Nile blue
نیل نیلا (یا نیل نیلا اے) ایک داغ ہے جو حیاتیات اور ہسٹولوجی میں استعمال ہوتا ہے۔ یہ زندہ یا فکسڈ خلیوں کے ساتھ استعمال کیا جا سکتا ہے، اور سیل نیوکلئی کو نیلا رنگ دیتا ہے۔ اسے فلوروسینس مائکروسکوپی کے ساتھ مل کر پروکیریوٹک یا یوکیریوٹک خلیوں میں پولی ہائیڈروکسی بیوٹیریٹ گرینیولز کی موجودگی کو داغدار کرنے کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔ نیل نیل کے محلول کو سلفورک ایسڈ کے ساتھ ابالنے سے نیل ریڈ (نیل بلیو آکسازون) پیدا ہوتا ہے۔ کیمیائی اور جسمانی خصوصیات نیل نیلا ایک فلوروسینٹ رنگ ہے۔ فلوروسینس خاص طور پر اعلی کوانٹم پیداوار والے غیر قطبی سالوینٹس میں ظاہر ہوتا ہے۔ نیل نیلے رنگ کے جذب اور اخراج کا زیادہ سے زیادہ انحصار پی ایچ اور استعمال شدہ سالوینٹس پر ہوتا ہے: ایتھنول میں نیل نیل فلوروسینس کی مدت 1.42 این ایس کے طور پر ناپی گئی تھی۔ یہ 3.65 این ایس کے ساتھ نیل ریڈ کی متعلقہ قیمت سے کم ہے۔ فلوروسینس کا دورانیہ 10−3 سے 10−8 mol/L کی حد میں ڈائلیوشن پر آزاد ہے۔ نیل نیل کا داغ حیاتیاتی تیاریوں کے ہسٹولوجیکل داغ کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ یہ غیر جانبدار لپڈ (ٹرائگلیسرائڈز، کولیسٹریل ایسٹرز، سٹیرائڈز) کے درمیان فرق کو اجاگر کرتا ہے جو داغدار گلابی ہوتے ہیں اور ایسڈ (فیٹی ایسڈ، کرومولیپیڈز، فاسفولیپیڈز) جو داغدار نیلے ہوتے ہیں۔ کلیبرگ کے مطابق نیل بلیو سٹیننگ میں درج ذیل کیمیکل استعمال ہوتے ہیں: نیل بلیو اے 1 ٪ ایسیٹک ایسڈ گلسرول یا گلسرول جیلیٹن ورک فلو نمونے یا منجمد حصوں کو فارملڈیہائیڈ میں لگایا جاتا ہے، پھر نیل بلیو کے محلول میں 20 منٹ یا نیل بلیو اے میں 30 سیکنڈ (آستین والے پانی میں 1 فیصد ڈبلیو/وی) ڈوبا جاتا ہے اور پانی سے دھویا جاتا ہے۔ بہتر تفریق کے لیے، اسے 1 فیصد ایسیٹک ایسڈ میں 10-20 منٹ یا 30 سیکنڈ تک ڈوبا جاتا ہے جب تک کہ رنگ خالص نہ ہو جائیں۔ اس میں صرف 1 سے 2 منٹ لگ سکتے ہیں۔ پھر نمونے کو پانی میں اچھی طرح دھویا جاتا ہے (ایک سے دو گھنٹے تک)۔ اس کے بعد داغدار نمونے کو خوردبین کی سلائیڈ پر لیا جاتا ہے اور اضافی پانی کو ہٹا دیا جاتا ہے۔ نمونے کو گلسرول یا گلسرول جلیٹن میں سرایت کیا جا سکتا ہے۔ نتائج غیر سیر شدہ گلیسیرائڈز گلابی ہوتے ہیں، نیوکلئی اور ایلسٹن گہرے ہوتے ہیں، فیٹی ایسڈ اور مختلف فیٹی مادہ اور چربی کے مرکب جامنی نیلے ہوتے ہیں۔ مثال: پولی-β-ہائیڈروکسی بیوٹیریٹ گرینیولز (پی ایچ بی) کا پتہ لگانا سیوڈوموناس سولانیسیریم کے خلیوں میں پی ایچ بی گرینیولز کو نیل بلیو اے سٹیننگ کے ذریعے دیکھا جا سکتا ہے۔ داغدار اسمیئرز میں پی ایچ بی کے دانے تیل وسرجن کے تحت ایک ایپی فلوریسنس خوردبین کے ساتھ مشاہدہ کیے جاتے ہیں، 1000 گنا وسعت پر ؛ 450 این ایم ایکسائٹیشن طول موج کے تحت وہ ایک مضبوط نارنجی فلوروسینس دکھاتے ہیں۔ ڈی این اے الیکٹروفورسس میں نیل بلیو بظاہر ڈی این اے الیکٹروفورسس کے لیے استعمال ہونے والے مختلف تجارتی ڈی این اے سٹیننگ فارمولیشن میں بھی استعمال ہوتا ہے۔ چونکہ اسے ایتھڈیم برومائڈ کی طرح ایگروز جیل میں دیکھنے کے لیے یووی ٹرانس روشنی کی ضرورت نہیں ہوتی ہے، اس لیے اسے ڈی این اے کا مشاہدہ کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے کیونکہ یہ الگ ہوتا ہے اور یووی تابکاری سے نقصان پہنچائے بغیر ڈی این اے کے ٹکڑوں کے جیل نکالنے میں مدد کے لیے ایک رنگ کے طور پر بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔ اونکولوجی میں نیل بلیو ڈیریویٹوز آف نیل بلیو مہلک ٹیومرز کی فوٹو ڈائنامک تھراپی میں ممکنہ فوٹوسنسیٹائزر ہیں۔ یہ رنگ ٹیومر کے خلیوں میں جمع ہوتے ہیں، خاص طور پر لپڈ جھلی میں، اور/یا الگ الگ ہوتے ہیں اور سب سیلولر آرگنیلز میں مرتکز ہوتے ہیں۔ نیل بلیو مشتق این-ایتھل-نیل بلیو (ای ٹی این بی اے) کے ساتھ، جانوروں کے تجربات میں عام اور قبل از وقت بافتوں کو فلوروسینس امیجنگ میں فلوروسینس سپیکٹروسکوپی کے ذریعے ممتاز کیا جا سکتا ہے۔ EtNBA کوئی فوٹوٹوکسک اثرات نہیں دکھاتا ہے۔ سنتھیسس نیل بلیو اور متعلقہ نیفتھوکسازینیم رنگوں کو یا تو 5-(ڈائیکلکیلیمینو)-2-نائٹروسوفینولز کے ساتھ 1-نیفتھائلیمائن، 3-(ڈائیکلکیلیمینو) فینولز کے ساتھ این-الکیلیٹڈ 4-نائٹروسو-1-نیفٹیلیمائنز، یا این، این-ڈائیکلکل-1,4-فینائلینیڈیمائنز کے ساتھ 4-(ڈائیکلکیلیمینو)-1,2-نیفتھوکینونز کے ایسڈ اتپریرک گاڑھاؤ کے ذریعے تیار کیا جا سکتا ہے۔ متبادل طور پر، 2-نیفتھول (9-(ڈائیکلکیلیمینو) بینزو [a] فینوکسازین-7-آئیم کا نمک) کے ساتھ 4-نائٹروسو-N، N-ڈائیکلینلین کے تیزاب-اتپریرک سنکشیپن کی پیداوار کو امین کی موجودگی میں آکسائڈائز کیا جا سکتا ہے، جس سے بینزو [a] فینوکسازینیم نظام کی 5 پوزیشن میں دوسرا امینو متبادل نصب کیا جا سکتا ہے۔ مندرجہ ذیل اسکیم ان چار طریقوں میں سے پہلے کی وضاحت کرتی ہے، جو نیل بلیو پرکلوریٹ کی طرف لے جاتا ہے: حوالہ جات آکسیزین ڈائز اہم داغ ڈائیتھیلیمینو مرکبات