BRAF (gene)
بی آر اے ایف ایک انسانی جین ہے جو بی-راف نامی پروٹین کو انکوڈ کرتا ہے۔ جین کو پروٹو-اونکوجین بی-راف اور وی-راف میورین سارکوما وائرل اونکوجین ہومولوگ بی بھی کہا جاتا ہے، جبکہ پروٹین کو باضابطہ طور پر سیرائن/تھریونین-پروٹین کینیز بی-راف کے نام سے جانا جاتا ہے۔ بی-راف پروٹین خلیوں کے اندر سگنل بھیجنے میں شامل ہوتا ہے جو خلیوں کی نشوونما کو ہدایت دینے میں شامل ہوتے ہیں۔ 2002 میں، یہ کچھ انسانی کینسروں میں تبدیل شدہ دکھایا گیا تھا۔ کچھ دیگر وراثت میں ملنے والی بی آر اے ایف تغیرات پیدائشی نقائص کا سبب بنتی ہیں۔ ایسی دوائیں تیار کی گئی ہیں جو بی آر اے ایف تغیرات سے چلنے والے کینسر کا علاج کرتی ہیں۔ ان میں سے دو دوائیں، ویمورفینب اور ڈابرافینیب کو ایف ڈی اے نے آخری مرحلے کے میلانوما کے علاج کے لیے منظور کیا ہے۔ ویمورافینب ٹکڑے ٹکڑے پر مبنی منشیات کی دریافت سے نکلنے والی پہلی منظور شدہ دوا تھی۔ فنکشن بی-راف گروتھ سگنل ٹرانسڈکشن پروٹین کنیز کے راف کنیز خاندان کا ایک رکن ہے۔ یہ پروٹین ایم اے پی کنیز/ای آر کے کے سگنلنگ راستے کو منظم کرنے میں کردار ادا کرتا ہے، جو خلیوں کی تقسیم، تفریق اور سراو کو متاثر کرتا ہے۔ ساخت بی-راف ایک 766 امینو ایسڈ، ریگولیٹڈ سگنل ٹرانسڈکشن سیرائن/تھریونین مخصوص پروٹین کینیز ہے۔ وسیع پیمانے پر، یہ راف کنیز خاندان کی خصوصیت والے تین محفوظ ڈومینز پر مشتمل ہے: محفوظ علاقہ 1 (سی آر 1)، ایک راس-جی ٹی پی-بائنڈنگ سیلف ریگولیٹری ڈومین، محفوظ علاقہ 2 (سی آر 2)، ایک سیرائن سے بھرپور قبضہ کا علاقہ، اور محفوظ علاقہ 3 (سی آر 3)، ایک اتپریرک پروٹین کینیز ڈومین جو فاسفوریلیٹ کرتا ہے پروٹین سبسٹریٹس پر اتفاق رائے کی ترتیب۔ اپنی فعال تشکیل میں، بی-راف اپنے کنیز ڈومینز کے ہائیڈروجن-بانڈنگ اور الیکٹروسٹیٹک تعاملات کے ذریعے ڈائمر بناتا ہے۔ سی آر 1 محفوظ علاقہ 1 بی-راف کے کنیز ڈومین (سی آر 3) کو خود بخود روکتا ہے تاکہ بی-راف سگنلنگ کو آئینی کے بجائے منظم کیا جائے۔ باقیات 155-227 راس بائنڈنگ ڈومین (آر بی ڈی) بناتے ہیں، جو سی آر 1 کو جاری کرنے اور کنیز کی روک تھام کو روکنے کے لیے راس-جی ٹی پی کے ایفیکٹر ڈومین سے منسلک ہوتا ہے۔ باقیات 234-280 ایک فوربول ایسٹر/ڈی اے جی بائنڈنگ زنک فنگر موٹف پر مشتمل ہوتے ہیں جو راس بائنڈنگ کے بعد بی-راف جھلی ڈاکنگ میں حصہ لیتے ہیں۔ سی آر 2 محفوظ علاقہ 2 (سی آر 2) ایک لچکدار لنکر فراہم کرتا ہے جو سی آر 1 اور سی آر 3 کو جوڑتا ہے اور قبضہ کے طور پر کام کرتا ہے۔ سی آر 3 محفوظ علاقہ 3 (سی آر 3)، بقیہ 457-717، بی-راف کا انزیمیٹک کنیز ڈومین بناتا ہے۔ یہ بڑی حد تک محفوظ ڈھانچہ دو عالمی ہے، جو ایک مختصر قبضہ کے علاقے سے جڑا ہوا ہے۔ چھوٹے این-لوب (بقیہ 457-530) بنیادی طور پر اے ٹی پی بائنڈنگ کے لیے ذمہ دار ہیں جبکہ بڑے سی-لوب (بقیہ 535-717) سبسٹریٹ پروٹین کو باندھتے ہیں۔ فعال جگہ دو لوبوں کے درمیان دراڑ ہے، اور اتپریرک ایس پی 576 باقیات سی-لوب پر واقع ہے، جو اس دراڑ کے اندر کی طرف ہے۔ ذیلی علاقے پی-لوپ بی-راف کا پی-لوپ (باقیات 464-471) اے ٹی پی-بائنڈنگ انزائم کے دوران اے ٹی پی کے غیر منتقلی فاسفیٹ گروپوں کو مستحکم کرتا ہے۔ خاص طور پر، S467، F468، اور G469 بیکبون مالیکیول کو لنگر انداز کرنے کے لیے ہائیڈروجن بانڈ کو ATP کے β-فاسفیٹ سے جوڑتے ہیں۔ ہینکس اور ہنٹر کے ذریعہ بی-راف کنیز ڈومین میں تجزیہ کردہ پی کے اے کی ہم آہنگی کا تجزیہ کرکے بی-راف فنکشنل موفٹس کا تعین کیا گیا ہے۔ نیوکلیوٹائڈ بائنڈنگ پاکٹ V471، C532، W531، T529، L514، اور A481 ایک ہائیڈروفوبک پاکٹ بناتے ہیں جس کے اندر ATP کا اڈینائن ATP بائنڈنگ پر وان ڈیر والز کے پرکشش مقامات کے ذریعے لنگر انداز ہوتا ہے۔ اتپریرک لوپ باقیات 574-581 کنیز ڈومین کا ایک حصہ تشکیل دیتے ہیں جو اے ٹی پی کے γ-فاسفیٹ کو بی-راف کے پروٹین سبسٹریٹ میں منتقل کرنے کے لیے ذمہ دار ہوتا ہے۔ خاص طور پر، D576 سبسٹریٹ سیرائن یا تھریونین کے باقیات پر نیوکلیوفیلک ہائیڈروکسیل آکسیجن کو چالو کرنے کے لیے ایک پروٹون قبول کنندہ کے طور پر کام کرتا ہے، جس سے فاسفیٹ کی منتقلی کا رد عمل بیس-اتپریرک کے ذریعے ہوتا ہے۔ ڈی ایف جی موٹیف ڈی 594، ایف 595، اور جی 596 بی-راف کے فنکشن کے لیے اس کی غیر فعال اور فعال حالت دونوں میں ایک مرکزی موٹف تشکیل دیتے ہیں۔ غیر فعال حالت میں، F595 نیوکلیوٹائڈ بائنڈنگ جیب پر قبضہ کرتا ہے، جو ATP کو انزائم اتپریرک کے امکان کو داخل کرنے اور کم کرنے سے روکتا ہے۔ فعال حالت میں، D594 ڈیویلینٹ میگنیشیم کیشن کو چیلیٹ کرتا ہے جو ATP کے β-اور γ-فاسفیٹ گروپوں کو مستحکم کرتا ہے، منتقلی کے لیے γ-فاسفیٹ کو سمت دیتا ہے۔ ایکٹیویشن لوپ ریسیڈیوز 596-600 کنیز کی غیر فعال تشکیل میں P-لوپ کے ساتھ مضبوط ہائیڈروفوبک تعاملات تشکیل دیتے ہیں، کنیز کو اس کی غیر فعال حالت میں بند کر دیتے ہیں جب تک کہ ایکٹیویشن لوپ فاسفوریلیٹ نہ ہو جائے، منفی چارج کی موجودگی کے ساتھ ان تعاملات کو غیر مستحکم کر دیتا ہے۔ یہ کنیز کی فعال حالت میں تبدیلی کو متحرک کرتا ہے۔ خاص طور پر، ایکٹیویشن لوپ کے ایل 597 اور وی 600 پی-لوپ کے جی 466، ایف 468، اور وی 471 کے ساتھ تعامل کرتے ہیں تاکہ کینیز ڈومین کو فاسفوریلیٹ ہونے تک غیر فعال رکھا جا سکے۔ انزائمولوجی بی-راف ایک سیرائن/تھریونین مخصوص پروٹین کینیز ہے۔ اس طرح، یہ اے ٹی پی کے ذریعہ ہدف پروٹین پر متفقہ ترتیب میں سیرین اور تھریونین کے باقیات کے فاسفوریلیشن کو متحرک کرتا ہے، جس سے اے ڈی پی اور ایک فاسفوریلیٹڈ پروٹین بطور مصنوعات حاصل ہوتا ہے۔ چونکہ یہ ایک انتہائی منظم سگنل ٹرانسڈکشن کینیز ہے، اس لیے بی-راف کو انزائم کے طور پر فعال ہونے سے پہلے راس-جی ٹی پی کو باندھنا چاہیے۔ ایک بار بی-راف فعال ہونے کے بعد، ایک محفوظ پروٹین کینیز اتپریرک کور فاسفوریلیٹس پروٹین سبسٹریٹس کو فعال سبسٹریٹ سیرائن یا تھریونین ہائیڈروکسیل آکسیجن ایٹم کے نیوکلیوفیلک حملے کو فروغ دے کر اے ٹی پی کے γ-فاسفیٹ گروپ پر بائیمولیکولر نیوکلیوفیلک متبادل کے ذریعے۔ انسانی راف کنیز کے کینیز (سی آر 3) ڈومین کو دو میکانزم کے ذریعے روکا جاتا ہے: اس کے اپنے ریگولیٹری راس-جی ٹی پی-بائنڈنگ سی آر 1 ڈومین کے ذریعے آٹو انبیشن اور سی آر 2 قبضے کے علاقے میں کلیدی سیرائن اور ٹائروسین کے باقیات (سی-راف کے لیے ایس 338 اور وائی 341) کے ترجمہ کے بعد فاسفوریلیشن کی کمی۔ بی-راف ایکٹیویشن کے دوران، پروٹین کا آٹو انابائٹری سی آر 1 ڈومین سب سے پہلے راس-جی ٹی پی کے ایفیکٹر ڈومین کو سی آر 1 راس بائنڈنگ ڈومین (آر بی ڈی) سے جوڑتا ہے تاکہ انسانی راف کنیز خاندان کے دیگر ممبروں کی طرح کینیز سی آر 3 ڈومین کو جاری کیا جا سکے۔ سی آر 1-راس تعامل کو بعد میں سی آر 1 کے سسٹین سے بھرپور ذیلی ڈومین (سی آر ڈی) کے راس اور جھلی فاسفولیپائڈز کے پابند ہونے کے ذریعے مضبوط کیا جاتا ہے۔ اے-راف اور سی-راف کے برعکس، جو فعال ہونے کے لیے سی آر 1 کو مکمل طور پر جاری کرنے سے پہلے ہائیڈروکسیل پر مشتمل سی آر 2 کے باقیات پر فاسفوریلیٹ ہونا ضروری ہے، بی-راف کو سی آر 2 ایس 445 پر آئینی طور پر فاسفوریلیٹ کیا جاتا ہے۔ یہ منفی طور پر چارج شدہ فاسفوسرین کو ریگولیٹری ڈومین کے غیر پابند ہونے کے بعد سٹیریک اور الیکٹروسٹیٹک تعاملات کے ذریعے سی آر 1 کو فوری طور پر پسپا کرنے کی اجازت دیتا ہے، جس سے سی آر 3 کینیز ڈومین سبسٹریٹ پروٹین کے ساتھ تعامل کرنے کے لیے آزاد ہو جاتا ہے۔ سی آر 3 ڈومین ایکٹیویشن آٹو انفیبیٹری سی آر 1 ریگولیٹری ڈومین کے جاری ہونے کے بعد، بی-راف کے سی آر 3 کنیز ڈومین کو پروٹین فاسفوریلیشن کو متحرک کرنے سے پہلے اپنے اے ٹی پی بائنڈنگ ایکٹیو کنفورمر میں تبدیل ہونا چاہیے۔ غیر فعال تشکیل میں، ڈی ایف جی موٹف کا ایف 595 ہائیڈروفوبک اڈینائن بائنڈنگ جیب کو روکتا ہے جبکہ ایکٹیویشن لوپ کے باقیات پی-لوپ کے ساتھ ہائیڈروفوبک تعاملات تشکیل دیتے ہیں، جو اے ٹی پی کو اس کی بائنڈنگ سائٹ تک رسائی سے روکتے ہیں۔ جب ایکٹیویشن لوپ فاسفوریلیٹڈ ہوتا ہے، تو فاسفیٹ کا منفی چارج پی-لوپ کے ہائیڈروفوبک ماحول میں غیر مستحکم ہوتا ہے۔ نتیجے کے طور پر، ایکٹیویشن لوپ تشکیل کو تبدیل کرتا ہے، کنیز ڈومین کے سی-لوب میں پھیلا ہوا ہے۔ اس عمل میں، یہ β6 اسٹرینڈ کے ساتھ β-شیٹ کے تعاملات کو مستحکم کرتا ہے۔ دریں اثنا، فاسفوریلیٹڈ باقیات K507 کے قریب پہنچتے ہیں، جس سے ایکٹیویشن لوپ کو جگہ جگہ بند کرنے کے لیے ایک مستحکم نمک پل بنتا ہے۔ ڈی ایف جی موٹف ایکٹیویشن لوپ کے ساتھ تشکیل بدلتا ہے، جس کی وجہ سے F595 اڈینائن نیوکلیوٹائڈ بائنڈنگ سائٹ سے باہر نکل کر αC اور αE ہیلیکس سے متصل ہائیڈروفوبک جیب میں چلا جاتا ہے۔ ایک ساتھ، ڈی ایف جی اور فاسفوریلیشن پر ایکٹیویشن لوپ کی حرکت اے ٹی پی بائنڈنگ سائٹ کو کھولتی ہے۔ چونکہ دیگر تمام سبسٹریٹ بائنڈنگ اور اتپریرک ڈومین پہلے سے ہی موجود ہیں، اکیلے ایکٹیویشن لوپ کا فاسفوریلیشن ایک چین ری ایکشن کے ذریعے بی-راف کے کنیز ڈومین کو چالو کرتا ہے جو بنیادی طور پر دوسری صورت میں تیار کردہ فعال سائٹ سے ڈھکن کو ہٹا دیتا ہے۔ اتپریرک کا طریقہ کار ایک چھوڑنے والے گروپ کے طور پر اے ڈی پی کے ساتھ سیرائن اور تھریونائن کے باقیات کے دو سالماتی متبادل کے ذریعے پروٹین فاسفوریلیشن کو مؤثر طریقے سے متحرک کرنے کے لیے، بی-راف کو پہلے اے ٹی پی کو باندھنا چاہیے اور پھر منتقلی کی حالت کو مستحکم کرنا چاہیے کیونکہ اے ٹی پی کا γ-فاسفیٹ منتقل ہوتا ہے۔ اے ٹی پی بائنڈنگ بی-راف غیر قطبی جیب (پیلا، شکل 1) میں اڈینائن نیوکلیوٹائڈ کو لنگر انداز کرکے اور فاسفیٹ گروپوں کے ساتھ ہائیڈروجن بانڈنگ اور الیکٹروسٹیٹک تعاملات کے ذریعے مالیکیول کو سمت دے کر اے ٹی پی کو باندھتا ہے۔ اوپر بیان کردہ پی-لوپ اور ڈی ایف جی موٹف فاسفیٹ بائنڈنگ کے علاوہ، کے 483 اور ای 501 غیر منتقلی فاسفیٹ گروپوں کو مستحکم کرنے میں کلیدی کردار ادا کرتے ہیں۔ K483 کے بنیادی امین پر مثبت چارج اسے ATP α-اور β-فاسفیٹ گروپوں پر منفی چارج کو مستحکم کرنے کی اجازت دیتا ہے جب ATP باندھتا ہے۔ جب اے ٹی پی موجود نہیں ہوتا ہے، تو E501 کاربوکسیل گروپ کا منفی چارج اس چارج کو متوازن کرتا ہے۔ فاسفوریلیشن ایک بار جب اے ٹی پی بی-راف کنیز ڈومین سے منسلک ہو جاتا ہے، تو اتپریرک لوپ کا D576 ایک سبسٹریٹ ہائیڈروکسیل گروپ کو چالو کرتا ہے، جس سے اس کی نیوکلیوفلیسیٹی میں اضافہ ہوتا ہے تاکہ فاسفوریلیشن رد عمل کو حرکی طور پر چلایا جا سکے جبکہ دیگر اتپریرک لوپ کے باقیات منتقلی کی حالت کو مستحکم کرتے ہیں۔ (شکل 2)۔ این 581 اے ٹی پی سے وابستہ ڈیویلینٹ میگنیشیم کیشن کو چیلٹ کرتا ہے تاکہ مالیکیول کو زیادہ سے زیادہ متبادل کے لیے سمت دینے میں مدد ملے۔ K578 ATP کے γ-فاسفیٹ گروپ پر منفی چارج کو بے اثر کر دیتا ہے تاکہ فعال سیر/تھر سبسٹریٹ کے باقیات کو فاسفیٹ پر حملہ کرتے وقت اتنا الیکٹران-الیکٹران پسپائی کا تجربہ نہ ہو۔ فاسفیٹ گروپ کی منتقلی کے بعد، اے ڈی پی اور نیا فاسفوپروٹین خارج ہوتا ہے۔ چونکہ آئینی طور پر فعال بی-راف میوٹینٹس عام طور پر خلیوں کو بڑھنے کا ضرورت سے زیادہ اشارہ دے کر کینسر کا سبب بنتے ہیں (کلینیکل اہمیت دیکھیں)، اس لیے کینسر کے علاج کے امیدواروں کے طور پر کینیز ڈومین کی غیر فعال اور فعال تشکیل دونوں کے لیے بی-راف کے انفیکٹر تیار کیے گئے ہیں۔ سورافینیب بی اے وائی 43-9006 (سورافینیب، نیکساور) ایک وی 600 ای میوٹینٹ بی-راف اور سی-راف انفیکٹر ہے جسے ایف ڈی اے نے بنیادی جگر اور گردے کے کینسر کے علاج کے لیے منظور کیا ہے۔ بے 43-9006 انزائم کو اس کی غیر فعال شکل میں بند کر کے بی-راف کنیز ڈومین کو غیر فعال کر دیتا ہے۔ روک تھام کنیز ڈومین کے لیے اعلی وابستگی کے ذریعے اے ٹی پی بائنڈنگ جیب کو روک کر اسے پورا کرتا ہے۔ اس کے بعد یہ کلیدی ایکٹیویشن لوپ اور ڈی ایف جی موٹف کے باقیات کو جوڑتا ہے تاکہ ایکٹیویشن لوپ اور ڈی ایف جی موٹف کی حرکت کو فعال تشکیل تک روکا جا سکے۔ آخر میں، ایک ٹرائیفلوورومیتھائل فینائل موئٹی ڈی ایف جی موٹف اور ایکٹیویشن لوپ فعال کنفارمیشن سائٹ کو مستحکم طور پر روکتا ہے، جس سے کنیز ڈومین کے لیے کنفارمیشن کو فعال ہونا ناممکن ہو جاتا ہے۔ کینیز این-لوب کے ہائیڈروفوبک نیوکلیوٹائڈ بائنڈنگ جیب میں بی اے وائی 43-9006 اینکرز کا ڈسٹل پیریڈیل رنگ، W531، F583، اور F595 کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ اتپریرک لوپ F583 اور DFG موٹف F595 کے ساتھ ہائیڈروفوبک تعاملات ان ڈھانچوں کی غیر فعال تشکیل کو مستحکم کرتے ہیں، جس سے انزائم ایکٹیویشن کا امکان کم ہوتا ہے۔ سینٹر فینائل رنگ کے ساتھ K483، L514، اور T529 کا مزید ہائیڈروفوبک تعامل انفیکٹر کے لیے کینیز ڈومین کی وابستگی میں اضافہ کرتا ہے۔ سینٹر رنگ کے ساتھ F595 کا ہائیڈروفوبک تعامل بھی DFG کنفارمیشن سوئچ کی توانائی بخش پسندی کو مزید کم کرتا ہے۔ آخر میں، کینیز ڈومین کے ساتھ بی اے وائی 43-9006 کے قطبی تعاملات انفیکٹر کے لیے انزائم کی وابستگی بڑھانے اور غیر فعال تشکیل میں ڈی ایف جی کے باقیات کو مستحکم کرنے کے اس رجحان کو جاری رکھتے ہیں۔ E501 اور C532 ہائیڈروجن بانڈ بالترتیب انفیکٹر کے یوریا اور پائریڈیل گروپوں کو بانڈ کرتے ہیں جبکہ یوریا کاربونل D594 کے ریڑھ کی ہڈی کے امیڈ نائٹروجن سے ہائیڈروجن بانڈ کو قبول کرتا ہے تاکہ DFG موٹف کو اپنی جگہ پر بند کر سکے۔ ٹرائیفلوورومیتھائل فینائل موئٹی غیر فعال تشکیل کی تھرموڈینامک پسندی کو مستحکم کرتا ہے جب کنیز ڈومین بی اے وائی 43-9006 سے منسلک ہوتا ہے تو αC اور αE ہیلیکس کے درمیان ہائیڈروفوبک جیب کو سٹیرک طور پر بلاک کر کے کہ ڈی ایف جی موٹف اور ایکٹیویشن لوپ پروٹین کی فعال تشکیل میں اپنے مقامات پر منتقل ہونے پر آباد ہوں گے۔ ویمورافینیب پی ایل ایکس 4032 (ویمورافینیب) ایک وی 600 میوٹینٹ بی-راف انفیکٹر ہے جسے ایف ڈی اے نے دیر سے مرحلے والے میلانوما کے علاج کے لیے منظور کیا ہے۔ بی اے وائی 43-9006 کے برعکس، جو کنیز ڈومین کی غیر فعال شکل کو روکتا ہے، ویمورفینب کینیز کی فعال "ڈی ایف جی-ان" شکل کو روکتا ہے، اور خود کو اے ٹی پی بائنڈنگ سائٹ میں مضبوطی سے لنگر انداز کرتا ہے۔ کنیز کی صرف فعال شکل کو روک کر، ویمورفینب منتخب طور پر غیر منظم بی-راف والے خلیوں کے پھیلاؤ کو روکتا ہے، عام طور پر وہ جو کینسر کا سبب بنتے ہیں۔ چونکہ ویمورافینب صرف اپنے پیش رو، پی ایل ایکس 4720 سے مختلف ہے، فارماکوکینٹک وجوہات کی بناء پر شامل کیے گئے فینائل رنگ میں، پی ایل ایکس 4720 کا عمل کا طریقہ ویمورافینب کے مساوی ہے۔ پی ایل ایکس 4720 کا اے ٹی پی بائنڈنگ سائٹ کے لیے جزوی طور پر اچھا لگاؤ ہے کیونکہ اس کا لنگر خطہ، ایک 7-ایزینڈول بائیسکلک، صرف قدرتی اڈینائن سے مختلف ہے جو اس جگہ پر دو جگہوں پر قابض ہے جہاں نائٹروجن ایٹموں کو کاربن سے تبدیل کیا گیا ہے۔ یہ C532 کے ساتھ N7 ہائیڈروجن بانڈنگ اور Q530 کے ساتھ N1 ہائیڈروجن بانڈنگ جیسے مضبوط بین سالماتی تعاملات کو محفوظ رکھنے کے قابل بناتا ہے۔ اے ٹی پی بائنڈنگ ہائیڈروفوبک جیب کے اندر بہترین فٹ (C532، W531، T529، L514، A481) بائنڈنگ وابستگی کو بھی بڑھاتا ہے۔ پانی کے ساتھ کیٹون لنکر ہائیڈروجن بانڈنگ اور دوسری ہائیڈروفوبک جیب میں ڈفلوورو فینائل فٹ (A481، V482، K483، V471، I527، T529، L514، اور F583) مجموعی طور پر غیر معمولی اعلی بائنڈنگ وابستگی میں حصہ ڈالتے ہیں۔ فعال راف کے لیے سلیکٹو بائنڈنگ ٹرمینل پروپائل گروپ کے ذریعے مکمل کی جاتی ہے جو αC ہیلکس کی شفٹ کے ذریعے بنائی گئی راف سلیکٹو جیب سے جڑی ہوتی ہے۔ کینیز کی فعال تشکیل کے لیے انتخاب میں پی ایچ حساس ڈیپروٹونیٹڈ سلفونامائڈ گروپ کے ذریعے مزید اضافہ کیا جاتا ہے جو فعال حالت میں ڈی 594 کے بیکبون پیپٹائڈ این ایچ کے ساتھ ہائیڈروجن بانڈنگ کے ذریعے مستحکم ہوتا ہے۔ غیر فعال حالت میں، انفیکٹر کا سلفونامائڈ گروپ اس کے بجائے اس باقیات کے ریڑھ کی ہڈی کے کاربونل کے ساتھ تعامل کرتا ہے، جس سے پسپائی پیدا ہوتی ہے۔ اس طرح، ویمورافینب ترجیحی طور پر بی-راف کے کنیز ڈومین کی فعال حالت سے جڑا رہتا ہے۔ طبی اہمیت بی آر اے ایف جین میں تغیرات دو طریقوں سے بیماری کا سبب بن سکتے ہیں۔ سب سے پہلے، تغیرات وراثت میں مل سکتے ہیں اور پیدائشی نقائص کا سبب بن سکتے ہیں۔ دوسرا، تغیرات بعد میں زندگی میں ظاہر ہو سکتے ہیں اور آنکوجین کے طور پر کینسر کا سبب بن سکتے ہیں۔ اس جین میں وراثت میں ہونے والی تغیرات کارڈیوفیسیوکوٹینئس سنڈروم کا سبب بنتی ہیں، یہ ایک ایسی بیماری ہے جس کی خصوصیت دل کے نقائص، ذہنی معذوری اور چہرے کی ایک مخصوص ظاہری شکل ہے۔ اس جین میں تغیرات کینسر میں پائے گئے ہیں، جن میں نان ہڈکن لیمفوما، کولوریکٹل کینسر، مہلک میلانوما، پیپلری تھائرائڈ کارسنوما، نان اسمال سیل پھیپھڑوں کا کارسنوما، پھیپھڑوں کا اڈینوکارسنوما، برین ٹیومر بشمول گلیوبلاسٹوما اور پلیومورفک زینتھواسٹروسیٹوما کے ساتھ ساتھ ایرڈہیم-چیسٹر بیماری جیسی سوزش کی بیماریاں شامل ہیں۔ بی آر اے ایف جین کی وی 600 ای اتپریورتن کو متعدد مطالعات میں بالوں والے سیل لیوکیمیا سے منسلک کیا گیا ہے اور غیر ضروری ایم ایل ایچ 1 ترتیب سے گزرنے والے مریضوں کی تعداد کو کم کرنے کے لیے لنچ سنڈروم کی اسکریننگ میں استعمال کرنے کی تجویز دی گئی ہے۔ انسانی کینسر سے وابستہ بی آر اے ایف جین کے 30 سے زیادہ تغیرات کی نشاندہی کی گئی ہے۔ بی آر اے ایف تغیرات کی تعدد انسانی کینسر میں وسیع پیمانے پر مختلف ہوتی ہے، میلانوما اور نیوی میں 80 ٪ سے زیادہ سے لے کر دوسرے ٹیومر میں 0-18% تک، جیسے کہ پھیپھڑوں کے کینسر میں 1-3% اور کولوریکٹل کینسر میں 5 ٪۔ 90 فیصد معاملات میں، تھامین کو نیوکلیوٹائڈ 1799 میں اڈینائن کے ساتھ تبدیل کیا جاتا ہے۔ اس کی وجہ سے انسانی کینسر میں پائے جانے والے ایکٹیویشن حصے میں کوڈن 600 (جسے اب V 600E کہا جاتا ہے) پر گلوٹامیٹ (E) کے ذریعہ ویلائن (V) کو تبدیل کیا جاتا ہے۔ یہ تغیر پپلری تھائرایڈ کارسنوما، کولوریکٹل کینسر، میلانوما اور غیر چھوٹے سیل پھیپھڑوں کے کینسر میں بڑے پیمانے پر دیکھا گیا ہے۔ بی آر اے ایف-وی 600 ای اتپریورتن لینجرہانس سیل ہسٹیوسیٹوسس کے 57 فیصد مریضوں میں موجود ہیں۔ وی 600 ای اتپریورتن بال سیل لیوکیمیا کے معاملات میں 100% میں ممکنہ ڈرائیور اتپریورتن ہے۔ امیلوبلاسٹوما میں بی آر اے ایف وی 600 ای تغیرات کی اعلی تعدد کا پتہ چلا ہے، جو ایک سودمند لیکن مقامی طور پر دراندازی کرنے والا اوڈنٹوجینک نیوپلازم ہے۔ وی 600 ای اتپریورتن کو پیپلری کرینیوفرینجیوما کی نشوونما کے بعض معاملات میں سنگل ڈرائیور اتپریورتن (ایک جینیاتی 'تمباکو نوشی بندوق') کے طور پر بھی جوڑا جا سکتا ہے۔ دیگر تغیرات جو پائے گئے ہیں وہ ہیں R461I، I462S، G463E، G463V، G465A، G465E، G465V، G468A، G468E، G469R، N580S، E585K، D593V، F594L، G595R، L596V، T598I، V599D، V599E، V599K، V599R، V600K، A727V، وغیرہ۔ اور ان میں سے زیادہ تر تغیرات دو خطوں میں جمع ہوتے ہیں: این لوب کا گلائسین سے بھرپور پی لوپ اور ایکٹیویشن طبقہ اور فلینکنگ ریجن۔ یہ تغیرات ایکٹیویشن کے حصے کو غیر فعال حالت سے فعال حالت میں تبدیل کرتے ہیں، مثال کے طور پر پچھلے حوالہ شدہ کاغذ میں یہ بتایا گیا ہے کہ ویل 599 کا الیفیٹک سائیڈ چین پی لوپ میں فی 467 کے فینائل رنگ کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ درمیانے درجے کے ہائیڈروفوبک ویل سائیڈ چین کو انسانی کینسر (گلو، ایسپ، لائس، یا آرگ) میں پائے جانے والے بڑے اور چارج شدہ باقیات کے ساتھ تبدیل کرنے سے توقع کی جائے گی کہ وہ تعاملات کو غیر مستحکم کریں گے جو ڈی ایف جی موٹف کو غیر فعال تشکیل میں برقرار رکھتے ہیں، لہذا ایکٹیویشن سیگمنٹ کو فعال پوزیشن میں پلٹ دیں۔ اتپریورتن کی قسم پر منحصر ہے کہ ایم ای کے کی طرف کنیز کی سرگرمی بھی مختلف ہو سکتی ہے۔ زیادہ تر میوٹینٹ ایم ای کے کی طرف بہتر بی-راف کنیز سرگرمی کو متحرک کرتے ہیں۔ تاہم، کچھ میوٹینٹ ایک مختلف میکانزم کے ذریعے کام کرتے ہیں کیونکہ اگرچہ ایم ای کے کی طرف ان کی سرگرمی کم ہو جاتی ہے، لیکن وہ ایک ایسی تشکیل اپناتے ہیں جو جنگلی قسم کے سی-آر اے ایف کو چالو کرتی ہے، جو پھر ای آر کے کو اشارہ کرتی ہے۔ بی آر اے ایف-وی 600 ای بی آر اے ایف وی 600 ای اتپریورتن میٹاسٹیٹک کولوریکٹل کینسر میں ناقص تشخیص فراہم کرتا ہے۔ بی آر اے ایف وی 600 ای کولوریکٹل کینسر میں بی آر اے ایف اور/یا ای جی ایف آر کی ٹارگٹڈ روک تھام پر، ایس آر سی کینیسز منظم طریقے سے چالو ہو جاتے ہیں۔ قابل ذکر بات یہ ہے کہ بی آر اے ایف اور ای جی ایف آر کے ساتھ ساتھ ایس آر سی کو بیک وقت نشانہ بنانے سے علاج کی تاثیر میں اضافہ ہوا ہے۔ ایس آر سی کنیز کی معاوضہ سرگرمی ایک آٹوکرائن پروسٹاگلینڈین ای 2 لوپ کے ذریعے کی جاتی ہے، جسے سائکلو آکسیجنیز-2 (سی او ایکس 2) انفیکٹرز کا استعمال کرتے ہوئے روکا جا سکتا ہے۔ خاص طور پر، بی آر اے ایف اور ای جی ایف آر کے ساتھ بیک وقت سی او ایکس 2 کو نشانہ بنانے سے پری کلینیکل ماڈلز میں نمایاں صلاحیت ظاہر ہوئی ہے، جس کی وجہ سے ٹیومر کی نشوونما کو مستقل طور پر دبایا جاتا ہے۔ بی آر اے ایف وی 600 ای پروٹیسوم انفیکٹرز کے لیے حساسیت کا تعین کرنے والا ہے۔ پروٹیسوم انفیکٹرز کا خطرہ مستقل بی آر اے ایف سگنلنگ پر منحصر ہے، کیونکہ پی ایل ایکس 4720 کے ذریعہ بی آر اے ایف-وی 600 ای ناکہ بندی نے بی آر اے ایف-اتپریورتن کولوریکٹل کینسر کے خلیوں میں کارفیلزومب کی حساسیت کو الٹ دیا۔ پروٹیسوم کی روک تھام بی آر اے ایف وی 600 ای-میوٹینٹ کولوریکٹل ٹیومر میں ایک قیمتی ٹارگیٹنگ حکمت عملی کی نمائندگی کر سکتی ہے۔ جیسا کہ اوپر ذکر کیا گیا ہے، کچھ دوا ساز کمپنیاں کینسر کے خلاف استعمال کے لیے میوٹیٹڈ بی-راف پروٹین کے مخصوص انفیکٹرز تیار کر رہی ہیں کیونکہ بی آر اے ایف ایک اچھی طرح سے سمجھا ہوا، زیادہ پیداوار کا ہدف ہے۔ ویمورافینیب (آر جی 7204 یا پی ایل ایکس 4032) کو یو ایس فوڈ اینڈ ڈرگ ایڈمنسٹریشن نے اگست 2011 میں فیز III کلینیکل ڈیٹا کی بنیاد پر میٹاسٹیٹک میلانوما کے علاج کے لیے زیلبوراف کے طور پر لائسنس دیا تھا۔ بہتر بقا کے ساتھ ساتھ 53 ٪ کے علاج کے ردعمل کی شرح بھی دیکھی گئی، اس کے مقابلے میں 7-12% سابق بہترین کیموتھراپیٹک علاج، ڈیکاربیزن کے ساتھ۔ کلینیکل ٹرائلز میں، بی-راف نے میٹاسٹیٹک میلانوما کے مریض کے زندہ رہنے کے امکانات میں اضافہ کیا۔ دوا کی اعلی افادیت کے باوجود، 20 ٪ ٹیومر اب بھی علاج کے خلاف مزاحمت پیدا کرتے ہیں۔ چوہوں میں، 20 ٪ ٹیومر 56 دنوں کے بعد مزاحم ہو جاتے ہیں۔ اگرچہ اس مزاحمت کے طریقہ کار اب بھی متنازعہ ہیں، کچھ مفروضوں میں ویمورفینب کی زیادہ تعداد کی تلافی کے لیے بی-راف کا حد سے زیادہ اظہار اور گروتھ سگنلنگ کے اپ اسٹریم اپ ریگولیشن شامل ہیں۔ مزید عام بی-راف انفیکٹرز میں جی ڈی سی-0879، پی ایل ایکس-4720، سورافینیب، ڈابرافینیب اور اینکورافینیب شامل ہیں۔ پین آر اے ایف انفیکٹرز بیلورافینیب کو پین آر اے ایف انفیکٹر کے طور پر درجہ بند کیا گیا ہے۔ ایک پین آر اے ایف انفیکٹر ڈائمر میں دونوں پروٹین کے اتپریرک فنکشن کو روکتا ہے۔ تعاملات بی آر اے ایف (جین) کے ساتھ تعامل دکھایا گیا ہے: اے کے ٹی 1، سی-راف، ایچ آر اے ایس، اور وائی ڈبلیو ایچ اے بی۔ حوالہ جات مزید پڑھنے بیرونی لنکس بی آر اے ایف میں نقائص تلاش کرنا-کینسر ریسرچ یوکے بلاگ پوسٹ کینسر پیدا کرنے والے بی آر اے ایف میوٹیشنز کی دریافت کے بارے میں (ویڈیو سمیت) اونکوجینز ای سی 2.7.11