو صاف کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ مونوکلونل اینٹی باڈیز کو پروٹین کو بڑی مخصوصیت کے ساتھ باندھنے کے لیے بھی منتخب کیا جا سکتا ہے، جہاں پروٹین کافی ہلکے حالات میں خارج ہوتا ہے۔ یہ مستقبل میں مزید تحقیق کے لیے مفید ثابت ہو سکتا ہے۔ پیپٹائڈ اینٹی جینز کے خلاف پیدا ہونے والی اینٹی باڈیز کو صاف کرنے کے لیے اکثر ایک آسان حکمت عملی استعمال کی جاتی ہے۔ جب پیپٹائڈ اینٹیجن مصنوعی طور پر تیار کیے جاتے ہیں، تو پیپٹائڈ کے این-یا سی-ٹرمینس پر ایک ٹرمینل سسٹین کے باقیات کو شامل کیا جاتا ہے۔ اس سسٹین کے باقیات میں ایک سلف ہائیڈریل فنکشنل گروپ ہوتا ہے جو پیپٹائڈ کو آسانی سے کیریئر پروٹین میں جوڑنے کی اجازت دیتا ہے (جیسے۔ کی ہول لمپیٹ ہیموسیانن (کے ایل ایچ))۔ اسی سسٹین پر مشتمل پیپٹائڈ کو بھی سسٹین کے باقیات کے ذریعے ایگروز رال پر متحرک کیا جاتا ہے اور پھر اینٹی باڈی کو صاف کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ زیادہ تر مونوکلونل اینٹی باڈیز کو امیونوگلوبلین مخصوص پروٹین اے یا پروٹین جی پر مبنی افینیٹی کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے صاف کیا گیا ہے، جو بیکٹیریا سے ماخوذ ہے۔ یک سنگی کالم پر متحرک مونوکلونل اینٹی باڈیز کے ساتھ امیونوافینیٹی کرومیٹوگرافی کو ای وی کی سطح پر پائے جانے والے ٹیٹراسپیننس اور انٹیگرینز کو نشانہ بنا کر انسانی خون کے پلازما سے ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز (جیسے، ایکزوسوم اور ایکزومیرز) کو پکڑنے کے لیے کامیابی سے استعمال کیا گیا ہے۔ امیونوافینیٹی کرومیٹوگرافی امیونوکرومیٹوگرافک ٹیسٹ (آئی سی ٹی) سٹرپس کی بنیاد بھی ہے، جو مریضوں کی دیکھ بھال میں تشخیص کا ایک تیز ذریعہ فراہم کرتی ہے۔ آئی سی ٹی کا استعمال کرتے ہوئے، ایک ٹیکنیشن لیبارٹری کی ضرورت کے بغیر، مریض کے بستر کے کنارے پر فیصلہ کر سکتا ہے۔ آئی سی ٹی کا پتہ لگانا انفیکشن کا سبب بننے والے مائکروب کے لیے انتہائی مخصوص ہے۔ امبوبلائزڈ میٹل آئن افینیٹی کرومیٹوگرافی امبوبلائزڈ میٹل آئن افینیٹی کرومیٹوگرافی (آئی ایم اے سی) امینو ایسڈ، خاص طور پر ہسٹائڈائن، دھاتوں کے مخصوص مربوط کوولینٹ بانڈ پر مبنی ہے۔ یہ تکنیک دھات کے آئنوں سے وابستگی رکھنے والے پروٹینوں کو متحرک دھات کے آئنوں پر مشتمل کالم میں برقرار رکھنے کی اجازت دے کر کام کرتی ہے، جیسے کہ کوبالٹ، نکل، یا تانبے کو ہسٹائڈائن پر مشتمل پروٹین یا پیپٹائڈز، آئرن، زنک یا گیلیم کی صفائی کے لیے فاسفوریلیٹڈ پروٹین یا پیپٹائڈز کی صفائی کے لیے۔ قدرتی طور پر پائے جانے والے بہت سے پروٹینوں کا دھاتی آئنوں سے کوئی تعلق نہیں ہوتا ہے، اس لیے ریکومبیننٹ ڈی این اے ٹیکنالوجی کو متعلقہ جین میں اس طرح کے پروٹین ٹیگ کو متعارف کرانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ دلچسپی کے پروٹین کو نکالنے کے لیے استعمال ہونے والے طریقوں میں پی ایچ کو تبدیل کرنا، یا مسابقتی مالیکیول شامل کرنا، جیسے امیڈازول شامل ہیں۔ ریکومبیننٹ پروٹین ممکنہ طور پر افینیٹی کرومیٹوگرافی کا سب سے عام استعمال ریکومبیننٹ پروٹین کی صفائی کے لیے ہے۔ معروف وابستگی والے پروٹین کو ان کی پاکیزگی میں مدد کے لیے ٹیگ کیا جاتا ہے۔ ہو سکتا ہے کہ پروٹین کو جینیاتی طور پر تبدیل کیا گیا ہو تاکہ اسے وابستگی کے پابند ہونے کے لیے منتخب کیا جا سکے۔ اسے فیوژن پروٹین کے نام سے جانا جاتا ہے۔ پروٹین ٹیگز میں ہیکساہسٹائڈائن (اس)، گلوٹاتھیون-ایس-ٹرانسفرس (جی ایس ٹی) اور مالٹوز بائنڈنگ پروٹین (ایم بی پی) شامل ہیں۔ ہسٹائڈائن ٹیگز کا نکل، کوبالٹ، زنک، تانبے اور لوہے کے آئنوں سے لگاؤ ہوتا ہے جنہیں مستحکم مرحلے میں شامل کیلیٹر کے ساتھ مربوط کوولینٹ بانڈ بنا کر متحرک کیا گیا ہے۔ ایلیوشن کے لیے، دھاتی آئن لگینڈ کے طور پر کام کرنے کے قابل مرکب کی اضافی مقدار، جیسے امیڈازول، استعمال کیا جاتا ہے۔ جی ایس ٹی کا گلوٹاتھیون سے لگاؤ ہے جو تجارتی طور پر گلوٹاتھیون ایگروز کے طور پر دستیاب ہے۔ ایلیوشن کے دوران، ٹیگ شدہ پروٹین کو ہٹانے کے لیے اضافی گلوٹاتھیون کا استعمال کیا جاتا ہے۔ لیکٹنس لیکٹنس افینیٹی کرومیٹوگرافی افینیٹی کرومیٹوگرافی کی ایک شکل ہے جہاں لیکٹنس کو نمونے کے اندر اجزاء کو الگ کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ لیکٹنس، جیسے کونکاناولین اے پروٹین ہیں جو مخصوص الفا-ڈی-مینوز اور الفا-ڈی-گلوکوز کاربوہائیڈریٹ مالیکیولز کو باندھ سکتے ہیں۔ لیکٹن افینیٹی کرومیٹوگرافی میں استعمال ہونے والے کچھ عام کاربوہائیڈریٹ مالیکیول کون اے-سیفروز اور ڈبلیو جی اے-ایگروز ہیں۔ لیکٹن کی ایک اور مثال گندم کے جراثیم ایگلوٹینن ہے جو ڈی-این-ایکٹیل-گلوکوسامین کو باندھتا ہے۔ سب سے عام اطلاق گلائکوپروٹین کو غیر گلائکوسیلیٹڈ پروٹین سے الگ کرنا ہے، یا ایک گلائکوفارم کو دوسرے گلائکوفارم سے الگ کرنا ہے۔ اگرچہ لیکٹین افینیٹی کرومیٹوگرافی انجام دینے کے مختلف طریقے ہیں، لیکن مقصد مطلوبہ پروٹین کا شوگر لگینڈ نکالنا ہے۔ خاصیت افینیٹی کرومیٹوگرافی کے لیے ایک اور استعمال جیل میٹرکس کا استعمال کرتے ہوئے مخصوص پروٹین کی صفائی ہے جو ایک مخصوص پروٹین کے لیے منفرد ہے۔ مثال کے طور پر، ای کولی β-گیلیکٹوسیڈیز کی صفائی وابستگی کرومیٹوگرافی کے ذریعے پی-امینوبینیل-1-تھیو-β-D-گیلیکٹوپیرنوسیل اگاروز کو وابستگی میٹرکس کے طور پر استعمال کرتے ہوئے مکمل کی جاتی ہے۔ پی-امینوبینیل-1-تھیو-β-D-گیلیکٹوپیرنوسیل اگاروز کو وابستگی میٹرکس کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے کیونکہ اس میں ایک گیلیکٹوپیرنوسیل گروپ ہوتا ہے، جو ای کولی β-گیلیکٹوسیڈیز کے لیے ایک اچھے سبسٹریٹ اینالاگ کے طور پر کام کرتا ہے۔ یہ خاصیت انزائم کو وابستگی میٹرکس کے مستحکم مرحلے سے جڑے رہنے کی اجازت دیتی ہے اور کالم میں نمک کی بڑھتی ہوئی تعداد کو شامل کرکے β-گیلیکٹوسیڈیز کو خارج کر دیا جاتا ہے۔ ای کولی سے الکلائن فاسفیٹیس کو ڈی ای اے ای-سیلولوز میٹرکس کا استعمال کرتے ہوئے صاف کیا جا سکتا ہے۔ A. فاسفیٹیس میں تھوڑا سا منفی چارج ہوتا ہے، جس کی وجہ سے یہ میٹرکس میں مثبت طور پر چارج شدہ امین گروپوں سے کمزور طور پر جڑا رہتا ہے۔ اس کے بعد نمک کی زیادہ مقدار کے ساتھ بفر شامل کر کے انزائم کو باہر نکالا جا سکتا ہے۔ بورونیٹ افینیٹی کرومیٹوگرافی میں گلائکوپروٹین کی مقدار کو کم کرنے اور اس کی مقدار طے کرنے کے لیے بورونک ایسڈ یا بورونیٹس کا استعمال ہوتا ہے۔ طبی موافقت نے اس قسم کی کرومیٹوگرافی کا استعمال ذیابیطس کے مریضوں کے گلائکیٹیڈ ہیموگلوبن کے تجزیے کے ذریعے طویل مدتی تشخیص کے تعین میں کیا ہے۔ سیرم البیومین پیوریفکیشن البیومین کی افینیٹی پیوریفکیشن اور میکروگلوبلین آلودگی ماس سپیکٹرومیٹری انجام دیتے وقت اضافی البیومین اور α2-میکروگلوبلین آلودگی کو دور کرنے میں مددگار ثابت ہوتی ہے۔ سیرم البیومین کے افینیٹی پیوریفکیشن میں، سیرم پروٹین کو جمع کرنے یا اپنی طرف متوجہ کرنے کے لیے استعمال ہونے والا اسٹیشنری سیباکرون بلیو-سیفروز ہو سکتا ہے۔ پھر سیرم پروٹین کو تھیوسیانیٹ (SCN−) پر مشتمل بفر کے ساتھ ایڈسوربنٹ سے نکالا جا سکتا ہے۔ کمزور وابستگی کرومیٹوگرافی کمزور وابستگی کرومیٹوگرافی (ڈبلیو اے سی) منشیات کی نشوونما میں وابستگی کی جانچ کے لیے ایک وابستگی کرومیٹوگرافی تکنیک ہے۔ ڈبلیو اے سی ایک وابستگی پر مبنی مائع کرومیٹوگرافک تکنیک ہے جو کیمیائی مرکبات کو ان کی مختلف کمزور وابستگی کی بنیاد پر ایک غیر متحرک ہدف سے الگ کرتی ہے۔ کسی مرکب کا ہدف کے ساتھ جتنا زیادہ لگاؤ ہوتا ہے، اتنا ہی یہ علیحدگی یونٹ میں رہتا ہے، اور اس کا اظہار طویل برقرار رکھنے کے وقت کے طور پر کیا جائے گا۔ وابستگی کی پیمائش اور وابستگی کی درجہ بندی تجزیہ شدہ مرکبات کے حاصل کردہ برقرار رکھنے کے اوقات پر کارروائی کرکے حاصل کی جا سکتی ہے۔ افینیٹی کرومیٹوگرافی کیموپروٹومکس پر مبنی منشیات کے ہدف کی شناخت میں استعمال ہونے والی تکنیکوں کے ایک بڑے مجموعے کا حصہ ہے۔ ڈبلیو اے سی ٹیکنالوجی کا مظاہرہ متعدد مختلف پروٹین کے اہداف-پروٹیسیس، کینیسیس، چیپرونز اور پروٹین پروٹین انٹرایکشن (پی پی آئی) کے اہداف کے خلاف کیا جاتا ہے۔ ٹکڑے ٹکڑے پر مبنی اسکریننگ کے لیے قائم کردہ طریقوں سے ڈبلیو اے سی زیادہ موثر ثابت ہوا ہے۔ افینیٹی کرومیٹوگرافی کا تصور اور سب سے پہلے پیڈرو کواٹریکاسس اور میر ولچک نے تیار کیا تھا۔ حوالہ جات بیرونی لنکس "وابستگی کرومیٹوگرافی اصول، طریقہ کار اور پیشگی تفصیلی نوٹ-2020"۔ "افینیٹی کرومیٹوگرافی کیا ہے" بائیو کیمیکل علیحدگی کے عمل کرومیٹوگرافی