Diethyl pyrocarbonate
ڈائیتھائل پائروکاربونیٹ (ڈی ای پی سی)، جسے ڈائیتھائل ڈائیکاربونیٹ (آئی یو پی اے سی نام) بھی کہا جاتا ہے، لیبارٹری میں پانی اور لیبارٹری کے برتنوں پر آر نیس انزائمز کو غیر فعال کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ یہ ہسٹائڈائن (سب سے زیادہ مضبوطی سے)، لائسین، سسٹین، اور ٹائروسین کے باقیات کی کوولینٹ ترمیم کے ذریعے ایسا کرتا ہے۔ ڈی ای پی سی سے علاج شدہ (اور اس لیے آر نیس سے پاک) پانی کا استعمال لیبارٹری میں آر این اے کو سنبھالنے میں کیا جاتا ہے تاکہ آر نیس کے ذریعے آر این اے کے انحطاط کے خطرے کو کم کیا جا سکے۔ پانی کو عام طور پر 37 ڈگری سیلسیس پر کم از کم 2 گھنٹے کے لیے 0.1 ٪ وی/وی ڈی ای پی سی کے ساتھ ٹریٹ کیا جاتا ہے اور پھر ڈی ای پی سی کے نشانات کو غیر فعال کرنے کے لیے آٹوکلیوڈ (کم از کم 15 منٹ) کیا جاتا ہے۔ اس طریقے سے ڈی ای پی سی کو غیر فعال کرنے سے کاربن ڈائی آکسائیڈ اور ایتھنول حاصل ہوتا ہے۔ ڈی ای پی سی کی زیادہ تعداد آر نیس کی بڑی مقدار کو غیر فعال کرنے کی صلاحیت رکھتی ہے، لیکن باقی نشانات یا ضمنی مصنوعات مزید بائیو کیمیکل رد عمل کو روک سکتے ہیں جیسے کہ ان وٹرو ٹرانسکرپشن۔ مزید برآں، ڈی ای پی سی یا اس کے ضمنی مصنوعات کے نشانات موجود ہونے پر آر این اے کی کیمیائی ترمیم جیسے کاربوکسی میتھیلیشن ممکن ہے، جس کے نتیجے میں بفر ایکسچینج (بارش کے بعد) کے بعد بھی برقرار آر این اے کی خراب بازیابی ہوتی ہے۔ ڈی ای پی سی پانی میں غیر مستحکم ہے اور کاربن ڈائی آکسائیڈ اور ایتھنول کے ہائیڈرولیسس کے لیے حساس ہے، خاص طور پر نیوکلیوفائل کی موجودگی میں۔ اس وجہ سے، ڈی ای پی سی کو ٹرس یا ایچ ای پی ای ایس بفر کے ساتھ استعمال نہیں کیا جا سکتا۔ اس کے برعکس، اسے فاسفیٹ بفرڈ سیلائن یا ایم او پی ایس کے ساتھ استعمال کیا جا سکتا ہے۔ ایک آسان قاعدہ یہ ہے کہ انزائمز یا کیمیکلز جن میں فعال-O:،-N: یا-S: ہوتے ہیں، انہیں DEPC کے ساتھ RNase سے پاک ہونے کے لیے علاج نہیں کیا جا سکتا، کیونکہ DEPC ان پرجاتیوں کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتا ہے۔ مزید برآں، ڈی ای پی سی انحطاط کی مصنوعات ان وٹرو ٹرانسکرپشن کو روک سکتی ہیں۔ ڈی ای پی سی سے ماخوذ ہسٹائڈائنز کا استعمال انزائموں میں ہسٹائڈائل کے باقیات کی اہمیت کا مطالعہ کرنے کے لیے بھی کیا جاتا ہے۔ ڈی ای پی سی کے ذریعے ہسٹائڈائن میں ترمیم کے نتیجے میں امیڈازول رنگ کے این-اومیگا-2 نائٹروجن میں کاربیتھاکسیلیٹڈ مشتق ہوتے ہیں۔ ہسٹائڈائنز کی ڈی ای پی سی ترمیم کو غیر جانبدار پی ایچ پر 0.5 ایم ہائیڈروکسیلیمائن کے ساتھ علاج کے ذریعے تبدیل کیا جا سکتا ہے۔ ڈی ای پی سی کو ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کی ساخت کی تحقیقات کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔ اوپن ویٹ ویئر لائف سائنٹسٹ ویکی آر نیس اور ڈی ای پی سی ٹریٹمنٹ کاربونیٹ ایسٹرز ڈائکاربونیٹس ایتھائل ایسٹرز پر ڈی ای پی سی کے بیرونی لنکس ڈی ای سی حوالہ جات بھی دیکھیں۔