Solid-phase reversible immobilization
سالڈ فیز ریورسیبل امبوبلائزیشن، یا ایس پی آر آئی، حل سے نیوکلک ایسڈ کو صاف کرنے کا ایک طریقہ ہے۔ یہ سلیکا یا کاربوکسیل لیپت پیرا میگنیٹک موتیوں کا استعمال کرتا ہے، جو پولی تھیلین گلائکول اور نمک کی موجودگی میں نیوکلک ایسڈ سے الٹا جڑے ہوتے ہیں۔ ایس پی آر آئی ٹیکنالوجی کا ایک عام استعمال ترتیب وار رد عمل کے لیے پی سی آر کے ذریعے بڑھائے گئے ڈی این اے کے نمونوں کو صاف کرنا ہے: نیوکلک ایسڈ صاف کرنے میں استعمال ہونے والے ایس پی آر آئی موتیوں میں سلیکا یا کاربوکسیل گروپوں کے ساتھ لیپت پیرا مقناطیسی موتیاں ہوتی ہیں۔ جب موتیوں کو پولی تھیلین گلائکول اور نمکیات کے زیادہ ارتکاز والے حلوں میں دوبارہ معطل کیا جاتا ہے، تو وہ نیوکلک ایسڈ کے ساتھ الٹا پابند ہونے کی صلاحیت رکھتے ہیں۔ یہ بائنڈنگ سائز منتخب ہے، اس میں نیوکلک ایسڈ کے لمبے پولیمر چھوٹے سے زیادہ مؤثر طریقے سے باندھتے ہیں۔ ایس پی آر آئی صاف کرنے میں عام طور پر درج ذیل مراحل شامل ہوتے ہیں: پولی تھیلین گلائکول اور سوڈیم کلورائڈ کے محلول میں ایس پی آر آئی موتیوں کو نیوکلک ایسڈ کے نمونے کے ساتھ ملایا جاتا ہے۔ نیوکلک ایسڈ موتیوں سے جڑے ہوتے ہیں۔ مرکب کو مقناطیسی میدان میں رکھا جاتا ہے، جو نیوکلک ایسڈ سے جڑے موتیوں کو محلول سے الگ کرتا ہے۔ محلول کو ہٹا دیا جاتا ہے اور موتیوں کو پانی میں 80 فیصد ایتھنول کے ساتھ کئی بار دھویا جاتا ہے۔ بقیہ ایتھنول کو ہٹانے کے لیے موتیوں کو خشک ہونے دیا جاتا ہے۔ موتیوں کو مقناطیسی میدان سے ہٹا دیا جاتا ہے اور پانی یا ایلیوشن بفر میں دوبارہ معطل کر دیا جاتا ہے، جو موتیوں سے نیوکلک ایسڈ کو خارج کرتا ہے۔ مرکب کو ایک بار پھر مقناطیسی میدان میں رکھا جاتا ہے، جو موتیوں کو محلول سے الگ کرتا ہے۔ محلول، جس میں اب صاف شدہ نیوکلک ایسڈ ہوتے ہیں، کو ہٹا دیا جاتا ہے اور نیچے کی طرف کے استعمال کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ نیوکلک ایسڈ کے طریقے ڈی این اے سیکوینسنگ سالڈ فیز ایکسٹریکشن حوالہ جات نیوکلک ایسڈ بھی دیکھیں۔