Floxing
جینیات میں، فلوکسنگ سے مراد دو لوکس پی سائٹس کے درمیان ڈی این اے کی ترتیب (جسے پھر فلوکسڈ کہا جاتا ہے) کی سینڈوچنگ ہے۔ اصطلاحات "فلینکنگ/فلینکڈ بائی ایل او ایکس پی" کے جملے پر بنائی گئی ہیں۔ ایل او ایکس پی سائٹس کے درمیان ریکومبینیشن کو کری ریکومبینیز کے ذریعے اتپریرک کیا جاتا ہے۔ جین کو فلوکس کرنے سے اسے حذف کرنے (ناک آؤٹ)، منتقل کرنے یا الٹا کرنے کی اجازت ملتی ہے جسے کری-لاکس ریکومبینیشن کہا جاتا ہے۔ سائنسی ماڈل کے نظام کی ترقی میں جینوں کی فلوکسنگ ضروری ہے کیونکہ یہ محققین کو جین کے اظہار کی مقامی اور عارضی تبدیلی کرنے کی اجازت دیتا ہے۔ مزید برآں، چوہوں جیسے جانوروں کو انسانی بیماری کا مطالعہ کرنے کے لیے نمونوں کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ لہذا، انسانی بیماریوں اور منشیات کی نشوونما کا مطالعہ کرنے کے لیے جین کے اظہار کو جوڑنے کے لیے چوہوں میں کری لوکس سسٹم کا استعمال کیا جا سکتا ہے۔ مثال کے طور پر، کری لوکس سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے، محققین آنکوجینز اور ٹیومر سپریسر جینز اور چوہوں کے ماڈلز میں کینسر کی نشوونما اور ترقی میں ان کے کردار کا مطالعہ کر سکتے ہیں۔ تحقیق میں استعمال فلوکسنگ جین کو حذف کرنے (ناک آؤٹ)، منتقل کرنے یا داخل کرنے (کری-لاکس ریکومبینیشن میں مختلف میکانزم کے ذریعے) کی اجازت دیتا ہے۔ سائنسی ماڈل کے نظام کی ترقی میں جینوں کی فلوکسنگ ضروری ہے کیونکہ یہ جین کے اظہار کی مقامی اور عارضی تبدیلی کی اجازت دیتا ہے۔ عام آدمی کے الفاظ میں، جین کو ویوو میں کسی مخصوص ٹشو میں ناک آؤٹ (غیر فعال) کیا جا سکتا ہے، کسی بھی وقت سائنسدان کے ذریعے منتخب کیا جا سکتا ہے۔ اس کے بعد سائنسدان ناک آؤٹ جین کے اثرات کا جائزہ لے سکتا ہے اور جین کے معمول کے کام کی شناخت کر سکتا ہے۔ یہ تصور سے شروع ہونے والے جین کی غیر موجودگی سے مختلف ہے، جس کے تحت حیاتیات کی نشوونما کے لیے ضروری جینوں کی غیر فعالیت یا نقصان خلیوں کے معمول کے کام میں مداخلت کر سکتا ہے اور قابل عمل اولاد کی پیداوار کو روک سکتا ہے۔ حذف کرنے کے واقعات کا طریقہ کار جین ایڈیٹنگ کے تجربات انجام دینے کے لیے مفید ہے جس میں حصوں یا یہاں تک کہ پورے جین کو درست طریقے سے ترمیم کیا جاتا ہے۔ حذف کرنے کے لیے ایل او ایکس پی سائٹس کے ساتھ دلچسپی کے حصے کی فلوکسنگ کی ضرورت ہوتی ہے جو ایک ہی سمت کا سامنا کرتی ہیں۔ کری ریکومبینیز یک طرفہ ایل او ایکس پی سائٹس کا پتہ لگائے گا اور ڈی این اے کے فلوکسڈ حصے کو ایکسائز کرے گا۔ کامیابی سے ترمیم شدہ کلون کو سلیکشن مارکر کا استعمال کرتے ہوئے منتخب کیا جا سکتا ہے جسے اسی کری-لاکس پی سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے ہٹایا جا سکتا ہے۔ اسی میکانزم کو ایک ایف آر ٹی/ایف ایل پی سائٹ متعارف کروا کر مشروط ایللیز بنانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے جو ایک ہی میکانزم کو پورا کرتا ہے لیکن ایک مختلف انزائم کے ساتھ۔ الٹ الٹ واقعات کا طریقہ کار جینیاتی مواد کی مقدار کو برقرار رکھنے کے لیے مفید ہے۔ الٹے جین اکثر غیر معمولی فینوٹائپز سے وابستہ نہیں ہوتے ہیں، یعنی الٹے جین عام طور پر قابل عمل ہوتے ہیں۔ کری-لوکس پی ریکومبینیشن جس کے نتیجے میں اندراج ہوتا ہے اس کے لیے لوکس پی سائٹس کو دلچسپی کے جین کو فلوکس کرنے کی ضرورت ہوتی ہے، جس میں لوکس پی سائٹس ایک دوسرے کی طرف مائل ہوتی ہیں۔ کری ریکومبینیشن سے گزرنے سے، ایل او ایکس پی سائٹس کے ذریعے فلوکس ہونے والا علاقہ الٹا ہو جائے گا، یہ عمل مستقل نہیں ہے اور اسے الٹا کیا جا سکتا ہے۔ ٹرانسلوکیشن ٹرانسلوکیشن کے واقعات کا میکانزم اس وقت ہوتا ہے جب ایل او ایکس پی دو مختلف ڈی این اے مالیکیولز پر فلوکس جینز کو یک طرفہ سمت میں رکھتا ہے۔ کری ریکومبینیز کو پھر دو ڈی این اے مالیکیولز کے درمیان ٹرانسلوکیشن پیدا کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، جینیاتی مواد کو ایک ڈی این اے مالیکیول سے دوسرے میں تبدیل کرتے ہوئے دونوں فلوکسڈ جینز کا بیک وقت ٹرانسلوکیشن تشکیل دیا جاتا ہے۔ تحقیق میں عام ایپلی کیشنز کارڈیومیوسائٹس (دل کے پٹھوں کے ٹشو) کو ایک قسم کے کری ریکومبینیز کا اظہار کرنے کے لیے دکھایا گیا ہے جو کارڈیومیوسائٹس کے لیے انتہائی مخصوص ہے اور محققین کے ذریعے انتہائی موثر ریکومبینیشن انجام دینے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ یہ ایک قسم کے کری کا استعمال کرکے حاصل کیا جاتا ہے جس کا اظہار-میوسن ہیوی چین پروموٹر (-مائی ایچ سی) کے ذریعہ کارفرما ہوتا ہے۔ یہ دوبارہ ملاپ جین کو اس انداز میں متاثر کرنے کی صلاحیت رکھتے ہیں جو ویو میں صرف دل کے بافتوں کے لیے مخصوص ہے اور زیادہ تر کنٹرول کے طور پر استعمال کرنے کے لیے دل کے مشروط ناک آؤٹ کی تخلیق کی اجازت دیتا ہے۔ مثال کے طور پر،-مائی ایچ سی پروموٹر کے ساتھ کری ریکومبینیز کا استعمال صرف دل میں فلوکسڈ جین کو غیر فعال کرنے کا سبب بنتا ہے۔ مزید یہ کہ یہ ناک آؤٹ قابل قبول ہو سکتے ہیں۔ ماؤس کے کئی مطالعات میں، ٹیموکسفین کا استعمال کری ریکومبینیز کو متاثر کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ اس صورت میں، کری ریکومبینیز کو ماؤس ایسٹروجن ریسیپٹر (ای آر) کے ایک حصے سے ملایا جاتا ہے جس میں اس کے لگینڈ بائنڈنگ ڈومین (ایل بی ڈی) کے اندر ایک تغیر ہوتا ہے۔ اتپریورتن رسیپٹر کو غیر فعال کر دیتا ہے، جو چیپرون پروٹین جیسے ہیٹ شاک پروٹین 70 اور 90 (ایچ ایس پی 70 اور ایچ ایس پی 90) کے ساتھ اس کے تعاملات کے ذریعے غلط لوکلائزیشن کا باعث بنتا ہے۔ ٹیموکسفین کری-ای آر سے جڑا رہتا ہے اور چیپرونز کے ساتھ اس کے تعاملات میں خلل ڈالتا ہے، جس سے کری-ای آر فیوژن پروٹین نیوکلئس میں داخل ہوتا ہے اور فلوکسڈ جین پر دوبارہ ملاپ انجام دیتا ہے۔ مزید برآں، مخصوص ہیٹ شاک عناصر (ایچ ایس ایز) کے قابو میں ہونے پر کری ریکومبینیز کو گرمی سے متاثر کیا جا سکتا ہے۔ حوالہ جات ڈی این اے جینیات کی تکنیک