Gene targeting
جین ٹارگیٹنگ ایک بائیوٹیکنالوجیکل ٹول ہے جو کسی جاندار کے ڈی این اے کی ترتیب کو تبدیل کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے (اس لیے یہ جینوم ایڈیٹنگ کی ایک شکل ہے)۔ یہ ہومیولوجی ڈائریکٹڈ مرمت (ایچ ڈی آر) کے قدرتی ڈی این اے مرمت کے طریقہ کار پر مبنی ہے، جس میں ہومیولوگس ریکومبینیشن بھی شامل ہے۔ جین ٹارگیٹنگ کو ڈی این اے ترمیم کے سائز کی ایک رینج بنانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، ڈی این اے کی بڑی ترامیم جیسے کہ کسی جاندار میں پورے نئے جین داخل کرنے سے لے کر موجودہ ڈی این اے میں بہت چھوٹی تبدیلیاں جیسے کہ واحد بیس جوڑی کی تبدیلی تک۔ جین ٹارگیٹنگ ڈی این اے میں صارف کی طرف سے متعین ترامیم کو متعارف کرانے کے لیے مرمت کے ٹیمپلیٹ کی موجودگی پر منحصر ہے۔ صارف (عام طور پر ایک سائنسدان) مرمت کے ٹیمپلیٹ کو مطلوبہ ترمیم پر مشتمل کرنے کے لیے ڈیزائن کرے گا، جو ڈی این اے کے اس علاقے سے مطابقت رکھتا ہے جس میں صارف ترمیم کرنا چاہتا ہے۔ اس لیے ترمیم ایک مخصوص جینومک خطے کو نشانہ بنایا جاتا ہے۔ اس طرح جین ٹارگیٹنگ قدرتی ہومیولوجی سے چلنے والی مرمت سے الگ ہے، جس کے دوران بہن کرومیٹڈ کا 'قدرتی' ڈی این اے مرمت ٹیمپلیٹ ٹوٹے ہوئے ڈی این اے کی مرمت کے لیے استعمال کیا جاتا ہے (بہن کرومیٹڈ جین کی دوسری کاپی ہے)۔ کسی جاندار میں ڈی این اے کی ترتیب میں تبدیلی تحقیقی سیاق و سباق دونوں میں مفید ہو سکتی ہے-مثال کے طور پر جین کے حیاتیاتی کردار کو سمجھنے کے لیے-اور بائیوٹیکنالوجی میں، مثال کے طور پر کسی جاندار کی خصوصیات کو تبدیل کرنے کے لیے (مثال کے طور پر۔ فصل کے پودوں کو بہتر بنانا)۔ طریقے جین کو نشانہ بنانے والا جاندار بنانے کے لیے اس کے خلیوں میں ڈی این اے داخل کرنا ضروری ہے۔ اس ڈی این اے میں جین کے ہدف کو مکمل کرنے کے لیے ضروری تمام حصے ہونے چاہئیں۔ کم از کم یہ ہومیولوجی مرمت کا ٹیمپلیٹ ہے، جس میں مطلوبہ ترمیم ہوتی ہے جس میں ڈی این اے ہومیولوگس (ترتیب میں یکساں) کے علاقوں کے ذریعے ھدف بنائے گئے علاقے (ان ہومیولوگس علاقوں کو "ہومیولوجی آرمز" کہا جاتا ہے) ہوتے ہیں۔ خلیوں (یا "واقعات") کی شناخت اور انتخاب میں مدد کے لیے اکثر ایک رپورٹر جین اور/یا منتخب کرنے کے قابل مارکر کی بھی ضرورت ہوتی ہے جہاں جی ٹی واقعتا واقع ہوا ہے۔ ہدف شدہ ڈی این اے کے علاقے میں ڈبل اسٹرینڈ بریک (ڈی ایس بی) کا سبب بن کر جی ٹی کی شرحوں میں اضافہ کرنا بھی عام عمل ہے۔ لہذا دلچسپی کے سائٹ-مخصوص-نیوکلیز کے لیے جینز انکوڈنگ کو بھی مرمت ٹیمپلیٹ کے ساتھ تبدیل کیا جا سکتا ہے۔ جی ٹی کے لیے درکار ان جینیاتی عناصر کو بیکٹیریا میں روایتی مالیکیولر کلوننگ کے ذریعے جمع کیا جا سکتا ہے۔ جین کو نشانہ بنانے کے طریقے کئی ماڈل حیاتیات کے لیے قائم کیے گئے ہیں اور استعمال شدہ انواع کے لحاظ سے مختلف ہو سکتے ہیں۔ چوہوں میں جینوں کو نشانہ بنانے کے لیے، ڈی این اے کو کلچر میں ماؤس کے جنین اسٹیم خلیوں میں داخل کیا جاتا ہے۔ داخل ہونے والے خلیے جنین انجکشن کے ذریعے چوہے کے ٹشو میں حصہ ڈال سکتے ہیں۔ آخر میں، چیمیرک چوہوں کی افزائش کی جاتی ہے جہاں ترمیم شدہ خلیات تولیدی اعضاء بناتے ہیں۔ اس مرحلے کے بعد چوہے کا پورا جسم منتخب کردہ جنین اسٹیم سیل پر مبنی ہوتا ہے۔ موس میں جینوں کو نشانہ بنانے کے لیے، ڈی این اے کو تازہ الگ تھلگ پروٹوپلاسٹ اور پولی تھیلین گلائکول کے ساتھ مل کر انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ چونکہ موسز ہیپلوئڈ جاندار ہوتے ہیں، اس لیے ماس فلامینٹس (پروٹونیما) کو براہ راست ہدف کے لیے اسکرین کیا جا سکتا ہے، یا تو اینٹی بائیوٹکس کے ساتھ یا پی سی آر کے ساتھ علاج کے ذریعے۔ پودوں میں منفرد، ریورس جینیات کا یہ طریقہ کار اتنا ہی موثر ہے جتنا خمیر میں ہوتا ہے۔ مویشیوں، بھیڑوں، خنزیر اور بہت سی پھپھوندی پر جین ٹارگیٹنگ کا کامیابی سے اطلاق کیا گیا ہے۔ جین ٹارگیٹنگ کی تعدد کو سائٹ کے مخصوص اینڈو نیوکلیز جیسے زنک فنگر نیوکلیز، انجینئرڈ ہومنگ اینڈو نیوکلیز، TALENS، یا عام طور پر CRISPR-Cas سسٹم کے استعمال کے ذریعے نمایاں طور پر بڑھایا جا سکتا ہے۔ یہ طریقہ ڈروسفیلا میلانوگاسٹر، تمباکو، مکئی، انسانی خلیات، چوہوں اور چوہوں سمیت انواع پر لاگو کیا گیا ہے۔ جینیاتی انجینئرنگ کی دیگر شکلوں سے موازنہ جین کو نشانہ بنانے، جین میں ترمیم اور جینیاتی ترمیم کے درمیان تعلق کا خاکہ ذیل میں وین خاکہ میں دیا گیا ہے۔ یہ ظاہر کرتا ہے کہ کس طرح 'جینیٹک انجینئرنگ' ان تینوں تکنیکوں کو گھیرے ہوئے ہے۔ جینوم ایڈیٹنگ کی خصوصیت یہ ہے کہ کسی مخصوص مقام پر جینوم میں چھوٹی چھوٹی ترامیم کی جاتی ہیں، اکثر سی آر آئی ایس پی آر جیسے سائٹ مخصوص نیوکلیز کے ذریعے ہدف ڈی این اے کے علاقے کو کاٹنے کے بعد۔ جینیاتی ترمیم عام طور پر ٹرانسجین (غیر ملکی ڈی این اے، یعنی۔ کسی دوسری نوع سے ایک جین) جینوم کے اندر بے ترتیب مقام پر۔ جین ٹارگیٹنگ ایک مخصوص بائیوٹیکنالوجیکل ٹول ہے جو کسی مخصوص جگہ پر جینوم میں چھوٹی تبدیلیوں کا باعث بن سکتا ہے-ایسی صورت میں جین ٹارگیٹنگ کی وجہ سے ہونے والی ترامیم کو جینوم ایڈیٹنگ کے طور پر شمار کیا جائے گا۔ تاہم جین کو نشانہ بنانا ہدف کی جگہ پر پورے جین (جیسے ٹرانسجینز) کو داخل کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے اگر ٹرانسجین کو ہومیولوجی مرمت ٹیمپلیٹ میں شامل کیا جاتا ہے جو جین کو نشانہ بنانے کے دوران استعمال ہوتا ہے۔ ایسے معاملات میں جین کو نشانہ بنانے کی وجہ سے ہونے والی ترامیم، کچھ دائرہ اختیار میں، جینیاتی ترمیم کے مساوی سمجھی جائیں گی کیونکہ غیر ملکی ڈی این اے کا اندراج ہوا ہے۔ جین ٹارگیٹنگ جینوم ایڈیٹنگ ٹول کی ایک مخصوص شکل ہے۔ جینوم ایڈیٹنگ کے دیگر ٹولز میں ٹارگیٹڈ میوٹیجینیسیس، بیس ایڈیٹنگ اور پرائم ایڈیٹنگ شامل ہیں، یہ سب ایک مخصوص جینومک مقام پر اینڈوجینس ڈی این اے (ڈی این اے جو پہلے سے ہی حیاتیات میں موجود ہے) میں ترمیم کرتے ہیں۔ جینوم ایڈیٹنگ کی یہ سائٹ مخصوص یا 'ٹارگٹڈ' نوعیت عام طور پر وہی ہے جو جینوم ایڈیٹنگ کو روایتی 'جینیاتی ترمیم' سے مختلف بناتی ہے جو حیاتیات کے جینوم میں غیر مخصوص مقام پر ٹرانسجین داخل کرتی ہے، نیز جین ایڈیٹنگ چھوٹے چھوٹے ترمیم کرتی ہے۔ حیاتیات میں پہلے سے موجود ڈی این اے، آیات جینیاتی ترمیم کسی دوسری نوع سے 'غیر ملکی' ڈی این اے داخل کرنا۔ چونکہ جین ایڈیٹنگ اینڈوجینس ڈی این اے میں چھوٹی تبدیلیاں کرتی ہے، اس لیے جینوم ایڈیٹنگ کے ذریعے پیدا ہونے والی بہت سی تغیرات نظریاتی طور پر قدرتی میوٹیجینیسیس کے ذریعے یا پودوں کے تناظر میں میوٹیشن بریڈنگ کے ذریعے ہو سکتی ہیں جو روایتی افزائش نسل کا حصہ ہے (اس کے برعکس جینیاتی طور پر تبدیل شدہ جاندار (جی ایم او) بنانے کے لیے ٹرانسجین کا اندراج قدرتی طور پر نہیں ہو سکتا)۔ تاہم اس عام اصول میں مستثنیات ہیں ؛ جیسا کہ تعارف میں بیان کیا گیا ہے، جی ٹی ڈی این اے میں ترمیم کے ممکنہ سائز کی ایک رینج متعارف کرا سکتا ہے۔ بہت چھوٹی ترامیم جیسے 1 بیس جوڑی کو تبدیل کرنا، داخل کرنا یا حذف کرنا، بہت طویل ڈی این اے ترتیبات داخل کرنا، جس میں نظریہ طور پر پورے ٹرانسجین کا اندراج شامل ہو سکتا ہے۔ تاہم عملی طور پر جی ٹی عام طور پر چھوٹے ترتیبات داخل کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ جی ٹی کے ذریعے ممکنہ ترامیم کی حد ریگولیٹ کرنا مشکل بنا سکتی ہے (ریگولیشن دیکھیں)۔ جین ایڈیٹنگ کی دو سب سے زیادہ قائم شدہ شکلیں جین کو نشانہ بنانا اور ٹارگیٹڈ میوٹیجینیسیس ہیں۔ جبکہ جین کا ہدف ہومیولوجی ڈائریکٹڈ مرمت (ایچ ڈی آر) (جسے ہومیولوگس ریکومبینیشن، ایچ آر بھی کہا جاتا ہے) ڈی این اے کی مرمت کے راستے پر منحصر ہے، ٹارگیٹڈ-میوٹیجینیسیس ٹوٹے ہوئے ڈی این اے کے نان-ہومیولوگس-اینڈ-جوائننگ (این ایچ ای جے) کا استعمال کرتا ہے۔ این ایچ ای جے ایک غلطی کا شکار ڈی این اے کی مرمت کا راستہ ہے، جس کا مطلب ہے کہ جب یہ ٹوٹے ہوئے ڈی این اے کی مرمت کرتا ہے تو یہ ڈی این اے بیس داخل یا حذف کر سکتا ہے، جس سے اندراج یا حذف (انڈلز) پیدا ہوتا ہے۔ صارف یہ واضح نہیں کر سکتا کہ یہ بے ترتیب انڈلز کیا ہوں گے، اس لیے وہ یہ کنٹرول نہیں کر سکتے کہ ٹارگٹ سائٹ پر کیا ترامیم کی جاتی ہیں۔ تاہم وہ یہ کنٹرول کر سکتے ہیں کہ یہ ترامیم کہاں ہوں گی (یعنی۔ ہدف کی جگہ پر ڈی این اے کو توڑنے کے لیے سائٹ کے مخصوص نیوکلیز (پہلے زنک فنگر نیوکلیز اور TALENs، اب عام طور پر CRISPR) کا استعمال کرتے ہوئے ہدف کی جگہ کا تعین کریں۔ ایچ ڈی آر کے ذریعے جین کو نشانہ بنانے (جسے ہومولوگس ریکومبینیشن بھی کہا جاتا ہے) اور این ایچ ای جے کے ذریعے ٹارگٹڈ میوٹیجینیسیس کا خلاصہ نیچے دی گئی شکل میں دکھایا گیا ہے۔ سی آر آئی ایس پی آر-سی اے ایس طریقوں پر مبنی پرائم ایڈیٹنگ اور بیس ایڈیٹنگ کی زیادہ نئی تیار شدہ جین ایڈیٹنگ تکنیک، جین ٹارگیٹنگ کے متبادل ہیں، جو ٹارگیٹڈ جینومک مقامات پر صارف سے متعین ترمیم بھی کر سکتے ہیں۔ تاہم ہر ایک ڈی این اے ترتیب کے اندراج کی لمبائی میں محدود ہے ؛ بیس ایڈیٹنگ سنگل بیس جوڑی تبادلوں تک محدود ہے جبکہ پرائم ایڈیٹنگ صرف ~ 44 بی پی تک کے ترتیبات داخل کر سکتی ہے۔ لہذا جی ٹی جینوم انجینئرنگ کے لیے طویل ڈی این اے ترتیبات کے ٹارگٹڈ (لوکیشن مخصوص) اندراج کا بنیادی طریقہ ہے۔ جین ٹریپنگ کے ساتھ موازنہ جین ٹریپنگ کیسٹ کے بے ترتیب اندراج پر مبنی ہے، جبکہ جین کو نشانہ بنانا ایک مخصوص جین میں ہیرا پھیری کرتا ہے۔ کیسٹ کو بہت سی مختلف چیزوں کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے جبکہ جین کو نشانہ بنانے والے کیسٹ کے فلیکنگ ہومیولوجی علاقوں کو ہر جین کے لیے ڈھالنے کی ضرورت ہے۔ یہ جین ٹریپنگ کو ہدف بنانے کے بجائے بڑے پیمانے کے منصوبوں کے لیے زیادہ آسانی سے قابل بناتا ہے۔ دوسری طرف، جین ٹارگیٹنگ کو کم ٹرانسکرپشن والے جینوں کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے جن کا ٹریپ اسکرین میں پتہ نہیں چلے گا۔ انٹرن سائز کے ساتھ ٹریپنگ کا امکان بڑھ جاتا ہے، جبکہ جین کو نشانہ بنانے کے لیے چھوٹے جینوں کو اتنی ہی آسانی سے تبدیل کیا جاتا ہے۔ ممالیہ نظاموں میں ایپلی کیشنز جین ٹارگیٹنگ 1980 کی دہائی میں ممالیہ خلیوں میں تیار کی گئی تھی، جس میں ہدف جینومک سائٹ پر مخصوص ترتیب میں تبدیلیاں کرنے کے قابل ہونے کے نتیجے میں متنوع ایپلی کیشنز ممکن ہیں، جیسے کہ جین فنکشن یا انسانی بیماری کا مطالعہ، خاص طور پر چوہوں کے ماڈلز میں۔ درحقیقت جین ٹارگیٹنگ کو انسانی جینیاتی بیماریوں کا مطالعہ کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے جس میں دلچسپی کی مخصوص تغیرات کو ہٹانا ("دستک دینا")، یا شامل کرنا ("دستک دینا") شامل کیا گیا ہے۔ پہلے چوہے کے خلیے کے نمونوں کو انجینئر کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا تھا، جین کو نشانہ بنانے والی ٹیکنالوجیز میں پیشرفت آئزوجینک انسانی بیماری کے نمونوں کی ایک نئی لہر کو قابل بناتی ہے۔ یہ ماڈل محققین کے لیے دستیاب سب سے درست ان وٹرو ماڈل ہیں اور ذاتی نوعیت کی دوائیوں اور تشخیص کی ترقی میں سہولت فراہم کرتے ہیں، خاص طور پر آنکولوجی میں۔ بیماری پیدا کرنے والی تغیرات کو درست کرنے کے لیے جین تھراپی کے لیے جین ٹارگیٹنگ کی بھی تحقیقات کی گئی ہیں۔ تاہم خلیوں میں جین کو نشانہ بنانے والی مشینری کی فراہمی کی کم کارکردگی نے اس میں رکاوٹ پیدا کی ہے، ان چیلنجوں سے نمٹنے کے لیے جین کو نشانہ بنانے کے لیے وائرل ویکٹرز پر تحقیق کی گئی ہے۔ خمیر اور موس میں استعمال جین کو نشانہ بنانا خمیر، بیکٹیریل اور موس میں نسبتا زیادہ کارکردگی کا حامل ہے (لیکن اعلی یوکرائٹس میں نایاب ہے)۔ لہذا ان نظاموں میں جین فنکشن کا مطالعہ کرنے کے لیے ریورس جینیات کے طریقوں میں جین ٹارگیٹنگ کا استعمال کیا گیا ہے۔ پلانٹ جینوم انجینئرنگ میں ایپلی کیشنز جین ٹارگیٹنگ (جی ٹی)، یا ہومیولوجی ڈائریکٹڈ مرمت (ایچ ڈی آر)، پلانٹ جینوم انجینئرنگ میں مخصوص ترتیبات داخل کرنے کے لیے معمول کے مطابق استعمال کیا جاتا ہے، 1980 کی دہائی میں پودوں میں جی ٹی کی پہلی شائع شدہ مثال کے ساتھ۔ تاہم، اعلی پودوں میں ہومولوگس ریکومبینیشن، یا ہومیولوجی ڈائریکٹڈ مرمت کی کم شرح اور پودوں کی بہت سی انواع کی طرف سے تبدیلی کی کم شرح (ڈی این اے اپٹیک) کی وجہ سے اعلی پودوں میں جین کو نشانہ بنانا خاص طور پر چیلنج ہے۔ تاہم، پچھلی دہائیوں میں پودوں میں جین کو نشانہ بنانے کی تعدد کو بڑھانے کی بہت کوشش کی گئی ہے، کیونکہ پلانٹ جینوم انجینئرنگ کے لیے پلانٹ جینوم میں مخصوص ترتیبات متعارف کرانے کے قابل ہونا بہت مفید ہے۔ پودوں میں جین کو نشانہ بنانے کی تعدد میں سب سے اہم بہتری سی آر آئی ایس پی آر جیسے سائٹ کے مخصوص نیوکلیز کے ذریعے ڈبل اسٹرینڈ بریکس کی شمولیت تھی، جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے۔ دیگر حکمت عملیوں میں پلانٹا جین کو نشانہ بنانا شامل ہے، جس کے تحت ہومیولوجی مرمت ٹیمپلیٹ کو پلانٹ کے جینوم کے اندر سرایت کیا جاتا ہے اور پھر سی آر آئی ایس پی آر کاٹنے کا استعمال کرتے ہوئے آزاد کیا جاتا ہے۔ ہومیولوگس ریکومبینیشن راستے میں شامل جینوں کی ریگولیشن ؛ مسابقتی نان-ہومیولوگس-اینڈ-جوائننگ راستے کی ریگولیشن ؛ ہومیولوگس مرمت ٹیمپلیٹ کی کاپی نمبروں میں اضافہ ؛ اور انجینئرنگ کاس مختلف اقسام کو پلانٹ ٹشو کلچر کے لیے بہتر بنایا جائے۔ ان میں سے کچھ طریقوں کو ممالیہ خلیوں میں جین کو نشانہ بنانے کی استعداد کو بہتر بنانے کے لیے بھی استعمال کیا گیا ہے۔ جن پودوں کو جین سے نشانہ بنایا گیا ہے ان میں عربی ڈوپسس تھالیانا (سب سے زیادہ استعمال ہونے والا ماڈل پلانٹ)، چاول، ٹماٹر، مکئی، تمباکو اور گندم شامل ہیں۔ تکنیکی چیلنجز جین ٹارگیٹنگ جینوم میں ٹارگیٹڈ، صارف سے متعین ترتیب میں تبدیلیاں یا ترتیب داخل کرنے کا بہت بڑا وعدہ رکھتی ہے۔ تاہم اس کی بنیادی ایپلی کیشنز-ہیومن ڈیزیز ماڈلنگ اور پلانٹ جینوم انجینئرنگ-ممالیہ اور اعلی پودوں کے خلیوں میں مسابقتی غیر ہم جنس پرست اختتامی شمولیت کے مقابلے میں ہم جنس پرست دوبارہ ملاپ کی کم کارکردگی کی وجہ سے رکاوٹ ہیں۔ جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے، ایسی حکمت عملی موجود ہیں جو پودوں اور ممالیہ خلیوں میں جین کو نشانہ بنانے کی تعدد کو بڑھانے کے لیے استعمال کی جا سکتی ہیں۔ اس کے علاوہ، مضبوط انتخاب کے طریقے جو خلیوں کے انتخاب یا مخصوص افزودگی کی اجازت دیتے ہیں جہاں جین کو نشانہ بنایا گیا ہے وہ جین کو نشانہ بنانے والے خلیوں کی بازیابی کی شرح میں اضافہ کر سکتے ہیں۔ 2007 کا نوبل انعام ماریو آر کیپیچی، مارٹن جے ایونز اور اولیور اسمتھز کو 2007 کا فزیولوجی یا میڈیسن کا نوبل انعام "جنین اسٹیم سیلز کے استعمال سے چوہوں میں مخصوص جین میں ترمیم متعارف کرانے کے اصولوں"، یا جین کو نشانہ بنانے پر ان کے کام کے لیے دیا گیا۔ جین ٹارگیٹڈ حیاتیات کا ضابطہ جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے، جین ٹارگیٹنگ تکنیکی طور پر جینیاتی تبدیلیوں کے سائز کی ایک رینج پیدا کرنے کی صلاحیت رکھتی ہے۔ سنگل بیس جوڑی اتپریورتن سے لے کر ممکنہ طور پر ٹرانسجینز سمیت طویل ترتیبات کے اندراج تک۔ اس کا مطلب یہ ہے کہ جین کو نشانہ بنانے کی مصنوعات قدرتی تغیر سے ناقابل شناخت ہو سکتی ہیں، یا ٹرانسجین کے داخل ہونے کی وجہ سے GMOs کے مساوی ہو سکتی ہیں (اوپر وین خاکہ دیکھیں)۔ لہذا جین ٹارگیٹنگ کی مصنوعات کو ریگولیٹ کرنا مشکل ہو سکتا ہے اور مختلف ممالک نے مختلف نقطہ نظر اختیار کیے ہیں یا جین ایڈیٹنگ کی مصنوعات میں وسیع تر ریگولیٹری جائزوں کے حصے کے طور پر ایسا کرنے کے طریقے کا جائزہ لے رہے ہیں۔ وسیع پیمانے پر اپنائی گئی درجہ بندی جین میں ترمیم شدہ حیاتیات کو "ایس ڈی این 1-3" کی 3 کلاسوں میں تقسیم کرتی ہے، جو سائٹ ڈائریکٹڈ نیوکلیز (جیسے سی آر آئی ایس پی آر-سی اے ایس) کا حوالہ دیتے ہیں جو جین میں ترمیم شدہ حیاتیات پیدا کرنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔ یہ ایس ڈی این کی درجہ بندی قومی ضوابط کی رہنمائی کر سکتی ہے کہ وہ ایس ڈی این کے کس طبقے کو 'جی ایم او' سمجھیں گے اور اس لیے جو ممکنہ طور پر سخت ضوابط کے تابع ہیں۔ ایس ڈی این 1 = ڈی این اے میں ایس ڈی این-اتپریرک بریک کے غیر ہم جنس پرست اختتامی شمولیت کے ذریعے پیدا ہونے والے حیاتیات۔ لہذا غلطی کے شکار این ایچ ای جے کے ذریعے بے ترتیب تغیرات واقع ہوئے ہیں، اور کوئی مرمت ٹیمپلیٹ استعمال نہیں کیا گیا ہے (اس لیے یہ جین ٹارگیٹنگ نہیں ہے)۔ ڈی این اے مرمت ٹیمپلیٹ کے استعمال کی کمی اور روایتی افزائش نسل کی تکنیکوں (پودوں کی افزائش کے معاملے میں) کے مساوی ہونے کی وجہ سے اکثر کم سخت ریگولیٹری نگرانی کے تابع ہوتا ہے۔ ایس ڈی این 2 = ایک یا کئی مخصوص تغیرات کو ہومولوجی-مرمت ٹیمپلیٹ کے استعمال کے ذریعے ایس ڈی این کٹ سائٹ پر ہدف جین میں متعارف کرایا گیا ہے (اس لیے یہ جین ٹارگیٹنگ ہے)۔ ایس ڈی این 3 = طویل ترتیبات کٹ سائٹ پر، ہومولوگس ریکومبینیشن کے ذریعے داخل کیے گئے ہیں (یعنی۔ جین ٹارگیٹنگ) یا این ایچ ای جے کے ذریعے۔ "طویل ترتیبات" عام طور پر پورے جینیاتی عناصر جیسے پروموٹرز یا پروٹین کوڈنگ کے علاقوں کا حوالہ دیتے ہیں۔ انہیں اکثر ٹرانسجینک سمجھا جاتا ہے اور اس لیے اکثر جی ایم او کے طور پر درجہ بند کیا جاتا ہے۔ تاریخی طور پر یورپی یونین (ای یو) نے اس کے احتیاطی اصول کی بنیاد پر جینیاتی ترمیم کی ٹیکنالوجی کی وسیع پیمانے پر مخالفت کی ہے۔ 2018 میں یورپی عدالت انصاف (ای سی جے) نے فیصلہ دیا کہ جین میں ترمیم شدہ فصلوں (بشمول جین کو نشانہ بنانے والی فصلوں) کو جینیاتی طور پر تبدیل شدہ سمجھا جانا چاہیے اور اس لیے وہ جی ایم او ہدایت کے تابع ہیں، جو جی ایم او کے استعمال پر اہم ریگولیٹری بوجھ ڈالتا ہے۔ تاہم اس فیصلے کو یورپی سائنسی برادری نے منفی طور پر قبول کیا۔ 2021 میں یورپی کمیشن نے سمجھا کہ جینیاتی ترمیم اور جین ترمیم کی تکنیکوں (یا این جی ٹی-نئی جینومک تکنیک) پر حکمرانی کرنے والی موجودہ یورپی یونین کی قانون سازی 'مقصد کے لیے موزوں نہیں' تھی اور سائنسی اور تکنیکی ترقی کی عکاسی کرنے کے لیے موافقت کی ضرورت تھی۔ جولائی 2023 میں یورپی کمیشن نے جین ایڈیٹنگ کے ساتھ تیار کردہ حیاتیات کے لیے ریگولیٹری ضروریات کو کم کرنے کے لیے جین ایڈیٹنگ کی کچھ مصنوعات کے لیے قواعد کو تبدیل کرنے کی تجویز شائع کی جس میں جینیاتی تبدیلیاں تھیں جو قدرتی طور پر واقع ہو سکتی تھیں۔ یہ بھی دیکھیں کری ریکومبنیز کری-لوکس ریکومبنیشن ایف ایل پی-ایف آر ٹی ریکومبنیشن جینیاتی ریکومبنیشن ریکومبنیز-میڈیٹڈ کیسٹ ایکسچینج ("دلچسپی کے جین" کے لیے پہلے سے موجود "جین کیسٹ" کا تبادلہ) جینیاتی انجینئرنگ سائٹ کے لیے مخصوص ریکومبنیز ٹیکنالوجی کا ضابطہ ٹول نما رسیپٹر (تجزیہ کے لیے نشانہ بنائے گئے جین کی مثال) مس مسکولس (ہاؤس ماؤس ؛ عام ماڈل حیاتیات) فزکومیٹریلا پیٹن (صرف پودا جس میں جین کو نشانہ بنایا جاتا ہے، 1998 تک) بیرونی حوالہ جات یونیورسٹی آف مشی گن کے جین کے ذریعے ماؤس کے خاکہ اور خلاصہ میں ہدف بنائے گئے جین کا خاکہ ہیڈاری لیب، وین اسٹیٹ یونیورسٹی ریسرچ نے ٹارگٹ کرنے والے جین میں استعمال ہونے والے رپورٹر جینوں پر روشنی ڈالی۔