Tn3 transposon
ٹی این 3 ٹرانسپوسن ایک 4957 بیس جوڑی متحرک جینیاتی عنصر ہے، جو پروکیریوٹس میں پایا جاتا ہے۔ یہ تین پروٹینوں کو انکوڈ کرتا ہے: β-لیکٹامیس، ایک انزائم جو β-لیکٹم اینٹی بائیوٹکس کے خلاف مزاحمت فراہم کرتا ہے (اور جین Bla کے ذریعے انکوڈ کیا جاتا ہے)۔ ٹی این 3 ٹرانسپوسز (جین ٹی این پی اے کے ذریعے انکوڈ) ٹی این 3 ریزولویز (جین ٹی این پی آر کے ذریعے انکوڈ) ابتدائی طور پر ٹرانسپوسز کے ریپریسر کے طور پر دریافت کیا گیا، ریزولویز بھی ٹی این 3 نقل کو آسان بنانے میں کردار ادا کرتا ہے (شیرٹ 1989)۔ ٹرانسپوسن 38 بی پی الٹی ہوئی ریپیٹس کے جوڑے سے بھرا ہوا ہے۔ نقل کا طریقہ کار مرحلہ 1-ریپلیکیٹو انٹیگریشن یہ پہلا مرحلہ ٹرانسپوز کے ذریعے اتپریرک ہوتا ہے۔ ٹرانسپوسن (ڈونر پلاسمڈ) پر مشتمل پلاسمڈ میزبان پلاسمڈ (ٹارگٹ پلاسمڈ) کے ساتھ فیوز ہو جاتا ہے۔ اس عمل میں، ٹرانسپوسن اور میزبان ڈی این اے کا ایک مختصر حصہ نقل کیا جاتا ہے۔ اختتامی پروڈکٹ ایک 'کوئنٹیگریٹ' پلازمیڈ ہے جس میں ٹرانسپوسن کی دو کاپیاں ہوتی ہیں۔ شاپیرو (1978) نے اس عمل کے لیے درج ذیل طریقہ کار کی تجویز پیش کی: چار سنگل اسٹرینڈ کلیویجز ہوتے ہیں-ڈونر پلاسمڈ کے ہر اسٹرینڈ پر ایک اور ٹارگٹ پلاسمڈ کے ہر اسٹرینڈ پر ایک۔ ڈونر اور ٹارگٹ پلازمیڈز ایک ساتھ جڑے ہوتے ہیں، لیکن اصل کلیویجز کی پوزیشننگ کی وجہ سے دو سنگل اسٹرینڈڈ ریجنز ہوتے ہیں۔ ڈی این اے کی نقل موجودہ اسٹرینڈ کو ٹیمپلیٹ کے طور پر استعمال کرتے ہوئے سنگل اسٹرینڈڈ علاقوں کو ڈبل اسٹرینڈڈ بناتی ہے۔ یہ اس مرحلے میں ہے کہ ٹرانسپوسن کی نقل کی جاتی ہے۔ دائیں طرف کے خاکے اس بات کی وضاحت کرتے ہیں کہ پلازمیڈز کے فیوز ہونے کے بعد کلیویجز کی پوزیشنیں بعض علاقوں کی نقل کا باعث بنتی ہیں۔ مرحلہ 2-ریزولوشن میزبان اور ٹارگٹ مالیکیولز کو الگ کرنے کے لیے ٹی این 3 ریزولوس ریس نامی ایک مخصوص سائٹ پر ٹرانسپوسن کی پرانی اور نئی کاپی کے درمیان سائٹ کے لحاظ سے مخصوص ریکومبینیشن انجام دیتا ہے، جو ٹرانسپوسن کی ہر کاپی میں موجود ہوتا ہے۔ ریس 114 بی پی لمبا ہے اور یہ 3 ذیلی سائٹس پر مشتمل ہے، یعنی سائٹس I، II اور III۔ ان سائٹس میں سے ہر ایک مختلف لمبائی (بالترتیب 28، 34 اور 25 بی پی) کی ہے اور وہ غیر مساوی طور پر 22 بی پی کے ساتھ الگ الگ سائٹس I اور II اور سائٹس II اور III کے درمیان صرف 5 بی پی کے ساتھ ہیں۔ سائٹس 6 بی پی الٹے دہرائے ہوئے نقشوں پر مشتمل ہیں جو متغیر لمبائی کی مرکزی ترتیب کو پھیلاتے ہیں۔ یہ موفٹ ریزولوس کے لیے بائنڈنگ سائٹس کے طور پر کام کرتے ہیں، تاکہ ہر سائٹ ایک ریزولوس ڈائمر کو باندھے لیکن مختلف وابستگی اور شاید قدرے مختلف پروٹین-ڈی این اے پیچیدہ فن تعمیر کے ساتھ۔ تینوں ذیلی سائٹیں دوبارہ ملاپ کے لیے ضروری ہیں۔ دوبارہ ملاپ کے وقت، ہر ذیلی سائٹ سے منسلک ریزولوس ڈائمرز کے ساتھ دو براہ راست بار بار ریز سائٹس، ایک بڑی پیچیدہ ساخت بنانے کے لیے اکٹھے ہوتے ہیں جسے سناپٹوسوم کہا جاتا ہے۔ سائٹس II اور III سے منسلک ریزولویس اس کمپلیکس کی اسمبلی کا آغاز کرتا ہے۔ اس ڈھانچے میں، جس کا عین مطابق فن تعمیر ابھی تک واضح نہیں ہے، دو ریز سائٹس اس طرح سے جڑے ہوئے ہیں کہ سائٹ I کی دو کاپیاں جوڑ دیں، جس سے ہر سائٹ سے منسلک ریزولوس ڈائمرز کو ٹیٹریمر بنانے کی اجازت ملتی ہے۔ ایک بار پھر، یہ آلات سائٹس (سائٹس II اور III) پر پابند ریزولویز ڈائمرز اور سائٹ I پر ریزولویز کے درمیان تعامل ہے جو دو ڈائمرز کو مطابقت پذیر کرنے اور ٹیٹریمر بنانے کا سبب بنتا ہے۔ ٹیٹریمر بننے کے بعد یہ فعال ہو جاتا ہے اور اوپر اور نیچے کے ڈی این اے اسٹرینڈز کو بیک وقت سائٹ I کے وسط میں 2 بی پی اوور ہینگ کے ساتھ الگ کر دیا جاتا ہے۔ اسٹرینڈ کا تبادلہ ابھی تک نامعلوم میکانزم کے ذریعے ہوتا ہے جس کے نتیجے میں 180° کی خالص گردش ہوتی ہے۔ اس کے بعد اسٹرینڈ کے تبادلے کے بعد مذہب (سٹارک اور دیگر، 1992) آتا ہے۔ دو براہ راست دہرائی جانے والی ریز سائٹس کے درمیان دوبارہ ملاپ دو اصل مالیکیولز میں "کوئنٹیگریٹ" کو الگ کرتا ہے، یا حل کرتا ہے، ہر ایک میں اب Tn3 ٹرانسپوسن کی ایک کاپی ہوتی ہے۔ ریزولوشن کے بعد یہ دونوں مالیکیول ایک سادہ دو نوڈ والے کیٹینین کے طور پر جڑے رہتے ہیں جسے ٹائپ II ٹوپو آئسومیرس (گرینڈلی 2002) کے ذریعے ویو میں آسانی سے الگ کیا جا سکتا ہے۔ وائلڈ ٹائپ ریزولویز سسٹم کے لیے بالکل ایک سپر کوائلڈ سبسٹریٹ کی ضرورت ہوتی ہے اور یہ کہ ریکومبینیشن سائٹس اسی ڈی این اے مالیکیول پر براہ راست ریپیٹ میں مبنی ہوتے ہیں۔ تاہم، متعدد "ڈی ریگولیٹڈ" یا "ہائپر ایکٹیو" میوٹینٹس جو آلات سائٹس کی ضرورت کھو چکے ہیں انہیں الگ کر دیا گیا ہے۔ یہ میوٹینٹ صرف سائٹ I کی دو کاپیوں کے درمیان ریکومبینیشن کو متحرک کرنے کی صلاحیت رکھتے ہیں، جو بنیادی طور پر ریکومبینیشن سائٹ کے سائز کو 114 بی پی سے کم کر کے صرف 28 بی پی کر دیتا ہے۔ مزید برآں، ان میوٹینٹس کو سپر کوائلنگ یا کنیکٹوٹی کی کوئی ضرورت نہیں ہے (آرنلڈ اور دیگر، 1999) اور یہ دکھایا گیا ہے کہ وہ ممالیہ خلیوں میں کام کرتے ہیں۔ ہائپر ایکٹیو ریزولویز میوٹینٹس اب تک تبدیل شدہ ترتیب کی خاصیت کے ساتھ ساتھ ساختی کام میں بھی ریزولویز بنانے میں مفید ثابت ہوئے ہیں۔ پورے ریزولویز ریکومبینیشن رد عمل کو وٹرو میں دوبارہ پیش کیا جا سکتا ہے، جس میں جنگلی قسم کے پروٹین یا ہائپر ایکٹیو میوٹینٹس کا استعمال کرتے ہوئے صرف ریزولویز، ایک سبسٹریٹ ڈی این اے اور ملٹی ویلینٹ کیٹیشن کی ضرورت ہوتی ہے۔ ہائپر ایکٹیو ریزولوس میوٹینٹس، اگر مزید تیار ہوئے تو، کری اور ایف ایل پی کا متبادل بن سکتے ہیں، جو آج تک سالماتی حیاتیات میں سب سے زیادہ استعمال ہونے والے ریکومبینیشن سسٹم ہیں۔ حوالہ جات شیرٹ، ڈی جے۔ (1989)۔ Tn3 اور متعلقہ ٹرانسپوزیبل عناصر: سائٹ کے لیے مخصوص ریکومبینیشن اور ٹرانسپوزیشن۔ برگ، ڈی۔ ای۔، ہو، ایم۔ (ایڈز) موبائل ڈی این اے میں۔ امریکن سوسائٹی فار مائکروبیولوجی، واشنگٹن، ڈی سی پی۔ 163-184 گرینڈلی، N. D. F. (2002)۔ Tn3 جیسے عناصر کی حرکت: منتقلی اور ریزولوشن کو مربوط کریں۔ موبائل ڈی این اے II میں، کریگ، این۔، کریگی، آر۔، گیلرٹ، ایم۔ اور لیمبوٹز، اے۔ (ایڈ۔ )، پی پی 272-302۔ اے ایس ایم پریس، واشنگٹن ڈی سی، یو ایس اے مالیکیولر بائیولوجی مالیکیولر جینیٹکس ڈی این اے موبائل جینیاتی عناصر