Umu Chromotest
فارماکولوجی اور جینیات کے لیے، اومو کروموٹیسٹ، جسے سب سے پہلے اوڈا اور دیگر نے تیار اور شائع کیا تھا، کیمیائی مرکبات کی جینوٹوکسک صلاحیت کا اندازہ لگانے کے لیے ایک حیاتیاتی جانچ (بائیواسے) ہے۔ یہ ڈی این اے کو نقصان پہنچانے والے ایجنٹوں کی امیو اوپیرون کے اظہار کو متاثر کرنے کی صلاحیت پر مبنی ہے۔ ریک اے، لیکس اے اور امیو ڈی کے نقصان پر مبنی (ڈین) جینوں کے سلسلے میں، امیو سی جین بنیادی طور پر ایس او ایس ردعمل کے ذریعے بیکٹیریل میوٹیجینیسیس میں شامل ہوتا ہے۔ یہ ٹیسٹ ایک اوپیرون فیوژن کا استعمال کرتا ہے جس میں لک اوپیرون (β-galactosidase پیدا کرنے کے لیے ذمہ دار، ایک پروٹین جو لییکٹوز کو خراب کرتا ہے) کو امیو سے متعلق پروٹین کے کنٹرول میں رکھا جاتا ہے۔ ایک سادہ کلورمیٹرک ٹیسٹ ایک لییکٹوز اینالاگ کو شامل کرکے ممکن ہے جسے β-galactosidase کے ذریعے خراب کیا جاتا ہے، جس سے ایک رنگین مرکب پیدا ہوتا ہے جسے سپیکٹروفوٹومیٹری کے ذریعے مقداری طور پر ماپا جا سکتا ہے۔ رنگ کی نشوونما کی ڈگری پیدا ہونے والے β-galactosidase کی بالواسطہ پیمائش ہے، جو خود ڈی این اے کے نقصان کی مقدار سے براہ راست متعلق ہے۔ اومو کروموٹیسٹ کا اضافی فائدہ یہ ہے کہ اس کے طریقہ کار کو آئی ایس او 13829 "پانی کے معیار-اومو ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے پانی اور گندے پانی کی جینوٹوکسائٹی کا تعین" کے تحت مرتب کیا گیا ہے۔ اگرچہ جینوٹوکسائٹی کو انسانوں میں کینسر کی نشوونما سے براہ راست نہیں جوڑا جا سکتا، لیکن بیکٹیریا میں جینوٹوکسک اثرات اور ممالیہ جانوروں میں ان کی میوٹیجینک اور ٹیومر شروع کرنے والی خصوصیات کے درمیان ایک مضبوط ارتباط موجود دکھایا گیا ہے۔ نظریہ سالمونیلا ٹائیفیموریم ٹی اے 1535 [پی ایس کے 1002] بیکٹیریا کو 96 ویل مائکرو پلیٹ میں ممکنہ طور پر جینوٹوکسک ٹیسٹ مرکبات کا سامنا کرنا پڑتا ہے۔ اگر جینوٹوکسک زخم بیکٹیریل جینوم میں پیدا ہوتے ہیں، تو عام ایس او ایس ردعمل کے حصے کے طور پر امیو سی جین کو متاثر کیا جاتا ہے۔ پلازمیڈ پی ایس کے 1002 میں لک زیڈ رپورٹر جین سے جڑا ہوا امیو سی جین ہوتا ہے، بالکل ایس او ایس کروموٹیسٹ میں فیوژن کی طرح۔ اس طرح امیو سی جین کو شامل کرنا نمونے کی جینوٹوکسک صلاحیت کا ایک پیمانہ ہے۔ چونکہ امیوسی جین کو β-گیلیکٹوسیڈیز کے لیے لیک زیڈ جین کے ساتھ ملایا جاتا ہے، اس لیے امیوسی جین کی شمولیت کا اندازہ β-گیلیکٹوسیڈیز سرگرمی کے تعین سے آسانی سے کیا جا سکتا ہے، جس کی پیمائش بے رنگ او این پی جی سبسٹریٹ (او-نائٹروفینائل-β-D-گیلیکٹوپیرانوسائیڈ) کو لیک زیڈ-انکوڈڈ بی-گیلیکٹوسیڈیز کے ذریعے پیلے رنگ کے پروڈکٹ او-نائٹروفینائل میں تبدیل کر کے کی جاتی ہے۔ چونکہ ایس او ایس کا ردعمل جینوٹوکسک زخموں کے لیے ایک عمومی ردعمل ہے، اس لیے مناسب رپورٹر جین کی تعمیر کے ساتھ ایس ٹائیفموریم کا ایک تناؤ بیکٹیریل جینوٹاکسن کی تمام کلاسوں کی شناخت کے لیے کافی ہے۔ دیگر بیکٹیریل جینوٹوکسائٹی اور میوٹیجینیسیٹی اسیسوں کی طرح، سرگرمی کے لیے میٹابولک ایکٹیویشن کی ضرورت والے مرکبات کی S9 مائکروسومل چوہے کے جگر کے نچوڑ کے اضافے سے تفتیش کی جا سکتی ہے۔ پروسیجر ایس۔ نشوونما کے تیز رفتار مرحلے میں ٹائیفموریم بیکٹیریا 2 گھنٹے تک تین گنا میں ٹیسٹ کے نمونے کی گھٹتی ہوئی تعداد کے سامنے رہتے ہیں، بشمول مثبت اور منفی کنٹرول، نیز خالی جگہیں۔ 2 گھنٹے کے بعد، ایکسپوزر کلچرز کو تازہ گروتھ میڈیا میں پتلا کر دیا جاتا ہے اور مزید 2 گھنٹے تک بڑھنے دیا جاتا ہے۔ امیو سی جین اور فیوزڈ لیک زیڈ رپورٹر جین کی شمولیت اور اس کے بعد β-galactosidase کے اظہار کا اندازہ بیکٹیریا کے لائسس کے بعد کیا جاتا ہے۔ بے رنگ او این پی جی کو انڈیوسڈ β-گیلیکٹوسیڈیز کی موجودگی میں پیلے رنگ کے پروڈکٹ او نائٹروفینائل میں تبدیل کیا جاتا ہے۔ رنگ کی شدت انڈیوسڈ پروٹین کی مقدار اور اس طرح ٹیسٹ کے نمونے کی جینوٹوکسک طاقت سے متعلق ہے۔ مقداری میٹرکس کا استعمال کیا جاتا ہے، جس میں نشوونما کے مرحلے سے پہلے اور بعد میں او ڈی 600 پر پلیٹ کے جذب کے ساتھ ساتھ او این پی جی انکیوبیشن کے بعد او ڈی 420 کو پڑھا جاتا ہے۔ یہ انڈکشن ریشو (IR) کے حساب کے ساتھ ساتھ گروتھ فیکٹر کی اجازت دیتا ہے تاکہ اس بات کا تعین کیا جا سکے کہ آیا سائٹوٹوکسائٹی بھی موجود ہے اور IR اقدار کو کالعدم قرار دیتا ہے۔ فوائد میوٹیجینیسیٹی کے لیے اومو کروموٹیسٹ اور روایتی امیس ٹیسٹ کے درمیان اعلی ارتباط ہر سال ترکیب شدہ ہزاروں نئے دواسازی، زرعی اور صنعتی کیمیکلز کی ابتدائی مرحلے کی جانچ کے لیے ایک معقول متبادل کے طور پر اس کی حمایت کرتا ہے۔ زیادہ تر بڑے کیمیائی مینوفیکچررز روایتی امیس ٹیسٹ کے ساتھ ہر سال 100 یا اس سے زیادہ مصنوعی کیمیائیوں کی اسکریننگ کرنے کی صلاحیت رکھتے ہیں، جس کے لیے کئی سالمونیلا تناؤ کے استعمال کی ضرورت ہوتی ہے۔ اومو ٹیسٹ، صرف ایک ہی سالمونلا تناؤ کا استعمال کرتے ہوئے، ممکنہ طور پر اسی وسائل کے ساتھ نئے کیمیکلز کی ایک بڑی رینج کی جانچ کر سکتا ہے۔ مادی اخراجات اور محنت میں کمی کے ساتھ ساتھ اس کی مضبوطی بھی اسے پیچیدہ ماحولیاتی نمونوں کے لیے ایک موزوں اسکرین کے طور پر پیش کرتی ہے۔ حوالہ جات کے ٹیسٹ