Hoechst stain
ہوکسٹ کے داغ نیلے فلوروسینٹ رنگوں کے ایک خاندان کا حصہ ہیں جو ڈی این اے پر داغ لگانے کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔ یہ بیس بینزیمائڈز اصل میں ہوچسٹ اے جی نے تیار کیے تھے، جس نے ان کے تمام مرکبات کو نمبر دیا تھا تاکہ ڈائی ہوچسٹ 33342 کمپنی کا بنایا ہوا 33,342 واں مرکب ہو۔ تین متعلقہ ہوکسٹ داغ ہیں: ہوکسٹ 33258، ہوکسٹ 33342، اور ہوکسٹ 34580۔ ہوکسٹ 33258 اور ہوکسٹ 33342 وہ رنگ ہیں جو سب سے زیادہ استعمال ہوتے ہیں اور ان میں اسی طرح کا ایکسائٹیشن-ایمیشن سپیکٹر ہوتا ہے۔ سالماتی خصوصیات دونوں رنگ تقریبا 350 این ایم پر بالائے بنفشی روشنی سے پرجوش ہوتے ہیں، اور دونوں اخراج سپیکٹرم کے ارد گرد زیادہ سے زیادہ 461 این ایم پر نیلی سیان فلوروسینٹ روشنی خارج کرتے ہیں۔ ان باؤنڈ ڈائی کا زیادہ سے زیادہ فلوروسینس اخراج 510-540 nm رینج میں ہوتا ہے۔ ہوکسٹ کے داغوں کو زینون یا مرکری آرک لیمپ سے یا بالائے بنفشی لیزر سے پرجوش کیا جا سکتا ہے۔ ایکسائٹیشن اور ایمیشن سپیکٹرہ کے درمیان اسٹوکس کی کافی تبدیلی ہے جو ہوکسٹ رنگوں کو تجربات میں مفید بناتی ہے جس میں متعدد فلوروفورز استعمال کیے جاتے ہیں۔ ہوچسٹ رنگوں کی فلوروسینس کی شدت بھی سالوینٹ کے پی ایچ کے ساتھ بڑھتی ہے۔ ہوکسٹ رنگ پانی میں اور نامیاتی سالوینٹس جیسے ڈائی میتھائل فارمامائڈ یا ڈائی میتھائل سلفوکسائڈ میں گھلنشیل ہوتے ہیں۔ ارتکاز 10 ملی گرام/ملی لیٹر تک حاصل کیا جا سکتا ہے۔ آبی محلول روشنی سے محفوظ ہونے پر کم از کم چھ ماہ تک 2 سے 6 ڈگری سیلسیس پر مستحکم ہوتے ہیں۔ طویل مدتی ذخیرہ کرنے کے لیے اس کے بجائے حلوں کو −20 ڈگری سیلسیس یا اس سے نیچے منجمد کیا جاتا ہے۔ رنگ اڈینائن اور تھامین سے بھرپور ترتیبات کو ترجیح دینے کے ساتھ ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کی معمولی نالی سے جڑے ہوتے ہیں۔ اگرچہ رنگ تمام نیوکلک ایسڈ سے جڑے ہو سکتے ہیں، اے ٹی سے بھرپور ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے اسٹرینڈز فلوروسینس کو کافی حد تک بڑھاتے ہیں۔ ہوکسٹ رنگ خلیوں کے پارगम्य ہوتے ہیں اور زندہ یا فکسڈ خلیوں میں ڈی این اے سے جڑے رہ سکتے ہیں۔ اس طرح، ان داغوں کو اکثر سپرراوٹل کہا جاتا ہے، جس کا مطلب ہے کہ زندہ خلیات ان مرکبات کے علاج سے بچ جاتے ہیں۔ وہ خلیے جو مخصوص اے ٹی پی بائنڈنگ کیسٹ ٹرانسپورٹر پروٹین کا اظہار کرتے ہیں وہ بھی فعال طور پر ان داغوں کو اپنے سائٹوپلازم سے باہر نکال سکتے ہیں۔ ایپلی کیشنز 0.1-12 μg/ml کا ارتکاز عام طور پر بیکٹیریا یا یوکیریوٹ خلیوں میں ڈی این اے کو داغدار کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ خلیوں کو کمرے کے درجہ حرارت یا 37 ڈگری سیلسیس پر 1-30 منٹ کے لیے داغدار کیا جاتا ہے اور پھر غیر پابند رنگ کو ہٹانے کے لیے دھویا جاتا ہے۔ ان نمونوں پر غیر باؤنڈ ہوچسٹ ڈائی کا سبز فلوروسینس دیکھا جا سکتا ہے جو بہت زیادہ رنگ سے داغدار ہوتے ہیں یا جو جزوی طور پر دھوئے جاتے ہیں۔ ہوکسٹ رنگوں کو اکثر ڈی اے پی آئی نامی ایک اور نیوکلک ایسڈ داغ کے متبادل کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ ہوکسٹ رنگوں اور ڈی اے پی آئی کے درمیان کلیدی فرق یہ ہیں: ہوکسٹ رنگ ڈی اے پی آئی سے کم زہریلے ہوتے ہیں، جو داغدار خلیوں کی اعلی عملداری کو یقینی بناتا ہے۔ بعض ہوکسٹ رنگوں میں اضافی ایتھائل گروپ (ہوکسٹ 33342) انہیں زیادہ سیل پارगम्य بناتا ہے۔ نیوکلئی سٹیننگ ڈائز ہوتے ہیں جو سٹیننگ کے بعد خلیوں کی عملداری کی اجازت دیتے ہیں۔ ہوکسٹ 33342 اور 33258 کو بروموڈیوکسیوریڈائن (بی آر ڈی یو) کے ذریعے بجھایا جاتا ہے، جو عام طور پر تقسیم کرنے والے خلیوں کا پتہ لگانے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ ہوکسٹ 33342 H 33258 سے 10 گنا زیادہ سیل پارگمیتا ظاہر کرتا ہے۔ خلیے تھائمیڈائن کے متبادل کے طور پر نئے ترکیب شدہ ڈی این اے میں بی آر ڈی یو کو ضم کر سکتے ہیں۔ جب بی آر ڈی یو کو ڈی این اے میں ضم کیا جاتا ہے، تو یہ سمجھا جاتا ہے کہ برومین معمولی نالی کو خراب کر دیتا ہے تاکہ ہوچسٹ رنگ اپنے زیادہ سے زیادہ بائنڈنگ سائٹ تک نہ پہنچ سکیں۔ ہوچسٹ رنگوں کی بائنڈنگ بی آر ڈی یو کے متبادل ڈی این اے سے بھی زیادہ مضبوط ہے ؛ تاہم، کوئی فلوروسینس نہیں ہوتا ہے۔ ہوچسٹ رنگوں کو بی آر ڈی یو کے ساتھ سیل سائیکل کی ترقی کی نگرانی کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ ہوکسٹ رنگ عام طور پر مندرجہ ذیل ایپلی کیشنز میں جینومک ڈی این اے کو داغدار کرنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں: فلوروسینس مائکروسکوپی اور امیونو ہسٹو کیمسٹری، اکثر دوسرے فلوروفورز فلو سائٹومیٹری کے ساتھ خلیوں کو گننے یا ترتیب دینے کے لیے۔ ایک مثال یہ ہے کہ ہوکسٹ رنگوں کا استعمال یہ تجزیہ کرنے کے لیے کیا جاتا ہے کہ سیل سائیکل کے کس مرحلے میں آبادی کے کتنے خلیات ہیں۔ اگروز جیل میں آر این اے کی موجودگی میں ڈی این اے کا پتہ لگانا۔ خودکار ڈی این اے کا تعین کروموسوم کی چھانٹ ہوکسٹ افلوکس بھی ہیمیٹوپوئیٹک اور جنین اسٹیم خلیوں کا مطالعہ کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ چونکہ یہ خلیے ڈائی کو مؤثر طریقے سے خارج کرنے کے قابل ہوتے ہیں، اس لیے ان کا پتہ فلو سائٹومیٹری کے ذریعے لگایا جا سکتا ہے جسے سائیڈ پاپولیشن کہا جاتا ہے۔ یہ پرجوش ہوچسٹ سے خارج ہونے والے فلوروسینس کو سرخ اور نیلے دونوں فلٹرز سے گزر کر، اور ہوچسٹ سرخ اور نیلے رنگ کو ایک دوسرے کے خلاف پلاٹ کرکے کیا جاتا ہے۔ زہریلا پن اور حفاظت کیونکہ ہوکسٹ کے داغ ڈی این اے سے جڑے ہوتے ہیں، وہ خلیوں کی تقسیم کے دوران ڈی این اے کی نقل میں مداخلت کرتے ہیں۔ نتیجتا، وہ ممکنہ طور پر میوٹیجینک اور کارسنجینک ہوتے ہیں، اس لیے ان کو سنبھالنے اور ٹھکانے لگانے میں احتیاط برتی جانی چاہیے۔ ہوکسٹ داغ کا استعمال مویشیوں اور انسانوں میں سپرم کی چھان بین کے لیے کیا جاتا ہے۔ اس کی حفاظت پر بحث ہوئی ہے۔ حوالہ جات بھی دیکھیں بیرونی روابط ہوچسٹ داغوں کے لیے فلوروسینٹ رنگوں کے دستی کے لیے سپیکٹرم کے نشانات فلوروسینٹ تحقیقات اور تجارتی لیبلنگ ٹیکنالوجیز کے لیے ایک آن لائن گائیڈ سٹیننگ ڈائز فلوروسینٹ رنگ ڈی این اے بائنڈنگ مادہ