Magnetic immunoassay
مقناطیسی امیونواسے (ایم آئی اے) تشخیصی امیونواسے کی ایک قسم ہے جس میں مقناطیسی موتیوں کو روایتی انزائمز (ای ایل آئی ایس اے)، ریڈیوآئیسوٹوپس (آر آئی اے) یا فلوروسینٹ موئٹیز (فلوروسینٹ امیونواسے) کے بجائے لیبل کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے تاکہ ایک مخصوص تجزیہ کا پتہ لگایا جا سکے۔ ایم آئی اے میں اینٹی باڈی کا اس کے اینٹیجن سے مخصوص پابند ہونا شامل ہے، جہاں مقناطیسی لیبل جوڑے کے ایک عنصر سے منسلک ہوتا ہے۔ اس کے بعد مقناطیسی موتیوں کی موجودگی کا پتہ مقناطیسی ریڈر (میگنیٹومیٹر) کے ذریعے لگایا جاتا ہے جو موتیوں سے پیدا ہونے والے مقناطیسی میدان کی تبدیلی کی پیمائش کرتا ہے۔ میگنیٹومیٹر کے ذریعے ماپا جانے والا سگنل اینالیٹ (وائرس، ٹاکسن، بیکٹیریا، کارڈیک مارکر وغیرہ) کے متناسب ہوتا ہے۔ ابتدائی نمونے میں ارتکاز۔ مقناطیسی لیبل مقناطیسی موتیاں نینومیٹرک سائز کے آئرن آکسائیڈ کے ذرات سے بنے ہوتے ہیں جو پولیمر کے ساتھ جڑے ہوتے ہیں یا چپکے ہوتے ہیں۔ یہ مقناطیسی موتیوں کی حد 35 این ایم سے لے کر 4.5 مائیکرو میٹر تک ہوتی ہے۔ جزو مقناطیسی نینو پارٹیکلز 5 سے 50 این ایم تک ہوتے ہیں اور بیرونی طور پر لاگو مقناطیسی میدان کی موجودگی میں ایک منفرد معیار کی نمائش کرتے ہیں جسے سپر پیرا میگنیٹزم کہا جاتا ہے۔ سب سے پہلے 1970 میں نوبل فزکس انعام یافتہ فرانسیسی لوئس نیل نے دریافت کیا، یہ سپر پیرا مقناطیسی معیار پہلے ہی مقناطیسی گونج امیجنگ (ایم آر آئی) اور حیاتیاتی علیحدگی میں طبی استعمال کے لیے استعمال کیا جا چکا ہے، لیکن ابھی تک تجارتی تشخیصی ایپلی کیشنز میں لیبلنگ کے لیے نہیں۔ مقناطیسی لیبل اس طرح کی ایپلی کیشنز کے لیے بہت اچھی طرح سے ڈھالنے والی کئی خصوصیات کی نمائش کرتے ہیں: وہ ریجینٹ کیمسٹری یا فوٹو بلیچنگ سے متاثر نہیں ہوتے ہیں اور اس لیے وقت کے ساتھ مستحکم ہوتے ہیں، حیاتیاتی سالماتی نمونے میں مقناطیسی پس منظر عام طور پر غیر اہم ہوتا ہے، نمونے کی گندگی یا داغ کا مقناطیسی خصوصیات پر کوئی اثر نہیں ہوتا ہے، مقناطیسی موتیوں کو مقناطیسیت کے ذریعے دور سے ہیرا پھیری کی جا سکتی ہے۔ ڈیٹیکشن میگنیٹک امیونواسے (ایم آئی اے) مقناطیسی طور پر ٹیگ شدہ اینٹی باڈی کے استعمال کے ذریعے منتخب مالیکیولز یا پیتھوجینز کا پتہ لگانے کے قابل ہے۔ ELISA یا ویسٹرن بلاٹ کی طرح کام کرتے ہوئے، تجزیہ کاروں کی تعداد کا تعین کرنے کے لیے دو اینٹی باڈی بائنڈنگ کا عمل استعمال کیا جاتا ہے۔ ایم آئی اے اینٹی باڈیز کا استعمال کرتا ہے جو مقناطیسی مالا کو کوٹنگ کر رہے ہوتے ہیں۔ یہ اینٹی باڈیز براہ راست مطلوبہ پیتھوجین یا مالیکیول سے جڑے ہوتے ہیں اور جڑے ہوئے موتیوں سے نکلنے والے مقناطیسی سگنل کو میگنیٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے پڑھا جاتا ہے۔ امیونوسٹیننگ کے لیے یہ ٹیکنالوجی جو سب سے بڑا فائدہ فراہم کرتی ہے وہ یہ ہے کہ اسے مائع میڈیم میں چلایا جا سکتا ہے، جہاں ایلیسا یا ویسٹرن بلاٹنگ جیسے طریقوں کو ثانوی اینٹی باڈی (جیسے ایچ آر پی [ہارس ریڈش پیرو آکسائیڈیز]) کے قابل ہونے سے پہلے مطلوبہ ہدف کے پابند ہونے کے لیے ایک مستحکم میڈیم کی ضرورت ہوتی ہے۔ چونکہ ایم آئی اے مائع میڈیم میں کیا جا سکتا ہے اس لیے ماڈل سسٹم میں مطلوبہ مالیکیولز کی زیادہ درست پیمائش کی جا سکتی ہے۔ چونکہ قابل قدر نتائج حاصل کرنے کے لیے کوئی الگ تھلگ ہونا ضروری نہیں ہے اس لیے صارفین کسی نظام کے اندر سرگرمی کی نگرانی کر سکتے ہیں۔ ان کے ہدف کے رویے کا بہتر اندازہ لگانا۔ جن طریقوں سے یہ پتہ چل سکتا ہے وہ بہت زیادہ ہیں۔ پتہ لگانے کی سب سے بنیادی شکل کشش ثقل کے کالم کے ذریعے نمونہ چلانا ہے جس میں ثانوی اینٹی باڈی کے ساتھ پولی تھیلین میٹرکس ہوتا ہے۔ ہدف مرکب میٹرکس میں موجود اینٹی باڈی سے جڑا رہتا ہے، اور کسی بھی بقایا مادے کو منتخب کردہ بفر کا استعمال کرتے ہوئے دھویا جاتا ہے۔ اس کے بعد مقناطیسی اینٹی باڈیز کو اسی کالم سے گزارا جاتا ہے اور انکیوبیشن کی مدت کے بعد، کسی بھی غیر پابند اینٹی باڈیز کو پہلے کی طرح اسی طریقہ کا استعمال کرتے ہوئے دھویا جاتا ہے۔ ہدف سے منسلک مقناطیسی موتیوں سے حاصل ہونے والی ریڈنگ جو جھلی پر موجود اینٹی باڈیز کے ذریعے پکڑی جاتی ہے، حل میں ہدف کمپاؤنڈ کی مقدار کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ نیز، کیونکہ یہ طریقہ کار میں ایلیسا یا ویسٹرن بلاٹ سے بہت ملتا جلتا ہے، ایم آئی اے کے تجربات کو اسی پتہ لگانے کے استعمال کے لیے ڈھالا جا سکتا ہے اگر محقق اپنے ڈیٹا کی مقدار اسی طرح طے کرنا چاہتا ہے۔ میگنیٹومیٹر ایک سادہ آلہ موجودگی کا پتہ لگا سکتا ہے اور نمونے کے کل مقناطیسی سگنل کی پیمائش کر سکتا ہے، تاہم، ایک موثر ایم آئی اے تیار کرنے کا چیلنج قدرتی طور پر پائے جانے والے مقناطیسی پس منظر (شور) کو کمزور مقناطیسی لیبل والے ہدف (سگنل) سے الگ کرنا ہے۔ بائیو سینسنگ ایپلی کیشنز کے لیے بامعنی سگنل ٹو شور تناسب (ایس این آر) حاصل کرنے کے لیے مختلف طریقوں اور آلات کو استعمال کیا گیا ہے: وشال میگنیٹو مزاحم سینسرز اور اسپن والوز، پیزو مزاحم کینٹائلورز، انڈکٹو سینسرز، سپر کنڈکٹنگ کوانٹم مداخلت ڈیوائسز، اینسوٹروپک مقناطیسی مزاحم رنگز، اور چھوٹے ہال سینسرز۔ لیکن ایس این آر کو بہتر بنانے کے لیے اکثر ڈیٹا پروسیسنگ کے ذریعے بار بار اسکیننگ اور ایکسٹراپولیشن فراہم کرنے کے لیے ایک پیچیدہ آلے کی ضرورت ہوتی ہے، یا چھوٹے اور مماثل سائز کے ہدف اور سینسر کی عین مطابق صف بندی۔ اس ضرورت سے آگے، ایم آئی اے جو مقناطیسی لیبل کی غیر لکیری مقناطیسی خصوصیات کا استحصال کرتا ہے، مقناطیسی میدان کی اندرونی صلاحیت کو پلاسٹک، پانی، نائٹروسیلولوز اور دیگر مواد سے گزرنے کے لیے مؤثر طریقے سے استعمال کر سکتا ہے، اس طرح مختلف امیونواسے فارمیٹس میں حقیقی حجم کی پیمائش کی اجازت دیتا ہے۔ روایتی طریقوں کے برعکس جو سپر پیرا مقناطیسی مواد کی حساسیت کی پیمائش کرتے ہیں، غیر لکیری مقناطیسیت پر مبنی ایم آئی اے لکیری ڈیا یا پیرا مقناطیسی مواد جیسے نمونہ میٹرکس، قابل استعمال پلاسٹک اور/یا نائٹروسیلولوز کے اثرات کو ختم کرتا ہے۔ اگرچہ ان مادوں کی اندرونی مقناطیسیت بہت کمزور ہے،-10−5 (ڈیا) یا + 10−3 (پیرا) کی عام حساسیت اقدار کے ساتھ، جب کوئی بہت کم مقدار میں سپرپرمگنیٹک مواد کی تحقیقات کر رہا ہوتا ہے، جیسے کہ نینوگرام فی ٹیسٹ، تو ذیلی مادوں سے پیدا ہونے والے پس منظر کے اشارے کو نظر انداز نہیں کیا جا سکتا۔ مقناطیسی لیبل کی غیر لکیری مقناطیسی خصوصیات پر مبنی ایم آئی اے میں موتیوں کو دو تعدد، ایف 1 اور ایف 2 پر ایک متبادل مقناطیسی میدان کے سامنے رکھا جاتا ہے۔ غیر لکیری مواد جیسے سپرپرمگنیٹک لیبلز کی موجودگی میں، ایک سگنل کو مشترکہ تعدد پر ریکارڈ کیا جا سکتا ہے، مثال کے طور پر، f = f1 ± 2 × f2 پر۔ یہ سگنل ریڈنگ کنڈلی کے اندر مقناطیسی مواد کی مقدار کے بالکل متناسب ہے۔ یہ ٹیکنالوجی مقناطیسی امیونواسے کو مختلف شکلوں میں ممکن بناتی ہے جیسے: مقناطیسی لیبل عمودی بہاؤ ٹیسٹ کے ساتھ سونے کے لیبل کو تبدیل کرکے روایتی پس منظر کے بہاؤ کی جانچ جس سے بڑے حجم کے نمونوں مائیکرو فلوڈک ایپلی کیشنز اور بائیوچپ میں نایاب تجزیہ کاروں (جیسے بیکٹیریا) سے پوچھ گچھ کی اجازت ملتی ہے۔ اسے ویو ایپلی کیشنز اور ملٹی پیرامیٹرک ٹیسٹنگ کے لیے بھی بیان کیا گیا تھا۔ استعمال ایم آئی اے ایک ورسٹائل تکنیک ہے جسے مختلف قسم کے طریقوں کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ فی الحال اس کا استعمال پودوں میں وائرس کا پتہ لگانے کے لیے کیا گیا ہے تاکہ وہ پیتھوجینز کو پکڑ سکیں جو عام طور پر فصلوں جیسے گریپائن فینلیف وائرس، اور آلو وائرس ایکس کو تباہ کر دیتے ہیں۔ اس کی موافقت میں اب پورٹیبل آلات شامل ہیں جو صارف کو میدان میں حساس ڈیٹا اکٹھا کرنے کی اجازت دیتے ہیں۔ ایم آئی اے کا استعمال علاج کی دوائیوں کی نگرانی کے لیے بھی کیا جا سکتا ہے۔ گردے کے ٹرانسپلانٹ کے ایک 53 سالہ مریض کی کیس رپورٹ میں تفصیل دی گئی ہے کہ ڈاکٹر کس طرح علاج معالجے کی دوا کی مقدار کو تبدیل کرنے میں کامیاب رہے۔ امیونولوجک ٹیسٹ بلڈ ٹیسٹ میڈیکل ٹیسٹنگ کا سامان