Cytometry
سائٹومیٹری خلیوں کی تعداد اور خصوصیات کی پیمائش ہے۔ جن متغیرات کی پیمائش سائٹومیٹرک طریقوں سے کی جا سکتی ہے ان میں خلیوں کا سائز، خلیوں کی گنتی، خلیوں کی مورفولوجی (شکل اور ساخت)، خلیوں کے چکر کا مرحلہ، ڈی این اے کا مواد، اور خلیوں کی سطح پر یا سائٹوپلازم میں مخصوص پروٹین کا وجود یا عدم موجودگی شامل ہیں۔ سائٹومیٹری کا استعمال عام خون کے ٹیسٹوں جیسے کہ مکمل خون کی گنتی میں خون کے خلیوں کی خصوصیت اور گنتی کے لیے کیا جاتا ہے۔ اسی طرح، سائٹومیٹری کا استعمال سیل بائیولوجی ریسرچ اور طبی تشخیص میں بھی کینسر اور ایڈز جیسی بیماریوں سے وابستہ ایپلی کیشنز کی ایک وسیع رینج میں خلیوں کی خصوصیت کے لیے کیا جاتا ہے۔ سائٹومیٹرک آلات امیج سائٹومیٹر امیج سائٹومیٹری سائٹومیٹری کی قدیم ترین شکل ہے۔ امیج سائٹومیٹر آپٹیکل مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے بڑی تعداد میں خلیوں کی مستحکم امیجنگ کے ذریعے کام کرتے ہیں۔ تجزیہ سے پہلے، خلیوں کو عام طور پر اس کے برعکس بڑھانے یا مخصوص مالیکیولز کا پتہ لگانے کے لیے انہیں فلوراکرومز کے ساتھ لیبل لگا کر داغدار کیا جاتا ہے۔ روایتی طور پر، دستی گنتی میں مدد کے لیے خلیوں کو ہیموسیٹومیٹر کے اندر دیکھا جاتا ہے۔ 1990 کی دہائی کے وسط میں ڈیجیٹل کیمرے کے تعارف کے بعد سے، امیج سائٹومیٹرز کی آٹومیشن کی سطح میں مسلسل اضافہ ہوا ہے۔ اس کی وجہ سے سادہ سیل کاؤنٹرز سے لے کر جدید ترین اعلی مواد کے اسکریننگ سسٹم تک خودکار امیج سائٹومیٹرز کی تجارتی دستیابی ہوئی ہے۔ فلو سائٹومیٹر خودکار خوردبین کی ابتدائی مشکلات کی وجہ سے، فلو سائٹومیٹر 1950 کی دہائی کے وسط سے غالب سائٹومیٹرک آلہ رہا ہے۔ بہاؤ سائٹومیٹر بہاؤ کی تکنیکوں کا استعمال کرتے ہوئے واحد خلیوں کو صف بندی کرکے کام کرتے ہیں۔ خلیوں کی خصوصیت نظری طور پر یا برقی رکاوٹ کے طریقہ کار کے استعمال سے ہوتی ہے جسے کولٹر اصول کہا جاتا ہے۔ نظری طور پر نمایاں ہونے پر مخصوص مالیکیولز کا پتہ لگانے کے لیے، خلیات زیادہ تر معاملات میں اسی قسم کے فلوروکرومز سے داغدار ہوتے ہیں جو امیج سائٹومیٹرز کے ذریعے استعمال ہوتے ہیں۔ فلو سائٹومیٹر عام طور پر امیج سائٹومیٹر کے مقابلے میں کم ڈیٹا فراہم کرتے ہیں، لیکن ان کا تھرو پٹ نمایاں طور پر زیادہ ہوتا ہے۔ سیل سارٹرز سیل سارٹرز فلو سائٹومیٹر ہوتے ہیں جو خلیوں کو ان کی خصوصیات کے مطابق ترتیب دینے کے قابل ہوتے ہیں۔ چھانٹنا اسی طرح کی ٹیکنالوجی کا استعمال کرکے حاصل کیا جاتا ہے جو انک جیٹ پرنٹروں میں استعمال ہوتی ہے۔ مکینیکل کمپن کے ذریعے سیال کے دھارے کو بوندوں میں تقسیم کیا جاتا ہے۔ پھر بوندوں کو بوند کے اندر موجود خلیے کی خصوصیات کے مطابق برقی طور پر چارج کیا جاتا ہے۔ ان کے چارج پر منحصر ہے، بوندوں کو آخر کار برقی میدان کے ذریعے مختلف کنٹینروں میں موڑ دیا جاتا ہے۔ ٹائم لیپس سائٹومیٹر ٹائم لیپس سائٹومیٹر کی ایک کلیدی خصوصیت ان کا غیر حرارت پیدا کرنے والے روشنی کے ذرائع جیسے روشنی خارج کرنے والے ڈایڈس کا استعمال ہے۔ یہ ایک ٹائم لیپس سائٹومیٹر کو روایتی سیل کلچر انکیوبیٹر کے اندر رکھنے کی اجازت دیتا ہے تاکہ انکیوبیٹر کے اندر گرمی کی تعمیر کے بغیر سیلولر عمل کے مسلسل مشاہدے کو آسان بنایا جا سکے۔ ہیموسیٹومیٹر کی تاریخ سائٹومیٹری کی ابتدائی تاریخ خون کے خلیوں کی گنتی کی نشوونما سے قریب سے وابستہ ہے۔ کارل وان ویرورڈ، لوئس-چارلس ملاسیز، کارل برکر اور دیگر کے کام کے ذریعے 19 ویں صدی کے آخر تک خون کے خلیوں کے ارتکاز کو خون کے خلیوں کی گنتی کے چیمبر، ہیموسیٹومیٹر اور آپٹیکل خوردبین کا استعمال کرتے ہوئے درست طریقے سے ماپا جا سکتا تھا۔ 1950 کی دہائی تک ہیموسیٹومیٹر خون کے خلیوں کی گنتی کا معیاری طریقہ تھا۔ خون کے خلیوں کی گنتی کی ایپلی کیشنز میں ہیموسیٹومیٹر کو اب الیکٹرانک سیل کاؤنٹرز سے تبدیل کر دیا گیا ہے۔ تاہم، ہیموسیٹومیٹر اب بھی سیل کلچر لیبارٹریوں میں خلیوں کی گنتی کے لیے استعمال کیا جا رہا ہے۔ بتدریج خوردبین کا استعمال کرتے ہوئے گنتی کا دستی کام چھوٹے خودکار امیج سائٹومیٹرز کے ذریعے انجام دیا جاتا ہے۔ فلوروسینس خوردبین 1904 میں، جینا میں کارل زیس میں مورٹز وان روہر اور اگست کوہلر نے پہلا بالائے بنفشی خوردبین بنایا۔ خوردبین کا مقصد بصری روشنی سے کم طول موج کے ساتھ روشنی کا استعمال کرکے اعلی نظری ریزولوشن حاصل کرنا تھا۔ تاہم، حیاتیاتی مواد کا مشاہدہ کرتے وقت انہیں آٹو فلوریسنس کے ساتھ مشکلات کا سامنا کرنا پڑا۔ خوش قسمتی سے، کوہلر نے فلوروسینس کی صلاحیت کو دیکھا۔ فلوروسینس ایکسائٹیشن لائٹ کے لیے فلٹرنگ تکنیک ہینرک لیمن نے 1910 میں زیس میں تیار کی تھی، جو رابرٹ ووڈ کے کام پر مبنی تھی۔ تاہم، اس نے جو "لومینزینزمیکروسکوپ" تیار کیا وہ بازار میں صرف دوسرے نمبر پر تھا، اس کے بعد جو آزادانہ طور پر آسکر ہیمسٹاڈٹ نے تیار کیا تھا جو ویانا میں سی ریچرٹ، آپٹیشے ورک اے جی میں کام کرتا تھا، جو آج لیکا مائیکرو سسٹمز کا ایک حصہ ہے۔ سائٹوفوٹومیٹری 1930 کی دہائی کے اوائل تک مختلف فرموں نے بالائے بنفشی فلوروسینٹ خوردبین تیار کیے۔ سائٹومیٹری کے لیے مرحلہ طے کیا گیا تھا کہ اب وہ اب قائم شدہ ہیموسیٹومیٹر سے آگے جائے۔ اس وقت، اسٹاک ہوم کے کیرولنسکا انسٹی ٹیوٹ میں کام کرنے والے ٹوربجورن کیسپرسن نے بتدریج زیادہ نفیس آلات کا ایک سلسلہ تیار کیا جسے سائٹوفوٹومیٹر کہا جاتا ہے۔ ان آلات نے سیلولر نیوکلک ایسڈ اور سیل کی نشوونما اور فنکشن سے ان کے تعلق کی مقدار طے کرنے کے لیے ایک فلوروسینٹ خوردبین کو سپیکٹرو فوٹومیٹر کے ساتھ ملایا۔ کیسپرسن کا ابتدائی آلات اب نا امید طور پر قدیم معلوم ہوتا ہے۔ لیکن، یہاں تک کہ اس قدیم آلات نے بھی نتائج حاصل کیے، اور دوسرے محققین کی توجہ مبذول کروائی۔ 1940 کی دہائی سے تجزیاتی سائٹولوجی میں بہت سی پیش رفت ان لوگوں نے کی جنہوں نے اسٹاک ہوم کی زیارت کی۔ پلس سائٹوفوٹومیٹری سیل گنتی کو خودکار بنانے کی پہلی کوششیں دوسری جنگ عظیم کے آس پاس کی گئیں۔ گکر اور دیگر۔ ایروسول میں بیکٹیریا کا پتہ لگانے کے لیے ایک آلہ بناتا ہے۔ Lagercrantz مائکروسکوپی پر مبنی ایک خودکار سیل کاؤنٹر بناتا ہے اور مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے انفرادی طور پر شمار کیے جانے والے خلیوں کو صف بندی کرنے میں مشکلات کی نشاندہی کرتا ہے، جیسا کہ مولڈوان نے 1934 میں تجویز کیا تھا۔ جوزف اور والیس کولٹر کسی سیال میں معطل خوردبین ذرات کو گننے اور سائز کرنے کے لیے برقی رکاوٹ کا استعمال کرنے کا اصول ایجاد کر کے ان مشکلات کا چکر لگاتے ہیں۔ یہ اصول آج کل کولٹر اصول کے نام سے جانا جاتا ہے اور 1954 میں کولٹر الیکٹرانکس کے ذریعہ جاری کردہ خودکار بلڈ سیل کاؤنٹر میں استعمال کیا گیا تھا۔ "کولٹر کاؤنٹر" پہلا تجارتی فلو سائٹومیٹر تھا۔ 1960 کی دہائی کے دوران ڈٹرچ، گوڈے اور کامینٹسکی نے 30 سال قبل کیسپرسن کے پیش کردہ ڈیزائن کو بہتر بنایا۔ ڈٹرچ اور گوڈے کا پلس سائٹوفوٹومیٹر زیس فلوروسینٹ خوردبین کے ارد گرد بنایا گیا تھا اور اسے 1968 میں پارٹیک جی ایم بی ایچ نے آئی سی پی 11 کے طور پر تجارتی بنایا تھا۔ کامینٹسکی کے آلے کو بائیو/فزکس سسٹمز انکارپوریٹڈ نے 1970 میں سائٹوگراف کے طور پر تجارتی بنایا تھا۔ یہ آلات پہلے کے کولٹر کاؤنٹر کی طرح خلیوں کو گننے کے قابل تھے۔ لیکن اس سے بھی اہم بات یہ ہے کہ وہ سیلولر خصوصیات کی پیمائش کرنے کے قابل بھی تھے۔ تاہم، یہ ابتدائی سائٹو فوٹومیٹر جہاں خوردبین پر مبنی ہوتے ہیں۔ 1953 میں کروسلینڈ ٹیلر نے خوردبین کا استعمال کرتے ہوئے سرخ خون کے خلیوں کو گننے کی ایک ناکام کوشش شائع کی جس میں انہوں نے خلیوں کو ہائیڈرو ڈائنامک طور پر فوکس کرنے کے لیے شیتھ فلوئڈ کا استعمال کرکے خلیوں کو صف بندی کرنے کا مسئلہ حل کیا۔ 1960 کی دہائی کے آخر میں، لاس الاموس نیشنل لیبارٹری میں وان ڈیلا نے پہلا غیر خوردبین پر مبنی سائٹوفوٹومیٹر بنایا۔ انہوں نے یہ کام کروسلینڈ-ٹیلر کی پیشرفت کو اصل میں خوردبین کے لیے تیار کردہ فلوروسینٹ رنگوں اور لیزر پر مبنی فلوروسینٹ کا پتہ لگانے والے نظام-فلو سائٹومیٹر کے ساتھ ملا کر کیا جیسا کہ ہم آج جانتے ہیں۔ فلولر، لاس الاموس میں بھی، 1965 میں پہلا سیل سارٹر بنانے کے لیے کولٹر اصول کو مسلسل انک جیٹ پرنٹر ٹیکنالوجی کے ساتھ جوڑتا ہے۔ 1973 میں اسٹینکیمپ اور لاس الاموس کی ٹیم فلوروسینس پر مبنی سیل سارٹر کے ساتھ پیروی کرتی ہے۔ 1978 میں، پینساکولا، فلوریڈا میں امریکن انجینئرنگ فاؤنڈیشن کی کانفرنس میں، نام پلس سائٹوفوٹومیٹری کو فلو سائٹومیٹری میں تبدیل کر دیا گیا، یہ اصطلاح تیزی سے مقبول ہو گئی۔ اس وقت پلس سائٹوفوٹومیٹری فلو سائٹومیٹری کی جدید شکل میں تیار ہوئی تھی، جس کا آغاز دس سال قبل وان ڈیلا نے کیا تھا۔ ماس سائٹومیٹری حوالہ جات بیرونی روابط سائٹومیٹری جلد 10 بذریعہ پرڈیو یونیورسٹی سائٹومیٹری لیبارٹریز بلڈ ٹیسٹ سیل بائیولوجی کلینیکل پیتھولوجی فلو سائٹومیٹری لیبارٹری تکنیک لیبارٹری کا سامان حیاتیاتی تکنیک اور اوزار