P19 cell
پی 19 خلیات ایک جنین کارسنوما سیل لائن ہے جو چوہوں میں جنین سے ماخوذ ٹیراٹو کارسنوما سے حاصل ہوتی ہے۔ خلیے کی لکیر پلور پوٹینٹ ہوتی ہے اور یہ جراثیم کی تینوں تہوں کے خلیوں کی اقسام میں فرق کر سکتی ہے۔ نیز، یہ سب سے زیادہ نمایاں جنین کارسنوما (ای سی) سیل لائن ہے جسے مختلف مخصوص علاج کے ذریعے کارڈیک پٹھوں کے خلیوں اور نیورونل خلیوں میں داخل کیا جا سکتا ہے۔ درحقیقت، مجموعی پی 19 خلیوں کو ڈائی میتھائل سلفوکسائڈ (ڈی ایم ایس او) سے بے نقاب کرنے سے کارڈیک اور کنکال کے پٹھوں میں تفریق پیدا ہوتی ہے۔ نیز، پی 19 خلیوں کو ریٹینوک ایسڈ (آر اے) سے بے نقاب کرنا انہیں نیورونل خلیوں میں الگ کر سکتا ہے۔ P19 سیل لائن کی ابتدا انسانوں میں کینسر کے خلیات مریض کی موت کا باعث بن سکتے ہیں اگر جارحانہ کینسر سیل بڑھتا ہے اور میٹاسٹاسائز ہوتا ہے۔ تاہم، محققین ان خلیوں کو کینسر کے خلیوں کی نشوونما کا مطالعہ کرنے کے لیے استعمال کرتے ہیں تاکہ مزید مخصوص علاج تلاش کیے جا سکیں۔ ترقیاتی حیاتیات کے ماہرین کے لیے، جنین کارسنوما، جو ٹیراٹو کارسنوما سے حاصل ہوتا ہے، ترقیاتی مطالعہ کے لیے ایک اچھا مقصد ہے۔ 1982 میں، میک برنی اور راجرز نے ٹیومر کی نشوونما کو فروغ دینے کے لیے 7.5 دن کے چوہے کے جنین کو خصیوں میں ٹرانسپلانٹ کیا۔ غیر متفرق سٹیم خلیوں پر مشتمل سیل کلچرز کو بنیادی ٹیومر سے الگ کیا گیا تھا جس میں یوپلوئڈ کیریوٹائپ ہوتا ہے۔ ان سٹیم سیلز کو ایمبریونل کارسنوما P19 سیلز کا نام دیا گیا۔ یہ اخذ شدہ P19 خلیے فیڈر خلیوں کے بغیر تیزی سے بڑھے اور ان کی دیکھ بھال کرنا آسان تھا۔ مزید برآں، پی 19 خلیوں کی کثیر صلاحیت کی تصدیق خلیوں کو ماؤس کے دوسرے تناؤ کے بلاسٹوسسٹ میں انجیکشن لگا کر کی گئی۔ محققین نے پایا کہ وصول کنندہ چوہے میں جراثیم کی تینوں تہوں کے بافت بڑھ رہے تھے۔ اپنے مسلسل مطالعات کی بنیاد پر، انہوں نے اصل P19 خلیوں سے ذیلی قسم کی سیل لائنیں حاصل کیں: P19S18، P19D3، P19RAC65 اور P19C16۔ ان ذیلی قسم کی سیل لائنوں کے درمیان فرق بالترتیب ریٹینوک ایسڈ یا ڈی ایم ایس او کے ساتھ علاج کے جواب میں نیورونل خلیوں یا پٹھوں کے خلیوں میں فرق کرنے کی صلاحیت ہے۔ حال ہی میں، مختلف مطالعات سیل لائنیں پیدا کرتے ہیں جو ابتدائی طور پر مختلف P19 خلیوں سے اخذ کیے گئے تھے۔ P19 خلیوں کی پلوری پوٹینسی کی وجہ سے، وہ نئی ماخوذ سیل لائنیں آکٹوڈرم، میسوڈرم اور اینڈوڈرم جیسے خلیات ہو سکتی ہیں۔ مستحکم کروموسومل ساخت کی وجہ سے پی 19 خلیوں پی 19 خلیوں کی تفریق کو تیز رفتار نمو میں برقرار رکھا جا سکتا ہے۔ چونکہ جنین کارسنوما تینوں جراثیم کی تہوں کے خلیوں میں فرق کر سکتا ہے، پی 19 خلیات ان آکٹوڈرم، میسوڈرم اور اینڈوڈرم جیسے خلیوں میں بھی فرق کر سکتے ہیں۔ جب جنین کے کارسنوما خلیوں کو زیادہ کثافت پر کلچر کیا جاتا ہے، تو وہ فرق کرنا شروع کردیتے ہیں۔ خلیوں کو ایک جنین جسم میں جمع کرکے، ای سی خلیات تفریق پر بھی عمل کر سکتے ہیں۔ پی 19 خلیوں میں، جمع شدہ جنین جسم کے خلیوں میں منشیات کے غیر زہریلے ارتکاز کا اضافہ اضافی دوا کے لحاظ سے پی 19 خلیوں کو مخصوص سیل لائنوں میں تفریق کا باعث بن سکتا ہے۔ دو سب سے عام اور موثر دوائیں ریٹینوک ایسڈ (آر اے) اور ڈائیمیتھائل سلفوکسائڈ (ڈی ایم ایس او) ہیں۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ آر اے کا ایک خاص ارتکاز پی 19 خلیوں کو نیورونل خلیوں میں فرق کرنے پر آمادہ کر سکتا ہے، بشمول نیوران اور گلیل خلیات، جبکہ 0.5%-1% ڈی ایم ایس او نے پی 19 خلیوں کو کارڈیک یا کنکال کے پٹھوں کے خلیوں میں فرق کرنے پر مجبور کیا۔ آر اے علاج کے طریقہ کار میں، نیوران، ایسٹروگلیا اور فائبربلاسٹ کی شناخت جمع ہونے کے بعد کی جا سکتی ہے۔ مختلف خلیوں میں کولین ایکٹیل ٹرانسفرس اور ایکٹیل کولینسٹیرس کی سرگرمیاں بھی ہوتی ہیں۔ جب ڈی ایم ایس او کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے، تو کارڈیک پٹھوں کے خلیات 5 دن کی نمائش کے بعد تیار ہوتے ہیں اور کنکال کے پٹھوں کے خلیات 8 دن کی نمائش کے بعد ظاہر ہوتے ہیں۔ ان مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ منشیات کی نمائش کثیر الجہتی P19 خلیوں کو خلیوں کی مختلف تہوں میں فرق کرنے کا سبب بنتی ہے۔ چونکہ ریٹینوک ایسڈ یا ڈی ایم ایس او کا ارتکاز خلیوں کے لیے غیر زہریلا ہوتا ہے، اس لیے دوا سے متعلق مخصوص تفریق خلیوں کی شمولیت کی وجہ سے ہوتی ہے نہ کہ انتخاب کی وجہ سے۔ منشیات سے متعلق مخصوص تفریق کے طریقہ کار کی تحقیقات کے لیے پی 19 خلیوں کے میوٹینٹ تیار کیے گئے ہیں۔ مزید برآں، جین کے اظہار کا مطالعہ کرکے یا پی 19 خلیوں کے میوٹینٹ پیدا کرکے نیوروجینیسیس اور میوجینیسیس سے متعلق سگنلنگ کے راستوں کی بھی تحقیقات کی گئیں۔ P19 خلیوں میں نیوروجینیسیس۔ ریٹینوک ایسڈ کے ساتھ غیر متفرق P19 خلیوں کا علاج خاص طور پر انہیں نیورونل خلیوں میں داخل کر سکتا ہے۔ آر اے کی 1 ایم یو ایم سے 3 ایم یو ایم کے درمیان خوراکوں کا استعمال سب سے زیادہ پرچر خلیے کی قسم کے طور پر نیوران پیدا کر سکتا ہے۔ اس علاج کے تحت نیوران چھ دن اور نو دن کے درمیان سب سے زیادہ آبادی تک پہنچ گئے۔ کئی نیورونل مارکر جیسے نیوروفیلامینٹ پروٹین، ایچ این کے-1 اینٹیجن اور ٹیٹنس ٹاکسن بائنڈنگ سائٹس ان دنوں کے دوران اعلی ترین سطح پر ظاہر ہوتے ہیں۔ چھ سے نو دن کے علاج کے بعد، متعلقہ نیورونل آبادی میں کمی آتی ہے، ممکنہ طور پر غیر نیورونل خلیوں کے تیزی سے پھیلاؤ کی وجہ سے۔ 10 دن کی نمائش کے بعد، گلیل فائبرلیری ایسڈک پروٹین (جی ایف اے پی) کا استعمال کرتے ہوئے ایسٹروگلیل خلیوں کا پتہ لگایا جا سکتا ہے، جو گلیل خلیوں کا ایک مخصوص مارکر ہے۔ نیوران اور ایسٹروسائٹس کے علاوہ، پی 19 خلیات اولیگوڈینڈروسائٹس میں بھی فرق کر سکتے ہیں، جن کا پتہ مخصوص مارکر، مائیلن سے وابستہ گلائکوپروٹین اور 2 '، 3'-سائکلک-نیوکلیوٹائڈ 3 '-فاسفوڈیسٹیریس کا استعمال کرتے ہوئے لگایا جا سکتا ہے۔ مزید برآں، اولیگوڈینڈروسائٹس بھی تیار ہوئے اور چوہوں میں فائبر کے بنڈلوں میں منتقل ہو گئے جب آر اے سے چلنے والے خلیوں کو دماغ میں ٹرانسپلانٹ کیا گیا۔ ریٹینوک ایسڈ نہ صرف پی 19 خلیوں بلکہ دیگر پروجینیٹر خلیوں یا جنین اسٹیم خلیوں کو بھی تفریق کی طرف راغب کر سکتا ہے۔ چونکہ ریٹینوک ایسڈ کے علاج کے بعد خلیات فوری طور پر نیورونل مارکر جینز کا اظہار نہیں کرتے تھے، اس لیے آر اے کو سیلولر تفریق پر عمل کرنے کے لیے کچھ راستہ شروع کرنا چاہیے۔ بہت سے مطالعات میں آر اے سے متاثر میکانزم کی تحقیقات کے لیے پی 19 خلیوں کا استعمال کیا گیا، جس میں ریٹینوک ایسڈ ریسیپٹر جینز کا میوٹینٹ ایلیل تیار کرنا اور آر اے کے سامنے آتے ہوئے ریسیپٹر جینز، ہاکس جینز اور ریٹینول بائنڈنگ پروٹینز کے اظہار کا مطالعہ کرنا شامل ہے۔ ان تمام مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ پی 19 سیل مخصوص سیلولر راستے میں مداخلت کرنے والی دوائیوں کے طریقہ کار کی تحقیقات کے لیے ایک اچھا ان وٹرو ماڈل سسٹم ہے۔ مزید برآں، پی 19 سیل میں آر اے سے متاثر نیوروجینیسیس کی صلاحیت کا استعمال کرتے ہوئے، بہت سے محققین نے نیورو-یا گلیوجینیسیس کے ان وٹرو تفریق کے طریقہ کار کی شناخت کرنا شروع کردی۔ کئی متعلقہ راستوں یا بشمول ڈبلیو این ٹی/β-کیٹینن راستے، نوچ راستے اور ہیج ہاگ راستے کی تحقیقات یا تو جین کے اظہار کا استعمال کرتے ہوئے یا متعلقہ جینوں کے لیے ایللیز پیدا کرنے کے ذریعے کی جاتی ہیں۔ پی 19 سیل لائن میں میوجینیسیس ریٹینوک ایسڈ کی طرح، ڈی ایم ایس او سے متاثر تفریق پی 19 خلیوں کے لیے مخصوص نہیں ہے۔ یہ نیورو بلاسٹوما خلیات، پھیپھڑوں کے کینسر کے خلیات اور ماؤس ای ایس خلیات کو بھی متاثر کر سکتا ہے۔ 0.5-1 ٪ کے ارتکاز پر DMSO نے P19 خلیوں کو میسوڈرمل اور اینڈوڈرمل خلیوں کی اقسام کو جمع کرنے اور ان پر عمل کرنے کے لیے آمادہ کیا۔ جمع اور تفریق کے دوران ہونے والے سیلولر میکانزم کا ابھی تک مکمل مطالعہ نہیں کیا گیا ہے۔ تاہم، کچھ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ سیلولر مواصلات P19 خلیوں میں پٹھوں کی تفریق میں اہم کردار ادا کرتا ہے جو اس بات کی وضاحت کر سکتا ہے کہ پٹھوں کی تفریق پر عمل کرنے کے لیے خلیوں کو پہلے جمع کرنے کی ضرورت کیوں ہے۔ پی 19 خلیوں میں مایوجینیسیس کے طریقہ کار کو واضح کرنے کے لیے، کئی کارڈیک مخصوص ٹرانسکرپشن عوامل بشمول جی اے ٹی اے-4، ایم ای ایف 2 سی، ایم ایس ایکس-1، Nkx2.5، ایم ایچ او ایکس، ایم ایس ایکس-2 اور ایم ایل پی تفریق کے دوران تبدیل ہوتے پائے جاتے ہیں۔ رپورٹس سے پتہ چلتا ہے کہ جی اے ٹی اے-4، NKx2.5 اور ایم ای ایف 2 سی سب کو ڈی ایم ایس او کے شامل ہونے کے بعد ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ حالیہ برسوں میں، پی 19 خلیوں کو کارڈیک تفریق اور مایوجینیسیس کے طریقہ کار کا مطالعہ کرنے میں بھی استعمال کیا گیا تھا۔ اہم متاثرہ سگنلنگ کا راستہ، ہڈی مورفوجنیٹک پروٹین (بی ایم پی) کا راستہ پی 19 خلیوں میں سب سے زیادہ سختی سے مطالعہ شدہ سگنلنگ ہے۔ پی 19 سی ایل 6 نوگین سیل لائن تیار کرکے، جو بی ایم پی مخالف نوگین کو زیادہ سے زیادہ ظاہر کرتا ہے، انہوں نے پایا کہ جب 1 فیصد ڈی ایم ایس او کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے تو اتپریورتن خلیات کارڈیومیوسائٹس میں فرق نہیں کرتے ہیں، جس سے یہ پتہ چلتا ہے کہ بی ایم پی اس نظام میں کارڈیومیوسائٹ تفریق کے لیے ناگزیر تھے۔ انہوں نے یہ ثبوت بھی فراہم کیا کہ ٹی اے کے 1، Nkx-2.5، اور جی اے ٹی اے-4 کارڈیوجینک بی ایم پی سگنلنگ راستے میں اہم ہیں۔ مستقبل کی سمتوں میں P19 خلیات وٹرو میں نیورونل خلیات اور پٹھوں کے خلیات دونوں کی قیمتی تشکیل فراہم کرتے ہیں۔ چونکہ پی 19 خلیوں کو دیگر جنین اسٹیم خلیوں کے مقابلے میں برقرار رکھنا اور کلچر کرنا آسان ہے، اس لیے وہ وٹرو میں ترقیاتی مطالعات انجام دینے کے لیے ایک آسان نمونہ ہیں۔ بعض جینوں کو ظاہر کرنے یا باہر نکالنے کے لیے اس سیل لائن کو جوڑنے کی تکنیکیں سگنلنگ کے راستوں، فعال پہلوؤں اور میوجینیسیس اور نیوروجینیسیس کے پروٹین کے اظہار کے ضابطے کی تفصیلی تحقیقات کی اجازت دیتی ہیں۔ توسیعی تحقیق دل یا دماغ کی نشوونما اور پختگی کے بعد کے مراحل کی بھی وضاحت کر سکتی ہے۔ حوالہ جات بیرونی روابط P19 روڈنٹ سیل لائنوں کے لیے سیلوسورس کا اندراج