Supravital staining
سپراوٹل سٹیننگ سٹیننگ کا ایک طریقہ ہے جو خوردبین میں زندہ خلیوں کی جانچ کے لیے استعمال ہوتا ہے جنہیں کسی جاندار سے ہٹا دیا گیا ہے۔ یہ انٹراوٹل سٹیننگ سے مختلف ہے، جو جسم میں داغ کو انجیکشن لگا کر یا دوسری صورت میں متعارف کروا کر کیا جاتا ہے۔ اس طرح ایک سپرراوٹل داغ میں زیادہ زہریلا ہو سکتا ہے، کیونکہ صرف چند خلیوں کو تھوڑی دیر کے لیے زندہ رہنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ "اہم داغ" کی اصطلاح کچھ مصنفین خاص طور پر ایک انٹراوٹل داغ کا حوالہ دینے کے لیے استعمال کرتے ہیں، اور دوسروں کے ذریعے ایک سپراوٹل داغ کے ساتھ، بنیادی تصور یہ ہے کہ جس خلیے کی جانچ کی جا رہی ہے وہ اب بھی زندہ ہے۔ چونکہ خلیات زندہ اور غیر فکسڈ ہوتے ہیں، اس لیے جسم کے باہر، سپرراوٹل داغ عارضی نوعیت کے ہوتے ہیں۔ سب سے عام سپراویٹل داغ ریٹیکولوسائٹس پر نئے میتھلین نیلے یا شاندار کریسل نیلے رنگ کا استعمال کرتے ہوئے کیا جاتا ہے، جس سے ریبوسومز کے ریٹیکولوفیلامینٹس پیٹرن کو دیکھنا ممکن ہو جاتا ہے جو خاص طور پر ان زندہ نامکمل سرخ خون کے خلیوں میں سپراویٹل داغوں سے نکلتے ہیں۔ ایسے خلیوں کی تعداد گن کر سرخ خون کے خلیوں کی تشکیل کی شرح کا تعین کیا جا سکتا ہے، جو بون میرو کی سرگرمی اور خون کی کمی کے بارے میں بصیرت فراہم کرتا ہے۔ یہ اہم داغ کے برعکس ہے، جب استعمال شدہ رنگ وہ ہوتا ہے جسے زندہ خلیوں سے خارج کر دیا جاتا ہے تاکہ صرف مردہ خلیات مثبت طور پر داغدار ہوں۔ (اہم داغوں میں ٹرپین بلیو اور پروپیڈیم آیوڈائڈ جیسے رنگ شامل ہیں، جو یا تو بہت زیادہ بھاری ہوتے ہیں یا سیل جھلی کو عبور کرنے کے لیے بہت زیادہ چارج ہوتے ہیں، یا جو فعال طور پر زندہ خلیوں کے ذریعے تیزی سے پمپ کیے جاتے ہیں۔) ایف اے سی ایس تجزیہ جیسی ایپلی کیشنز کے لیے سپراویٹل سٹیننگ کو سیل کی سطح کے اینٹی باڈی سٹیننگ (امیونو فلوریسنس) کے ساتھ جوڑا جا سکتا ہے۔ ڈٹرجنٹ ٹریٹن ایکس-100 کا استعمال کرتے ہوئے ریورسیبل سیل پارمیبلائزیشن کے ذریعے زندہ خلیوں کے اندرونی حصے میں بھی امیونو فلوریسنس کیا جا سکتا ہے۔ خلیوں کی تعداد کے لیے مناسب ارتکاز کے لیے احتیاط سے ایڈجسٹ کیا گیا، پری ٹریٹمنٹ سیل کے اندرونی حصے میں 1 اور 150 کلو ڈالٹن کے درمیان مالیکیولز کی رسائی کی اجازت دے سکتا ہے۔ اگرچہ اس تناظر میں اینٹی باڈیز کو اسی طرح استعمال کیا جا سکتا ہے، لیکن "سپرراوٹل سٹین" کی اصطلاح عام طور پر چھوٹے کیمیکلز کے لیے مخصوص ہوتی ہے جو اندرونی طور پر مناسب خصوصیات رکھتے ہیں۔ آر بی سی کے لیے عام سپراویٹل رنگوں کی مثالیں: نیا میتھلین بلیو برلینٹ کریسل بلیو کرسٹل وایلیٹ میتھائل وایلیٹ نیل بلیو ہوچسٹ سٹین حوالہ جات داغ