HAT medium
ایچ اے ٹی میڈیم (ہائپوکسینتھائن-امینوپٹین-تھائمیڈائن میڈیم) ممالیہ سیل کلچر کے لیے ایک سلیکشن میڈیم ہے، جو امینوپٹین کے امتزاج پر انحصار کرتا ہے، ایک ایسی دوا جو ہائپوکسینتھائن (ایک پیورین مشتق) اور تھائمیڈائن (ایک ڈیوکسینوکلیوسائڈ) کے ساتھ، جو ڈی این اے کی ترکیب میں انٹرمیڈیٹس ہیں، ڈائی ہائیڈروفولیٹ ریڈکٹیس کو روک کر ایک طاقتور فولیٹ میٹابولزم انفیکٹر کے طور پر کام کرتی ہے۔ چال یہ ہے کہ امینوپٹین ڈی این اے ڈی نووو کی ترکیب کو روکتا ہے، جو خلیوں کی تقسیم کے آگے بڑھنے کے لیے بالکل ضروری ہے، لیکن ہائپوکسنتھائن اور تھائمیڈائن خلیوں کو رکاوٹ ("سیلویج پاتھ وے") سے بچنے کے لیے خام مال فراہم کرتے ہیں، بشرطیکہ ان کے پاس صحیح انزائم ہوں، جس کا مطلب ہے کہ ان کو انکوڈ کرنے والے جینوں کی فعال کاپیاں ہونا۔ انزائم ڈائی ہائیڈروفولیٹ ریڈکٹیس، جو ڈائی ہائیڈروفولیٹ کی کمی سے ٹیٹرا ہائیڈروفولیٹ (ٹی ایچ ایف) پیدا کرتا ہے، خاص طور پر امینوپٹین کے ذریعے بلاک کیا جاتا ہے۔ ٹی ایچ ایف، جو مخصوص پروٹین کے ساتھ مل کر کام کرتا ہے، واحد کاربن یونٹ حاصل کر سکتا ہے جو پھر مخصوص اہداف میں منتقل ہو جاتے ہیں۔ سیلولر پنروتپادن کے اہم اہداف میں سے ایک تھائمیڈیلیٹ سنتھس ہے، جو ڈی آکسی یوریڈائن مونو فاسفیٹ (ڈی یو ایم پی) سے تھائمیڈائن مونو فاسفیٹ (ٹی ایم پی) بناتا ہے۔ اضافی فاسفوریلیشن رد عمل کے ذریعے، ٹی ایم پی کو تھائمیڈائن ٹرائی فاسفیٹ (ٹی ٹی پی) بنانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، جو کہ ڈی این اے پولیمریز کے ذریعے ڈی این اے بنانے کے لیے استعمال ہونے والے چار نیوکلیوٹائڈ پریکسرز میں سے ایک ہے۔ ڈی یو ایم پی کو تبدیل کرنے کے لیے درکار ٹی ایچ ایف کے بغیر، کوئی ٹی ٹی پی نہیں ہو سکتا، اور ڈی این اے کی ترکیب آگے نہیں بڑھ سکتی، جب تک کہ ٹی ایم پی کو کسی دوسرے ماخذ سے تیار نہیں کیا جا سکتا۔ متبادل ذریعہ ایچ اے ٹی میڈیم میں موجود تھائمیڈائن ہے جسے خلیوں کے ذریعے جذب کیا جا سکتا ہے اور تھائمیڈائن کنیز (ٹی کے) کے ذریعے ٹی ایم پی میں فاسفوریلیٹ کیا جا سکتا ہے۔ آئی ایم پی کی ترکیب، (جی ایم پی اور جی ٹی پی کا پیش خیمہ، اور اے ایم پی اور اے ٹی پی) کے لیے بھی ٹی ایچ ایف کی ضرورت ہوتی ہے، اور اسے بائی پاس بھی کیا جا سکتا ہے۔ اس صورت میں ہائپوکسانتھائن-گوانائن فاسفوریبوسیل ٹرانسفرس (ایچ جی پی آر ٹی) پی آر پی پی کے ساتھ میڈیم سے جذب ہونے والی ہائپوکسانتھائن پر رد عمل ظاہر کرتا ہے، پائروفاسفیٹ کو آزاد کرتا ہے، تاکہ سیلویج راستے سے آئی ایم پی تیار کیا جا سکے۔ لہذا، سیل کلچر کے لیے ایچ اے ٹی میڈیم کا استعمال کام کرنے والے ٹی کے اور ایچ جی پی آر ٹی پر مشتمل خلیوں کے لیے مصنوعی انتخاب کی ایک شکل ہے۔ اس اسکیم میں بہت سی مفید اصلاحات خلیوں کو مارنے والے زہر سے ممکن ہوتی ہیں، لیکن اگر ان میں سے کسی ایک جین کی کمی ہو تو وہ اس سے مدافعتی ہوتے ہیں۔ اس طرح، ٹی کے کی کمی والا خلیہ بروموڈیوکسیوریڈائن (بی آر ڈی یو) کے خلاف مزاحم ہوتا ہے اور ایچ جی پی آر ٹی کی کمی والا خلیہ 6-تھیوگوانائن (6-ٹی جی) اور 8-ایزگوانائن کے خلاف مزاحم ہوتا ہے۔ اس طرح، مؤخر الذکر دو دوائیوں میں سے ایک کے ساتھ انتخاب، اس کے بعد ایچ اے ٹی میڈیم، ریورٹنٹ کالونیاں پیدا کرے گا۔ ایپلی کیشنز ایچ اے ٹی میڈیم کا استعمال مونوکلونل اینٹی باڈیز کی تیاری کے لیے کیا جاتا ہے۔ اس عمل کو ہائبرڈوما ٹیکنالوجی کہا جاتا ہے۔ لیبارٹری کے جانور (مثال کے طور پر چوہے) سب سے پہلے ایک اینٹیجن کے سامنے آتے ہیں جس کے خلاف ہم اینٹی باڈی کو الگ کرنے میں دلچسپی رکھتے ہیں۔ ایک بار جب سپلینوسائٹس ستنداری سے الگ ہو جاتے ہیں، تو بی خلیات کو پولی تھیلین گلائکول یا سینڈائی وائرس کا استعمال کرتے ہوئے ایچ جی پی آر ٹی منفی، لافانی مائیلوما خلیوں کے ساتھ ملا دیا جاتا ہے۔ مربوط خلیات کو ایچ اے ٹی میڈیم میں انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ میڈیم میں امینوپٹرین ڈی نووو راستے کو روکتا ہے۔ لہذا، غیر استعمال شدہ مائیلوما خلیات مر جاتے ہیں، کیونکہ وہ ڈی نووو یا سیلویج راستے سے نیوکلیوٹائڈز پیدا نہیں کر سکتے ہیں۔ غیر استعمال شدہ بی خلیات مر جاتے ہیں کیونکہ ان کی عمر مختصر ہوتی ہے۔ اس طرح، صرف بی سیل-مائیلوما ہائبرڈ زندہ رہتے ہیں۔ یہ خلیے اینٹی باڈیز (بی خلیوں کی ایک خاصیت) پیدا کرتے ہیں اور لافانی ہوتے ہیں (مائیلوما خلیوں کی ایک خاصیت)۔ اس کے بعد انکیوبیٹڈ میڈیم کو ملٹی ویل پلیٹوں میں اس حد تک پتلا کیا جاتا ہے کہ ہر کنویں میں صرف 1 خلیہ ہوتا ہے۔ پھر ہر کنویں میں موجود سپر نیٹنٹ کو مطلوبہ اینٹی باڈی کے لیے چیک کیا جا سکتا ہے۔ چونکہ کنویں میں موجود اینٹی باڈیز ایک ہی بی سیل کے ذریعے تیار کی جاتی ہیں، اس لیے وہ ایک ہی ایپیٹوپ کی طرف جائیں گی، اور انہیں مونوکلونل اینٹی باڈیز کے نام سے جانا جاتا ہے۔ مونوکلونل اینٹی باڈیز کی پیداوار سب سے پہلے سیزر ملسٹین اور جارجز جے ایف کوہلر نے ایجاد کی تھی، جس نے انہیں 1984 کا فزیولوجی یا میڈیسن کا نوبل انعام حاصل کیا، جو نیلز کاج جیرن کے ساتھ مشترکہ تھا۔ حوالہ جات سیل کلچر میڈیا