Column chromatography
کیمسٹری میں کالم کرومیٹوگرافی ایک کرومیٹوگرافی کا طریقہ ہے جو کسی مرکب سے ایک کیمیائی مرکب کو الگ کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ کرومیٹوگرافی مرکبات کے تفریق جذب کی بنیاد پر مادوں کو جذب کرنے والے مادے سے الگ کرنے کے قابل ہے۔ مرکبات مختلف شرحوں پر کالم سے گزرتے ہیں، جس سے انہیں حصوں میں الگ کیا جا سکتا ہے۔ یہ تکنیک وسیع پیمانے پر لاگو ہوتی ہے، کیونکہ بہت سے مختلف ایڈسوربنٹس (عام مرحلہ، الٹا مرحلہ، یا دوسری صورت میں) سالوینٹس کی ایک وسیع رینج کے ساتھ استعمال کیے جا سکتے ہیں۔ اس تکنیک کو مائیکروگرام سے لے کر کلوگرام تک کے ترازو پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ کالم کرومیٹوگرافی کا بنیادی فائدہ اس عمل میں استعمال ہونے والے اسٹیشنری مرحلے کی نسبتا کم لاگت اور ڈسپوزیبلٹی ہے۔ مؤخر الذکر ری سائیکلنگ کی وجہ سے کراس آلودگی اور اسٹیشنری مرحلے کے انحطاط کو روکتا ہے۔ کالم کرومیٹوگرافی سالوینٹ کو منتقل کرنے کے لیے کشش ثقل کا استعمال کرتے ہوئے، یا کالم کے ذریعے سالوینٹ کو دھکا دینے کے لیے کمپریسڈ گیس کا استعمال کرتے ہوئے کی جا سکتی ہے۔ ایک پتلی پرت والا کرومیٹوگراف یہ دکھا سکتا ہے کہ کالم کرومیٹوگرافی کے ذریعے پاک ہونے پر مرکبات کا مرکب کس طرح برتاؤ کرے گا۔ کالم کرومیٹوگرافی انجام دینے سے پہلے پتلی پرت کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے علیحدگی کو بہتر بنایا جاتا ہے۔ کالم کی تیاری ایک کالم ایک ٹھوس جذب کو بیلناکار شیشے یا پلاسٹک کی ٹیوب میں پیک کرکے تیار کیا جاتا ہے۔ سائز کا انحصار اس بات پر ہوگا کہ مرکب کی مقدار کو الگ کیا جا رہا ہے۔ ٹیوب کی بنیاد پر ایک فلٹر ہوتا ہے، یا تو ایک روئی یا شیشے کا اون کا پلگ، یا ٹھوس مرحلے کو برقرار رکھنے کے لیے شیشے کا فریٹ۔ کالم کے اوپری حصے میں ایک سالوینٹ ریزروائر منسلک کیا جا سکتا ہے۔ کالم تیار کرنے کے لیے عام طور پر دو طریقے استعمال کیے جاتے ہیں: خشک طریقہ اور گیلا طریقہ۔ خشک طریقہ کار کے لیے، کالم کو پہلے خشک اسٹیشنری فیز پاؤڈر سے بھرا جاتا ہے، اس کے بعد موبائل فیز کا اضافہ ہوتا ہے، جسے کالم کے ذریعے اس وقت تک فلش کیا جاتا ہے جب تک کہ یہ مکمل طور پر گیلا نہ ہو جائے، اور اس مقام سے اسے کبھی خشک نہیں ہونے دیا جاتا ہے۔ گیلے طریقہ کار کے لیے، اسٹیشنری فیز پاؤڈر کے ساتھ ایلیوینٹ کا ایک سلری تیار کیا جاتا ہے اور پھر احتیاط سے کالم میں ڈالا جاتا ہے۔ سلیکا کا اوپری حصہ چپٹا ہونا چاہیے، اور سلیکا کے اوپری حصے کو ریت کی پرت سے محفوظ کیا جا سکتا ہے۔ نامیاتی مواد کو آگے بڑھانے کے لیے ایلیوینٹ کو آہستہ آہستہ کالم سے گزارا جاتا ہے۔ انفرادی اجزاء کو اسٹیشنری مرحلے کے ذریعہ مختلف طریقے سے برقرار رکھا جاتا ہے اور ایک دوسرے سے الگ ہوتے ہیں جب کہ وہ ایلیوینٹ کے ساتھ کالم کے ذریعے مختلف رفتار سے چل رہے ہوتے ہیں۔ کالم کے آخر میں وہ ایک وقت میں ایک ایلیوٹ کرتے ہیں۔ کرومیٹوگرافی کے پورے عمل کے دوران ایلیوینٹ کو حصوں کی ایک سیریز میں جمع کیا جاتا ہے۔ فریکشن جمع کرنے والوں کے ذریعے فریکشن کو خود بخود جمع کیا جا سکتا ہے۔ ایک وقت میں کئی کالم چلا کر کرومیٹوگرافی کی پیداواری صلاحیت میں اضافہ کیا جا سکتا ہے۔ اس صورت میں ملٹی اسٹریم کلیکٹر استعمال کیے جاتے ہیں۔ الوینٹ بہاؤ کی ساخت کی نگرانی کی جا سکتی ہے اور تحلیل شدہ مرکبات کے لیے ہر حصے کا تجزیہ کیا جاتا ہے، مثال کے طور پر۔ تجزیاتی کرومیٹوگرافی، یو وی جذب سپیکٹر، یا فلوروسینس کے ذریعے۔ رنگین مرکبات (یا یو وی لیمپ کی مدد سے فلوروسینٹ مرکبات) کو شیشے کی دیوار کے ذریعے حرکت پذیر بینڈ کے طور پر دیکھا جا سکتا ہے۔ اسٹیشنری فیز کالم کرومیٹوگرافی میں اسٹیشنری فیز یا ایڈسوربنٹ ایک ٹھوس ہے۔ کالم کرومیٹوگرافی کے لیے سب سے عام اسٹیشنری مرحلہ سلیکا جیل ہے، اگلا سب سے عام ایلومینیم ہے۔ ماضی میں سیلولوز پاؤڈر اکثر استعمال ہوتا رہا ہے۔ آئن ایکسچینج کرومیٹوگرافی، ریورس فیز کرومیٹوگرافی (آر پی)، افینیٹی کرومیٹوگرافی یا ایکسٹینڈڈ بیڈ ایڈسورپشن (ای بی اے) انجام دینے کے لیے اسٹیشنری مراحل کی ایک وسیع رینج دستیاب ہے۔ مستحکم مراحل عام طور پر باریک گراؤنڈ پاؤڈر یا جیل ہوتے ہیں اور/یا بڑھتی ہوئی سطح کے لیے مائکروپورس ہوتے ہیں، حالانکہ ای بی اے میں ایک سیال شدہ بستر استعمال کیا جاتا ہے۔ مستحکم مرحلے کے وزن اور تجزیاتی مرکب کے خشک وزن کے درمیان ایک اہم تناسب ہے جسے کالم پر لگایا جا سکتا ہے۔ سلیکا کالم کرومیٹوگرافی کے لیے، یہ تناسب 20:1 سے 100:1 کے اندر ہے، اس بات پر منحصر ہے کہ تجزیاتی اجزاء ایک دوسرے کے کتنے قریب ہیں۔ متحرک مرحلہ (ایلیوینٹ) متحرک مرحلہ یا ایلیوینٹ ایک سالوینٹ یا سالوینٹس کا مرکب ہے جو مرکبات کو کالم کے ذریعے منتقل کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ اس کا انتخاب اس طرح کیا جاتا ہے کہ دلچسپی کے مرکب کی برقرار رکھنے والے عنصر کی قیمت تقریبا 0.0-0.3 ہو تاکہ کرومیٹوگرافی کو چلانے کے لیے وقت اور محرک کی مقدار کو کم سے کم کیا جا سکے۔ ایلیوینٹ کو بھی منتخب کیا گیا ہے تاکہ مختلف مرکبات کو مؤثر طریقے سے الگ کیا جا سکے۔ ایلونٹ کو چھوٹے پیمانے کے پری ٹیسٹوں میں بہتر بنایا جاتا ہے، اکثر اسی اسٹیشنری مرحلے کے ساتھ پتلی پرت کرومیٹوگرافی (ٹی ایل سی) کا استعمال کرتے ہوئے، مختلف قطعیت کے سالوینٹس کا استعمال کرتے ہوئے جب تک کہ مناسب سالوینٹ سسٹم نہ مل جائے۔ عام متحرک مرحلے کے سالوینٹس، بڑھتی ہوئی قطعیت کی ترتیب میں، ہیکسین، ڈائکلورومیتھین، ایتھائل ایسیٹیٹ، ایسیٹون، اور میتھانول شامل ہیں۔ ایک عام سالوینٹ سسٹم ہیکسین اور ایتھائل ایسیٹیٹ کا مرکب ہے، جس کے تناسب کو اس وقت تک ایڈجسٹ کیا جاتا ہے جب تک کہ ٹارگٹ کمپاؤنڈ میں 0.2-0.3 کا برقرار رکھنے والا عنصر نہ ہو۔ عام غلط فہمی کے برعکس، اکیلے میتھانول کو انتہائی قطبی مرکبات کے لیے محرک کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے، اور یہ سلیکا جیل کو تحلیل نہیں کرتا ہے۔ ہر مخصوص علیحدگی کے لیے بہاؤ کی زیادہ سے زیادہ شرح ہوتی ہے۔ ایلیوینٹ کے تیز بہاؤ کی شرح کالم کو چلانے کے لیے درکار وقت کو کم کرتی ہے اور اس طرح پھیلاؤ کو کم کرتی ہے، جس کے نتیجے میں بہتر علیحدگی ہوتی ہے۔ تاہم، زیادہ سے زیادہ بہاؤ کی شرح محدود ہے کیونکہ تجزیہ کار کے لیے اسٹیشنری فیز اور موبائل فیز کے درمیان توازن قائم کرنے کے لیے ایک محدود وقت درکار ہوتا ہے، وان ڈیمٹر کی مساوات دیکھیں۔ ایک سادہ تجربہ گاہ کالم کشش ثقل کے بہاؤ سے چلتا ہے۔ اس طرح کے کالم کے بہاؤ کی شرح کو مستحکم مرحلے کے اوپری حصے کے اوپر تازہ ایلیوینٹ سے بھرے کالم کو بڑھا کر یا نل کے کنٹرول کے ذریعے کم کیا جا سکتا ہے۔ تیز بہاؤ کی شرح پمپ کا استعمال کرکے یا کمپریسڈ گیس کا استعمال کرکے حاصل کی جا سکتی ہے (جیسے۔ کالم (فلیش کالم کرومیٹوگرافی) کے ذریعے سالوینٹ کو دھکا دینے کے لیے ہوا، نائٹروجن، یا آرگون)۔ اسٹیشنری مرحلے کا ذرہ سائز کشش ثقل کالم کرومیٹوگرافی کے مقابلے میں فلیش کالم کرومیٹوگرافی میں عام طور پر بہتر ہوتا ہے۔ مثال کے طور پر، سابقہ تکنیک میں سب سے زیادہ استعمال ہونے والے سلیکا جیل گریڈ میں سے ایک میش 230-400 (40-63 مائیکرو میٹر) ہے، جبکہ مؤخر الذکر تکنیک میں عام طور پر میش 70-230 (63-200 مائیکرو میٹر) سلیکا جیل کی ضرورت ہوتی ہے۔ ایک اسپریڈشیٹ تیار کی گئی ہے جو فلیش کالموں کی کامیاب ترقی میں مدد کرتی ہے۔ اسپریڈشیٹ تجزیہ کاروں کے برقرار رکھنے کے حجم اور بینڈ کے حجم، ہر تجزیہ پر مشتمل متوقع فریکشن نمبروں، اور ملحقہ چوٹیوں کے درمیان ریزولوشن کا تخمینہ لگاتا ہے۔ یہ معلومات صارفین کو فلیش کالم کی کوشش کرنے سے پہلے تیاری کے پیمانے پر علیحدگی کے لیے بہترین پیرامیٹرز کو منتخب کرنے کی اجازت دیتی ہے۔ خودکار نظام کالم کرومیٹوگرافی کسی بھی لیب میں ایک انتہائی وقت طلب مرحلہ ہے اور کسی بھی عمل لیب کے لیے جلدی سے رکاوٹ بن سکتا ہے۔ بائیوٹیج، بوچی، انٹرچیم اور ٹیلیڈین اسکو جیسے بہت سے مینوفیکچررز نے خودکار فلیش کرومیٹوگرافی سسٹم تیار کیے ہیں (جسے عام طور پر ایل پی ایل سی، کم دباؤ والی مائع کرومیٹوگرافی کہا جاتا ہے) جو صفائی کے عمل میں انسانی شمولیت کو کم کرتے ہیں۔ آٹومیٹڈ سسٹمز میں عام طور پر زیادہ مہنگے ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (ایچ پی ایل سی) سسٹمز پر پائے جانے والے اجزاء شامل ہوں گے جیسے کہ گریڈینٹ پمپ، سیمپل انجیکشن پورٹس، یو وی ڈٹیکٹر اور ایلیوینٹ کو جمع کرنے کے لیے فریکشن کلیکٹر۔ عام طور پر یہ خودکار نظام نمونوں کو چند ملیگرام سے صنعتی کئی کلوگرام پیمانے تک الگ کر سکتے ہیں اور پری-ایچ پی ایل سی سسٹمز پر متعدد انجیکشن لگانے کے لیے بہت سستا اور تیز حل پیش کرتے ہیں۔ ایل پی ایل سی سسٹم پر ریزولوشن (یا مرکب کو الگ کرنے کی صلاحیت) ہمیشہ ایچ پی ایل سی کے مقابلے میں کم ہوگی، کیونکہ ایچ پی ایل سی کالم میں پیکنگ کا مواد بہت چھوٹا ہو سکتا ہے، عام طور پر صرف 5 مائیکرو میٹر اس طرح اسٹیشنری مرحلے کی سطح کے رقبے میں اضافہ ہوتا ہے، سطح کے تعاملات میں اضافہ ہوتا ہے اور بہتر علیحدگی دیتا ہے۔ تاہم، اس چھوٹے پیکنگ میڈیا کا استعمال کمر کے زیادہ دباؤ کا سبب بنتا ہے اور اسی وجہ سے اسے ہائی پریشر مائع کرومیٹوگرافی کہا جاتا ہے۔ ایل پی ایل سی کالم عام طور پر تقریبا 50 مائیکرو میٹر کے سلیکا سے بھرے ہوتے ہیں، اس طرح کمر کے دباؤ اور ریزولوشن کو کم کرتے ہیں، لیکن یہ مہنگے ہائی پریشر پمپوں کی ضرورت کو بھی دور کرتا ہے۔ مینوفیکچررز اب ہائی پریشر فلیش کرومیٹوگرافی سسٹم میں منتقل ہونا شروع کر رہے ہیں اور ان کو میڈیم پریشر مائع کرومیٹوگرافی (ایم پی ایل سی) سسٹم قرار دیا ہے جو اوپر کام کرتے ہیں۔ کالم کرومیٹوگرام ریزولوشن کا حساب عام طور پر، کالم کرومیٹوگرافی کو پیریسٹالٹک پمپوں، بہتے ہوئے بفرز اور کالم کے اوپری حصے سے حل کے نمونے کے ساتھ ترتیب دیا جاتا ہے۔ حل اور بفر اس کالم سے گزرتے ہیں جہاں کالم سیٹ اپ کے آخر میں ایک فریکشن کلیکٹر خارج شدہ نمونے جمع کرتا ہے۔ فریکشن کلیکشن سے پہلے، کالم سے نکالے گئے نمونے ایک ڈٹیکٹر جیسے سپیکٹرو فوٹومیٹر یا ماس سپیکٹرومیٹر سے گزرتے ہیں تاکہ نمونے کے محلول کے مرکب میں الگ کیے گئے نمونوں کے ارتکاز کا تعین کیا جا سکے۔ مثال کے طور پر، اگر آپ حل کے نمونے سے کالم سے مختلف بائنڈنگ کی صلاحیتوں کے ساتھ دو مختلف پروٹین کو الگ کرتے ہیں، تو ایک اچھی قسم کا ڈٹیکٹر 280 این ایم کی طول موج کا استعمال کرتے ہوئے سپیکٹرو فوٹومیٹر ہوگا۔ پروٹین کا ارتکاز جتنا زیادہ ہوگا جو کالم کے ذریعے ایلیوٹڈ محلول سے گزرتا ہے، اس طول موج کا جذب اتنا ہی زیادہ ہوگا۔ چونکہ کالم کرومیٹوگرافی میں مختلف ارتکاز پر ڈٹیکٹر سے گزرنے والے ایلیوٹڈ حل کا مستقل بہاؤ ہوتا ہے، اس لیے ڈٹیکٹر کو وقت کے ساتھ ایلیوٹڈ نمونے کے ارتکاز کو پلاٹ کرنا چاہیے۔ نمونے کے ارتکاز بمقابلہ وقت کے اس پلاٹ کو کرومیٹوگرام کہا جاتا ہے۔ کرومیٹوگرافی کا حتمی مقصد مختلف اجزاء کو محلول کے مرکب سے الگ کرنا ہے۔ قرارداد مرکب سے اجزاء کے درمیان علیحدگی کی حد کو ظاہر کرتی ہے۔ کرومیٹوگرام کی ریزولوشن جتنی زیادہ ہوگی، کالم کے نمونوں کی علیحدگی کی حد اتنی ہی بہتر ہوگی۔ یہ ڈیٹا اس مخصوص نمونے کے کالم کی علیحدگی کی خصوصیات کا تعین کرنے کا ایک اچھا طریقہ ہے۔ ریزولوشن کا حساب کرومیٹوگرام سے لگایا جا سکتا ہے۔ خاکہ میں الگ الگ منحنی خطوط کالم رال سے وابستگی کی بنیاد پر وقت کے ساتھ ساتھ مختلف نمونے ایلیوشن کنسنٹریشن پروفائلز کی نمائندگی کرتے ہیں۔ ریزولوشن کا حساب لگانے کے لیے، برقرار رکھنے کا وقت اور منحنی خطوط کی چوڑائی درکار ہوتی ہے۔ برقرار رکھنے کا وقت ڈٹیکٹر کے ذریعہ سگنل کا پتہ لگانے کے آغاز سے لے کر ہر مختلف نمونے کے ایلیوشن کنسنٹریشن پروفائل کی چوٹی اونچائی تک کا وقت ہے۔ منحنی چوڑائی وقت کی اکائیوں میں کرومیٹوگرام میں مختلف نمونوں کے ارتکاز پروفائل وکر کی چوڑائی ہے۔ کرومیٹوگرام ریزولوشن کا حساب لگانے کا ایک آسان طریقہ پلیٹ ماڈل کا استعمال کرنا ہے۔ پلیٹ ماڈل یہ فرض کرتا ہے کہ کالم کو ایک مخصوص تعداد میں حصوں، یا پلیٹوں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے اور ہر انفرادی پلیٹ کے لیے بڑے پیمانے پر توازن کا حساب لگایا جا سکتا ہے۔ یہ نقطہ نظر ایک عام کرومیٹوگرام منحنی خطوط کو گوسی تقسیم منحنی خطوط کے طور پر ظاہر کرتا ہے۔ ایسا کرنے سے، منحنی خطوط کی چوڑائی کا تخمینہ منحنی خطوط کے معیاری انحراف سے 4 گنا، 4σ لگایا جاتا ہے۔ برقرار رکھنے کا وقت سگنل کا پتہ لگانے کے آغاز سے لے کر گوسی وکر کی چوٹی کی اونچائی تک کا وقت ہے۔ مندرجہ بالا شکل کے متغیرات سے، کالم پلیٹ ماڈل کی ریزولوشن، پلیٹ نمبر، اور پلیٹ کی اونچائی کا حساب مساوات کا استعمال کرتے ہوئے کیا جا سکتا ہے: ریزولوشن (روپے): روپے = 2 (ٹی آر بی-ٹی آر اے)/(ڈبلیو بی + ڈبلیو اے)، جہاں: ٹی آر بی = سالیوٹ بی ٹی آر اے کا برقرار رکھنے کا وقت = سالیوٹ اے ڈبلیو بی کا برقرار رکھنے کا وقت = سالیوٹ بی ڈبلیو اے کی گاؤسی وکر چوڑائی = گاؤسی وکر کی چوڑائی ایک پلیٹ نمبر (این): این = (ٹی آر) 2/(ڈبلیو/4) 2 پلیٹ اونچائی (ایچ): ایچ = ایل/این جہاں ایل کالم کی لمبائی ہے۔ کالم جذب توازن ایک جذب کالم کے لیے، کالم رال (مستحکم مرحلہ) مائکرو بیڈز پر مشتمل ہوتا ہے۔ یہاں تک کہ چھوٹے ذرات جیسے پروٹین، کاربوہائیڈریٹ، دھاتی آئن، یا دیگر کیمیائی مرکبات مائیکرو بیڈز پر جڑے ہوتے ہیں۔ مائکروبیڈ سے منسلک ہر بائنڈنگ ذرہ کو کالم کے ذریعے بھیجے گئے سولیوٹ نمونے کے ساتھ 1:1 کے تناسب میں باندھا جا سکتا ہے جسے پاک کرنے یا الگ کرنے کی ضرورت ہے۔ علیحدہ کیے جانے والے ٹارگٹ مالیکیول اور کالم کے موتیوں پر بائنڈنگ مالیکیول کے درمیان بائنڈنگ کو ایک سادہ توازن رد عمل Keq = [CS]/([C] [S]) کا استعمال کرتے ہوئے ماڈل کیا جا سکتا ہے جہاں Keq توازن مستقل ہے، [C] اور [S] بالترتیب کالم رال پر ٹارگٹ مالیکیول اور بائنڈنگ مالیکیول کی تعداد ہیں۔ [CS] کالم رال سے منسلک ہدف مالیکیول کے کمپلیکس کا ارتکاز ہے۔ اسے ایک بنیاد کے طور پر استعمال کرتے ہوئے، کالم کرومیٹوگرافی کی بائنڈنگ ڈائنامکس کو بیان کرنے کے لیے تین مختلف آئسوتھرم استعمال کیے جا سکتے ہیں: لکیری، لینگموائر، اور فرینڈلیچ۔ لکیری آئسوتھرم اس وقت ہوتا ہے جب صاف کرنے کے لیے درکار سالیوٹ کا ارتکاز بائنڈنگ مالیکیول کے مقابلے میں بہت کم ہوتا ہے۔ اس طرح، توازن کی تعریف اس طرح کی جا سکتی ہے: [CS] = Keq [C]۔ صنعتی پیمانے کے استعمال کے لیے، کالم رال کے موتیوں پر کل بائنڈنگ مالیکیولز کو فیکٹر کیا جانا چاہیے کیونکہ غیر آباد مقامات کو مدنظر رکھنا ضروری ہے۔ لینگموائر آئسوتھرم اور فرینڈلیچ آئسوتھرم اس توازن کو بیان کرنے میں مفید ہیں۔ لینگموئر آئسوتھرم اس طرح دیا جاتا ہے: [CS] = (KeqStot [C])/(1 + Keq [C])، جہاں Stot موتیوں پر بائنڈنگ کے کل مالیکیول ہوتے ہیں۔ فرینڈلیچ آئسوتھرم اس طرح دیا جاتا ہے: [CS] = Keq [C] 1/n فرینڈلیچ آئسوتھرم کا استعمال اس وقت کیا جاتا ہے جب کالم حل میں بہت سے مختلف نمونوں سے جڑا ہو جس کو صاف کرنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ چونکہ بہت سے مختلف نمونوں میں موتیوں کے لیے مختلف بائنڈنگ مستقل ہوتے ہیں، اس لیے بہت سے مختلف کیکس ہوتے ہیں۔ لہذا، لینگموائر آئسوتھرم اس معاملے میں بائنڈنگ کے لیے اچھا نمونہ نہیں ہے۔ ہائی پریشر کا استعمال کرتے ہوئے کالم کرومیٹوگرافی کے لیے ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (ایچ پی ایل سی) بھی دیکھیں۔ کالم کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کی علیحدگی کے لیے تیز پروٹین مائع کرومیٹوگرافی (ایف پی ایل سی)۔ حوالہ جات بیرونی روابط فلیش کالم کرومیٹوگرافی گائیڈ (پی ڈی ایف) ریڈیل فلو کرومیٹوگرافی کرومیٹوگرافی لیبارٹری تکنیک