Tandem mass tag
ٹینڈم ماس ٹیگ (ٹی ایم ٹی) ایک کیمیائی لیبل ہے جو ماس سپیکٹرومیٹری (ایم ایس) پر مبنی مقدار میں نمونہ ملٹی پلیکسنگ اور حیاتیاتی میکرو مالیکیولز جیسے پروٹین، پیپٹائڈز اور نیوکلک ایسڈ کی شناخت میں سہولت فراہم کرتا ہے۔ ٹی ایم ٹی کا تعلق ریجینٹس کے ایک خاندان سے ہے جسے آئسوبارک ماس ٹیگز کہا جاتا ہے جو ایک ہی کمیت والے مالیکیولز کا ایک مجموعہ ہے، لیکن ٹکڑے ٹکڑے ہونے کے بعد مختلف کمیت کے رپورٹر آئنز پیدا کرتے ہیں۔ پیمائش شدہ رپورٹر آئنوں کا رشتہ دار تناسب ٹیگ شدہ مالیکیول کی نسبتا کثرت کی نمائندگی کرتا ہے، حالانکہ آئن دبانے سے درستگی پر نقصان دہ اثر پڑتا ہے۔ ان پیچیدگیوں کے باوجود، ٹی ایم ٹی پر مبنی پروٹومکس کو لیبل فری کوانٹیفیکیشن سے زیادہ صحت سے متعلق ثابت کیا گیا ہے۔ پروٹین کی مقدار میں مدد کرنے کے علاوہ، ٹی ایم ٹی ٹیگز آر پی ایل سی-ایم ایس تجزیوں میں کچھ انتہائی ہائیڈروفیلک تجزیہ کاروں، جیسے فاسفوپیپٹائڈز کی کھوج کی حساسیت کو بھی بڑھا سکتے ہیں۔ ورژن فی الحال ٹی ایم ٹی کی چھ اقسام دستیاب ہیں: ٹی ایم ٹی زیرو، ایک غیر آئسوٹوپک طور پر تبدیل شدہ بنیادی ڈھانچہ ؛ ٹی ایم ٹی ڈوپلیکس، ایک واحد آئسوٹوپک متبادل کے ساتھ ماس ٹیگز کا ایک آئسوبارک جوڑا ؛ ٹی ایم ٹی سکسپلیکس، پانچ آئسوٹوپک متبادل کے ساتھ چھ ماس ٹیگز کا ایک آئسوبارک سیٹ ؛ ٹی ایم ٹی 10-پلیکس-10 آئسوٹوپک ماس ٹیگز کا ایک سیٹ جو ٹی ایم ٹی سکسپلیکس رپورٹر ریجن کا استعمال کرتا ہے، لیکن 0.0063 Da کا بڑے پیمانے پر فرق پیدا کرنے کے لیے مختلف عنصر آئسوٹوپ کا استعمال کرتا ہے، ٹی ایم ٹی پرو اصل ٹی ایم ٹی، اور ٹی ایم ٹی پرو زیرو سے مختلف رپورٹر اور ماس نارملائزر کے ساتھ 16 پلیکس ورژن۔ ٹیگز چار خطوں پر مشتمل ہوتے ہیں، یعنی ایک ماس رپورٹر ریجن (ایم)، ایک کلییویبل لنکر ریجن (ایف)، ایک ماس نارملائزیشن ریجن (این) اور ایک پروٹین ری ایکٹیو گروپ (آر)۔ تمام ٹیگز کے کیمیائی ڈھانچے ایک جیسے ہوتے ہیں لیکن ہر ایک میں مختلف پوزیشنوں پر تبدیل شدہ آاسوٹوپس ہوتے ہیں، جیسے کہ ماس رپورٹر اور ماس نارملائزیشن کے علاقوں میں ہر ٹیگ میں مختلف سالماتی کمیت ہوتی ہے۔ ٹیگز کے مشترکہ ایم-ایف-این-آر علاقوں میں ایک جیسے کل مالیکیولر وزن اور ساخت ہوتی ہے تاکہ کرومیٹوگرافک یا الیکٹروفوریٹک علیحدگی کے دوران اور سنگل ایم ایس موڈ میں، مختلف ٹیگز کے ساتھ لیبل کیے گئے مالیکیول ناقابل شناخت ہوں۔ ایم ایس/ایم ایس موڈ میں ٹکڑے ٹکڑے ہونے پر، ترتیب کی معلومات پیپٹائڈ بیک ہڈی کے ٹکڑے ٹکڑے ہونے سے حاصل کی جاتی ہیں اور مقدار کے اعداد و شمار بیک وقت ٹیگز کے ٹکڑے ٹکڑے ہونے سے حاصل کیے جاتے ہیں، جس سے بڑے پیمانے پر رپورٹر آئن پیدا ہوتے ہیں۔ لیبل والے پیپٹائڈز کی مقدار ٹی ایم ٹی ٹیگز کے ڈھانچے unimod.org پر یونومڈ ڈیٹا بیس کے ذریعے عوامی طور پر دستیاب ہیں اور اس لیے ماسکوٹ جیسے ماس سپیکٹرومیٹری سافٹ ویئر ٹیگ ماس کا حساب لگانے کے قابل ہیں۔ مزید برآں، ورژن 2.2 تک، ماسکوٹ میں اضافی سافٹ ویئر کے استعمال کے بغیر ٹی ایم ٹی اور دیگر آئسوبارک ماس ٹیگز کا استعمال کرتے ہوئے مقدار طے کرنے کی صلاحیت ہے۔ بدیہی طور پر، پروٹین کی پیمائش سے وابستہ اعتماد کا انحصار مختلف پیپٹائڈز کے تناسب کی مماثلت اور ان پیمائشوں کے سگنل کی سطح پر ہوتا ہے۔ ایک ریاضیاتی طور پر سخت نقطہ نظر جسے بی اے سی آئی کیو کہا جاتا ہے، جو پیپٹائڈ کی شدت اور پیپٹائڈ کی پیمائش کے معاہدے کو پروٹین کے تناسب کے لیے اعتماد کے وقفوں میں ضم کرتا ہے۔ ٹی کے او معیار کو مداخلت کا اندازہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ اسوبارک کیریئر تصور ٹی ایم ٹی ٹیگز عام طور پر مساوی کثرت کے نمونوں کو لیبل کرنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔ اگر لیبل والے نمونوں میں سے ایک زیادہ وافر مقدار میں ہے، تاہم، یہ تمام نمونوں کے لیے تجزیہ کی حساسیت میں اضافہ کر سکتا ہے۔ اس طرح کے آئسوبارک لیبل والے نمونوں کو آئسوبارک کیریئر کہا جاتا ہے۔ انہیں ماس سپیکٹرومیٹری کے ذریعے سنگل سیل پروٹین تجزیہ کے لیے متعارف کرایا گیا تھا، اور اس کے بہت سے دوسرے استعمال ملے ہیں۔ حوالہ جات بائیو کیمسٹری کا پتہ لگانے کے طریقے بائیوٹیکنالوجی ماس سپیکٹرومیٹری