Adenylylation
ایڈینیلیلیشن، جسے عام طور پر اے ایم پیلیشن کے نام سے جانا جاتا ہے، ایک ایسا عمل ہے جس میں ایک اڈینوسین مونو فاسفیٹ (اے ایم پی) مالیکیول پروٹین کے امینو ایسڈ سائیڈ چین سے مشترکہ طور پر منسلک ہوتا ہے۔ پروٹین کے ہائیڈروکسیل سائیڈ چین میں اے ایم پی کا یہ کوولینٹ اضافہ ترجمہ کے بعد کی ترمیم ہے۔ اڈینولیلیشن میں اڈینولیلیشن سے گزرنے والے مالیکیول کے ہائیڈروکسیل گروپ اور اڈینوسین مونو فاسفیٹ نیوکلیوٹائڈ کے فاسفیٹ گروپ (یعنی۔ اڈینیلک ایسڈ)۔ وہ انزائم جو اس عمل کو متحرک کرنے کی صلاحیت رکھتے ہیں انہیں ایمپیلیٹر کہتے ہیں۔ پروٹین میں جن معروف امینو ایسڈ کو نشانہ بنایا جاتا ہے وہ ٹائروسین اور تھریونین، اور بعض اوقات سیرائن ہوتے ہیں۔ جب کسی پروٹین پر چارج میں تبدیلی آتی ہے، تو یہ پروٹین کی خصوصیات کو متاثر کرتا ہے، عام طور پر پروٹین بنانے والے امینو ایسڈ کے تعاملات کے ذریعے اس کی شکل کو تبدیل کر کے۔ ایمپایلیشن کے پروٹین پر مختلف اثرات ہو سکتے ہیں۔ یہ پروٹین کی خصوصیات ہیں جیسے استحکام، انزیمیٹک سرگرمی، شریک عنصر بائنڈنگ، اور پروٹین کی بہت سی دیگر فعال صلاحیتیں۔ ایڈینیلیلیشن کا ایک اور کام امینو ایسڈ ایکٹیویشن ہے، جسے ٹی آر این اے امینو ایسیل سنتھٹیس کے ذریعے اتپریرک کیا جاتا ہے۔ ایمپایلیشن حاصل کرنے کے لیے سب سے زیادہ عام طور پر شناخت شدہ پروٹین جی ٹی پیسز، اور گلوٹامین سنتھٹیز ہیں۔ ایمپایلیشن کے لیے ذمہ دار ایڈینیلیٹرز انزائم، جنہیں ایمپیلیٹرز یا ایڈینیلی ٹرانسفرس کہا جاتا ہے، دو مختلف خاندانوں میں آتے ہیں، یہ سب ان کی ساختی خصوصیات اور استعمال شدہ میکانزم پر منحصر ہوتے ہیں۔ ایمپیلیٹر دو اتپریرک ہومولوگس حصوں سے بنایا جاتا ہے۔ ایک نصف ایڈینیلیلیشن رد عمل کو متحرک کرنے کا ذمہ دار ہے، جبکہ دوسرا نصف فاسفورولائٹک ڈیڈینلیلیشن رد عمل کو متحرک کرتا ہے۔ یہ دونوں خاندان ڈی این اے-β-پولی میریز نما اور فک خاندان ہیں۔ ڈی این اے-β-پولی میریز کی طرح، نیوکلیوٹائڈیل ٹرانسفرس کا ایک خاندان ہے۔ یہ زیادہ خاص طور پر GLnE خاندان کے نام سے جانا جاتا ہے۔ ایک مخصوص موٹف ہے جو اس مخصوص خاندان کو واضح کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ موٹف تین پھنسے ہوئے β-شیٹ پر مشتمل ہے جو میگنیشیم آئن کوآرڈینیشن اور فاسفیٹ بائنڈنگ کا حصہ ہے۔ اس خاندان میں ہونے والی سرگرمی کے لیے ایسپرٹیٹ ضروری ہے۔ فک ڈومین کا تعلق فڈو (فک/ڈاک) سپر فیملی سے ہے فک فیملی، جو کہ سائیکلک اے ایم پی ڈومین سے متاثر ایک تنت ہے، اے ایم پیلیشن انجام دینے کے لیے جانا جاتا ہے۔ یہ اصطلاح اس وقت بنائی گئی تھی جب ویبریو پیراہیمولیٹیکس سے VopS کو سیرائن پر AMP کے ساتھ RhoGTPaces میں ترمیم کرنے کے لیے دریافت کیا گیا تھا۔ پروٹین کا یہ خاندان زمین پر زندگی کے تمام شعبوں میں پایا جاتا ہے۔ اس کی ثالثی اے ٹی پی بائنڈنگ سائٹ الفا ہیلکس موٹف کے طریقہ کار کے ذریعے کی جاتی ہے۔ متعدی بیکٹیریا اس ڈومین کو فگوسیٹوسس کو روکنے اور خلیوں کی موت کا سبب بننے کے لیے استعمال کرتے ہیں۔ فک ڈومینز پروکیریوٹس اور یوکیریوٹس میں ارتقائی طور پر محفوظ ڈومینز ہیں جن کا تعلق فیڈو ڈومین سپر فیملی سے ہے۔ ایمپیلیٹرز کو ان کی اے ٹی پی ہائیڈرولیسس سرگرمی اور میٹابولائٹ کی ریورسیبل منتقلی کی وجہ سے پروٹین سبسٹریٹ کے ہائیڈروکسیل سائیڈ چین میں کینیس سے موازنہ کیا گیا ہے۔ تاہم، ایمپایلیشن α-فاسفیٹ گروپ پر نیوکلیوفیلک حملے کو متحرک کرتا ہے، جبکہ فاسفوریلیشن رد عمل میں کینیز γ-فاسفیٹ کو نشانہ بناتا ہے۔ اے ایم پیلیشن کا نیوکلیوفیلک حملہ پائروفاسفیٹ کو خارج کرنے کا باعث بنتا ہے اور اے ایم پی میں ترمیم شدہ پروٹین اے ایم پیلیشن رد عمل کی مصنوعات ہیں۔ ڈی-ایڈینیلیٹرز ڈی-ایمپیلیشن ایک الٹا رد عمل ہے جس میں اے ایم پی مالیکیول کو چین پروٹین کے امینو ایسڈ سائیڈ سے الگ کیا جاتا ہے۔ اس رد عمل کے لیے تین معروف میکانزم ہیں۔ بیکٹیریل جی ایس-اے ٹیز (جی ایل این ای) ایک دو طرفہ پروٹین کو الگ الگ این-ٹرمینل ایمپیلیشن اور سی-ٹرمینل ڈی-ایمپیلیشن ڈومینز کے ساتھ انکوڈ کرتا ہے جس کی سرگرمی پی آئی آئی اور متعلقہ پوسٹ ٹرانسلیشنل ترمیم کے ذریعے منظم ہوتی ہے۔ اس کے سبسٹریٹ ایمپیلیٹڈ گلوٹامین سنتھٹیس کی ڈی-ایمپیلیشن جی ایس اور آرتھو فاسفیٹ کے اڈینائل-ٹائروسین کے درمیان فاسفورولائٹک رد عمل کے ذریعے ہوتی ہے، جس کی وجہ سے اے ڈی پی اور غیر تبدیل شدہ گلوٹامین سنتھٹیس کی تشکیل ہوتی ہے۔ سی ڈی ڈی، ایک پروٹین جو میزبان خلیے میں پیتھوجینک بیکٹیریا لیجیئنلا نیوموفلا کے ذریعے متعارف کرایا جاتا ہے، ڈی-اے ایم پیلیٹس رب 1 ایک میزبان پروٹین ہے جو ایک مختلف لیجیئنلا نیوموفلا انزائم، اے ایم پیلیز سی ڈی ایم کے ذریعے تیار کیا جاتا ہے۔ اگرچہ میزبان میں ان دو مخالف اثرات کو متعارف کرانے کے پیتھوجین کا فائدہ واضح نہیں ہے، لیکن سی ڈی ڈی کے ذریعے کیے جانے والے بائیو کیمیکل رد عمل میں فاسفیٹیز جیسے ڈومین کا استعمال شامل ہوتا ہے تاکہ میزبان کے رب 1 کے ٹائروسین 77 سے اے ایم پی کے ہائیڈرولائٹک ہٹانے کو متحرک کیا جا سکے۔ جانوروں کے خلیوں میں بی آئی پی/جی آر پی 78 کے تھریونین 518 سے اے ایم پی کو ہٹانا اسی انزائم، ایف آئی سی ڈی کے ذریعے اتپریرک ہوتا ہے، جو اے ایم پی بی آئی پی کو متحرک کرتا ہے۔ بیکٹیریل جی ایس-ایٹیس کے برعکس، ایف آئی سی ڈی ایک ہی اتپریرک ڈومین کے ساتھ دونوں رد عمل انجام دیتا ہے۔ پروکیریوٹک بیکٹیریل ہومیوسٹاسس اے ایم پیلیشن بیکٹیریل ہومیوسٹاسس میں شامل ہے۔ سب سے مشہور مثال ایمپیلیٹر جی ایس-اے ٹیز (جی ایل این ای) ہے، جو گلوٹامین سنتھٹیز کے ایمپیلیشن کے ذریعے نائٹروجن میٹابولزم کے پیچیدہ ضابطے میں معاون ہے جو ایمپیلیشن اور ڈی اے ایم پیلیشن حصوں میں متعارف کرایا گیا تھا۔ ایمپیلیٹرز کی ایک اور مثال جو بیکٹیریل ہومیوسٹاسس میں کردار ادا کرتی ہے وہ کلاس I فک ایمپیلیٹرز (ایف آئی سی ٹی) ہے، جو ڈی این اے گائرز کی گیر بی ذیلی اکائی میں ترمیم کرتی ہے، جو ٹوپوئسومیرس IV میں پیر ای ذیلی اکائی کے اے ٹی پی بائنڈنگ کے لیے محفوظ ٹائروسین کے باقیات ہیں۔ ایمپایلیشن کے ذریعے یہ ڈی این اے گائرز غیر فعال ہونے سے ایس او ایس رسپانس چالو ہوتا ہے، جو ڈی این اے کے نقصان کے لیے سیلولر رسپانس ہے۔ ایف آئی سی ٹی ایمپایلیشن کی سرگرمی ریورسیبل ہے اور صرف گروتھ گرفتاری کا باعث بنتی ہے، لیکن سیل کی موت کا نہیں۔ لہذا، ایف آئی سی ٹی ایمپایلیشن خلیوں کے تناؤ کو منظم کرنے میں ایک کردار ادا کرتا ہے، جو کہ وولباچیا بیکٹیریا میں دکھایا گیا ہے کہ ڈاکسائی سائکلائن کے جواب میں ایف آئی سی ٹی کی سطح میں اضافہ ہوتا ہے۔ این میننگٹیڈس کا ایک کلاس III فک ایمپیلیٹر این ایم فک بھی اے ٹی پی بائنڈنگ کے لیے محفوظ ٹائروسین پر ایمپیلیٹ گیر بی میں ترمیم کرنے کے لیے پایا جاتا ہے۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ فک ڈومینز انتہائی محفوظ ہیں جو بیکٹیریا میں سیلولر تناؤ کو منظم کرنے میں ایمپایلیشن کے اہم کردار کی نشاندہی کرتے ہیں۔ این ایم ایف آئی سی کے ضابطے میں این ایم ایف آئی سی سرگرمی کو چالو کرنے کے لیے ارتکاز پر منحصر مونومیرائزیشن اور آٹو اے ایم پیلیشن شامل ہے۔ بیکٹیریل پیتھوجینسیٹی بیکٹیریا پروٹین، جسے ایفیکٹر بھی کہا جاتا ہے، کو ایمپایلیشن کا استعمال کرتے ہوئے دکھایا گیا ہے۔ وی او پی ایس، آئی بی پی اے، اور ڈی آر آر اے جیسے اثرات کو ایمپیلیٹ میزبان جی ٹی پیسز اور ایکٹین سائٹوسکیلیٹن تبدیلیوں کا سبب بننے کے لیے دکھایا گیا ہے۔ جی ٹی پیسز ایمپیلیٹرز کے عام اہداف ہیں۔ رو، راب، اور آرف جی ٹی پیس خاندان ایکٹین سائٹوسکیلیٹن ڈائنامکس اور ویسیکلر اسمگلنگ میں ملوث ہیں۔ وہ میزبان خلیے میں فگوسیٹوسس جیسے سیلولر کنٹرول میکانزم میں بھی کردار ادا کرتے ہیں۔ پیتھوجین میزبان سیل فگوسیٹوسس کو متاثر کرکے یا روک کر اس کی داخلی کاری کو بڑھاتا ہے یا روکتا ہے۔ Vibrio parahaemolyticus ایک گرام منفی بیکٹیریا ہے جو انسانوں میں خام یا کم پکی ہوئی سمندری غذا کے استعمال کے نتیجے میں فوڈ پوائزننگ کا سبب بنتا ہے۔ VopS، ایک ٹائپ III ایفیکٹر جو Vibrio parahaemolyticus میں پایا جاتا ہے، ایک Fic ڈومین پر مشتمل ہوتا ہے جس میں ایک محفوظ HPFx (D/E) GN (G/K) R موٹف ہوتا ہے جس میں AMPyلیشن کے لیے ضروری ہسٹائڈائن کے باقیات ہوتے ہیں۔ وی او پی ایس رو جی ٹی پیسز کے سوئچ 1 خطے میں تھریونین کے باقیات میں ترمیم کرکے ایکٹین اسمبلی کو روکتا ہے۔ اے ٹی پی کا استعمال کرتے ہوئے اے ایم پی کے حصے کو تھریونین کے باقیات میں منتقل کرنے کے نتیجے میں سٹیرک رکاوٹ پیدا ہوتی ہے، اور اس طرح رو جی ٹی پیسیس کو نیچے کی طرف اثر انداز کرنے والوں کے ساتھ تعامل کرنے سے روکتا ہے۔ وی او پی ایس آر ایچ او اے اور سیل ڈویژن سائیکل 42 (سی ڈی سی 42) کو بھی ایڈینیلیٹ کرتا ہے، جس کی وجہ سے ایکٹین فلامینٹ نیٹ ورک الگ ہوجاتا ہے۔ نتیجے کے طور پر، میزبان خلیے کا ایکٹین سائٹوسکیلیٹن کنٹرول غیر فعال ہو جاتا ہے، جس کی وجہ سے خلیے گول ہو جاتے ہیں۔ آئی بی پی اے ایچ سومنی سے یوکرائیوٹک خلیوں میں خارج ہوتا ہے، جو مویشیوں میں ایک گرام منفی بیکٹیریا ہے جو سانس کے اپیتھیلیم انفیکشن کا سبب بنتا ہے۔ یہ ایفیکٹر سی-ٹرمینل ریجن میں دو فک ڈومینز پر مشتمل ہے۔ رو فیملی جی ٹی پیسز کے آئی بی پی اے فک ڈومین کا ایمپایلیشن اس کی سائٹوٹوکسائٹی کا ذمہ دار ہے۔ دونوں ایف آئی سی ڈومینز کے میزبان خلیوں کے سائٹوسکیلیٹن پر وی او پی ایس کی طرح ہی اثرات ہوتے ہیں۔ سوئچ 1 خطے کے ٹائروسین کے باقیات پر ایمپایلیشن پی اے کے جیسے ڈاون اسٹریم سبسٹریٹس کے ساتھ جی ٹی پیسز کے تعامل کو روکتا ہے۔ ڈی آر آر اے لیجیئنلا نیوموفلا سے ڈاٹ/آئی سی ایم ٹائپ IV ٹرانسلوکیشن سسٹم سبسٹریٹ ڈی آر آر اے ہے۔ یہ میزبان خلیوں کے جی ٹی پیسز میں ترمیم کرنے کے لیے ایل نیوموفلا کے ذریعے خارج ہونے والا اثر کار ہے۔ یہ ترمیم میزبان خلیوں میں بیکٹیریا کی بقا میں اضافہ کرتی ہے۔ ڈی آر آر اے رب 1 بی مخصوص گوانائن نیوکلیوٹائڈ ایکسچینج فیکٹر (جی ای ایف) ڈومین، ایک سی-ٹرمینل لپڈ بائنڈنگ ڈومین اور غیر واضح سائٹوٹوکسک خصوصیات کے ساتھ ایک این-ٹرمینل ڈومین پر مشتمل ہے۔ تحقیقی کاموں سے پتہ چلتا ہے کہ این-ٹرمینل اور مکمل لمبائی والا ڈی آر آر اے میزبان کے رب 1 بی پروٹین (راس سے متعلق پروٹین) کی طرف ایمپیلیٹرز کی سرگرمی کو ظاہر کرتا ہے، جو کہ رب 1 بی جی ای ایف ڈومین کا سبسٹریٹ بھی ہے۔ رب 1 بی پروٹین جی ٹی پیس رب ہے جو پھپھوندی کی نقل و حمل اور جھلی کے فیوژن کو منظم کرتا ہے۔ بیکٹیریا ایمپیلیٹرز کے ذریعہ ایڈینیلیشن رب 1 بی کی جی ٹی پی سے منسلک حالت کو طول دیتا ہے۔ اس طرح، ایفیکٹر ڈی آر آر اے کا کردار انفیکشن کے دوران ان کی نقل کے لیے بیکٹیریا کے ویکیولز کے فوائد سے جڑا ہوا ہے۔ یوکرائیوٹک پودوں اور خمیر میں کوئی معلوم اینڈوجینس ایمپیلیٹنگ انزائم نہیں ہوتے ہیں، لیکن جانوروں کے جینوموں کو فک ڈومین ایمپیلیز کو انکوڈنگ کرنے والے جین کی ایک نقل سے نوازا جاتا ہے، جسے ممکنہ طور پر جانوروں کے ابتدائی آباؤ اجداد نے پروکیریوٹ سے افقی جین کی منتقلی کے ذریعے حاصل کیا تھا۔ انسانی پروٹین جسے عام طور پر ایف آئی سی ڈی کہا جاتا ہے، اس کی شناخت پہلے ہنٹنگٹن سے وابستہ پروٹین ای کے طور پر کی گئی تھی (ہائپ ای ؛ خمیر دو ہائبرڈ اسکرین سے پیدا ہونے والی ایک تفویض، لیکن قابل اعتراض مطابقت کی وجہ سے، ہنٹنگٹن اور ہائپ ای/ایف آئی سی ڈی مختلف سیلولر کمپارٹمنٹس میں مقامی ہیں)۔ ڈروسفیلا میلانوگاسٹر (سی جی 9523) اور سی ایلیگنس (ایف آئی سی-1) میں سی جی 9523 ہومولوگس نے بھی توجہ حاصل کی ہے۔ تمام جانوروں میں ایف آئی سی ڈی کی ساخت ایک جیسی ہوتی ہے۔ یہ ایک ٹائپ II ٹرانس میمبرین ڈومین پروٹین ہے، جس میں ایک مختصر سائٹوپلاسمک ڈومین ہوتا ہے جس کے بعد جھلی اینکر ہوتا ہے جو پروٹین کو اینڈوپلاسمک ریٹیکولم (ای آر) میں رکھتا ہے اور طویل سی-ٹرمینل حصہ جو ای آر میں رہتا ہے اور ٹیٹراٹریکوپیپٹائڈ ریپیٹس (ٹی پی آر) پر مشتمل ہوتا ہے جس کے بعد ایک اتپریرک فک ڈومین ہوتا ہے۔ اینڈوپلاسمک ریٹیکولم جانوروں کے خلیے ایمپیلیز کی دریافت، اس کے بعد اس کی ای آر لوکلائزیشن کی دریافت اور یہ کہ بی آئی پی اس کی سرگرمی کے لیے ایک نمایاں سبسٹریٹ ہے، اہم پیش رفت تھی۔ بی آئی پی (جسے جی آر پی 78 بھی کہا جاتا ہے) طویل عرصے سے ایک غیر فعال پوسٹ ٹرانسلیشن ترمیم سے گزرنے کے لیے جانا جاتا تھا، لیکن اس کی نوعیت مبہم ہے۔ وسیع پیمانے پر اے ڈی پی-رائبوسیلیشن سمجھا جاتا ہے، یہ ایف آئی سی ڈی کی ثالثی میں ایمپیلیشن ثابت ہوتا ہے، کیونکہ خلیوں میں ایف آئی سی ڈی جین کو غیر فعال کرنے سے بی آئی پی کی پیمائش کے بعد کی تمام ترامیم کو ختم کر دیا گیا۔ بی آئی پی ایک ای آر مقامی پروٹین چیپرون ہے جس کی سرگرمی کو جین ایکسپریشن پروگرام کے ذریعے نقل کی سطح پر سختی سے منظم کیا جاتا ہے جسے ان فولڈڈ پروٹین رسپانس (یو پی آر) کہا جاتا ہے۔ یو پی آر ایک ہومیوسٹیٹک عمل ہے جو ای آر پروٹوسٹاسس کو برقرار رکھنے میں مدد کے لیے بی آئی پی (اور بہت سے دوسرے پروٹین) کی نقل کی شرح کو ای آر (نام نہاد ای آر تناؤ) میں بے نقاب پروٹین کے بوجھ سے جوڑتا ہے۔ ایمپایلیشن بی آئی پی کی سرگرمی کے کنٹرول کی ایک اور تیز تر ترجمہ کے بعد کی پرت کا اضافہ کرتا ہے، کیونکہ بی آئی پی کے سبسٹریٹ بائنڈنگ ڈومین کے تھر 518 کی ترمیم اے ایم پی کے ساتھ چیپرون کو ایک غیر فعال تشکیل میں بند کر دیتی ہے۔ اضافی بی آئی پی کو غیر فعال کرنے کے لیے اس ترمیم کو منتخب طور پر ای آر تناؤ کے کم ہونے کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ تاہم، جیسے جیسے ای آر تناؤ دوبارہ بڑھتا ہے، وہی انزائم، ایف آئی سی ڈی، مخالف رد عمل، بی آئی پی ڈی-ایمپیلیشن کو متحرک کرتا ہے۔ بی آئی پی ایمپایلیشن اور ڈی ایمپایلیشن کی ساختی بنیاد کی تفہیم بتدریج ابھر رہی ہے، جیسا کہ الوسٹری کے اشارے ہیں جو ایف آئی سی ڈی کی سرگرمی میں تبدیلی کو منظم کر سکتے ہیں لیکن اس عمل کی اہم تفصیلات جیسا کہ یہ خلیوں میں ہوتا ہے ابھی دریافت ہونا باقی ہیں۔ تھری 518 پر بی آئی پی ایمپیلیشن (اور ڈی-ایمپیلیشن) میں ایف آئی سی ڈی کے کردار کو بائیو کیمیکل اور ساختی مطالعات کی طرف سے اچھی طرح سے حمایت حاصل ہے۔ شواہد یہ بھی پیش کیے گئے ہیں کہ کچھ حالات میں ایف آئی سی ڈی بی آئی پی کے نیوکلیوٹائڈ بائنڈنگ ڈومین میں ایک مختلف باقیات، تھر 366 کو ایمپیلیٹ کر سکتا ہے۔ سینورابڈائٹس ایلیگنس فک-1 واحد فک پروٹین ہے جو سی۔ ایلیگنس کے جینیاتی کوڈ میں موجود ہے۔ یہ بنیادی طور پر بالغ جرملائن خلیوں اور جنین خلیوں کے ای آر جوہری لفافے میں پایا جاتا ہے، لیکن سائٹوپلازم کے اندر تھوڑی مقدار میں پایا جا سکتا ہے۔ ایف آئی سی ڈی-1 کے اس اضافی ای آر پول کو نیماتوڈ کے اندر بنیادی ہسٹونز اور ای ای ایف 1-اے قسم کے ترجمے کے عوامل کی ایمپایلیشن کا سہرا دیا جاتا ہے۔ اگرچہ ایمپایلیشن کی مختلف سطحوں نے نیماتوڈ کے رویے یا فزیولوجی کے اندر کوئی نمایاں اثرات پیدا نہیں کیے، لیکن فعال ایف آئی سی-1 ڈومینز کے ہم منصبوں کے مقابلے میں ایف آئی سی-1 ناک آؤٹ کیڑے سیوڈوموناس ایروگینوسا کے انفیکشن کے لیے زیادہ حساس تھے، جس سے سیلولر اہداف کے ایمپایلیشن اور نیماتوڈز کے اندر مدافعتی ردعمل کے درمیان تعلق ظاہر ہوتا ہے۔ ایف آئی سی ڈی (سی جی 9523) میں کمی والی ڈروسفیلا میلانوگاسٹر مکھی کو نابینا قرار دیا گیا ہے۔ ابتدائی طور پر، اس عیب کو کیپیٹیٹ پروجیکشنز کی خلیے کی سطح پر ایف آئی سی ڈی کے کردار سے منسوب کیا گیا تھا-نیورو ٹرانسمیٹر ری سائیکلنگ کی ایک تخیلاتی سائٹ تاہم بعد کے مطالعے میں بصری مسئلے میں بی آئی پی تھر 366 کے ایف آئی سی ڈی کی ثالثی والے ایمپیلیشن کو شامل کیا گیا۔ طبی اہمیت پریسیناپٹک پروٹین α-سنکیوکلین کو ایف آئی سی ڈی ایمپیلیشن کا ہدف پایا گیا۔ αSyn کے ہائپ ای کی ثالثی میں ہونے والے ایڈینیلیلیشن کے دوران، αSyn کا جمع ہونا کم ہو جاتا ہے اور نیوروٹوکسائٹی اور ER تناؤ دونوں وٹرو میں کم ہوتے پائے گئے۔ اس طرح، αSyn کا ایڈینیلیلیشن ممکنہ طور پر ER تناؤ اور αSyn جمع کرنے کے لیے ایک حفاظتی ردعمل ہے۔ تاہم، چونکہ اے سین اور ایف آئی سی ڈی مختلف حصوں میں رہتے ہیں، ان دعووں کی اہمیت کی تصدیق کے لیے مزید تحقیق کی ضرورت ہے۔ ڈٹیکشن کیمیائی ہینڈل کیمیائی ہینڈل کا استعمال ترجمہ کے بعد ترمیم شدہ پروٹین کا پتہ لگانے کے لیے کیا جاتا ہے۔ حال ہی میں، ایک این 6 پی اے ٹی پی ہے جس میں اے ٹی پی کے اڈینائن کی این 6 پوزیشن پر ایک الکینائل ٹیگ (پروپرجیل) ہوتا ہے۔ یہ N6pATP AMPylated پروٹین کا پتہ لگانے کے لیے کلک ری ایکشن کے ساتھ مل جاتا ہے۔ غیر تسلیم شدہ ترمیم شدہ پروٹین کا پتہ لگانے اور VopS سبسٹریٹس کو لیبل کرنے کے لیے، ایسا کرنے کے لیے اڈینائن N6 NH2 پر فلوروفور کے ساتھ ATP مشتقات کا استعمال کیا جاتا ہے۔ اینٹی باڈی پر مبنی طریقہ اینٹی باڈی اپنی اعلی وابستگی اور انتخاب کے لیے مشہور ہے، اس لیے یہ AMPylated پروٹین کا پتہ لگانے کا اچھا طریقہ ہے۔ حال ہی میں، ɑ-AMP اینٹی باڈیز کا استعمال خلیوں اور سیل لائسیٹس سے AMPylated پروٹینز (خاص طور پر AMPylated tirosine اور AMPylated threonine) کا براہ راست پتہ لگانے اور الگ کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ ایمپایلیشن ترجمہ کے بعد کی ترمیم ہے، لہذا یہ اے ایم پی اور ہائیڈروفوبیسیٹی کے قطبی کردار کو دے کر پروٹین کی خصوصیات میں ترمیم کرے گا۔ اس طرح، اینٹی باڈیز کا استعمال کرنے کے بجائے جو پوری پیپٹائڈ ترتیب کا پتہ لگاتے ہیں، اے ایم پی اینٹی باڈیز کو براہ راست مخصوص امینو ایسڈ کو نشانہ بنانے کو ترجیح دی جاتی ہے۔ ماس سپیکٹرومیٹری اس سے پہلے، بہت سے سائنسی کاموں میں اے ایم پیلیٹڈ پیپٹائڈز کا پتہ لگانے کے لیے مختلف ٹکڑے ٹکڑے کرنے کے طریقوں میں ماس سپیکٹرومیٹری (ایم ایس) کا استعمال کیا جاتا تھا۔ مخصوص ٹکڑے ٹکڑے کرنے کی تکنیکوں کے جواب میں، اے ایم پی کے مختلف حصوں میں اے ایم پیلیٹڈ پروٹین کے سلسلے منتشر ہو گئے۔ جبکہ الیکٹران ٹرانسفر ڈس ایسوسی ایشن (ای ٹی ڈی) کم سے کم ٹکڑے اور کم پیچیدہ سپیکٹرا بناتا ہے، تصادم سے چلنے والی ڈس ایسوسی ایشن (سی آئی ڈی) اور ہائی انرجی کولیشن (ایچ سی ڈی) ٹکڑے ٹکڑے متعدد اے ایم پی ٹکڑے پیدا کرکے اے ایم پیلیٹڈ پروٹین کی شناخت کے لیے موزوں خصوصیت والے آئن پیدا کرتے ہیں۔ اے ایم پی کے استحکام کی وجہ سے، پیپٹائڈ فریگمینٹیشن سپیکٹر کو دستی طور پر یا سرچ انجنوں کے ساتھ پڑھنا آسان ہے۔ 6-50 ایم یو ایم سے لے کر کم از کم 30 گنا سلیکٹیویٹی بمقابلہ ہائپ ای تک کے انفیکٹوری کانسٹینٹ (کی) کے ساتھ پروٹین ایمپایلیشن کے انفیکٹرز دریافت کیے گئے ہیں۔ حوالہ جات بائیو کیمسٹری