CFTR inhibitory factor
سی ایف ٹی آر انابائٹری فیکٹر (سی آئی ایف) ایک پروٹین وائرولنس فیکٹر ہے جو گرام نیگیٹیو بیکٹیریا سیوڈوموناس ایروگینوسا اور ایسینیٹوبیکٹر نوسوکومیالس کے ذریعے خارج ہوتا ہے۔ ڈارٹماؤتھ میڈیکل اسکول میں دریافت کیا گیا، سی آئی ایف یوکرائیوٹک ایپیٹیلیل خلیوں میں منتخب اے بی سی ٹرانسپورٹرز کی اسمگلنگ کو تبدیل کرنے کے قابل ہے، جیسے سسٹک فائبروسس ٹرانس میمبرین کنڈکٹینس ریگولیٹر (سی ایف ٹی آر)، اور پی-گلائکوپروٹین میزبان ڈیوبیکیوٹینیٹنگ مشینری میں مداخلت کرکے۔ سی ایف ٹی آر کے یوبیکیوٹین کی ثالثی سے ہونے والے انحطاط کو فروغ دے کر، سی آئی ایف سیلولر سطح پر سسٹک فائبروسس کی فینو کاپی کرنے کے قابل ہے۔ سی آئی ایف جین کو 3 جین اوپیرون کے حصے کے طور پر نقل کیا جاتا ہے، جس کے اظہار کو منفی طور پر سی آئی ایف آر، ایک ٹی ٹی آر فیملی ریپریسر کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے۔ عمل کا سیلولر میکانزم Cif سب سے پہلے پی ایروگینوسا کو انسانی ہوا کے راستے کے اپیتھیلیل خلیوں کے ساتھ مل کر کاشت کرکے اور پولرائزڈ مونو لیئر میں کلورائڈ آئن کے اخراج پر ہونے والے اثر کی نگرانی کرکے دریافت کیا گیا تھا۔ شریک کاشت کے بعد، سی ایف ٹی آر مخصوص کلورائد آئن کے اخراج میں زبردست کمی پائی گئی۔ یہ ان خلیوں کی اوپری سطح پر سی ایف ٹی آر کی کم سطح کی وجہ سے طے کیا گیا تھا۔ یہ اثر بعد میں پی ایروگینوسا کے ذریعہ تیار کردہ ایک واحد خفیہ پروٹین کا نتیجہ پایا گیا، جسے اس ابتدائی فینوٹائپ کے لیے سی ایف ٹی آر انفیکٹو فیکٹر کا نام دیا گیا۔ سی آئی ایف کو پی ایروگینوسا پی اے 14 کے ذریعے گھلنشیل پروٹین کے طور پر خفیہ کیا جاتا ہے اور ساتھ ہی بیرونی جھلی کے پھپھوندی (او ایم وی) میں پیک کیا جاتا ہے۔ جب او ایم وی میں لگایا جاتا ہے تو سی آئی ایف کہیں زیادہ طاقتور ہوتا ہے، ممکنہ طور پر ترسیل کی کارکردگی کی وجہ سے۔ پاک شدہ، ریکومبیننٹ سیف پروٹین کو ممالیہ خلیوں کے پولرائزڈ مونو لیئرز پر لگایا جا سکتا ہے اور اپیکل جھلی سے سی ایف ٹی آر اور پی-گلائکوپروٹین کو ہٹانے کو فروغ دیا جا سکتا ہے۔ سی آئی ایف میزبان ڈیوبیکیوٹیلیشن سسٹم میں مداخلت کرکے اسے پورا کرتا ہے۔ ایپوکسائڈ ہائیڈرولیز انزائم میکانزم سی آئی ایف ایک ایپوکسائڈ ہائیڈرولیز (ای ایچ) ہے جس میں منفرد سبسٹریٹ سلیکٹیویٹی ہے۔ سی آئی ایف وائرس عنصر کے طور پر کام کرنے والے ای ایچ کی پہلی مثال ہے۔ ساختی موازنہ کی بنیاد پر، یہ ظاہر ہوتا ہے کہ انزائم بقیہ ایس پی 129، گلو 153 اور اس کے 297 کی ایک اتپریرک تثلیث کا استعمال کرتا ہے، جس میں معاون بقیہ اس کے 177 اور ٹائر 239 رنگ اوپننگ کے دوران ایپوکسائڈ آکسیجن کو مربوط کرتے ہیں۔ سی آئی ایف ای ایچ کی پہلی مثال بھی ہے جس میں کینونکل ٹائر-ٹائر جوڑے کے بجائے ایپوکسائڈ سبسٹریٹ کو مربوط کرنے کے لیے اس-ٹائر جوڑی کا استعمال کیا گیا ہے۔ مجوزہ انزائم میکانزم میں، ایس پی 129 نیوکلیوفیلک طور پر ایک سبسٹریٹ کے ایپوکسائڈ کے حصے کے کاربن پر حملہ کرتا ہے، جس سے ایسٹر سے منسلک انزائم-ایسیل انٹرمیڈیٹ بنتا ہے۔ جس ترجیح کے لیے کاربن پر حملہ کیا جاتا ہے وہ سبسٹریٹ کے لحاظ سے مختلف ہوتا ہے۔ رد عمل کے دوسرے مرحلے میں، پانی کا ایک مالیکیول چارج ریلے ہس 297-گلیو 153 جوڑی کے ذریعے چالو ہوتا ہے، اور ایسپ 129 کے سی جی ایم پر نیوکلیوفیلک حملے سے گزرتا ہے۔ یہ ایسٹر گروپ کو ہائیڈرولائز کرتا ہے، اور ہائیڈرولائسیس پروڈکٹ کو ویسینل ڈائل کے طور پر آزاد کرتا ہے۔ ساخت Cif کا تعلق پروٹین کے α/β ہائیڈرولیز خاندان سے ہے۔ اس کی ساخت کا تعین ایکس رے کرسٹلگرافی کے ذریعے کیا گیا تھا اور یہ کیپ ڈومین کے ساتھ کینونکل α/β ہائیڈرولیز فولڈ پر مشتمل ہوتا ہے، جسے یہ حل میں آئینی طور پر ہومو ڈائمرائز کرنے کے لیے استعمال کرتا ہے۔ فعال جگہ پروٹین کے اندرونی حصے میں α/β ہائیڈرولیز کور اور ٹوپی کے درمیان انٹرفیس پر دفن ہے۔ حوالہ جات وائرس کے عوامل سسٹک فائبروسس