Tissue cytometry
ٹشو امیج سائٹومیٹری یا ٹشو سائٹومیٹری ڈیجیٹل ہسٹوپیتھولوجی کا ایک طریقہ ہے اور کلاسیکی ڈیجیٹل پیتھولوجی (گلاس سلائیڈز اسکیننگ اور ورچوئل سلائیڈ جنریشن) اور کمپیوٹیشنل پیتھولوجی (ڈیجیٹل تجزیہ) کو ایک مربوط نقطہ نظر میں جوڑتا ہے جس میں ہر قسم کی بیماریوں، ٹشوز اور خلیوں کی اقسام کے ساتھ ساتھ مالیکیولر مارکرز اور ان مارکرز کو دیکھنے کے لیے متعلقہ سٹیننگ کے طریقے شامل ہیں۔ ٹشو سائٹومیٹری ورچوئل سلائیڈز کا استعمال کرتی ہے کیونکہ انہیں متعدد، تجارتی طور پر دستیاب سلائیڈ اسکینرز کے ساتھ ساتھ وقف شدہ تصویری تجزیہ سافٹ ویئر کے ذریعے تیار کیا جا سکتا ہے-ترجیحی طور پر بشمول مشین اور ڈیپ لرننگ الگورتھم۔ ٹشو سائٹومیٹری موٹے بافتوں کے اندر سیلولر تجزیہ کو قابل بناتا ہے، مورفولوجیکل اور سیاق و سباق کی معلومات کو برقرار رکھتا ہے، بشمول متعین سیلولر ذیلی آبادی پر مقامی معلومات۔ اس عمل میں، ٹشو کا نمونہ، یا تو فارملین فکسڈ پیرافین ایمبیڈڈڈ (ایف ایف پی ای) یا منجمد ٹشو سیکشن، جسے "کریو کٹ" بھی کہا جاتا ہے، کو یا تو امیونو ہسٹو کیمسٹری (آئی ایچ سی) یا امیونو فلوریسنٹ مارکر کے ساتھ لیبل کیا جاتا ہے، ہائی تھرو پٹ سلائیڈ اسکینرز کے ساتھ اسکین کیا جاتا ہے اور ورچوئل سلائیڈز سے جمع کردہ ڈیٹا کو سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے پروسیس اور تجزیہ کیا جاتا ہے جو ٹشو کے سیاق و سباق میں انفرادی خلیوں کی خود بخود شناخت کرنے اور ہر خلیے کے لیے نیوکلئس اور سائٹوپلازم کے درمیان فرق کرنے کے قابل ہوتا ہے۔ اضافی الگورتھم سیلولر جھلی، سب سیلولر ڈھانچے (جیسے سائٹوسکیلیٹل فائبر، ویکیولز، نیوکلیولی) اور/یا ملٹی سیلولر ٹشو ڈھانچے (غدود، گلومیرولی، ایپیڈرمس، یا ٹیومر فوکی) کی شناخت کر سکتے ہیں۔ فلوروسینس ایکٹیویٹڈ سیل شارٹنگ (ایف اے سی ایس) تجزیہ کا ایک طریقہ ہے جو واحد خلیوں پر فلوروسینس سگنلز کی پیمائش کرتا ہے، جہاں سگنل اینٹی باڈی کی ثالثی سے داغ لگانے کی تکنیک اور فلو سائٹومیٹری کے ذریعے پائے جانے والے فینوٹائپ سے آتا ہے۔ فلو سائٹومیٹری کی بڑی حد یہ ہے کہ اسے صرف محلول میں موجود خلیوں پر لاگو کیا جا سکتا ہے-جیسا کہ نام سے پتہ چلتا ہے۔ اگرچہ ٹھوس ٹشو کو "گھلنشیل" کرنے کے طریقے موجود ہیں، اس طرح کی کوئی بھی پروسیسنگ ٹشو فن تعمیر اور کسی بھی مقامی سیاق و سباق کو ناقابل تنسیخ طور پر تباہ کر دیتی ہے۔ لہذا، ٹشو سائٹومیٹری بنیادی تحقیق، کلینیکل پریکٹس، اور کلینیکل ٹرائلز میں فلو سائٹومیٹری اور فلوروسینس مائکروسکوپ کے استعمال کو ٹھوس ٹشو کے حصوں (نیز ایڈرینٹ سیل کلچرز) پر ایف اے سی ایس جیسے تجزیے فراہم کرکے مکمل کرتی ہے۔ فلو سائٹومیٹری کے خلاف ٹشو سائٹومیٹری کا فائدہ یہ ہے کہ ٹشو سائٹومیٹری میں خلیوں کو سیال میں معطل کرنے کی ضرورت نہیں ہوتی ہے، جس سے ٹشو کی ساخت، مورفولوجی اور سیاق و سباق کی معلومات کی سالمیت کو برقرار رکھنے میں مدد ملتی ہے، جس سے عین مطابق اور درست سیاق و سباق کے تجزیے میں مزید مدد ملتی ہے جو فلو سائٹومیٹری میں ممکن نہیں ہیں۔ امیونوہسٹو کیمسٹری کلینیکل پریکٹس میں استعمال ہوتی ہے، جہاں کینسر کے ہر ممکنہ مریض سے ٹشو بائیوپسیز اکٹھا کی جاتی ہیں، فارملن میں لگائی جاتی ہیں اور پیرافن پر سرایت کی جاتی ہیں۔ ان ٹشو کے حصوں کو مائیکروٹوم میں سیریل طور پر کاٹا جاتا ہے تاکہ پتلے حصے فراہم کیے جا سکیں، جو طبی تشخیص کے لیے تشخیصی مواد کی نمائندگی کرتے ہیں۔ ایک بار کینسر کے خلیوں کا پتہ لگانے کے لیے ابتدائی طور پر ہیماٹوکسیلن اور ایوسن کے داغ سے داغ لگایا جاتا ہے۔ پھیلاؤ، نسب، پیشن گوئی اور آنکوجینک اہداف کے لیے متعدد مارکر سٹیننگ کی جاتی ہے۔ پیتھولوجسٹوں نے آبجیکٹیو لینس کے ذریعے تشخیص کے لیے آپٹیکل مائکروسکوپ کا استعمال کیا اور داغ کو فیصد میں یا مثبت/منفی کے طور پر اسکور کرکے تشخیص کا اختتام کیا۔ بصری تشخیص ایک ساپیکش تشخیص اور علاج کا منصوبہ فراہم کرتی ہے۔ ایک زیادہ مضبوط اور خودکار نظام کو ایک فکسڈ ٹشو میں امیونوسٹینڈ خلیوں پر فلو سائٹومیٹری جیسے تجزیے کرنے کے لیے ڈیزائن کیا گیا تھا اور اسے ٹشو سائٹومیٹری کہا جاتا ہے۔ یہ تکنیک 1990 کی دہائی میں اسٹینر اور ایکر (سی ای او/بانی ٹشوگنوسٹکس) کے پیٹنٹ کی بنیاد پر متعارف کرائی گئی تھی، جس میں "ٹشو سیکشنز یا سیل کلچر میں مختلف خلیوں کی آبادی کا سائٹومیٹرک تجزیہ جسے فلوروسینس رنگوں اور/یا کروموجینز کے ذریعے دیکھا جاتا ہے" کے طریقہ کار کو بیان کیا گیا تھا۔ اضافی پیٹنٹ 21 ویں صدی کے اوائل میں ہرنانی اور دیگر نے دائر کیے تھے۔ امیونوسٹینڈ ٹشو پر ورچوئل فلو سائٹومیٹری انجام دینے کے لیے۔ مؤخر الذکر کی بنیادی باتیں 1982 میں گیلٹ اور دیگر کے ذریعہ پیش کردہ طریقہ کار سے اخذ کی گئی تھیں، جس میں سپیکٹرم حوالہ لائبریری کے ساتھ مل کر فیکٹر تجزیہ کا استعمال کرکے سپیکٹرم مرکب کے کوالٹی تجزیہ کو بیان کیا گیا تھا۔ اس مطالعے کے بعد، چاؤ آر اور دیگر۔ پروسٹیٹ ٹیومر کے ہسٹولوجک حصوں میں پروسٹیٹ مخصوص ایسڈ فاسفیٹیس (پی ایس اے پی) کی مقدار کے لیے ایک طریقہ شائع کیا جس میں پیرو آکسائیڈیز-اینٹی پیرو آکسائیڈیز (پی اے پی) پیچیدہ تکنیک کا استعمال کرتے ہوئے ڈامینبینزائڈائن (ڈی اے بی) کو سبسٹریٹ کے طور پر استعمال کیا گیا۔ ٹشو سائٹومیٹری ٹیومر مائیکرو انوائرمنٹ کی ایپلی کیشنز: ٹشو سائٹومیٹری کو ٹیومر مائیکرو انوائرمنٹ کی خصوصیت کے لیے تحقیق میں بہت زیادہ استعمال کیا جاتا ہے بشمول مثال کے طور پر۔ آئی ایچ سی/آئی ایف پراسیسڈ ٹشو سیکشنز کے اندر امیون لینڈ اسکیپ یا ٹیومر ویسکولرائزیشن کی شناخت۔ ایک وجہ یہ ہے کہ اس ٹیکنالوجی کو استعمال کرنے سے پیچیدہ ٹشو فن تعمیر برقرار رہتا ہے اور اس لیے سیلولر فینوٹائپز اور/یا ملٹی سیلولر ڈھانچوں کے درمیان مقامی تعلقات کا بھی تجزیہ کیا جا سکتا ہے۔ ٹشو سائٹومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے متعدد تحقیقی گروپ کینسر کی مختلف اقسام میں مریض کی بقا پر مختلف مدافعتی خلیوں کی ذیلی آبادی (سی ڈی 4، سی ڈی 68، سی ڈی 8، سی ڈی 20، فاکس پی 3، پی ڈی 1) کے اثرات کا مظاہرہ کرنے میں کامیاب رہے۔ چھاتی کا کینسر، بڑی آنت کا کینسر، معدے کا کینسر، میلانوما، غیر چھوٹے سیل پھیپھڑوں کا کینسر)۔ چونکہ کینسر تھراپی میں ایک نئی علاج کی حکمت عملی امیون چیک پوائنٹس (وہ مالیکیول جو اینٹی ٹیومرل امیون ری ایکشن کو روکتے ہیں) کو نشانہ بنا رہی ہے، ٹشو سائٹومیٹری کے ذریعے حاصل کردہ بصیرت نئے ٹارگٹ مالیکیولز/بائیو مارکرز کو تلاش کرنے کے ساتھ ساتھ مریضوں کے لیے بہترین علاج کی حکمت عملی کا تعین کرنے میں مدد کر سکتی ہے۔ امیونولوجی: امیون سیل کا سیاق و سباق سوزش کی بیماریوں کی صفت کی وضاحت کے لیے اہم ہے، جو اکثر انکولی اور/یا پیدائشی مدافعتی خلیوں کے خراب کام کا نتیجہ ہوتے ہیں۔ ٹشو سائٹومیٹری مخصوص خلیوں کا پتہ لگانے اور مقامی بنانے کے لیے مفید ہے، خاص طور پر متنوع آبادی، ان کے مقامی ٹشو ماحول میں اور بیماری کے پیچھے کے اشاروں کی شناخت کرنے کے لیے۔ مثال کے طور پر، اسے آئی جی جی 4 سے متعلق بیماریوں کی تحقیقات کے لیے استعمال کیا گیا تھا: ایک مقالے میں بتایا گیا ہے کہ فائبراسنگ میڈیاسٹینائٹس کو سی ڈی 4 + سی ٹی ایل کے ذریعے چلایا جا رہا ہے نہ کہ ٹی ایچ 2 خلیوں کے ذریعے جہاں سی ڈی 4 + سی ٹی ایل کی دراندازی کو ٹشو سائٹومیٹری کے ذریعے واضح کیا گیا تھا۔ فالو اپ مطالعات نے تفتیش کی کہ آئی جی جی 4 سے متعلق بیماری اور کمورا بیماری میں فولیکولر ٹی خلیات بی سیل کلاس کو تبدیل کرنے کے واقعات کو کس طرح متاثر کرتے ہیں-محققین نے ٹشو سائٹومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے اے آئی سی ڈی اے + سی ڈی 19 + بی خلیات اور آئی جی جی 4 کے اظہار کے درمیان ارتباط پایا۔ Mesenchymal اسٹیم سیلز کی خصوصیت: Mesenchymal اسٹیم سیلز (MSCs) ملٹی پوٹینٹ سیلز ہیں جن میں ہڈیوں، کارٹلیج، پٹھوں، دانتوں کی نشوونما اور چربی کے ٹشو جیسی کئی ذیلی اقسام میں فرق کرنے کی صلاحیت ہوتی ہے جو دوبارہ پیدا ہونے والی ادویات کے لیے طبی اہمیت رکھتے ہیں۔ تاہم، اگرچہ کم سے کم فینوٹائپک معیارات کی وضاحت کی گئی ہے، لیکن ایم ایس سی کو ان کی متنوع نوعیت کی وجہ سے ان کے الگ الگ بائیو مارکروں کے حوالے سے مزید نمایاں کرنے کی ضرورت ہے۔ ٹشو سائٹومیٹری پرسکون ایم سی ایس کے بائیو مارکروں کو بیان کرنے اور اس آبادی پر ہائیلورونان کے اثر کو مزید نمایاں کرنے میں امید افزا طور پر مدد کرتا ہے۔ ٹشو سائٹومیٹری کو گلیوبلاسٹوما کے ساتھ ایم ایس سی کے تعامل کی تحقیقات کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے: سیل فیوژن، ایکسٹرا سیلولر ویسیکل ٹرانسفر اور انٹر سیلولر مواصلات کی خصوصیت کے لیے۔ مزید برآں، ٹشو سائٹومیٹری کا استعمال میورین ہپپوکیمپس کی تصویر لینے اور الزائمر کی بیماری کے ماڈل کے طور پر ایم ایس سی ٹرانسپلانٹیشن کے ساتھ چوہوں میں ایم 1/ایم 2 مائکروگلیا کو دیکھنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ کووڈ-19: کووڈ-19 وبائی مرض کو بیماری کی ترقی اور شدت کا خاکہ پیش کرنے کے لیے مختلف آلات کی ضرورت تھی۔ ٹشو سائٹومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے، محققین نے مدافعتی خلیوں اور سارس-کوو-2 وائرس کے باہمی عمل اور بیماری پر اس کے اثرات کے بارے میں اطلاع دی: مثال کے طور پر، ایک تحقیق سے پتہ چلا ہے کہ شدید کووڈ-19 میں سی ڈی 4 + سائٹوٹوکسک ٹی خلیات پھیپھڑوں میں نمایاں طور پر پھیل گئے۔ ایک اور دریافت شدید کووڈ-19 میں لمف نوڈس اور سپلینز میں جراثیمی مراکز کے نقصان کی وضاحت کرتی ہے، جسے ملٹی کلر امیونو فلوریسنس سائٹومیٹری کے ذریعے دکھایا گیا تھا۔ نیورو سائنس: نیورو ڈیولپمنٹل عمل کا سراغ لگانا نیورو سائنس میں تحقیق کا ایک فعال شعبہ ہے۔ اعصابی نظام میں مختلف محرکات کے کردار کا تعین کرنے کے لیے مقداری بافتوں کا تجزیہ میدان میں بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے۔ ایک تحقیقی گروپ نے پلور پوٹینٹ اسٹیم خلیوں کی عصبی تفریق پر مقناطیسی میدان کے اثرات کے بارے میں اطلاع دی، جہاں ٹشو سائٹومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے فینوٹائپک اثرات کا مشاہدہ کیا گیا۔ نیورو سائنس میں ٹشو سائٹومیٹری کا ایک اور اطلاق ایک مطالعہ میں دکھایا گیا تھا جو ہائپوتھامک نیوران پر تناؤ کے اثر کا اندازہ کرنے کے لیے بنایا گیا تھا۔ حوالہ جات کلینیکل پیتھولوجی لیبارٹری تکنیک میڈیکل امیجنگ ہسٹوپیتھولوجی مائکروسکوپی