Isotope-coded affinity tag
آئسوٹوپ کوڈڈ افینیٹی ٹیگ (آئی سی اے ٹی) ایک ان وٹرو آئسوٹوپک لیبلنگ کا طریقہ ہے جو ماس سپیکٹرومیٹری کے ذریعے مقداری پروٹومکس کے لیے استعمال ہوتا ہے جو کیمیائی لیبلنگ ریجینٹس کا استعمال کرتا ہے۔ یہ کیمیائی تحقیقات تین عناصر پر مشتمل ہوتی ہیں: ایک امینو ایسڈ سائیڈ چین کو لیبل کرنے کے لیے ایک رد عمل گروپ (مثال کے طور پر، سسٹین کے باقیات میں ترمیم کرنے کے لیے آئیوڈواسیٹامائڈ)، ایک آئسوٹوپک طور پر کوڈڈ لنکر، اور لیبل شدہ پروٹین/پیپٹائڈز کی وابستگی کی تنہائی کے لیے ایک ٹیگ (مثال کے طور پر بائیوٹن)۔ نمونوں کو ملایا جاتا ہے اور پھر کرومیٹوگرافی کے ذریعے الگ کیا جاتا ہے، پھر پروٹین کے درمیان بڑے پیمانے پر چارج کے تناسب کا تعین کرنے کے لیے ماس سپیکٹرومیٹر کے ذریعے بھیجا جاتا ہے۔ پیپٹائڈز پر مشتمل صرف سسٹین کا تجزیہ کیا جا سکتا ہے۔ چونکہ پیپٹائڈز پر مشتمل صرف سسٹین کا تجزیہ کیا جاتا ہے، اس لیے اکثر پوسٹ ٹرانسلیشنل ترمیم ختم ہو جاتی ہے۔ اصل ٹیگز ڈیوٹیریم کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیے گئے تھے، لیکن بعد میں اسی گروپ نے کالم کے مستحکم مرحلے کے ساتھ ڈیوٹیریم کے تعامل کی وجہ سے مائع کرومیٹوگرافی کے دوران چوٹی کی علیحدگی کے مسائل کو روکنے کے بجائے 13 سی کا استعمال کرتے ہوئے ٹیگز کو دوبارہ ڈیزائن کیا۔ مقداری پروٹومکس دو پروٹومز کے مقداری موازنہ کے لیے، ایک نمونے کو آئسوٹوپک طور پر ہلکے (ڈی 0) پروب کے ساتھ اور دوسرے کو آئسوٹوپک طور پر بھاری (ڈی 8) ورژن کے ساتھ لیبل کیا جاتا ہے۔ غلطی کو کم کرنے کے لیے، پھر دونوں نمونوں کو ملایا جاتا ہے، پروٹیز (یعنی ٹرپسن) کے ساتھ ہضم کیا جاتا ہے، اور آئسوٹوپ کوڈڈ ٹیگنگ ریجینٹس کے ساتھ لیبل والے پیپٹائڈز کو الگ کرنے کے لیے ایوڈین افینیٹی کرومیٹوگرافی کا نشانہ بنایا جاتا ہے۔ ان پیپٹائڈز کا تجزیہ مائع کرومیٹوگرافی ماس سپیکٹرومیٹری (ایل سی-ایم ایس) کے ذریعے کیا جاتا ہے۔ دونوں نمونوں میں پروٹین کی متعلقہ سطح کا تعین کرنے کے لیے مختلف طور پر بڑے پیمانے پر ٹیگ کیے گئے پیپٹائڈ جوڑوں کی سگنل کی شدت کے تناسب کی مقدار مقرر کی جاتی ہے۔ حوالہ جات بائیو کیمسٹری کا پتہ لگانے کے طریقے پروٹومکس