PBR322
پی بی آر 322 ایک پلازمیڈ ہے اور یہ سب سے پہلے بڑے پیمانے پر استعمال ہونے والے ای کولی کلوننگ ویکٹرز میں سے ایک تھا۔ 1977 میں یونیورسٹی آف کیلیفورنیا، سان فرانسسکو میں ہربرٹ بوئر کی لیبارٹری میں بنایا گیا، اس کا نام پوسٹ ڈاکٹریٹ کے محقق فرانسسکو بولیور زپاٹا اور ریمنڈ ایل روڈریگز کے نام پر رکھا گیا تھا۔ پی کا مطلب ہے "پلاسمڈ"، اور بی آر کا مطلب ہے "بولیوار" اور "روڈریگز"۔ پی بی آر 322 لمبائی میں 4361 بیس جوڑے ہیں اور ان میں دو اینٹی بائیوٹک مزاحمتی جین ہیں-جین بی ایل اے ایمپیسلن مزاحمت (ایم پی آر) پروٹین کو انکوڈنگ کرتا ہے، اور جین ٹی ٹی اے ٹیٹراسائکلائن مزاحمت (ٹی ٹی آر) پروٹین کو انکوڈنگ کرتا ہے۔ اس میں پی ایم بی 1 کی نقل کی ابتدا ہوتی ہے، اور آر او پی جین، جو پلاسمڈ کاپی نمبر کے محاصرے کو انکوڈ کرتا ہے۔ پلازمیڈ میں چالیس سے زیادہ پابندی والے انزائموں کے لیے منفرد پابندی والے مقامات ہیں۔ ان چالیس مقامات میں سے گیارہ ٹی ٹی آر جین کے اندر ہیں۔ ٹی ٹی آر جین کے پروموٹر کے اندر پابندی والے انزائم ہند III اور کلا آئی کے لیے دو مقامات ہیں۔ ان اینٹی بائیوٹک مزاحمتی جینوں کے ایم پی آر gene.The ماخذ کے اندر چھ کلیدی پابندی والے مقامات ہیں جو ٹیٹراسائکلائن کے لیے پی ایس سی 101 اور ایمپیسلن کے لیے آر ایس ایف 2124 سے ہیں۔ سرکلر ترتیب کو اس طرح نمبر دیا گیا ہے کہ 0 منفرد ایکوری سائٹ کا وسط ہے اور ٹی ٹی آر جین کے ذریعے گنتی میں اضافہ ہوتا ہے۔ مثال کے طور پر اگر ہمیں ایمپیسلن کو ہٹانا ہے تو ہمیں پی ایس ٹی آئی کے خلاف پابندی والے اینڈو نیوکلیز یا مالیکیولر کینچی کا استعمال کرنا چاہیے اور پھر پی بی آر 322 ایمپیسلن کے خلاف مزاحم بن جائے گا۔ ٹیٹراسیکلائن پر بھی اسی طرح کی انسرشنل ان ایکٹیویشن کا عمل لاگو کیا جا سکتا ہے۔ ایم پی آر جین پینسلن بیٹا-لیکٹامیز ہے۔ پروموٹر پی 1 اور پی 3 بیٹا-لیکٹامیز جین کے لیے ہیں۔ پی 3 قدرتی پروموٹر ہے، اور پی 1 مصنوعی طور پر پی بی آر 322 بنانے کے لیے دو مختلف ڈی این اے ٹکڑوں کے ربڑ کے ذریعے بنایا گیا ہے۔ P2 اسی خطے میں ہے جس میں P1 ہے، لیکن یہ مخالف سمت پر ہے اور ٹیٹراسیکلائن مزاحمتی جین کی سمت میں نقل کا آغاز کرتا ہے۔ پس منظر ابتدائی کلوننگ کے تجربات قدرتی پلازمیڈز جیسے کول ای 1 اور پی ایس سی 101 کا استعمال کرتے ہوئے کیے جا سکتے ہیں۔ ان میں سے ہر ایک پلازمیڈ کے اپنے فوائد اور نقصانات ہو سکتے ہیں۔ مثال کے طور پر، کول ای 1 پلاسمڈ اور اس کے مشتقات میں زیادہ کاپی نمبر کا فائدہ ہوتا ہے اور پلاسمڈ کی اعلی پیداوار پیدا کرنے کے لیے پلاسمڈ کے کلورامفینکول امپلیفکیشن کی اجازت دیتا ہے، تاہم کولیسن ای 1 سے قوت مدافعت کے لیے اسکریننگ تکنیکی طور پر آسان نہیں ہے۔ پلازمیڈ پی ایس سی 101، سالمونلا پناما کا ایک قدرتی پلازمیڈ، ٹیٹراسیکلائن مزاحمت فراہم کرتا ہے جو اینٹی بائیوٹک انتخاب کے ساتھ اسکریننگ کے آسان عمل کی اجازت دیتا ہے، لیکن یہ ایک کم کاپی نمبر پلازمیڈ ہے جو پلازمیڈ کی زیادہ پیداوار نہیں دیتا ہے۔ ایک اور پلاسمڈ، آر ایس ایف 2124، جو کہ کول ای 1 سے ماخوذ ہے، ایمپیسلن مزاحمت کو تسلیم کرتا ہے لیکن بڑا ہے۔ بہت سے دوسرے پلازمیڈز کو مصنوعی طور پر ایسا بنانے کے لیے بنایا گیا تھا جو کلوننگ کے مقصد کے لیے مثالی ہو، اور پی بی آر 322 کو بہت سے لوگوں نے سب سے زیادہ ورسٹائل پایا اور اس وجہ سے یہ سب سے زیادہ مقبول تھا۔ اس میں دو اینٹی بائیوٹک مزاحمتی جین ہیں، بطور منتخب مارکر، اور متعدد آسان منفرد پابندی والے مقامات ہیں جنہوں نے اسے کلوننگ ویکٹر کے طور پر موزوں بنایا ہے۔ پلاسمڈ کو 3 اہم ذرائع سے جینیاتی مواد کے ساتھ بنایا گیا تھا-پی ایس سی 101 کا ٹیٹراسیکلائن مزاحمتی جین، آر ایس ایف 2124 کا ایمپیسلن مزاحمتی جین، اور پی ایم بی 1 کے نقل عناصر، جو کول ای 1 پلاسمڈ کے قریبی رشتہ دار ہیں۔ اس کے بعد سے پی بی آر 322 پر مبنی بڑی تعداد میں دیگر پلازمیڈز کو خاص طور پر مختلف مقاصد کے لیے ڈیزائن کیا گیا ہے۔ مثالوں میں پلازمیڈز کی پی یو سی سیریز شامل ہیں۔ ایکسٹرا کروموسومل پروٹین کے اظہار اور شٹل ویکٹر کے لیے زیادہ تر ایکسپریشن ویکٹرز میں نقل کی اصل پی بی آر 322 ہوتی ہے، اور پی بی آر 322 کے ٹکڑے انٹراسپیسیس شٹل یا بائنری ویکٹرز کی تعمیر میں بہت مقبول ہیں اور کروموسوم سے ڈی این اے کے ٹارگٹڈ انٹیگریشن اور اخراج کے لیے ویکٹرز ہیں۔ ڈی این اے ترتیب پی بی آر 322 میں ترتیب یہ بھی دیکھیں پابندی والے انزائم کاٹنے والی سائٹوں کی فہرست حوالہ جات بیرونی روابط پی بی آر 322 نقشہ پی بی آر 322 خصوصیات پی بی آر 322 ڈی این اے موبائل جینیاتی عناصر سالماتی حیاتیات تکنیک پلازمیڈز