Countercurrent chromatography
کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی (سی سی سی، کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی بھی) مائع-مائع کرومیٹوگرافی کی ایک شکل ہے جو ایک مائع اسٹیشنری مرحلے کا استعمال کرتی ہے جو سالمات کی جمود کے ذریعہ جگہ پر رکھی جاتی ہے جو اسٹیشنری مرحلے کو تشکیل دیتی ہے جو مرکز کی وجہ سے سنٹری فیوج کے مرکز کی طرف تیز ہوتی ہے اور مرکب کے کیمیائی اجزاء کو الگ کرنے، شناخت کرنے اور مقدار کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ اپنے وسیع تر معنوں میں، کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی متعلقہ مائع کرومیٹوگرافی تکنیکوں کے مجموعے پر مشتمل ہے جو ٹھوس حمایت کے بغیر دو غیر متزلزل مائع مراحل کو استعمال کرتی ہے۔ دو مائع مراحل ایک دوسرے کے ساتھ رابطے میں آتے ہیں کیونکہ کم از کم ایک مرحلے کو ایک کالم، ایک کھوکھلی ٹیوب یا چینلز سے منسلک چیمبروں کی ایک سیریز کے ذریعے پمپ کیا جاتا ہے، جس میں دونوں مراحل ہوتے ہیں۔ نتیجے میں متحرک اختلاط اور تصفیہ عمل اجزاء کو دونوں مراحل میں ان کی متعلقہ حل پذیری سے الگ کرنے کی اجازت دیتا ہے۔ مطلوبہ علیحدگی کے لیے مناسب انتخاب فراہم کرنے کے لیے کم از کم دو غیر متزلزل مائعوں پر مشتمل دو مراحل والے سالوینٹ سسٹم کی وسیع اقسام کو استعمال کیا جا سکتا ہے۔ کچھ قسم کی کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی، جیسے ڈوئل فلو سی سی سی، ایک حقیقی کاؤنٹر کرنٹ عمل کی خصوصیت رکھتی ہے جہاں دو غیر متزلزل مراحل ایک دوسرے سے گزرتے ہیں اور کالم کے مخالف سروں پر باہر نکلتے ہیں۔ تاہم، اکثر، ایک مائع ساکن مرحلے کے طور پر کام کرتا ہے اور کالم میں برقرار رہتا ہے جب کہ متحرک مرحلے کو اس کے ذریعے پمپ کیا جاتا ہے۔ مائع اسٹیشنری فیز کشش ثقل یا مالیکیولز کی جمود کی وجہ سے ہوتا ہے جو اسٹیشنری فیز بناتا ہے جو سنٹریپیٹل فورس کی وجہ سے سینٹری فیوج کے مرکز کی طرف تیز ہوتا ہے۔ کشش ثقل کے طریقہ کار کی ایک مثال کو ڈراپلیٹ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی (ڈی سی سی سی) کہا جاتا ہے۔ دو طریقے ہیں جن کے ذریعے اسٹیشنری فیز کو سنٹریپیٹل فورس کے ذریعے برقرار رکھا جاتا ہے: ہائیڈروسٹیٹک اور ہائیڈروڈائنامک۔ ہائیڈروسٹیٹک طریقہ کار میں، کالم کو مرکزی محور کے گرد گھمایا جاتا ہے۔ ہائیڈروسٹیٹک آلات کو سینٹرفیوگل پارٹیشن کرومیٹوگرافی (سی پی سی) کے نام سے فروخت کیا جاتا ہے۔ ہائیڈروڈائنامک آلات کو اکثر تیز رفتار یا اعلی کارکردگی والے کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی (بالترتیب ایچ ایس سی سی سی اور ایچ پی سی سی سی) آلات کے طور پر فروخت کیا جاتا ہے جو کالم میں مستحکم مرحلے کو برقرار رکھنے کے لیے ہیلیکل کنڈلی میں آرکیمیڈیز کے سکرو فورس پر انحصار کرتے ہیں۔ سی سی سی سسٹم کے اجزاء زیادہ تر مائع کرومیٹوگرافی کی ترتیبات سے ملتے جلتے ہیں، جیسے کہ اعلی کارکردگی والی مائع کرومیٹوگرافی (ایچ پی ایل سی)۔ ایک یا زیادہ پمپ مراحل کو کالم تک پہنچاتے ہیں جو کہ خود سی سی سی آلہ ہے۔ نمونے خودکار یا دستی سرنج سے بھرے نمونے کے لوپ کے ذریعے کالم میں داخل کیے جاتے ہیں۔ اخراج کی نگرانی مختلف ڈٹیکٹرز جیسے الٹرا وایلیٹ وزیبل سپیکٹروسکوپی یا ماس سپیکٹرومیٹری کے ذریعے کی جاتی ہے۔ پمپوں، سی سی سی آلے، نمونہ انجکشن، اور پتہ لگانے کے عمل کو دستی طور پر یا مائکرو پروسیسر کے ذریعے کنٹرول کیا جا سکتا ہے۔ جدید کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی تھیوری اور پریکٹس کا پیشرو کاؤنٹر کرنٹ ڈسٹری بیوشن (سی سی ڈی) تھا۔ سی سی ڈی کا نظریہ 1930 کی دہائی میں رینڈل اور لانگٹن نے بیان کیا تھا۔ آرچر مارٹن اور رچرڈ لارنس ملنگٹن سنج نے 1940 کی دہائی کے دوران طریقہ کار کو مزید تیار کیا۔ آخر کار، لیمن سی کریگ نے 1944 میں کریگ کاؤنٹر کرنٹ ڈسٹری بیوشن اپریٹس متعارف کرایا جس نے سی سی ڈی کو لیبارٹری کے کام کے لیے عملی بنا دیا۔ سی سی ڈی کو کئی دہائیوں تک مختلف قسم کے مفید مرکبات کو الگ کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا رہا۔ سپورٹ فری مائع کرومیٹوگرافی معیاری کالم کرومیٹوگرافی ایک ٹھوس اسٹیشنری فیز اور مائع موبائل فیز پر مشتمل ہوتی ہے، جبکہ گیس کرومیٹوگرافی (جی سی) ٹھوس سپورٹ اور گیسس موبائل فیز پر ٹھوس یا مائع اسٹیشنری فیز کا استعمال کرتی ہے۔ اس کے برعکس، مائع-مائع کرومیٹوگرافی میں، متحرک اور مستحکم دونوں مراحل مائع ہوتے ہیں۔ تاہم، تضاد اتنا سخت نہیں ہے جتنا پہلے ظاہر ہوتا ہے۔ مثال کے طور پر، ریورسڈ فیز کرومیٹوگرافی میں، اسٹیشنری فیز کو ایک مائع سمجھا جا سکتا ہے جو مائیکرو پورس سلیکا ٹھوس سپورٹ کے ساتھ کیمیائی بندھن کے ذریعے متحرک ہوتا ہے۔ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی میں سنٹریپیٹل یا کشش ثقل کی قوتیں مستحکم مائع پرت کو متحرک کر دیتی ہیں۔ ٹھوس سپورٹ کو ختم کرنے سے، کالم پر اینالائٹ کے مستقل جذب سے بچا جا سکتا ہے، اور اینالائٹ کی اعلی بازیابی حاصل کی جا سکتی ہے۔ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی آلے کو آسانی سے عام فیز کرومیٹوگرافی اور ریورس فیز کرومیٹوگرافی کے درمیان صرف موبائل اور اسٹیشنری مراحل کو تبدیل کرکے تبدیل کیا جاتا ہے۔ کالم کرومیٹوگرافی کے ساتھ، علیحدگی کی صلاحیت تجارتی طور پر دستیاب اسٹیشنری فیز میڈیا اور اس کی مخصوص خصوصیات کے ذریعہ محدود ہے۔ متضاد کرومیٹوگرافی میں تقریبا کسی بھی جوڑے کے غیر متزلزل حل کا استعمال کیا جا سکتا ہے بشرطیکہ اسٹیشنری مرحلے کو کامیابی کے ساتھ برقرار رکھا جا سکے۔ سالوینٹ کی لاگت بھی عام طور پر ایچ پی ایل سی کے مقابلے میں کم ہوتی ہے۔ کالم کرومیٹوگرافی کے مقابلے میں، بہاؤ اور کل سالوینٹ کا استعمال زیادہ تر کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی میں علیحدگی کو نصف اور یہاں تک کہ دسواں تک کم کیا جا سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، اسٹیشنری فیز میڈیا کی خریداری اور اسے ٹھکانے لگانے کی لاگت ختم ہو جاتی ہے۔ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی کا ایک اور فائدہ یہ ہے کہ لیبارٹری میں کیے جانے والے تجربات کو صنعتی حجم تک بڑھایا جا سکتا ہے۔ جب گیس کرومیٹوگرافی یا ایچ پی ایل سی کو بڑی مقدار کے ساتھ انجام دیا جاتا ہے، تو سطح سے حجم کے تناسب اور بہاؤ کی حرکیات کے مسائل کی وجہ سے حل ختم ہو جاتا ہے ؛ جب دونوں مراحل مائع ہوں تو اس سے گریز کیا جاتا ہے۔ سی سی سی علیحدگی کے عمل کو تین مراحل میں ہونے کے بارے میں سوچا جا سکتا ہے: اختلاط، آباد کاری، اور دونوں مراحل کی علیحدگی (حالانکہ وہ اکثر مسلسل ہوتے ہیں)۔ ان کے درمیان انٹرفیسیل ایریا کو زیادہ سے زیادہ کرنے اور بڑے پیمانے پر منتقلی کو بڑھانے کے لیے مراحل کا زبردست اختلاط اہم ہے۔ تجزیہ کار اپنے تقسیم گتانک کے مطابق مراحل کے درمیان تقسیم کرے گا جسے تقسیم گتانک، تقسیم مستقل، یا تقسیم کا تناسب بھی کہا جاتا ہے اور اس کی نمائندگی پی، کے، ڈی، کے سی، یا کے ڈی کرتے ہیں۔ کسی خاص بائی فیسک سالوینٹ سسٹم میں اینالیٹ کے لیے پارٹیشن گتانک آلے کے حجم، بہاؤ کی شرح، اسٹیشنری فیز برقرار رکھنے کے حجم کے تناسب اور اسٹیشنری فیز کو متحرک کرنے کے لیے درکار جی-فورس سے آزاد ہوتا ہے۔ اسٹیشنری فیز برقرار رکھنے کی ڈگری ایک اہم پیمانہ ہے۔ عام عوامل جو اسٹیشنری فیز برقرار رکھنے پر اثر انداز ہوتے ہیں وہ بہاؤ کی شرح، بیفاسک سالوینٹ سسٹم کی سالوینٹ کی ساخت، اور جی-فورس ہیں۔ اسٹیشنری فیز برقرار رکھنے کی نمائندگی اسٹیشنری فیز حجم برقرار رکھنے کے تناسب (ایس ایف) سے کی جاتی ہے جو اسٹیشنری فیز کا حجم ہے جسے آلہ کے کل حجم سے تقسیم کیا جاتا ہے۔ تصفیہ کا وقت سالوینٹ سسٹم اور سیمپل میٹرکس کی ایک خاصیت ہے، یہ دونوں ہی اسٹیشنری فیز برقرار رکھنے کو بہت زیادہ متاثر کرتے ہیں۔ زیادہ تر پروسیس کیمسٹوں کے لیے، "کاؤنٹر کرنٹ" کی اصطلاح سے مراد دو غیر متزلزل مائع ہیں جو مخالف سمتوں میں حرکت کرتے ہیں، جیسا کہ عام طور پر بڑی سینٹری فیوگل ایکسٹریکٹر اکائیوں میں ہوتا ہے۔ دوہری بہاؤ (نیچے دیکھیں) سی سی سی کے استثناء کے ساتھ، آپریشن کے زیادہ تر کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی طریقوں میں ایک مستحکم مرحلہ اور ایک متحرک مرحلہ ہوتا ہے۔ یہاں تک کہ اس صورت حال میں بھی آلات کے کالم کے اندر متضاد بہاؤ ہوتے ہیں۔ کئی محققین نے سی سی سی اور سی پی سی دونوں کا نام بدل کر مائع مائع کرومیٹوگرافی رکھنے کی تجویز پیش کی ہے، لیکن دوسروں کا خیال ہے کہ "کاؤنٹر کرنٹ" کی اصطلاح خود ایک غلط نام ہے۔ کالم کرومیٹوگرافی اور ایچ پی ایل سی کے برعکس، کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی آپریٹرز کالم کے حجم کے مقابلے میں بڑی مقدار میں انجیکشن لگا سکتے ہیں۔ عام طور پر کنڈلی کے حجم کا 5 سے 10 فیصد انجکشن کیا جا سکتا ہے۔ بعض صورتوں میں اسے کنڈلی کے حجم کے 15 سے 20 فیصد تک بڑھایا جا سکتا ہے۔ عام طور پر، زیادہ تر جدید تجارتی سی سی سی اور سی پی سی 5 سے 40 گرام/ایل صلاحیت کو داخل کر سکتے ہیں۔ رینج اتنی بڑی ہے، یہاں تک کہ کسی مخصوص آلے کے لیے بھی، تمام آلات کے اختیارات کو چھوڑ دیں، کیونکہ ٹارگٹ، میٹرکس اور دستیاب بائی فیسک سالوینٹ کی قسم بہت مختلف ہوتی ہے۔ تقریبا 10 گرام/ایل ایک زیادہ عام قیمت ہوگی، جسے زیادہ تر ایپلی کیشنز بیس ویلیو کے طور پر استعمال کر سکتی ہیں۔ کاؤنٹر کرنٹ علیحدگی مطلوبہ علیحدگی کے لیے ایک مناسب بائی فیزک سالوینٹ سسٹم کے انتخاب سے شروع ہوتی ہے۔ سی سی سی پریکٹیشنر کے لیے مختلف تناسب میں این-ہیکسین (یا ہیپٹین)، ایتھائل ایسیٹیٹ، میتھانول اور پانی کے امتزاج سمیت بفیسک سالوینٹ مرکب کی ایک وسیع صف دستیاب ہے۔ اس بنیادی سالوینٹ سسٹم کو بعض اوقات ایچ ای ایم واٹ سالوینٹ سسٹم کہا جاتا ہے۔ سالوینٹ سسٹم کے انتخاب کی رہنمائی سی سی سی ادب کے مشاہدے سے کی جا سکتی ہے۔ پتلی پرت کرومیٹوگرافی کی واقف تکنیک کو ایک بہترین سالوینٹ سسٹم کا تعین کرنے کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔ "خاندانوں" میں سالوینٹ سسٹمز کی تنظیم نے سالوینٹ سسٹمز کے انتخاب میں بھی بہت سہولت فراہم کی ہے۔ سالوینٹ سسٹم کی جانچ ون فلاسک پارٹیشننگ کے تجربے سے کی جا سکتی ہے۔ تقسیم کے تجربے سے ماپا گیا تقسیم کا گتانک مرکب کے ایلیوشن رویے کی نشاندہی کرے گا۔ عام طور پر، ایسے سالوینٹ سسٹم کا انتخاب کرنا مطلوب ہے جہاں ٹارگٹ کمپاؤنڈ کا تقسیم گتانک 0.25 اور 8 کے درمیان ہو۔ تاریخی طور پر، یہ خیال کیا جاتا تھا کہ کوئی بھی تجارتی کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگراف آئنک مائعوں کی اعلی چپچپا کا مقابلہ نہیں کر سکتا۔ تاہم، جدید آلات جو 30 سے 70 + ٪ آئنک مائعوں کو ایڈجسٹ کر سکتے ہیں (اور ممکنہ طور پر 100% آئنک مائع، اگر دونوں مراحل مناسب طریقے سے اپنی مرضی کے مطابق آئنک مائع ہیں) دستیاب ہو گئے ہیں۔ آئنک مائعوں کو قطبی/غیر قطبی نامیاتی، اچیرل اور چیرل مرکبات، بائیو مالیکیول، اور غیر نامیاتی علیحدگی کے لیے اپنی مرضی کے مطابق بنایا جا سکتا ہے، کیونکہ آئنک مائعوں کو غیر معمولی سالوینسی اور خاصیت کے لیے اپنی مرضی کے مطابق بنایا جا سکتا ہے۔ بفیسک سالوینٹ سسٹم کو منتخب کرنے کے بعد اس کا ایک بیچ تشکیل دیا جاتا ہے اور ایک علیحدہ فنل میں توازن قائم کیا جاتا ہے۔ اس مرحلے کو سالوینٹ سسٹم کا پری ایکولبریشن کہا جاتا ہے۔ دونوں مراحل الگ کیے گئے ہیں۔ پھر کالم کو ایک پمپ کے ساتھ اسٹیشنری سے بھرا جاتا ہے۔ اگلا، کالم کو توازن کے حالات مقرر کیے جاتے ہیں، جیسے کہ مطلوبہ گردش کی رفتار، اور متحرک مرحلے کو کالم کے ذریعے پمپ کیا جاتا ہے۔ موبائل فیز اسٹیشنری فیز کے ایک حصے کو اس وقت تک بے دخل کرتا ہے جب تک کہ کالم کا توازن حاصل نہ ہو جائے اور موبائل فیز کالم سے الگ نہ ہو جائے۔ نمونے کو کالم کے توازن کے مرحلے کے دوران یا توازن مکمل ہونے کے بعد کسی بھی وقت کالم میں متعارف کرایا جا سکتا ہے۔ ایلونٹ کے حجم کے کالم میں موبائل مرحلے کے حجم کو عبور کرنے کے بعد، نمونے کے اجزاء ایلیوٹ ہونا شروع ہو جائیں گے۔ اتحاد کے تقسیم گتانک والے مرکبات اس وقت ختم ہو جائیں گے جب انجکشن کے وقت سے موبائل مرحلے کا ایک کالم حجم کالم سے گزر چکا ہو۔ اس کے بعد مرکب کو دوسرے مستحکم مرحلے میں متعارف کرایا جا سکتا ہے تاکہ نتائج کے حل کو بڑھانے میں مدد ملے۔ ہدف کمپاؤنڈ (مرکبات) کے خارج ہونے کے بعد بہاؤ روک دیا جاتا ہے یا کالم کے ذریعے اسٹیشنری مرحلے کو پمپ کرکے کالم کو باہر نکال دیا جاتا ہے۔ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی کے ایک بڑے استعمال کی ایک مثال یہ ہے کہ ایک انتہائی پیچیدہ میٹرکس جیسے پلانٹ ایکسٹریکٹ لیا جائے، احتیاط سے منتخب کردہ سالوینٹ سسٹم کے ساتھ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی کی علیحدگی انجام دی جائے، اور تمام نمونوں کو بازیافت کرنے کے لیے کالم کو باہر نکالا جائے۔ اصل پیچیدہ میٹرکس کو مجرد تنگ قطعیت والے بینڈوں میں تقسیم کیا گیا ہوگا، جس کے بعد کیمیائی ساخت یا بائیو ایکٹیویٹی کے لیے جانچ کی جا سکتی ہے۔ دیگر کرومیٹوگرافک اور غیر کرومیٹوگرافک تکنیکوں کے ساتھ مل کر ایک یا زیادہ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی علیحدگی انجام دینے میں انتہائی پیچیدہ میٹرکس کی ساخت کی شناخت میں تیزی سے ترقی کی صلاحیت ہے۔ ڈراپلیٹ سی سی سی ڈراپلیٹ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی (ڈی سی سی سی) کو 1970 میں تانیمورا، پیسانو، ایٹو اور بومن نے متعارف کرایا تھا۔ ڈی سی سی سی متحرک مرحلے کو اسٹیشنری مرحلے سے منتقل کرنے کے لیے صرف کشش ثقل کا استعمال کرتا ہے جو سیریز میں منسلک لمبی عمودی ٹیوبوں میں رکھی جاتی ہے۔ نزولی موڈ میں، گھنے متحرک مرحلے اور نمونے کی بوندوں کو صرف کشش ثقل کا استعمال کرتے ہوئے ہلکے اسٹیشنری مرحلے کے کالموں سے گزرنے دیا جاتا ہے۔ اگر کم گھنے موبائل مرحلے کا استعمال کیا جاتا ہے تو یہ اسٹیشنری مرحلے سے گزرے گا ؛ اسے ایسینڈنگ موڈ کہا جاتا ہے۔ ایک کالم سے الوینٹ کو دوسرے کالم میں منتقل کیا جاتا ہے۔ جتنے زیادہ کالم استعمال کیے جائیں گے، اتنی ہی زیادہ نظریاتی پلیٹیں حاصل کی جا سکتی ہیں۔ ڈی سی سی سی نے قدرتی مصنوعات کی علیحدگی کے ساتھ کچھ کامیابی حاصل کی لیکن ہائی سپیڈ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی کی تیز رفتار ترقی کی وجہ سے بڑی حد تک گر گیا۔ ڈی سی سی سی کی بنیادی حد یہ ہے کہ بہاؤ کی شرح کم ہے، اور زیادہ تر بائنری سالوینٹ سسٹمز کے لیے ناقص اختلاط حاصل کیا جاتا ہے۔ ہائیڈرو ڈائنامک سی سی سی کا جدید دور ڈاکٹر یوئچیرو ایٹو کے ذریعے سیاروں کے سینٹری فیوج کی ترقی کے ساتھ شروع ہوا جسے پہلی بار 1966 میں ایک بند ہیلیکل ٹیوب کے طور پر متعارف کرایا گیا تھا جسے "سیاروں" کے محور پر گھمایا جاتا تھا جیسا کہ "سورج" کے محور کو آن کیا جاتا ہے۔ بعد میں ایک فلو تھرو ماڈل تیار کیا گیا اور اس نئی تکنیک کو 1970 میں کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی کہا گیا۔ اس تکنیک کو کلوروفارم میں ڈی این پی امینو ایسڈ کے ٹیسٹ مرکب کو استعمال کرتے ہوئے مزید تیار کیا گیا: گلیشیئل ایسیٹک ایسڈ: 0.1 ایم آبی ہائیڈروکلورک ایسڈ (2:2:1 وی/وی) سالوینٹ سسٹم۔ آلہ کی انجینئرنگ کے لیے بہت زیادہ ترقی کی ضرورت تھی تاکہ کنڈلی کے ذریعے مراحل کو پمپ کیے جانے کے دوران مطلوبہ سیاروں کی حرکت کو برقرار رکھا جا سکے۔ پیرامیٹرز جیسے کہ دو محوروں کی رشتہ دار گردش (مطابقت پذیر یا غیر مطابقت پذیر)، کنڈلی کے ذریعے بہاؤ کی سمت، اور روٹر کے زاویوں کی تحقیقات کی گئیں۔ تیز رفتار 1982 تک اس تکنیک کو "تیز رفتار" کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی (ایچ ایس سی سی سی) کہلانے کے لیے ٹیکنالوجی کافی ترقی یافتہ تھی۔ پیٹر کارمیسی نے ابتدائی طور پر پی سی انکارپوریٹڈ۔ ایٹو ملٹی لیئر کوئل سیپریٹر/ایکسٹریکٹر کو تجارتی بنایا جس میں ایک واحد بوبن (جس پر کنڈلی کو زخم لگایا جاتا ہے) اور ایک کاؤنٹر بیلنس کے علاوہ "فلائنگ لیڈز" کا ایک سیٹ استعمال کیا گیا جو نلیاں ہیں جو بوبن کو جوڑتی ہیں۔ ڈاکٹر والٹر کونوے اور دیگر نے بعد میں بوبن کا ڈیزائن اس طرح تیار کیا کہ متعدد کنڈلی، یہاں تک کہ مختلف نلیوں کے سائز کے کنڈلی بھی، ایک ہی بوبن پر رکھے جا سکتے ہیں۔ ایڈورڈ چو نے بعد میں فارمیٹیک سی سی سی کے طور پر ٹرپل بوبن ڈیزائن تیار کیا اور اسے تجارتی بنایا جس میں تین بوبن کے درمیان لیڈز کے لیے ڈی ٹوسٹ میکانزم تھا۔ 1993 میں جاری ہونے والے کواٹرو سی سی سی نے ایک نئی آئینے کی تصویر، جڑواں بوبن ڈیزائن کا استعمال کرتے ہوئے تجارتی طور پر دستیاب آلات کو مزید تیار کیا جس میں متعدد بوبنز کے درمیان فارمیٹیک کے ڈی ٹوسٹ میکانزم کی ضرورت نہیں تھی، لہذا اب بھی ایک ہی آلے پر متعدد بوبنز کو ایڈجسٹ کر سکتا ہے۔ ہائیڈروڈائنامک سی سی سی اب فی آلہ 4 کنڈلی کے ساتھ دستیاب ہیں۔ یہ کنڈلی پی ٹی ایف ای، پی ای ای کے، پی وی ڈی ایف، یا سٹینلیس سٹیل کی نلیوں میں ہو سکتی ہیں۔ "2 ڈی" سی سی سی کو آسان بنانے کے لیے 2، 3 یا 4 کنڈلی سب ایک ہی بور کے ہو سکتے ہیں (نیچے دیکھیں)۔ کنڈلی کو لمبا کرنے اور صلاحیت بڑھانے کے لیے کنڈلی کو سیریز میں جوڑا جا سکتا ہے، یا کنڈلی کو متوازی طور پر جوڑا جا سکتا ہے تاکہ 2، 3، یا 4 علیحدگی بیک وقت کی جا سکیں۔ کنڈلی بھی مختلف سائز کی ہو سکتی ہیں، ایک آلے پر، ایک آلے پر 1 سے 6 ملی میٹر تک، اس طرح ایک آلے کو فی دن ملی گرام سے کلو تک بہتر بنانے کی اجازت ملتی ہے۔ حال ہی میں آلات کے مشتقات کو مختلف ہائیڈروڈائنامک سی سی سی ڈیزائنوں کے لیے گھومنے والی مہروں کے ساتھ پیش کیا گیا ہے، بجائے اس کے کہ وہ اپنی مرضی کے مطابق یا معیاری اختیارات کے طور پر لیڈز اڑائیں۔ اعلی کارکردگی سی سی سی آلات کے آپریٹنگ اصول کے لیے ایک کالم کی ضرورت ہوتی ہے جو بوبن کے ارد گرد کنڈلی والی ٹیوب پر مشتمل ہوتا ہے۔ بوبن کو ڈبل محور جائریٹری موشن (ایک کارڈیوئڈ) میں گھمایا جاتا ہے، جس کی وجہ سے ہر گردش کے دوران کالم پر متغیر جی-فورس کام کرتی ہے۔ اس حرکت کی وجہ سے کالم میں فی انقلاب ایک پارٹیشننگ مرحلہ نظر آتا ہے اور نمونے کے اجزاء دو غیر متزلزل مائع مراحل کے درمیان پارٹیشننگ گتانک کی وجہ سے کالم میں الگ ہو جاتے ہیں۔ "ہائی پرفارمنس" کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی (ایچ پی سی سی سی) ایچ ایس سی سی سی کی طرح ہی کام کرتی ہے۔ سات سالہ تحقیق اور ترقی کے عمل نے ایچ پی سی سی سی آلات تیار کیے جو ایچ ایس سی سی سی مشینوں کے 80 گرام کے مقابلے میں 240 گرام پیدا کرتے ہیں۔ جی-فورس اور کالم کے بڑے بور میں اس اضافے نے موبائل فیز کے بہاؤ کی شرحوں میں بہتری اور زیادہ اسٹیشنری فیز برقرار رکھنے کی وجہ سے تھرو پٹ میں دس گنا اضافہ کیا ہے۔ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی ایک پریپریٹو لیکویڈ کرومیٹوگرافی تکنیک ہے، تاہم اعلی-جی ایچ پی سی سی سی آلات کی آمد کے ساتھ اب چند ملیگرام تک نمونے کی لوڈنگ کے ساتھ آلات کو چلانا ممکن ہے، جبکہ ماضی میں سینکڑوں ملیگرام ضروری تھے۔ اس تکنیک کے استعمال کے بڑے شعبوں میں قدرتی مصنوعات کی صفائی اور منشیات کی ترقی شامل ہیں۔ ہائیڈروسٹیٹک سی سی سی ہائیڈروسٹیٹک سی سی سی یا سینٹری فیوگل پارٹیشن کرومیٹوگرافی (سی پی سی) 1980 کی دہائی میں جاپانی کمپنی سانکی انجینئرنگ لمیٹڈ نے ایجاد کی تھی، جس کے صدر کانچی نونوگاکی تھے۔ سی پی سی کو فرانس میں 1990 کی دہائی کے آخر سے بڑے پیمانے پر تیار کیا گیا ہے۔ فرانس میں، انہوں نے ابتدائی طور پر سانکی کے شروع کردہ اسٹیکڈ ڈسک تصور کو بہتر بنایا۔ حال ہی میں، فرانس اور برطانیہ میں، غیر اسٹیکڈ ڈسک سی پی سی ترتیبات پی ٹی ایف ای، سٹینلیس سٹیل یا ٹائٹینیم روٹرز کے ساتھ تیار کی گئی ہیں۔ ان کو اصل تصور کی اسٹیکڈ ڈسکس کے درمیان ممکنہ رساو پر قابو پانے اور اچھی مینوفیکچرنگ پریکٹس کے لیے بھاپ کی صفائی کی اجازت دینے کے لیے ڈیزائن کیا گیا ہے۔ 100 ملی لیٹر سے لے کر 12 لیٹر تک کے حجم مختلف روٹر مواد میں دستیاب ہیں۔ 25 لیٹر روٹر سی پی سی میں ٹائٹینیم روٹر ہوتا ہے۔ یہ تکنیک بعض اوقات "تیز" سی پی سی یا "اعلی کارکردگی" سی پی سی کے نام سے فروخت کی جاتی ہے۔ احساس سینٹری فیوگل پارٹیشن کرومیٹوگراف آلہ ایک منفرد روٹر کے ساتھ تشکیل دیا گیا ہے جس میں کالم ہوتا ہے۔ یہ روٹر اپنے مرکزی محور پر گھومتا ہے (جبکہ ایچ ایس سی سی سی کالم اپنے سیاروں کے محور پر گھومتا ہے اور بیک وقت دوسرے شمسی محور کے گرد سنکی طور پر گھومتا ہے)۔ کم کمپن اور شور کے ساتھ، سی پی سی 500 سے 2000 آر پی ایم تک ایک عام گردش کی رفتار کی حد پیش کرتا ہے۔ ہائیڈروڈائنامک سی سی سی کے برعکس، گردش کی رفتار مستحکم مرحلے کے برقرار رکھنے کے حجم کے تناسب کے براہ راست متناسب نہیں ہوتی ہے۔ ڈی سی سی سی کی طرح، سی پی سی کو نزولی یا چڑھائی کے موڈ میں چلایا جا سکتا ہے، جہاں سمت کشش ثقل کے بجائے روٹر سے پیدا ہونے والی قوت سے متعلق ہوتی ہے۔ بڑے چیمبرز اور چینلز کے ساتھ دوبارہ ڈیزائن کیے گئے سی پی سی کالم کو سینٹری فیوگل پارٹیشن ایکسٹریکشن (سی پی ای) کا نام دیا گیا ہے۔ سی پی ای ڈیزائن میں، تیز بہاؤ کی شرح اور کالم کی بڑھتی ہوئی لوڈنگ حاصل کی جا سکتی ہے۔ فوائد سی پی سی تیزی سے بیچ کی پیداوار کے لیے تجزیاتی آلات (چند ملی لیٹر) سے لے کر صنعتی آلات (کئی لیٹر) تک براہ راست پیمانے کی پیشکش کرتا ہے۔ سی پی سی خاص طور پر آبی دو مرحلے والے سالوینٹ سسٹم کو ایڈجسٹ کرنے کے لیے موزوں معلوم ہوتا ہے۔ عام طور پر، سی پی سی آلات سالوینٹ سسٹم کو برقرار رکھ سکتے ہیں جو مراحل کے درمیان کثافت میں چھوٹے فرق کی وجہ سے ہائیڈرو ڈائنامک انسٹرومنٹ میں اچھی طرح سے برقرار نہیں ہیں۔ یہ سی پی سی آلات کی ترقی کے لیے بہت مددگار ثابت ہوا ہے تاکہ بہاؤ کے نمونوں کو دیکھا جا سکے جو سی پی سی چیمبر میں ایک غیر متزلزل کیمرے اور سی پی سی روٹر کے ذریعے متحرک ایک سٹروبوسکوپ کے ساتھ اختلاط اور آباد ہونے کو جنم دیتے ہیں۔ آپریشن کے طریقے مذکورہ بالا ہائیڈروڈائنامک اور ہائیڈروسٹیٹک آلات کو سائنس دان کی مخصوص علیحدگی کی ضروریات کو پورا کرنے کے لیے مختلف طریقوں، یا آپریشن کے طریقوں میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی تکنیک کی طاقتوں اور صلاحیتوں سے فائدہ اٹھانے کے لیے آپریشن کے بہت سے طریقے وضع کیے گئے ہیں۔ عام طور پر، درج ذیل طریقوں کو تجارتی طور پر دستیاب آلات کے ساتھ انجام دیا جا سکتا ہے۔ نارمل-فیز نارمل فیز ایلیوشن کو غیر آبی یا بیفاسک سالوینٹ سسٹم کے فیز کو کالم کے ذریعے موبائل فیز کے طور پر پمپ کرکے حاصل کیا جاتا ہے، جس میں کالم میں زیادہ قطبی اسٹیشنری فیز برقرار رکھا جاتا ہے۔ کے اصل نام کی وجہ متعلقہ ہے۔ چونکہ کاغذی کرومیٹوگرافی کے اصل اسٹیشنری مراحل کو زیادہ موثر مواد جیسے ڈائیٹومیسیس ارتھز (قدرتی مائیکرو پورس سلیکا) نے ختم کر دیا تھا اور اس کے بعد جدید سلیکا جیل، پتلی پرت والی کرومیٹوگرافی کا اسٹیشنری مرحلہ قطبی (سلیکا سے منسلک ہائیڈروکسی گروپ) تھا اور زیادہ سے زیادہ برقرار رکھنے کو غیر قطبی سالوینٹس جیسے این-ہیکسین کے ساتھ حاصل کیا گیا تھا۔ اس کے بعد قطبی مرکبات کو پلیٹ کے اوپر منتقل کرنے کے لیے بتدریج زیادہ قطبی ایلیوینٹس کا استعمال کیا گیا۔ مختلف الکین بانڈڈ مراحل کی کوشش کی گئی جس میں C18 سب سے زیادہ مقبول ہوا۔ الکین کی زنجیروں کو کیمیائی طور پر سلیکا سے منسلک کیا گیا تھا، اور ایلیوشن رجحان کا الٹ جانا ہوا۔ اس طرح ایک قطبی اسٹیشنری "نارمل" فیز کرومیٹوگرافی بن گئی، اور غیر قطبی اسٹیشنری فیز کرومیٹوگرافی "ریورسڈ" فیز کرومیٹوگرافی بن گئی۔ الٹا مرحلہ الٹا مرحلے میں (مثال کے طور پر۔ آبی متحرک مرحلہ) ایلیوشن، آبی مرحلے کو کم قطبی اسٹیشنری مرحلے کے ساتھ متحرک مرحلے کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی میں ایک ہی سالوینٹ سسٹم کو یا تو نارمل یا ریورسڈ فیز موڈ میں صرف کالم کے ذریعے موبائل فیز فلو کی سمت بدل کر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ ایلیوشن-اخراج ایک علیحدگی کے تجربے کے اختتام پر کالم سے اسٹیشنری مرحلے کا اخراج گردش کو روک کر اور کالم کے ذریعے سالوینٹ یا گیس کو پمپ کرکے سی سی سی پریکٹیشنرز نے ای ای سی سی سی کی اصطلاح تجویز کرنے سے پہلے استعمال کیا تھا۔ ایلیوشن-ایکسٹروژن موڈ (ای ای سی سی سی) میں، گردش کو برقرار رکھتے ہوئے سسٹم میں پمپ کیے جانے والے مرحلے کو تبدیل کرکے ایک خاص نقطہ کے بعد موبائل مرحلے کو باہر نکالا جاتا ہے۔ مثال کے طور پر، اگر علیحدگی ایک مخصوص مقام پر متحرک مرحلے کے طور پر آبی مرحلے کے ساتھ شروع کی گئی ہے تو نامیاتی مرحلے کو کالم کے ذریعے پمپ کیا جاتا ہے جو مؤثر طریقے سے دونوں مراحل کو باہر نکال دیتا ہے جو بدلتے وقت کالم میں موجود ہوتے ہیں۔ مکمل نمونے کو پھیلاؤ کے ذریعے ریزولوشن کے نقصان کے بغیر قطعیت (یا تو نارمل یا الٹا) کی ترتیب میں خارج کیا جاتا ہے۔ اس کے لیے سالوینٹ مرحلے کے صرف ایک کالم حجم کی ضرورت ہوتی ہے اور اس کے بعد کی علیحدگی کے لیے نئے اسٹیشنری مرحلے سے بھرے کالم کو چھوڑ دیتا ہے۔ گریڈینٹ کالم کرومیٹوگرافی میں سالوینٹ گریڈینٹ کا استعمال بہت اچھی طرح سے تیار کیا گیا ہے لیکن سی سی سی میں یہ کم عام ہے۔ قطبین کی ایک وسیع رینج میں زیادہ سے زیادہ ریزولوشن حاصل کرنے کے لیے علیحدگی کے دوران متحرک مرحلے کی قطعیت کو بڑھا کر (یا کم کر کے) سالوینٹ گریڈینٹ تیار کیا جاتا ہے۔ مثال کے طور پر، ہیپٹین کو مستحکم مرحلے کے طور پر استعمال کرتے ہوئے میتھانول پانی کے متحرک مرحلے کے میلان کو استعمال کیا جا سکتا ہے۔ کالم کے اندر توازن کے حالات میں خلل ڈالنے سے پیدا ہونے والے اسٹیشنری مرحلے کے ضرورت سے زیادہ نقصان کی وجہ سے یہ تمام بائی فیسک سالوینٹ سسٹمز کے ساتھ ممکن نہیں ہے۔ گریڈینٹس یا تو مراحل میں، یا مسلسل تیار کیے جا سکتے ہیں۔ ڈوئل موڈ میں، موبائل اور اسٹیشنری مراحل علیحدگی کے تجربے کے ذریعے جزوی طور پر الٹ جاتے ہیں۔ اس کے لیے کالم کے ذریعے پمپ کیے جانے والے مرحلے کے ساتھ ساتھ بہاؤ کی سمت کو تبدیل کرنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ ڈوئل موڈ آپریشن کالم سے پورے نمونے کو خارج کرنے کا امکان ہے لیکن بہاؤ کے مرحلے اور سمت کو تبدیل کرنے سے ایلیوشن کی ترتیب میں خلل پڑتا ہے۔ دوہری بہاؤ دوہری بہاؤ، جسے دوہری، کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی بھی کہا جاتا ہے، اس وقت ہوتا ہے جب دونوں مراحل کالم کے اندر مخالف سمتوں میں بہہ رہے ہوتے ہیں۔ ہائیڈرو ڈائنامک اور ہائیڈروسٹیٹک سی سی سی دونوں کے لیے دوہری بہاؤ کے آپریشن کے لیے آلات دستیاب ہیں۔ ڈوئل فلو کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی کو سب سے پہلے یوچیرو ایٹو نے 1985 میں جھاگ سی سی سی کے لیے بیان کیا تھا جہاں گیس-مائع علیحدگی کی گئی تھی۔ مائع-مائع علیحدگی جلد ہی عمل میں آئی۔ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی آلے میں ترمیم کی جانی چاہیے تاکہ کالم کے دونوں سروں میں انلیٹ اور آؤٹ لیٹ دونوں صلاحیتیں ہوں۔ یہ طریقہ مسلسل یا ترتیب وار علیحدگی کو ایڈجسٹ کر سکتا ہے جس میں نمونے کو کالم کے وسط میں یا ہائیڈرو ڈائنامک آلے میں دو بوبن کے درمیان متعارف کرایا جاتا ہے۔ انٹرمیٹنٹ کاؤنٹر کرنٹ ایکسٹریکشن (آئی سی سی ای) نامی ایک تکنیک ایک نیم مسلسل طریقہ ہے جہاں مراحل کے بہاؤ کو نارمل اور ریورسڈ فیز ایلیوشن کے درمیان "وقفے وقفے سے" تبدیل کیا جاتا ہے تاکہ اسٹیشنری فیز بھی بدل جائے۔ ری سائیکلنگ اور سیکوینشیل ری سائیکلنگ کرومیٹوگرافی کا طریقہ ایچ پی ایل سی اور سی سی سی دونوں میں عمل میں لایا جاتا ہے۔ ری سائیکلنگ کرومیٹوگرافی میں، ہدف مرکبات کو ایلیوٹ کرنے کے بعد کالم میں دوبارہ متعارف کرایا جاتا ہے۔ کالم سے گزرنے سے ہر ایک نظریاتی پلیٹوں کی تعداد میں اضافہ ہوتا ہے جو مرکبات کا تجربہ کرتے ہیں اور کرومیٹوگرافک ریزولوشن کو بڑھاتا ہے۔ براہ راست ری سائیکلنگ ایک آئسوکریٹک سالوینٹ سسٹم کے ساتھ کی جانی چاہیے۔ اس موڈ کے ساتھ، علیحدگی کو آسان بنانے کے لیے ایلونٹ کو اسی یا مختلف کالم پر منتخب طور پر دوبارہ کرومیٹوگراف کیا جا سکتا ہے۔ انتخابی ری سائیکلنگ کے اس عمل کو "ہارٹ کٹ" قرار دیا گیا ہے اور یہ خاص طور پر منتخب ہدف مرکبات کو صاف کرنے میں موثر ہے جس سے بازیابی میں کچھ نقصان ہوتا ہے۔ ایک کرومیٹوگرافی کے تجربے سے منتخب حصوں کو دوسرے کرومیٹوگرافک طریقہ کے ساتھ دوبارہ الگ کرنے کے عمل پر سائنس دانوں نے طویل عرصے سے عمل کیا ہے۔ ری سائیکلنگ اور ترتیب وار کرومیٹوگرافی اس عمل کا ایک ہموار ورژن ہے۔ سی سی سی میں، کالم کی علیحدگی کی خصوصیات کو صرف بفیسک سالوینٹ سسٹم کی ساخت کو تبدیل کرکے تبدیل کیا جا سکتا ہے۔ آئن ایکسچینج اور پی ایچ زون ریفائننگ ایک روایتی سی سی سی تجربے میں بفیسک سالوینٹ سسٹم کو پہلے سے مساوی کیا جاتا ہے اس سے پہلے کہ آلہ اسٹیشنری مرحلے سے بھر جائے اور موبائل مرحلے کے ساتھ مساوی ہو۔ قبل از توازن کے بعد دونوں مراحل میں ترمیم کرکے ایک آئن ایکسچینج موڈ بنایا گیا ہے۔ عام طور پر، ایک آئنک ڈسلیسر (یا ایلیوٹر) کو موبائل مرحلے میں شامل کیا جاتا ہے اور ایک آئنک ریٹینر کو اسٹیشنری مرحلے میں شامل کیا جاتا ہے۔ مثال کے طور پر، آبی متحرک مرحلے میں ایک بے گھر کرنے والے کے طور پر این اے آئی ہو سکتا ہے اور نامیاتی مستحکم مرحلے میں چوتھائی امونیم نمک کے ساتھ ترمیم کی جا سکتی ہے جسے الیکٹ 336 کہا جاتا ہے۔ پی ایچ زون ریفائننگ کے نام سے جانا جانے والا موڈ ایک قسم کا آئن ایکسچینج موڈ ہے جو ایسڈ اور/یا بیس کو سالوینٹ ترمیم کاروں کے طور پر استعمال کرتا ہے۔ عام طور پر، تجزیہ کاروں کو ان کی پی کے اے اقدار سے طے شدہ ترتیب میں خارج کیا جاتا ہے۔ مثال کے طور پر، 6 آکسینڈول الکلائڈز کو جیلسیمیم ایلیگنس اسٹیم ایکسٹریکٹ کے 4.5 گرام نمونے سے الگ کیا گیا تھا جس میں ہیکسین-ایتھائل ایسیٹیٹ-میتھانول-واٹر (3:7:1:9، v/v) پر مشتمل بیفاسک سالوینٹ سسٹم تھا جہاں 10 ایم ایم ٹرائیتھائلیمائن (ٹی ای اے) کو اوپری نامیاتی اسٹیشنری مرحلے میں بطور ریٹینر اور 10 ایم ایم ہائیڈروکلورک ایسڈ (ایچ سی ایل) کو آبی متحرک مرحلے میں بطور ایلیوٹر شامل کیا گیا تھا۔ آئن ایکسچینج موڈ جیسے پی ایچ زون ریفائننگ میں زبردست صلاحیت ہوتی ہے کیونکہ زیادہ نمونے کا بوجھ علیحدگی کی طاقت کو قربان کیے بغیر حاصل کیا جا سکتا ہے۔ یہ آئنائزبل مرکبات جیسے نائٹروجن پر مشتمل الکلائڈز یا کاربوکسلک ایسڈ پر مشتمل فیٹی ایسڈ کے ساتھ بہترین کام کرتا ہے۔ مختلف قسم کے کیمیائی مادوں کو صاف کرنے کے لیے صنعتی اور لیبارٹری دونوں پیمانے پر کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی اور متعلقہ مائع-مائع علیحدگی کی تکنیکوں کا استعمال کیا گیا ہے۔ علیحدگی کے احساسات میں پروٹین، ڈی این اے، کینابیس سٹیوا اینٹی بائیوٹکس سے کینابڈیول (سی بی ڈی)، وٹامنز، قدرتی مصنوعات، دواسازی، دھاتی آئنز، کیڑے مار ادویات، اینانٹیومرز، ماحولیاتی نمونوں سے پولی ایرومیٹک ہائیڈرو کاربن، فعال انزائمز، اور کاربن نینو ٹیوبز شامل ہیں۔ کاؤنٹر کرنٹ کرومیٹوگرافی اسکیل ایبلٹی کی اپنی اعلی متحرک رینج کے لیے جانی جاتی ہے: ملیگرام سے کلوگرام مقدار میں پاک شدہ کیمیائی اجزاء اس تکنیک سے حاصل کیے جا سکتے ہیں۔ اس میں کیمیائی طور پر پیچیدہ نمونوں کو غیر حل شدہ ذرات کے ساتھ ایڈجسٹ کرنے کا بھی فائدہ ہے۔ یہ بھی دیکھیں کرومیٹوگرافی کی تاریخ سپر کریٹیکل فلوئڈ کرومیٹوگرافی حوالہ جات بیرونی لنکس کرومیٹوگرافی