Ultramicrotomy
الٹرامائکروٹومی نمونوں کو انتہائی پتلی سلائسز میں کاٹنے کا ایک طریقہ ہے، جسے الٹرا پتلی سیکشنز کہا جاتا ہے، جس کا مطالعہ کیا جا سکتا ہے اور ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (ٹی ای ایم) میں مختلف وسعتوں پر دستاویز کیا جا سکتا ہے۔ یہ زیادہ تر حیاتیاتی نمونوں کے لیے استعمال ہوتا ہے، لیکن پلاسٹک اور نرم دھاتوں کے حصے بھی تیار کیے جا سکتے ہیں۔ حصوں کو بہت پتلا ہونا چاہیے کیونکہ معیاری الیکٹران خوردبین کے 50 سے 125 کے وی الیکٹران 150 این ایم سے زیادہ موٹے حیاتیاتی مواد سے نہیں گزر سکتے ہیں۔ بہترین ریزولوشن کے لیے، سیکشن 30 سے 60 این ایم تک ہونے چاہئیں۔ یہ تقریبا 0.1 ملی میٹر موٹے انسانی بالوں کو اس کے قطر کے ساتھ 2,000 سلائسز میں تقسیم کرنے، یا خون کے ایک سرخ خلیے کو 100 سلائسز میں کاٹنے کے مترادف ہے۔ الٹرامائکروٹومی عمل نمونوں کے انتہائی پتلے حصوں کو "الٹرامائکروٹوم" نامی ایک خصوصی آلے کا استعمال کرتے ہوئے کاٹا جاتا ہے۔ الٹرا مائکروٹوم میں یا تو ہیرے کا چاقو لگایا جاتا ہے، زیادہ تر حیاتیاتی انتہائی پتلی سیکشننگ کے لیے، یا شیشے کا چاقو، جو اکثر ابتدائی کٹ کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ الٹرا مائکروٹومی کے عمل میں شامل آلات کے بے شمار دوسرے ٹکڑے ہوتے ہیں۔ نمونہ بلاک کے کسی علاقے کو انتہائی پتلے حصے کے طور پر منتخب کرنے سے پہلے، ٹیکنیشن سیمی تھین یا "موٹے" حصوں کی حد 0.5 سے 2 مائیکرو میٹر تک کا جائزہ لیتا ہے۔ ان موٹے حصوں کو سروے کے حصوں کے نام سے بھی جانا جاتا ہے اور انہیں ہلکے خوردبین کے نیچے دیکھا جاتا ہے تاکہ اس بات کا تعین کیا جا سکے کہ نمونے کا صحیح حصہ پتلی حصے کے لیے پوزیشن میں ہے یا نہیں۔ ٹی ای ایم میں 50 سے 100 این ایم موٹے "انتہائی پتلے" حصوں کو دیکھا جا سکتا ہے۔ الٹرا مائکروٹومی کے ذریعے حاصل ہونے والے ٹشو کے حصوں کو چاقو کی کاٹنے والی قوت کے ذریعے دبایا جاتا ہے۔ اس کے علاوہ، بلاکس کی کٹی ہوئی سطح کی مداخلت خوردبین سے پتہ چلتا ہے کہ حصے اکثر چپٹے نہیں ہوتے ہیں۔ ایمبیڈنگ میڈیم کے طور پر ایپون یا ویسٹوپال کے ساتھ پہاڑیوں اور وادیوں کی اونچائی عام طور پر 0.0 مائیکرو میٹر سے زیادہ نہیں ہوتی، یعنی عام حصوں کی موٹائی سے 1 گنا زیادہ ہوتی ہے۔ جانچ پڑتال کے لیے نمونے سے ایک چھوٹا سا نمونہ لیا جاتا ہے۔ نمونے حیاتیاتی مادے سے ہو سکتے ہیں، جیسے جانور یا پودوں کے بافت، یا غیر نامیاتی مواد جیسے چٹان، دھات، مقناطیسی ٹیپ، پلاسٹک، فلم وغیرہ سے ہو سکتے ہیں۔ نمونے کے بلاک کو پہلے 1 ملی میٹر اور 1 ملی میٹر کا بلاک فیس بنانے کے لیے تراشا جاتا ہے۔ "موٹے" حصوں (1 مائیکرو میٹر) کو نظری خوردبین پر دیکھنے کے لیے لیا جاتا ہے۔ ٹی ای ایم کے لیے حصے کے طور پر ایک علاقے کا انتخاب کیا جاتا ہے اور بلاک کے چہرے کو ایک طرف 0.7 ملی میٹر سے بڑے سائز میں دوبارہ تراشا جاتا ہے۔ بلاک چہروں میں عام طور پر مربع، ٹریپیزائڈل، آئتاکار، یا مثلث شکل ہوتی ہے۔ آخر میں، پتلے حصوں کو الٹرامائکروٹوم کا استعمال کرتے ہوئے شیشے یا ہیرے کے چاقو سے کاٹا جاتا ہے اور حصوں کو پانی پر تیرتے ہوئے چھوڑ دیا جاتا ہے جو کشتی یا گرت میں رکھا جاتا ہے۔ اس کے بعد حصوں کو پانی کی سطح سے بازیافت کیا جاتا ہے اور تانبے، نکل، سونے یا دیگر دھات کے گرڈ پر نصب کیا جاتا ہے۔ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی کے لیے مثالی سیکشن موٹائی 50kV اور 120kV کے درمیان تیز رفتار وولٹیج کے ساتھ تقریبا 30-100 nm ہے۔ ترقی 1952 میں ہمبرٹو فرنانڈیز موران نے کریو الٹرا مائکروٹومی متعارف کرائی، جو اسی طرح کی تکنیک ہے لیکن −20 اور −150 ڈگری سیلسیس کے درمیان منجمد درجہ حرارت پر کی جاتی ہے۔ کریو الٹرامائکروٹومی کا استعمال انتہائی پتلی منجمد حیاتیاتی نمونوں کو کاٹنے کے لیے کیا جا سکتا ہے۔ زیادہ "روایتی" الٹرا مائکروٹومی کے عمل کے فوائد میں سے ایک رفتار ہے، کیونکہ 1 سے 2 گھنٹوں میں ایک نمونے کو منجمد اور سیکشن کرنا ممکن ہونا چاہیے۔ حوالہ جات مائکروسکوپی الیکٹران مائکروسکوپی حیاتیاتی تکنیک اور اوزار