DAPI
ڈی۔ اے۔ پی۔ آئی (تلفظ 'ڈی۔ اے۔ پی۔ پی۔ وائی'،/ڈی۔ اے۔ پی۔ آئی۔/)، یا 4′، 6-ڈیامیڈینو-2-فینائلینڈول، ایک فلوروسینٹ داغ ہے جو ڈی۔ این۔ اے میں اڈینائن-تھامین سے بھرپور علاقوں سے مضبوطی سے جڑا رہتا ہے۔ یہ فلوروسینس مائکروسکوپی میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتا ہے۔ چونکہ ڈی اے پی آئی ایک برقرار خلیے کی جھلی سے گزر سکتا ہے، اس لیے اسے زندہ اور فکسڈ دونوں خلیوں پر داغ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، حالانکہ یہ زندہ خلیوں میں جھلی سے کم مؤثر طریقے سے گزرتا ہے اور اس لیے جھلی کی عملداری کے لیے ایک مارکر فراہم کرتا ہے۔ ڈی اے پی آئی کو پہلی بار 1971 میں اوٹو ڈین کی لیبارٹری میں ٹرائیپانوسومیاسس کے علاج کے لیے ادویات کی تلاش کے حصے کے طور پر ترکیب کیا گیا تھا۔ اگرچہ یہ ایک دوا کے طور پر ناکام رہا، لیکن مزید تحقیقات سے پتہ چلتا ہے کہ یہ ڈی این اے سے مضبوطی سے جڑا ہوا ہے اور جڑے ہونے پر زیادہ فلوروسینٹ ہو جاتا ہے۔ اس کی وجہ سے 1975 میں الٹرا سینٹرفیوگیشن میں مائٹوکونڈریل ڈی این اے کی شناخت میں اس کا استعمال ہوا، ڈی اے پی آئی کا فلوروسینٹ ڈی این اے داغ کے طور پر پہلا ریکارڈ شدہ استعمال۔ ڈی این اے سے منسلک ہونے پر مضبوط فلوروسینس فلوروسینس مائکروسکوپی کے لیے ڈی این اے کے فلوروسینٹ سٹیننگ کے لیے ڈی اے پی آئی کو تیزی سے اپنانے کا باعث بنا۔ پودوں، میٹازوا اور بیکٹیریا کے خلیوں اور وائرس کے ذرات میں ڈی این اے کا پتہ لگانے کے لیے اس کے استعمال کا مظاہرہ 1970 کی دہائی کے آخر میں کیا گیا تھا، اور خلیوں کے اندر ڈی این اے کے مقداری داغ کا مظاہرہ 1977 میں کیا گیا تھا۔ اس وقت کے آس پاس فلو سائٹومیٹری کے لیے ڈی این اے داغ کے طور پر ڈی اے پی آئی کے استعمال کا بھی مظاہرہ کیا گیا۔ فلوروسینس کی خصوصیات جب ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے سے منسلک ہوتا ہے، تو ڈی اے پی آئی 358 این ایم (بالائے بنفشی) کی طول موج پر زیادہ سے زیادہ جذب کرتا ہے اور اس کا اخراج زیادہ سے زیادہ 461 این ایم (نیلا) ہوتا ہے۔ لہذا، فلوروسینس مائکروسکوپی کے لیے، ڈی اے پی آئی بالائے بنفشی روشنی سے پرجوش ہوتا ہے اور نیلے/سیان فلٹر کے ذریعے اس کا پتہ لگایا جاتا ہے۔ اخراج کی چوٹی کافی وسیع ہے۔ ڈی اے پی آئی آر این اے سے بھی جڑا رہے گا، حالانکہ یہ اتنا مضبوط فلوروسینٹ نہیں ہے۔ آر این اے سے منسلک ہونے پر اس کا اخراج تقریبا 500 این ایم تک منتقل ہو جاتا ہے۔ ڈی اے پی آئی کا نیلا اخراج خوردبین ماہرین کے لیے آسان ہے جو ایک ہی نمونے میں متعدد فلوروسینٹ داغ استعمال کرنا چاہتے ہیں۔ ڈی اے پی آئی اور گرین فلوروسینٹ مالیکیولز جیسے فلوروسین اور گرین فلوروسینٹ پروٹین (جی ایف پی) کے درمیان کچھ فلوروسینس اوورلیپ ہوتا ہے لیکن اس کا اثر کم ہوتا ہے۔ اگر انتہائی عین مطابق تصویری تجزیہ کی ضرورت ہو تو سپیکٹرم انمکسنگ کا استعمال اس اثر کا سبب بن سکتا ہے۔ تجزیاتی فلوروسینس لائٹ مائکروسکوپی سے باہر ڈی اے پی آئی آلودہ مائیکوپلاسما یا وائرس کے ڈی این اے کا پتہ لگانے کے لیے سیل کلچرز کی لیبلنگ کے لیے بھی مقبول ہے۔ ترقی کے درمیانے درجے میں لیبل شدہ مائیکوپلاسما یا وائرس کے ذرات ایک بار ڈی اے پی آئی سے داغدار ہو جاتے ہیں جس سے ان کا پتہ لگانا آسان ہو جاتا ہے۔ جذب اور فلوروسینس خصوصیات کی ماڈلنگ یہ ڈی این اے فلوروسینٹ تحقیقات مؤثر طریقے سے وقت پر منحصر کثافت فنکشنل تھیوری کا استعمال کرتے ہوئے ماڈلنگ کی گئی ہے، جو پولرائزبل تسلسل ماڈل کے آئی ای ایف ورژن کے ساتھ مل کر ہے۔ اس کوانٹم مکینیکل ماڈلنگ نے کم ساختی لچک اور پولرائزیشن کے لحاظ سے ڈی این اے کی جیب میں معمولی نالی کے بائنڈنگ اور انٹرکلیشن کے ذریعے دیے گئے جذب اور فلوروسینس رویے کو معقول بنا دیا ہے۔ زندہ خلیات اور زہریلا ڈی اے پی آئی کو فکسڈ سیل سٹیننگ کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ زندہ خلیوں کے داغ لگانے کے لیے درکار ڈی اے پی آئی کا ارتکاز عام طور پر بہت زیادہ ہوتا ہے ؛ یہ زندہ خلیوں کے لیے شاذ و نادر ہی استعمال ہوتا ہے۔ اس پر اس کے ایم ایس ڈی ایس میں غیر زہریلا لیبل لگایا گیا ہے اور اگرچہ اس میں ای کولی کے لیے میوٹیجینیسیٹی نہیں دکھائی گئی تھی، لیکن اسے مینوفیکچرر کی معلومات میں معروف میوٹیجین کے طور پر لیبل کیا گیا ہے۔ چونکہ یہ ایک چھوٹا ڈی این اے بائنڈنگ کمپاؤنڈ ہے، اس کے کچھ کارسنجینک اثرات ہونے کا امکان ہے اور اسے سنبھالنے اور ٹھکانے لگانے میں احتیاط برتی جانی چاہیے۔ متبادل ہوچسٹ کے داغ ڈی اے پی آئی سے ملتے جلتے ہیں کیونکہ وہ نیلے رنگ کے فلوروسینٹ ڈی این اے کے داغ بھی ہیں جو لائیو اور فکسڈ سیل ایپلی کیشنز دونوں کے ساتھ مطابقت رکھتے ہیں، نیز ڈی اے پی آئی کی طرح ہی آلات فلٹر کی ترتیبات کا استعمال کرتے ہوئے نظر آتے ہیں۔ حوالہ جات یہ بھی دیکھیں کہ ڈی این اے بائنڈنگ لگینڈ ہوچسٹ سٹین لیکسیٹروپسن نیٹروپسن پینٹامائڈائن سٹیننگ ڈائز فلوروسینٹ ڈائز ڈی این اے بائنڈنگ مادہ انڈولس امیڈائنز