Glucose phosphate broth
گلوکوز فاسفیٹ کا شوربہ میتھائل ریڈ (ایم آر) ٹیسٹ اور ووجز-پروسکاؤر ٹیسٹ (وی پی) انجام دینے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ مواد گلوکوز-5 گرام/ایل ڈایپوٹاشیم فاسفیٹ-5 گرام/ایل پروٹائز پیپٹون-5 گرام/ایل ڈسٹلڈ واٹر-1000 ملی لیٹر پی ایچ-6.9 میتھائل ریڈ ٹیسٹ اصول یہ گلوکوز کے خمیر کے ذریعے مخلوط ایسڈ پیدا کرنے کی کسی جاندار کی صلاحیت کا تعین کرنے اور میڈیم کی بفرنگ صلاحیت پر قابو پانے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ طریقہ کار میک کونکی (گلوکوز فاسفیٹ بروتھ) کو ٹیسٹ حیاتیات کی خالص کلچر کے ساتھ ٹیکہ لگائیں۔ شوربے کو 35 ڈگری سیلسیس پر 48-72 گھنٹوں کے لیے انکیوبیٹ کریں۔ انکیوبیشن کے بعد ٹیوب کے اطراف سے براہ راست شوربے میں میتھائل ریڈ کے 5 قطرے ڈالیں۔ تشریح میڈیم کی سطح میں مستحکم سرخ رنگ کی نشوونما پی ایچ کو 4.4 تک کم کرنے کے لیے کافی تیزابیت کی پیداوار کی نشاندہی کرتی ہے اور ایک مثبت ٹیسٹ تشکیل دیتی ہے۔ چونکہ دوسرے جاندار ٹیسٹ سبسٹریٹ سے کم مقدار میں تیزاب پیدا کر سکتے ہیں، اس لیے پیلے اور سرخ کے درمیان ایک درمیانی نارنجی رنگ پیدا ہو سکتا ہے۔ یہ مثبت ٹیسٹ کی نشاندہی نہیں کرتا ہے۔ کنٹرول مثبت اور منفی کنٹرول میڈیم کے ہر ایک لاٹ کی تیاری کے بعد چلائے جانے چاہئیں۔ مثبت کنٹرول: Escherichia کولی منفی کنٹرول: Klebsiella Voges Proscauer ٹیسٹ اصول یہ گلوکوز خمیر سے ایک غیر جانبدار اختتامی مصنوعات، ایسیٹیل میتھائل کاربنول (ایسیٹوئن) تیار کرنے کے لیے کچھ حیاتیات کی صلاحیت کا تعین کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ ایسیٹوئن کی پیداوار، جو کہ کلیبسیلا، اینٹروبیکٹر وغیرہ جیسے اراکین کے ذریعہ تیار کردہ ایک غیر جانبدار رد عمل کا اختتامی پروڈکٹ ہے، گلوکوز میٹابولزم کا بنیادی اختتامی پروڈکٹ ہے اور کم مقدار میں مخلوط ایسڈ بناتا ہے۔ ماحولیاتی آکسیجن اور 40 ٪ KOH کی موجودگی میں، ایسیٹوئن کو ڈائیسیٹائل میں تبدیل کیا جاتا ہے اور α-نیفتھول سرخ رنگ کے کمپلیکس کو باہر لانے کے لیے اتپریرک کے طور پر کام کرتا ہے۔ میڈیا گلوکوز فاسفیٹ بروتھ ریجینٹس اے: α-نیفتھول-5 گرام مطلق ایتھائل الکحل-100 ملی لیٹر-0.6 ملی لیٹر-3 حصے بی: کے او ایچ-40 گرام آستین شدہ پانی-100 ملی لیٹر-0.2 ملی لیٹر-1 حصہ طریقہ کار گلوکوز فاسفیٹ بروتھ کی ایک ٹیوب کو ٹیسٹ حیاتیات کے خالص انوکولم کے ساتھ ٹیکہ لگائیں اور 24 گھنٹوں کے لیے 35 ڈگری سیلسیس پر انکیوبیٹ کریں۔ اس شوربے کے 1 ملی لیٹر میں 5 ٪ α-نیفتھول کا 0.6 ملی لیٹر اور اس کے بعد 40 ٪ KOH کا 0.2 ملی لیٹر شامل کریں۔ درمیانی سے ماحولیاتی آکسیجن کو بے نقاب کرنے کے لیے ٹیوب کو آہستہ سے ہلا دیں اور ٹیوب کو 10-15 منٹ تک بغیر کسی رکاوٹ کے رہنے دیں۔ تشریح ایک مثبت ٹیسٹ کی نمائندگی ریجینٹس کے اضافے کے بعد 15 منٹ یا اس سے زیادہ وقت میں سرخ رنگ کی نشوونما سے ہوتی ہے، جو ایسیٹوئن کے آکسیکرن پروڈکٹ ڈائیسیٹائل کی موجودگی کی نشاندہی کرتی ہے۔ 1 گھنٹے تک کھڑے رہنے کے بعد ٹیسٹ سرخ ہونا چاہیے کیونکہ منفی وی پی کلچر تانبے جیسا رنگ پیدا کر سکتے ہیں جس کے نتیجے میں ممکنہ طور پر غلط مثبت تشریح ہو سکتی ہے، اس لیے بھی کہ مرکب ہونے پر ریجینٹس کے عمل کی وجہ سے۔ کنٹرول مثبت اور منفی کنٹرول میڈیم کے ہر ایک لاٹ کی تیاری کے بعد چلائے جانے چاہئیں۔ مثبت کنٹرول: کلیبسیلا منفی کنٹرول: ایسچریچیا کولی حوالہ جات پی ایچ اشارے مائکروبیولوجی تکنیک