H&E stain
ہیماٹوکسیلن اور ایوسین داغ (یا ہیماٹوکسیلن اور ایوسین داغ یا ہیماٹوکسیلن-ایوسین داغ ؛ اکثر ایچ اینڈ ای داغ یا ایچ ای داغ کے طور پر مختصر کیا جاتا ہے) ہسٹولوجی میں استعمال ہونے والے اہم ٹشو داغوں میں سے ایک ہے۔ یہ طبی تشخیص میں سب سے زیادہ استعمال ہونے والا داغ ہے اور اکثر گولڈ اسٹینڈرڈ ہوتا ہے۔ مثال کے طور پر، جب کوئی پیتھولوجسٹ مشتبہ کینسر کی بائیوپسی دیکھتا ہے، تو ہسٹولوجیکل سیکشن H & E سے داغدار ہونے کا امکان ہوتا ہے۔ ایچ اینڈ ای دو ہسٹولوجیکل داغوں کا مجموعہ ہے: ہیماٹوکسیلن اور ایوسن۔ ہیماٹوکسیلن خلیوں کے مرکزوں کو جامنی نیلے رنگ میں داغ دیتا ہے، اور ایوسن ایکسٹرا سیلولر میٹرکس اور سائٹوپلازم گلابی کو داغ دیتا ہے، دیگر ڈھانچے ان رنگوں کے مختلف رنگوں، رنگوں اور امتزاج کو اختیار کرتے ہیں۔ لہذا ایک پیتھولوجسٹ سیل کے نیوکلیئر اور سائٹوپلاسمک حصوں کے درمیان آسانی سے فرق کر سکتا ہے، اور اس کے علاوہ، داغ سے رنگنے کے مجموعی نمونے خلیوں کی عمومی ترتیب اور تقسیم کو ظاہر کرتے ہیں اور ٹشو کے نمونے کی ساخت کا عمومی جائزہ فراہم کرتے ہیں۔ اس طرح، نمونوں کی شناخت، خود ماہر انسانوں کے ذریعے اور سافٹ ویئر کے ذریعے جو ان ماہرین کی مدد کرتا ہے (ڈیجیٹل پیتھولوجی میں)، ہسٹولوجک معلومات فراہم کرتا ہے۔ اس داغ کے امتزاج کو 1877 میں روس کی کاسان امپیریل یونیورسٹی میں کیمسٹ این وسوزکی نے متعارف کرایا تھا۔ H & E داغ لگانے کا طریقہ کار جزوی طور پر ہسٹولوجی میں بنیادی داغ ہے کیونکہ یہ جلدی سے کیا جا سکتا ہے، مہنگا نہیں ہے، اور بافتوں کو اس طرح داغ دیتا ہے کہ کافی مقدار میں خوردبین اناٹومی کا انکشاف ہوتا ہے، اور ہسٹوپیتھولوجی حالات کی وسیع رینج کی تشخیص کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ ایچ اینڈ ای سٹیننگ کے نتائج ٹشو کو ٹھیک کرنے کے لیے استعمال ہونے والے کیمیکل یا لیبارٹری پروٹوکول میں معمولی تضادات پر زیادہ انحصار نہیں کرتے، اور یہ عوامل ہسٹولوجی میں اس کے معمول کے استعمال میں معاون ہوتے ہیں۔ H & E داغ ہمیشہ تمام بافتوں، سیلولر ڈھانچوں، یا کیمیائی مادوں کی تقسیم میں فرق کرنے کے لیے کافی تضاد فراہم نہیں کرتا ہے، اور ان صورتوں میں زیادہ مخصوص داغ اور طریقے استعمال کیے جاتے ہیں۔ H & E طریقہ کار میں استعمال ہونے والے ہیماٹوکسیلن حل (تشکیل) تیار کرنے کے بہت سے طریقے ہیں، اس کے علاوہ، H & E داغدار سلائیڈز تیار کرنے کے لیے بہت سے لیبارٹری پروٹوکول ہیں، جن میں سے کچھ کسی خاص لیبارٹری کے لیے مخصوص ہو سکتے ہیں۔ اگرچہ کوئی معیاری طریقہ کار موجود نہیں ہے، اس میں روایت کے مطابق نتائج معقول طور پر مطابقت رکھتے ہیں کہ خلیے کے مرکزے داغدار نیلے ہوتے ہیں اور سائٹوپلازم اور ایکسٹرا سیلولر میٹرکس داغدار گلابی ہوتے ہیں۔ ہسٹولوجی لیبارٹریز کسی خاص پیتھولوجسٹ کے لیے داغ کی مقدار یا قسم کو بھی ایڈجسٹ کر سکتی ہیں۔ بافتوں کو جمع کرنے کے بعد (اکثر بائیوپسیز کے طور پر) اور ٹھیک کرنے کے بعد، انہیں عام طور پر پانی سے پاک کیا جاتا ہے اور پگھلے ہوئے پیرافن موم میں سرایت کیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں بلاک کو مائیکروٹوم پر نصب کیا جاتا ہے اور پتلی سلائسز میں کاٹا جاتا ہے۔ سلائسز کو خوردبین سلائیڈز پر لگایا جاتا ہے جس مقام پر موم کو سالوینٹ سے ہٹا دیا جاتا ہے اور سلائیڈز سے منسلک ٹشو سلائسز کو ری ہائیڈریٹ کیا جاتا ہے اور داغدار ہونے کے لیے تیار ہوتے ہیں۔ متبادل طور پر، ایچ اینڈ ای داغ محاس سرجری میں سب سے زیادہ استعمال ہونے والا داغ ہے جس میں بافتوں کو عام طور پر منجمد کیا جاتا ہے، ایک کروسٹیٹ (ایک مائیکرو ٹوم جو منجمد بافتوں کو کاٹتا ہے) پر کاٹا جاتا ہے، الکحل میں لگایا جاتا ہے، اور پھر داغدار کیا جاتا ہے۔ ایچ اینڈ ای سٹیننگ کے طریقہ کار میں دھاتی نمک، یا مورڈنٹ کے ساتھ ملا کر ہیماٹوکسیلن کا اطلاق شامل ہوتا ہے، جس کے بعد اکثر اضافی سٹیننگ (تفریق) کو دور کرنے کے لیے کمزور ایسڈ کے محلول میں دھونا ہوتا ہے، اس کے بعد ہلکے الکلین پانی میں بلیو کرنا ہوتا ہے۔ ہیماٹوکسیلن کے استعمال کے بعد، ٹشو کو ایوسن (عام طور پر ایوسن Y) سے روک دیا جاتا ہے۔ نتائج ہیماٹوکسیلن بنیادی طور پر خلیوں کے مرکزے کو نیلے یا گہرے جامنی رنگ کے ساتھ ساتھ کچھ دیگر بافتوں، جیسے کیراٹوہیالن کے دانے اور کیلسیفائیڈ مواد کو بھی رنگ دیتا ہے۔ ایوسن سائٹوپلازم اور کچھ دیگر ڈھانچوں پر داغ لگاتا ہے جن میں ایکسٹرا سیلولر میٹرکس جیسے کولیجن گلابی رنگ کے پانچ رنگوں میں ہوتے ہیں۔ ایوسینوفیلک (ایسے مادے جو ایوسین سے داغدار ہوتے ہیں) ڈھانچے عام طور پر انٹرا سیلولر یا ایکسٹرا سیلولر پروٹین پر مشتمل ہوتے ہیں۔ لیوی باڈیز اور میلوری باڈیز ایوسینوفیلک ڈھانچوں کی مثالیں ہیں۔ زیادہ تر سائٹوپلازم ایوسینوفیلک ہوتا ہے اور اسے گلابی رنگ میں پیش کیا جاتا ہے۔ سرخ خون کے خلیات شدید سرخ رنگ کے ہوتے ہیں۔ عمل کا طریقہ اگرچہ ہیمیٹین، ہیمیٹوکسیلن کی ایک آکسیڈائزڈ شکل، فعال رنگین ہے (جب اسے مورڈنٹ کے ساتھ ملایا جاتا ہے)، اس داغ کو اب بھی ہیمیٹوکسیلن کہا جاتا ہے۔ ہیماٹوکسیلن، جب ایک مورڈنٹ (عام طور پر ایلومینیم الم) کے ساتھ ملایا جاتا ہے تو اسے اکثر ایک بنیادی، مثبت طور پر چارج شدہ، یا کیٹیشنک داغ سے ملتا جلتا سمجھا جاتا ہے۔ ایوسین ایک آئنک (منفی چارج شدہ) اور تیزابیت کا داغ ہے۔ ہیملم (ایلومینیم آئنوں اور ہیمیٹین کا ایک مجموعہ) کے ذریعہ نیوکلئی کا داغ عام طور پر ڈائی میٹل کمپلیکس کے ڈی این اے سے جڑے ہونے کی وجہ سے ہوتا ہے، لیکن ٹشو کے حصوں سے ڈی این اے نکالنے کے بعد نیوکلیئر داغ حاصل کیا جا سکتا ہے۔ یہ طریقہ کار بنیادی (کیٹیانک) رنگوں جیسے تھیونائن یا ٹولیوڈین بلیو کے ذریعہ نیوکلیئر سٹیننگ سے مختلف ہے۔ بنیادی رنگوں سے داغ صرف ان حلوں سے ہوتا ہے جو ہیملم سے کم تیزابیت والے ہوتے ہیں، اور اسے نیوکلک ایسڈ کے پہلے کیمیائی یا انزیمیٹک نکالنے سے روکا جاتا ہے۔ اس بات کے شواہد موجود ہیں کہ ایلومینیم اور ہیمیٹین کو ایک ساتھ رکھنے والے بانڈز کی طرح ہم آہنگ بانڈز ہیملم کمپلیکس کو ڈی این اے اور نیوکلیئر کرومیٹن میں پروٹین کے کاربوکسی گروپوں سے باندھتے ہیں۔ ڈھانچے کو بیسوفیلک اور ایوسینوفیلک کہلانے کے لیے تیزابیت یا بنیادی ہونا ضروری نہیں ہے۔ اصطلاحات رنگوں کے لیے سیلولر اجزاء کی وابستگی پر مبنی ہیں۔ دوسرے رنگ، جیسے۔ پیلا اور بھورا، نمونے میں موجود ہو سکتے ہیں ؛ وہ میلانین جیسے اندرونی روغنوں کی وجہ سے ہوتے ہیں۔ اگر انہیں اچھی طرح سے نظر آنا ہے تو بیسال لامینی کو پی اے ایس داغ یا کچھ چاندی کے داغوں سے داغدار کرنے کی ضرورت ہے۔ ریٹکولر ریشوں کو بھی چاندی کے داغ کی ضرورت ہوتی ہے۔ ہائیڈروفوبک ڈھانچے بھی صاف رہتے ہیں۔ یہ عام طور پر چربی سے بھرپور ہوتے ہیں، جیسے۔ ایڈپوسائٹس، نیوران محور کے ارد گرد مائلین، اور گولگی اپریٹس جھلی۔ ایچ اینڈ ای داغدار بافتوں کی مثالیں حوالہ جات مزید پڑھنے کیرنن جے اے (2008) ہسٹولوجیکل اینڈ ہسٹو کیمیکل میتھڈز: تھیوری اینڈ پریکٹس۔ چوتھی ایڈیشن۔ بلاکسھم، برطانیہ: سکیون۔ للی آر ڈی، پیزولیٹو پی، ڈونلڈسن پی ٹی (1976) گھلنشیل میٹا کروم مورڈنٹ جھیل کے رنگوں کے ساتھ نیوکلیئر داغ۔ کیمیائی اینڈ گروپ بلاکنگ رد عمل کا اثر اور بافتوں میں تیزاب کے گروپوں کا مصنوعی تعارف۔ ہسٹو کیمسٹری 49:23-35۔ لیولین بی ڈی (2009) ایلم ہیمیٹوکسیلن کے ساتھ نیوکلیئر سٹیننگ۔ بائیوٹیک۔ ہسٹوکیم۔ 84: 159-177۔ پچٹلر ایچ، میلوان ایس این، والڈروپ ایف ایس (1986) دھات-ہیماٹین اور-برازیلین داغوں پر موجودہ کیمیائی تصورات کا اطلاق۔ ہسٹو کیمسٹری 85:353-364۔ بیرونی روابط سگما-ایلڈرچ ایچ اینڈ ای اطلاعاتی پرائمر پروٹوکول روٹین میئر کا ہیماٹوکسیلن اور ایوسن سٹین (ایچ اینڈ ای) ہیماٹوکسیلن اور ایوسن (ایچ اینڈ ای) سٹیننگ پروٹوکول روزن لیب، ڈیپارٹمنٹ آف مالیکیولر اینڈ سیلولر بائیولوجی، بیلر کالج آف میڈیسن) مرحلہ وار پروٹوکول ایچ-ای سٹین مائکروسکوپی مائکروبیولوجی تکنیک لیبارٹری تکنیک ہسٹوپیتھولوجی ہسٹو ٹیکنالوجی سٹیننگ ڈائز سٹیننگ