Eukaryotic DNA replication
یوکرائیوٹک ڈی این اے کی نقل ایک محفوظ طریقہ کار ہے جو ڈی این اے کی نقل کو فی سیل سائیکل میں ایک بار تک محدود کرتا ہے۔ کروموسومل ڈی این اے کی یوکرائیوٹک ڈی این اے نقل خلیے کی نقل کے لیے مرکزی حیثیت رکھتی ہے اور یوکرائیوٹک جینوم کی دیکھ بھال کے لیے ضروری ہے۔ ڈی این اے نقل ڈی این اے پولیمریز کا عمل ہے جو اصل ٹیمپلیٹ اسٹرینڈ کی تکمیل کرنے والے ڈی این اے اسٹرینڈ کی ترکیب کرتا ہے۔ ڈی این اے کی ترکیب کے لیے، ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کو پولی میریز سے پہلے ڈی این اے ہیلیکیسز کے ذریعے کھولا جاتا ہے، جس سے دو سنگل اسٹرینڈڈ ٹیمپلیٹس پر مشتمل ایک نقل کانٹا بنتا ہے۔ نقل کے عمل ایک واحد ڈی این اے ڈبل ہیلکس کو دو ڈی این اے ہیلیکس میں نقل کرنے کی اجازت دیتے ہیں، جو مائٹوسس میں بیٹی کے خلیوں میں تقسیم ہوتے ہیں۔ ریپلیکیشن فورک پر کیے جانے والے بڑے انزیمیٹک افعال پروکیریوٹس سے لے کر یوکیریوٹس تک اچھی طرح سے محفوظ ہیں، لیکن یوکیریوٹک ڈی این اے ریپلیکیشن میں ریپلیکیشن مشینری ایک بہت بڑا کمپلیکس ہے، جو ریپلیکیشن کی جگہ پر بہت سے پروٹین کو مربوط کرتی ہے، اور ریپلیسوم بناتی ہے۔ ریپلیسوم ہر پرولیفریٹو سیل میں جینومک ڈی این اے کی مکمل نقل کے لیے ذمہ دار ہے۔ یہ عمل موروثی/جینیاتی معلومات کو والدین کے خلیے سے بیٹی کے خلیے تک اعلی اعتبار سے منتقل کرنے کی اجازت دیتا ہے اور اس طرح یہ تمام حیاتیات کے لیے ضروری ہے۔ سیل سائیکل کا زیادہ تر حصہ اس بات کو یقینی بنانے کے ارد گرد بنایا گیا ہے کہ ڈی این اے کی نقل غلطیوں کے بغیر ہوتی ہے۔ سیل سائیکل کے جی 1 مرحلے میں، ڈی این اے کی نقل کے بہت سے ریگولیٹری عمل شروع کیے جاتے ہیں۔ یوکرائٹس میں، ڈی این اے کی ترکیب کی اکثریت سیل سائیکل کے ایس مرحلے کے دوران ہوتی ہے، اور پورے جینوم کو غیر مستحکم ہونا چاہیے اور دو بیٹی کاپیاں بنانے کے لیے نقل کرنا چاہیے۔ جی 2 کے دوران، کسی بھی خراب ڈی این اے یا نقل کی غلطیوں کو درست کیا جاتا ہے۔ آخر میں، جینوم کی ایک کاپی کو مائٹوسس یا ایم مرحلے میں ہر بیٹی کے خلیے میں الگ کیا جاتا ہے۔ یہ بیٹی نقلیں ہر ایک میں پیرنٹل ڈوپلیکس ڈی این اے سے ایک اسٹرینڈ اور ایک نوزائیدہ اینٹی پیریلل اسٹرینڈ ہوتا ہے۔ یہ طریقہ کار پروکیریوٹس سے لے کر یوکیریوٹس تک محفوظ ہے اور اسے سیمی کنزرویٹو ڈی این اے ریپلیکیشن کے نام سے جانا جاتا ہے۔ ڈی این اے نقل کی جگہ کے لیے سیمی کنزرویٹو نقل کا عمل ایک کانٹے کی طرح ڈی این اے ڈھانچہ ہے، نقل کا کانٹا، جہاں ڈی این اے ہیلکس کھلا ہوتا ہے، یا غیر زخمی ہوتا ہے، شناخت کے لیے غیر جوڑے والے ڈی این اے نیوکلیوٹائڈز کو بے نقاب کرتا ہے اور آزاد نیوکلیوٹائڈز کو شامل کرنے کے لیے بیس جوڑی بناتا ہے۔ ڈبل پھنسے ہوئے ڈی این اے میں۔ یوکرائیوٹک ڈی این اے کی نقل کا آغاز ڈی این اے کی ترکیب کا پہلا مرحلہ ہے جہاں ڈی این اے ڈبل ہیلکس غیر مستحکم ہوتا ہے اور ڈی این اے پولیمرس α کی طرف سے ایک ابتدائی ابتدائی واقعہ لیڈنگ اسٹرینڈ پر ہوتا ہے۔ لیجنگ اسٹرینڈ پر پرائمنگ ایونٹ ایک ریپلیکیشن کانٹا قائم کرتا ہے۔ ڈی این اے ہیلکس کی پرائمنگ آر این اے پرائمر کی ترکیب پر مشتمل ہوتی ہے تاکہ ڈی این اے پولیمریز α کے ذریعے ڈی این اے کی ترکیب کی اجازت دی جا سکے۔ پرائمنگ ایک بار اگنے والے اسٹرینڈ پر اور ہر اوکازاکی ٹکڑے کے شروع میں پسماندہ اسٹرینڈ پر ہوتی ہے۔ نقل کی ابتدا نقل کی ابتدا سے شروع ہوتی ہے۔ ان مقامات پر مشتمل ڈی این اے کے سلسلے کو ابتدائی طور پر 1970 کی دہائی کے آخر میں پلازمیڈز کی نقل کی حمایت کرنے کی صلاحیت کی بنیاد پر الگ کیا گیا تھا، اس لیے خود مختار طور پر نقل کرنے والے سلسلے (اے آر ایس) کا عہدہ دیا گیا۔ ابتداء اپنی کارکردگی میں وسیع پیمانے پر مختلف ہوتی ہیں، جن میں سے کچھ تقریبا ہر خلیے کے چکر میں استعمال ہوتے ہیں جبکہ دیگر ایک ہزار ایس مراحل میں سے صرف ایک میں استعمال ہو سکتے ہیں۔ خمیر اے آر ایس کی کل تعداد کم از کم 1600 ہے، لیکن اگر کم فعال سائٹس کو شمار کیا جائے تو 5000 سے زیادہ ہو سکتی ہے، یعنی ہر 2000 سے 8000 بیس جوڑوں میں اے آر ایس ہو سکتا ہے۔ پری ریپلیکیٹو کمپلیکس ایک سے زیادہ ریپلیکیٹو پروٹین جمع ہوتے ہیں اور ڈی این اے ریپلیکیشن شروع کرنے کے لیے ان ریپلیکیٹو ماخذوں سے الگ ہو جاتے ہیں۔ پری-ریپلیکیشن کمپلیکس (پری-آر سی) کی تشکیل کے ساتھ ریپلیکیشن کے آغاز کے عمل میں ایک کلیدی انٹرمیڈیٹ ہے۔ ایسوسی ایشن آف دی اوریجن ریکگنیشن کمپلیکس (او آر سی) ایک ریپلیکیشن اوریجن کے ساتھ سیل ڈویژن سائیکل 6 پروٹین (سی ڈی سی 6) کو بھرتی کرتی ہے تاکہ منی کروموسوم کی دیکھ بھال (ایم سی ایم 2-7) پیچیدہ پروٹین کو لوڈ کرنے کے لیے ایک پلیٹ فارم تشکیل دیا جا سکے، جسے کرومیٹن لائسنسنگ اور ڈی این اے ریپلیکیشن فیکٹر 1 پروٹین (سی ڈی ٹی 1) سے سہولت ملتی ہے۔ او آر سی، سی ڈی سی 6، اور سی ڈی ٹی 1 مل کر سیل سائیکل کے جی 1 مرحلے کے دوران نقل کی ابتداء کے ساتھ میک ایم 2-7 کمپلیکس کی مستحکم ایسوسی ایشن کے لیے ضروری ہیں۔ نقل کی یوکرائیوٹک ابتداء کئی پروٹین کمپلیکس کی تشکیل کو کنٹرول کرتی ہے جو دو دو طرفہ ڈی این اے نقل کانٹوں کی اسمبلی کا باعث بنتی ہے۔ یہ واقعات نقل کی ابتدا میں پری ریپلیکیشن کمپلیکس (پری-آر سی) کی تشکیل سے شروع ہوتے ہیں۔ یہ عمل سیل سائیکل کے G1 مرحلے میں ہوتا ہے۔ آر سی سے پہلے کی تشکیل میں بہت سے نقل کے عوامل کی منظم اسمبلی شامل ہوتی ہے جن میں اوریجن ریکگنیشن کمپلیکس (او آر سی)، سی ڈی سی 6 پروٹین، سی ڈی ٹی 1 پروٹین، اور منی کروموسوم مینٹیننس پروٹین (ایم سی ایم 2-7) شامل ہیں۔ ایک بار پری-آر سی بننے کے بعد، کمپلیکس کی سرگرمی دو کنیز، سائکلین پر منحصر کینیز 2 (سی ڈی کے) اور ڈی بی ایف 4 پر منحصر کینیز (ڈی ڈی کے) کے ذریعے شروع ہوتی ہے جو ڈی این اے کی نقل کے آغاز سے پہلے پری-آر سی کو ابتدائی کمپلیکس میں منتقل کرنے میں مدد کرتی ہے۔ اس منتقلی میں ڈی این اے کو کھولنے اور غیر زخمی ڈی این اے کے ارد گرد متعدد یوکرائیوٹک ڈی این اے پولیمریز کو جمع کرنے کے لیے اضافی نقل کے عوامل کی منظم اسمبلی شامل ہے۔ اس سوال کا مرکز یہ ہے کہ نقل کی ابتداء پر دو طرفہ نقل کے کانٹے کیسے قائم کیے جاتے ہیں وہ طریقہ کار ہے جس کے ذریعے او آر سی ہر نقل کی ابتدا کے لیے دو سر سے سر میک ایم 2-7 کمپلیکس کو بھرتی کرتا ہے تاکہ نقل سے پہلے کا کمپلیکس تشکیل دیا جا سکے۔ اوریجن ریکگنیشن کمپلیکس پری ریپلیکیشن کمپلیکس (پری-آر سی) کی اسمبلی میں پہلا قدم اوریجن ریکگنیشن کمپلیکس (او آر سی) کو ریپلیکیشن اوریجن سے جوڑنا ہے۔ دیر سے مائٹوسس میں، سی ڈی سی 6 پروٹین باؤنڈ او آر سی میں شامل ہوتا ہے جس کے بعد سی ڈی ٹی 1-ایم سی ایم 2-7 کمپلیکس کو باندھتا ہے۔ او آر سی، سی ڈی سی 6، اور سی ڈی ٹی 1 سبھی چھ پروٹین منی کروموسوم کی دیکھ بھال (ایم سی ایم 2-7) کمپلیکس کو ڈی این اے پر لوڈ کرنے کے لیے ضروری ہیں۔ او آر سی ایک چھ ذیلی یونٹ، او آر سی 1 پی-6، پروٹین کمپلیکس ہے جو نقل کے آغاز کے لیے ڈی این اے پر نقل کی اصل جگہوں کا انتخاب کرتا ہے اور کرومیٹن سے منسلک او آر سی کو سیل سائیکل کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے۔ عام طور پر، او آر سی ذیلی اکائیوں کے کام اور سائز کو بہت سے یوکرائیوٹک جینوموں میں محفوظ رکھا جاتا ہے جس میں فرق ان کے مختلف ڈی این اے بائنڈنگ سائٹس کا ہوتا ہے۔ سب سے زیادہ وسیع پیمانے پر مطالعہ شدہ اصل شناخت کمپلیکس Saccharomyces cerevisiae یا خمیر کا ہے جو خود مختار نقل ترتیب (اے آر ایس) سے منسلک ہونے کے لیے جانا جاتا ہے۔ ایس۔ سیریوزیا او آر سی خاص طور پر 30 بیس جوڑوں کے علاقے میں پھیلے ہوئے، نقل کے خمیر کی ابتدا کے اے اور بی 1 دونوں عناصر کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ ان ترتیبات کے پابند ہونے کے لیے اے ٹی پی کی ضرورت ہوتی ہے۔ اے آر ایس ڈی این اے سے منسلک ایس سیریوسیا او آر سی کی جوہری ساخت کا تعین کیا گیا ہے۔ او آر سی 1، او آر سی 2، او آر سی 3، او آر سی 4، اور او آر سی 5 اے عنصر کو دو قسم کے تعاملات، بیس غیر مخصوص اور بیس مخصوص کے ذریعے گھیرے ہوئے ہیں، جو اے عنصر پر ڈی این اے کو موڑ دیتے ہیں۔ تمام پانچ ذیلی اکائیاں اے عنصر کے متعدد نکات پر شوگر فاسفیٹ ریڑھ کی ہڈی سے رابطہ کرتی ہیں تاکہ بنیادی خاصیت کے بغیر ایک سخت گرفت بن سکے۔ او آر سی 1 اور او آر سی 2 اے عنصر کی معمولی نالی سے رابطہ کرتے ہیں جبکہ او آر سی 4 کا ایک پروں والا ہیلکس ڈومین ایک اندراج ہیلکس (آئی ایچ) کے ذریعے اے عنصر کی بڑی نالی میں غیر متغیر ٹیز کے میتھائل گروپوں سے رابطہ کرتا ہے۔ میٹا زوان میں اس آئی ایچ کی عدم موجودگی انسانی او آر سی میں ترتیب کی خاصیت کی کمی کی وضاحت کرتی ہے۔ ایس سی او آر سی سے آئی ایچ کو ہٹانے کی وجہ سے یہ اے عنصر کے لیے اپنی مخصوصیت کھو دیتا ہے، اور پروموٹر علاقوں میں بے ساختہ اور ترجیحی طور پر (83 فیصد) جڑا رہتا ہے۔ اے آر ایس ڈی این اے بھی او آر سی 2، او آر سی 5 اور او آر سی 6 کے ساتھ تعاملات کے ذریعے بی 1 عنصر پر جھکا ہوا ہے۔ او آر سی کے ذریعہ اصل ڈی این اے کا موڑنا ارتقاء کے لحاظ سے محفوظ معلوم ہوتا ہے جس سے یہ پتہ چلتا ہے کہ یہ میک ایم 2-7 پیچیدہ لوڈنگ میکانزم کے لیے ضروری ہو سکتا ہے۔ جب او آر سی نقل کی ابتداء پر ڈی این اے سے جڑا ہوتا ہے، تو یہ پری ریپلیکیٹو کمپلیکس کے دیگر اہم ابتدائی عوامل کی اسمبلی کے لیے ایک سہارے کے طور پر کام کرتا ہے۔ سیل سائیکل کے جی 1 مرحلے کے دوران یہ پری ریپلیکیٹو کمپلیکس اسمبلی ایس مرحلے کے دوران ڈی این اے ریپلیکیشن کو چالو کرنے سے پہلے ضروری ہے۔ میٹا فیز میں کروموسوم سے کمپلیکس (او آر سی 1) کے کم از کم حصے کو ہٹانا ممالیہ او آر سی کے ضابطے کا حصہ ہے تاکہ اس بات کو یقینی بنایا جا سکے کہ میٹا فیز کی تکمیل سے قبل پری ریپلیکیٹو کمپلیکس تشکیل ختم ہو جائے۔ سی ڈی سی 6 پروٹین سیل ڈویژن سائیکل 6 (سی ڈی سی 6) پروٹین کو اوریجن ریکگنیشن کمپلیکس (او آر سی) سے جوڑنا ریپلیکیشن کی ابتدا پر پری ریپلیکیشن کمپلیکس (پری-آر سی) کی اسمبلی میں ایک ضروری قدم ہے۔ سی ڈی سی 6 اے ٹی پی پر منحصر طریقے سے ڈی این اے پر او آر سی سے جڑا ہوتا ہے، جس سے اوریجن بائنڈنگ کے پیٹرن میں تبدیلی آتی ہے جس کے لیے اورک 1 اے ٹی پیز کی ضرورت ہوتی ہے۔ کرومیٹن کے ساتھ منسلک ہونے کے لیے سی ڈی سی 6 کو او آر سی کی ضرورت ہوتی ہے اور اس کے نتیجے میں سی ڈی ٹی 1-ایم سی ایم 2-7 ہیپٹیمر کو کرومیٹن سے جڑے رہنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ او آر سی-سی ڈی سی 6 کمپلیکس ایک رنگ کی شکل کا ڈھانچہ بناتا ہے اور دیگر اے ٹی پی پر منحصر پروٹین مشینوں کے مترادف ہے۔ سی ڈی سی 6 کی سطح اور سرگرمی اس تعدد کو منظم کرتی ہے جس کے ساتھ سیل سائیکل کے دوران نقل کی ابتداء کا استعمال کیا جاتا ہے۔ سی ڈی ٹی 1 پروٹین کرومیٹن لائسنسنگ اور ڈی این اے ریپلیکیشن فیکٹر 1 (سی ڈی ٹی 1) پروٹین ڈی این اے ریپلیکیشن کے لیے کرومیٹن کے لائسنسنگ کے لیے ضروری ہے۔ ایس سیریوسی میں، سی ڈی ٹی 1 میک ایم 2-7 سنگل ہیکسامیر کے بائیں ہاتھ والے اوپن رنگ ڈھانچے کو مستحکم کرکے کروموسوم پر ایک وقت میں میک ایم 2-7 کمپلیکس کو لوڈ کرنے میں سہولت فراہم کرتا ہے۔ سی ڈی ٹی 1 کو کرومیٹن میں میک ایم پروٹین کی ایسوسی ایشن کو باہمی تعاون سے فروغ دینے کے لیے سی ڈی سی 6 کے سی ٹرمینس کے ساتھ منسلک دکھایا گیا ہے۔ او سی سی ایم (او آر سی-سی ڈی سی 6-سی ڈی ٹی 1-ایم سی ایم) کمپلیکس کا کریو-ای ایم ڈھانچہ ظاہر کرتا ہے کہ سی ڈی ٹی 1-سی ٹی ڈی میک ایم 6-ڈبلیو ایچ ڈی کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ میٹازون میں، سیل سائیکل کے دوران سی ڈی ٹی 1 سرگرمی کو پروٹین جیمینن کے ساتھ اس کی وابستگی کے ذریعے مضبوطی سے منظم کیا جاتا ہے، جو دونوں ڈی این اے کی دوبارہ نقل کو روکنے کے لیے ایس مرحلے کے دوران سی ڈی ٹی 1 سرگرمی کو روکتا ہے اور اسے ہر جگہ اور اس کے بعد پروٹیولیسس سے روکتا ہے۔ منی کروموسوم مینٹیننس پروٹین کمپلیکس منی کروموسوم مینٹیننس (ایم سی ایم) پروٹین کا نام ایس سیریوسیا میں ڈی این اے ریپلیکیشن انیشی ایشن میوٹینٹس کے لیے جینیاتی اسکرین کے نام پر رکھا گیا تھا جو اے آر ایس مخصوص انداز میں پلازمیڈ استحکام کو متاثر کرتے ہیں۔ میک ایم 2، میک ایم 3، میک ایم 4، میک ایم 5، میک ایم 6 اور میک ایم 7 ایک ہیکسامیرک کمپلیکس بناتے ہیں جس میں میک ایم 2 اور میک ایم 5 کے درمیان فرق کے ساتھ اوپن رنگ ڈھانچہ ہوتا ہے۔ کرومیٹن پر میک ایم پروٹین کی اسمبلی کے لیے اوریجن ریکگنیشن کمپلیکس (او آر سی)، سی ڈی سی 6، اور سی ڈی ٹی 1 کے مربوط فنکشن کی ضرورت ہوتی ہے۔ ایک بار جب میک ایم پروٹین کو کرومیٹن پر لوڈ کر دیا جاتا ہے، تو او آر سی اور سی ڈی سی 6 کو بعد میں ڈی این اے کی نقل کو روکے بغیر کرومیٹن سے ہٹایا جا سکتا ہے۔ اس مشاہدے سے پتہ چلتا ہے کہ پری ریپلیکیشن کمپلیکس کا بنیادی کردار میک ایم پروٹین کو صحیح طریقے سے لوڈ کرنا ہے۔ کرومیٹن پر موجود میک ایم پروٹین مرکزی چینل میں ایک کنک بنانے کے لیے سر سے سر تک ڈبل ہیکسامیر بناتے ہیں جس میں دونوں حلقے قدرے جھکے ہوئے، مڑے ہوئے اور آف سینٹرڈ ہوتے ہیں جہاں باؤنڈ ڈی این اے کو دونوں حلقوں کے انٹرفیس پر پکڑا جاتا ہے۔ ہر ہیکسامیرک میک ایم 2-7 رنگ پہلے ریپلیسوم کی اسمبلی کے لیے سکافولڈ کے طور پر کام کرتا ہے اور پھر اتپریرک سی ایم جی (سی ڈی سی 45-ایم سی ایم-جی آئی این ایس) ہیلیکیس کے بنیادی حصے کے طور پر کام کرتا ہے، جو ریپلیسوم کا ایک اہم جزو ہے۔ ہر میک ایم پروٹین کا دیگر تمام پروٹینوں سے بہت زیادہ تعلق ہوتا ہے، لیکن ہر ذیلی اکائی کی اقسام کو ممتاز کرنے والے منفرد سلسلے یوکرائٹس میں محفوظ ہوتے ہیں۔ تمام یوکرائٹس میں بالکل چھ میک ایم پروٹین اینالاگس ہوتے ہیں جو ہر ایک موجودہ کلاس (میک ایم 2-7) میں سے ایک میں آتے ہیں، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ہر میک ایم پروٹین کا ایک منفرد اور اہم کام ہوتا ہے۔ ڈی این اے ہیلیکیس سرگرمی کے لیے منی کروموسوم کی دیکھ بھال کے پروٹین کی ضرورت ہوتی ہے۔ ایس مرحلے کے دوران چھ میک ایم پروٹینوں میں سے کسی کو بھی غیر فعال کرنا ناقابل واپسی طور پر ریپلیکیشن کانٹے کی مزید ترقی کو روکتا ہے جس سے یہ پتہ چلتا ہے کہ ہیلیکیس کو ری سائیکل نہیں کیا جا سکتا اور اسے ریپلیکیشن کی ابتداء پر جمع کیا جانا چاہیے۔ منی کروموسوم کی دیکھ بھال پروٹین کمپلیکس ہیلیکیس سرگرمی کے ساتھ، کمپلیکس نے اے ٹی پیز سرگرمی کو بھی منسلک کیا ہے۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ میک ایم پروٹین کمپلیکس کے اندر میک ایم پروٹین کے مخصوص اتپریرک جوڑے ہوتے ہیں جو اے ٹی پی ہائیڈرولیسس کو مربوط کرنے کے لیے مل کر کام کرتے ہیں۔ میک ایم 2-7 کمپلیکس کے کریو-ای ایم ڈھانچوں سے تصدیق شدہ ان مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ میک ایم کمپلیکس ایک ہیکسامیر ہے جس میں ذیلی اکائیاں میک ایم 2-میک ایم 6-میک ایم 4-میک ایم 7-میک ایم 3-میک ایم 5-کی ترتیب میں ایک رنگ میں ترتیب دی گئی ہیں۔ ہر اتپریرک جوڑے کے دونوں ممبران اس تشکیل میں حصہ ڈالتے ہیں جو اے ٹی پی بائنڈنگ اور ہائیڈرولیسس کی اجازت دیتا ہے اور فعال اور غیر فعال ذیلی اکائیوں کا مرکب ممکنہ طور پر میک ایم ہیکسامیرک کمپلیکس کو اے ٹی پی بائنڈنگ اور ہائیڈرولیسس کو مکمل کرنے کی اجازت دیتا ہے تاکہ ایک مربوط اے ٹی پیز سرگرمی پیدا کی جا سکے۔ منی کروموسوم کی دیکھ بھال کے پروٹین کی نیوکلیئر لوکلائزیشن کو ابھرتے ہوئے خمیر کے خلیوں میں منظم کیا جاتا ہے۔ میک ایم پروٹین سیل سائیکل کے جی 1 مرحلے اور ایس مرحلے میں نیوکلئس میں موجود ہوتے ہیں، لیکن جی 2 مرحلے اور ایم مرحلے کے دوران سائٹوپلازم میں برآمد ہوتے ہیں۔ سیل نیوکلئس میں داخل ہونے کے لیے ایک مکمل اور برقرار چھ ذیلی یونٹ میک ایم کمپلیکس کی ضرورت ہوتی ہے۔ ایس سیریوسیا میں، جوہری برآمد کو سائکلین پر منحصر کنیز (سی ڈی کے) سرگرمی کے ذریعے فروغ دیا جاتا ہے۔ میک ایم پروٹین جو کرومیٹن سے وابستہ ہیں سی ڈی کے تک رسائی کی کمی کی وجہ سے سی ڈی کے برآمدی مشینری سے محفوظ ہیں۔ ابتدائی کمپلیکس سیل سائیکل کے جی 1 مرحلے کے دوران، نقل کے ابتدائی عوامل، اوریجن ریکگنیشن کمپلیکس (او آر سی)، سی ڈی سی 6، سی ڈی ٹی 1، اور منی کروموسوم مینٹیننس (ایم سی ایم) پروٹین کمپلیکس، ایم سی ایم رنگ کمپلیکس کا ہیڈ ٹو ہیڈ ڈائمر بنانے کے لیے ترتیب وار ڈی این اے سے جڑے ہوتے ہیں، جسے پری ریپلیکیشن کمپلیکس (پری-آر سی) کہا جاتا ہے۔ جب کہ خمیر پری-آر سی ایک بند ڈی این اے کمپلیکس بناتا ہے، انسانی پری-آر سی ایک کھلا کمپلیکس بناتا ہے۔ جی 1 مرحلے کی سیل سائیکل کے ایس مرحلے میں منتقلی پر، ایس مرحلے کے مخصوص سائکلین پر منحصر پروٹین کنیز (سی ڈی کے) اور سی ڈی سی 7/ڈی بی ایف 4 کینیز (ڈی ڈی کے) غیر فعال پری آر سی کو ایک فعال کمپلیکس میں تبدیل کر دیتے ہیں جو دو دو طرفہ نقلوں کو جمع کرنے کے قابل ہوتا ہے۔ کریو ای ایم ڈھانچوں سے پتہ چلتا ہے کہ دو ڈی ڈی کے آزادانہ طور پر ایم سی ایم ڈبل ہیکسامر کے انٹرفیس پر ڈوک کرتے ہیں جو دونوں رنگوں میں پھیلے ہوئے ہیں۔ میک ایم 4، میک ایم 2 اور میک ایم 6 کے این ٹی ایز پر متعدد سبسٹریٹس کا ترتیب وار فاسفوریلیشن ایک ووبل میکانزم کے ذریعے حاصل کیا جاتا ہے جس کے تحت ڈی بی ایف 4 مختلف ووبل اسٹیٹس کو اپنے متعدد سبسٹریٹس پر سی ڈی سی 7 کی پوزیشن کے لیے فرض کرتا ہے۔ ایم سی ایم ڈبل ہیکسامیر، خاص طور پر ایم سی ایم 4-این ایس ڈی کا ڈی ڈی کے کے ذریعے فاسفوریلیشن خمیر میں عملداری کے لیے ضروری ہے۔ سی ڈی سی 45 اور جی آئی این ایس کی بھرتی ڈی ڈی کے اور سی ڈی کے کے ذریعے ایم سی ایم کے فعال ہونے کے بعد ہوتی ہے۔ سی ڈی سی 45 پروٹین سیل ڈویژن سائیکل 45 (سی ڈی سی 45) پروٹین پری ریپلیکیٹو کمپلیکس کو ابتدائی کمپلیکس میں تبدیل کرنے کے لیے ایک اہم جزو ہے۔ سی ڈی سی 45 پروٹین ابتدا سے پہلے نقل کی ابتداء پر جمع ہوتا ہے اور Saccharomyces cerevisiae میں نقل شروع کرنے کے لیے ضروری ہے، اور توسیع کے دوران اس کا ایک اہم کردار ہوتا ہے۔ اس طرح، کروموسومل ڈی این اے نقل کے آغاز اور توسیع دونوں مراحل میں سی ڈی سی 45 کے مرکزی کردار ہیں۔ Cdc45 کرومیٹن کے ساتھ G1 مرحلے کے آخر میں آغاز کے آغاز کے بعد اور سیل سائیکل کے S مرحلے کے دوران وابستہ ہوتا ہے۔ سی ڈی سی 45 جسمانی طور پر میک ایم 5 کے ساتھ وابستہ ہوتا ہے اور میک ایم جین خاندان کے چھ میں سے پانچ ارکان اور او آر سی 2 جین کے ساتھ جینیاتی تعاملات کو ظاہر کرتا ہے۔ کرومیٹن پر سی ڈی سی 45 کی لوڈنگ دیگر مختلف ریپلیکیشن پروٹینز کو لوڈ کرنے کے لیے اہم ہے، بشمول ڈی این اے پولیمریز α، ڈی این اے پولیمریز ε، ریپلیکیشن پروٹین A (آر پی اے) اور کرومیٹن پر سیل نیوکلیئر اینٹیجن (پی سی این اے) کو بڑھانا۔ زینوپس نیوکلئس سے پاک نظام کے اندر، یہ ظاہر کیا گیا ہے کہ سی ڈی سی 45 پلازمیڈ ڈی این اے کو کھولنے کے لیے ضروری ہے۔ زینوپس نیوکلئس سے پاک نظام یہ بھی ظاہر کرتا ہے کہ کرومیٹن سے جڑا ہوا ڈی این اے غیر متزلزل اور سخت آر پی اے صرف سی ڈی سی 45 کی موجودگی میں ہوتا ہے۔ کرومیٹن کے ساتھ سی ڈی سی 45 کی بائنڈنگ سی ایل بی-سی ڈی سی 28 کنیز سرگرمی کے ساتھ ساتھ فعال سی ڈی سی 6 اور ایم سی ایم 2 پر منحصر ہے، جس سے پتہ چلتا ہے کہ سی ڈی سی 45 ایس-فیز سائکلین پر منحصر کنیز (سی ڈی کے) کو چالو کرنے کے بعد پری-آر سی کے ساتھ منسلک ہوتا ہے۔ جیسا کہ وقت اور سی ڈی کے انحصار سے ظاہر ہوتا ہے، سی ڈی سی 45 کا کرومیٹن سے پابند ہونا ڈی این اے نقل کے آغاز کے عزم کے لیے اہم ہے۔ ایس مرحلے کے دوران، سی ڈی سی 45 کرومیٹن پر میک ایم پروٹین کے ساتھ جسمانی طور پر تعامل کرتا ہے ؛ تاہم، کرومیٹن سے سی ڈی سی 45 کی علیحدگی میک ایم کے مقابلے میں سست ہوتی ہے، جو اس بات کی نشاندہی کرتی ہے کہ پروٹین مختلف میکانزم کے ذریعے جاری کیے جاتے ہیں۔ جی آئی این ایس چھ منی کروموسوم کی دیکھ بھال کے پروٹین اور سی ڈی سی 45 ابتدائی اور طول و عرض کے دوران نقل کے کانٹوں کی نقل و حرکت اور ڈی این اے کو کھولنے کے لیے ضروری ہیں۔ ابتداء کے دوران نقل کی ابتداء پر میک ایم اور سی ڈی سی 45 کے تعامل کے لیے جی آئی این ایس ضروری ہیں اور پھر ڈی این اے نقل کے کانٹوں پر جیسے جیسے نقل تیار ہوتا ہے۔ جی آئی این ایس کمپلیکس چار چھوٹے پروٹین ایس ایل ڈی 5 (سی ڈی سی 105)، پی ایس ایف 1 (سی ڈی سی 101)، پی ایس ایف 2 (سی ڈی سی 102) اور پی ایس ایف 3 (سی ڈی سی 103) پر مشتمل ہے، جی آئی این ایس 'گو، آئیچی، نی، سان' کی نمائندگی کرتا ہے جس کا مطلب جاپانی میں '5، 1، 2، 3' ہے۔ سی ڈی سی 45، میک ایم 2-7 اور جی آئی این ایس مل کر سی ایم جی ہیلیکیس بناتے ہیں، جو ریپلیسوم کا ریپلیکیٹو ہیلیکیس ہے۔ اگرچہ اکیلے میک ایم 2-7 کمپلیکس میں کمزور ہیلیکیس سرگرمی ہوتی ہے۔ مضبوط ہیلیکیس سرگرمی کے لیے سی ڈی سی 45 اور جی آئی این ایس کی ضرورت ہوتی ہے۔ میک ایم 10 میک ایم 10 کروموسوم کی نقل کے لیے ضروری ہے اور منی کروموسوم کی دیکھ بھال 2-7 ہیلیکیس کے ساتھ تعامل کرتا ہے جو ڈی این اے کی نقل کی ابتدا میں غیر فعال شکل میں لوڈ ہوتا ہے۔ میک ایم 10 اتپریرک ڈی این اے پولیمریز α کو بھی چیپرون کرتا ہے اور نقل کے کانٹوں پر پولیمریز کو مستحکم کرنے میں مدد کرتا ہے۔ ڈی ڈی کے اور سی ڈی کے کنیز ایس مرحلے کے آغاز پر، پری ریپلیکیٹو کمپلیکس کو دو ایس مرحلے کے مخصوص کنیز کے ذریعے چالو کیا جانا چاہیے تاکہ نقل کی ابتدا پر ایک ابتدائی کمپلیکس تشکیل دی جا سکے۔ ایک کنیز سی ڈی سی 7-ڈی بی ایف 4 کینیز ہے جسے ڈی بی ایف 4 انحصار کینیز (ڈی ڈی کے) کہا جاتا ہے اور دوسرا سائکلین انحصار کینیز (سی ڈی کے) ہے۔ خمیر اور زینوپس میں سی ڈی سی 45 کی کرومیٹن بائنڈنگ جانچ سے پتہ چلتا ہے کہ سی ڈی کے ایکشن کا ایک ڈاون اسٹریم ایونٹ کرومیٹن پر سی ڈی سی 45 کو لوڈ کر رہا ہے۔ سی ڈی سی 6 کو سی ڈی سی 6 اور سی ڈی کے کے درمیان تعلق اور سی ڈی سی 6 کے سی ڈی کے پر منحصر فاسفوریلیشن کی وجہ سے سی ڈی سی 6 کو سی ڈی کے ایکشن کا ہدف سمجھا جاتا ہے۔ سی ڈی سی 6 کے سی ڈی کے پر منحصر فاسفوریلیشن کو ایس مرحلے میں داخلے کے لیے ضروری سمجھا گیا ہے۔ ڈی ڈی کے کی اتپریرک ذیلی اکائیاں، سی ڈی سی 7، اور ایکٹیویٹر پروٹین، ڈی بی ایف 4، دونوں یوکرائٹس میں محفوظ ہیں اور سیل سائیکل کے ایس مرحلے کے آغاز کے لیے ضروری ہیں۔ نقل کے کرومیٹن ماخذ پر سی ڈی سی 45 کو لوڈ کرنے کے لیے ڈی بی ایف 4 اور سی ڈی سی 7 دونوں کی ضرورت ہوتی ہے۔ ڈی ڈی کے کنیز کے بائنڈنگ کا ہدف میک ایم کمپلیکس کی کرومیٹن سے جڑی شکل ہے۔ ہائی ریزولوشن کریو ای ایم ڈھانچوں سے پتہ چلتا ہے کہ ڈی ڈی کے کی ڈی بی ایف 4 ذیلی اکائی ڈی این اے سے منسلک ایم سی ایم-ڈی ایچ کے ہیکسامیر انٹرفیس میں پھیلی ہوئی ہے، جس سے ایک ہیکسامیر کے ایم سی ایم 2 اور مخالف ہیکسامیر کے ایم سی ایم 4/6 سے رابطہ ہوتا ہے۔ میک ایم 2، میک ایم 4 اور میک ایم 6 ڈی ڈی کے کے ذریعے فاسفوریلیشن کے تمام سبسٹریٹ ہیں لیکن میک ایم 4 کا صرف این-ٹرمینل سیرائن/تھریونین سے بھرپور ڈومین (این ایس ڈی) ایک ضروری ڈی ڈی کے ہدف ہے۔ این ایس ڈی کا فاسفوریلیشن میک ایم ہیلیکیس سرگرمی کو چالو کرنے کا باعث بنتا ہے۔ ڈی پی بی 11، ایس ایل ڈی 3، اور ایس ایل ڈی 2 پروٹین ایس ایل ڈی 3، ایس ایل ڈی 2، اور ڈی پی بی 11 بہت سے نقل پروٹین کے ساتھ تعامل کرتے ہیں۔ ایس ایل ڈی 3 اور سی ڈی سی 45 ایک کمپلیکس بناتے ہیں جو جی 11 مرحلے میں بھی نقل کی ابتدائی ابتداء پر پری-آر سی سے وابستہ ہے اور ایس مرحلے میں نقل کی بعد کی ابتداء کے ساتھ باہمی طور پر میک ایم پر منحصر ہے۔ ڈی پی بی 11 اور ایس ایل ڈی 2 پولیمیرس کے ساتھ تعامل کرتے ہیں اور کراس لنکنگ تجربات نے اشارہ کیا ہے کہ ڈی پی بی 11 اور پولیمیرس ایس مرحلے میں شریک ہوتے ہیں اور نقل کی ابتداء سے وابستہ ہوتے ہیں۔ ایس ایل ڈی 3 اور ایس ایل ڈی 2 کو سی ڈی کے کے ذریعے فاسفوریلیٹ کیا جاتا ہے، جو دو نقل پروٹین کو ڈی پی بی 11 سے منسلک کرنے کے قابل بناتا ہے۔ ڈی پی بی 11 میں بی آر سی اے 1 سی ٹرمینس (بی آر سی ٹی) ڈومینز کے دو جوڑے تھے جنہیں فاسفوپیپٹائڈ بائنڈنگ ڈومینز کے نام سے جانا جاتا ہے۔ بی آر سی ٹی ڈومینز کا این-ٹرمینل جوڑا فاسفوریلیٹڈ ایس ایل ڈی 3 سے جڑا ہوتا ہے، اور سی-ٹرمینل جوڑا فاسفوریلیٹڈ ایس ایل ڈی 2 سے جڑا ہوتا ہے۔ خمیر میں ڈی این اے بڈنگ کے سی ڈی کے پر منحصر ایکٹیویشن کے لیے یہ دونوں تعاملات ضروری ہیں۔ ڈی پی بی 11 جی آئی این ایس کے ساتھ بھی تعامل کرتا ہے اور کروموسومل ڈی این اے نقل کے آغاز اور توسیع کے مراحل میں حصہ لیتا ہے۔ جی آئی این ایس نقل کرنے والے پروٹینوں میں سے ایک ہے جو نقل کرنے والے کانٹوں پر پایا جاتا ہے اور سی ڈی سی 45 اور ایم سی ایم کے ساتھ ایک کمپلیکس بناتا ہے۔ ڈی پی بی 11، ایس ایل ڈی 2، اور ایس ایل ڈی 3 کے درمیان یہ فاسفوریلیشن پر منحصر تعاملات ڈی این اے کی نقل کے سی ڈی کے پر منحصر ایکٹیویشن کے لیے ضروری ہیں، اور کچھ تجربات کے اندر کراس لنکنگ ریجینٹس کا استعمال کرکے، ایک نازک کمپلیکس کی شناخت کی گئی جسے پری لوڈنگ کمپلیکس (پری-ایل سی) کہا جاتا ہے۔ اس کمپلیکس میں پول، جی آئی این ایس، ایس ایل ڈی 2، اور ڈی پی بی 11 شامل ہیں۔ پری-ایل سی سی ڈی کے پر منحصر اور ڈی ڈی کے پر منحصر انداز میں ابتداء کے ساتھ کسی بھی ایسوسی ایشن سے پہلے تشکیل پاتا ہے اور سی ڈی کے سرگرمی پری-ایل سی کی تشکیل کے ذریعے ڈی این اے کی نقل کے آغاز کو منظم کرتی ہے۔ طول و عرض پری ریپلیکیٹو کمپلیکس (پری-آر سی) کی تشکیل ڈی این اے ریپلیکیشن کے آغاز کے لیے ممکنہ مقامات کی نشاندہی کرتی ہے۔ ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کو گھیرے ہوئے منی کروموسوم مینٹیننس کمپلیکس کے مطابق، پری-آر سی کی تشکیل اصل ڈی این اے کو فوری طور پر کھولنے یا ڈی این اے پولیمرس کی بھرتی کا باعث نہیں بنتی ہے۔ اس کے بجائے، سیل سائیکل کے جی 1 کے دوران بننے والا پری-آر سی صرف ڈی این اے کو کھولنے اور خلیوں کے جی 1 سے سیل سائیکل کے ایس مرحلے میں منتقل ہونے کے بعد نقل شروع کرنے کے لیے چالو کیا جاتا ہے۔ ایک بار جب ابتدائی کمپلیکس بن جاتا ہے اور خلیات ایس مرحلے میں گزر جاتے ہیں، تو کمپلیکس پھر ایک نقل بن جاتا ہے۔ یوکرائیوٹک ریپلیسوم کمپلیکس ڈی این اے ریپلیکیشن کو مربوط کرنے کے لیے ذمہ دار ہے۔ آگے اور پیچھے رہنے والے تاروں پر نقل ڈی این اے پولیمریز ε اور ڈی این اے پولیمریز δ کے ذریعے کی جاتی ہے۔ کلاسپین، اینڈ 1، ریپلیکیشن فیکٹر سی کلیمپ لوڈر اور فورک پروٹیکشن کمپلیکس سمیت بہت سے ریپلیسوم عوامل پولیمریز افعال کو منظم کرنے اور سی ڈی سی 45-ایم سی ایم-جی آئی این ایس کمپلیکس کے ذریعہ ٹیمپلیٹ اسٹرینڈ کو کھولنے کے ساتھ ڈی این اے کی ترکیب کو مربوط کرنے کے ذمہ دار ہیں۔ جیسے جیسے ڈی این اے غیر مستحکم ہوتا ہے موڑ کی تعداد کم ہوتی جاتی ہے۔ اس کی تلافی کے لیے رتھ نمبر بڑھ جاتا ہے، جس سے ڈی این اے میں مثبت سپر کوئلز کا تعارف ہوتا ہے۔ یہ سپر کوئلز ڈی این اے کی نقل کو روکنے کا سبب بنیں گے اگر انہیں نہیں ہٹایا گیا۔ نقل کے کانٹے سے پہلے ان سپر کوئلز کو ہٹانے کے لیے ٹوپو آئسومیرس ذمہ دار ہوتے ہیں۔ ریپلیسوم ہر پرولیفریٹو سیل میں پورے جینومک ڈی این اے کی نقل کرنے کے لیے ذمہ دار ہے۔ بیس جوڑی اور زنجیر کی تشکیل کے رد عمل، جو ڈٹر ہیلکس بناتے ہیں، ڈی این اے پولیمریز کے ذریعے اتپریرک ہوتے ہیں۔ یہ انزائم سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کے ساتھ حرکت کرتے ہیں اور ٹیمپلیٹ اسٹرینڈ کو "پڑھ کر" اور مناسب پیورین نیوکلیوبیسز، اڈینائن اور گوانائن، اور پیریمیڈائن نیوکلیوبیسز، تھامین اور سائٹوسین کو شامل کرنے کی اجازت دے کر نوزائیدہ ڈی این اے اسٹرینڈ کی توسیع کی اجازت دیتے ہیں۔ فعال آزاد ڈی آکسی ریب نیوکلیوٹائڈز خلیے میں ڈی آکسی ریب نیوکلیوٹائڈ ٹرائی فاسفیٹس (ڈی این ٹی پیز) کے طور پر موجود ہوتے ہیں۔ یہ آزاد نیوکلیوٹائڈز آخری شامل کردہ نیوکلیوٹائڈ پر ایک بے نقاب 3 '-ہائیڈروکسیل گروپ میں شامل کیے جاتے ہیں۔ اس تعامل میں، آزاد ڈی این ٹی پی سے ایک پائروفاسفیٹ خارج ہوتا ہے، جو پولیمرائزیشن تعامل کے لیے توانائی پیدا کرتا ہے اور 5 'مونو فاسفیٹ کو بے نقاب کرتا ہے، جو پھر 3' آکسیجن سے ہم آہنگی سے جڑا ہوتا ہے۔ مزید برآں، غلط طور پر داخل کردہ نیوکلیوٹائڈز کو ہٹایا جا سکتا ہے اور توانائی کے لحاظ سے سازگار رد عمل میں صحیح نیوکلیوٹائڈز سے تبدیل کیا جا سکتا ہے۔ یہ خاصیت مناسب پروف ریڈنگ اور ڈی این اے کی نقل کے دوران ہونے والی غلطیوں کی مرمت کے لیے اہم ہے۔ ریپلیکیشن فورک ریپلیکیشن فورک نئے الگ شدہ ٹیمپلیٹ اسٹرینڈز کے درمیان جنکشن ہے، جسے لیڈنگ اور لیگنگ اسٹرینڈز کہا جاتا ہے، اور ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے۔ چونکہ ڈوپلیکس ڈی این اے مخالف متوازی ہے، اس لیے ڈی این اے کی نقل دو نئے تاروں کے درمیان مخالف سمتوں میں ہوتی ہے، لیکن تمام ڈی این اے پولیمرس نئے ترکیب شدہ تار کے حوالے سے 5 'سے 3' سمت میں ڈی این اے کی ترکیب کرتے ہیں۔ ڈی این اے نقل کے دوران مزید ہم آہنگی کی ضرورت ہوتی ہے۔ دو ریپلیکیٹو پولیمرس ڈی این اے کو مخالف سمتوں میں ترکیب کرتے ہیں۔ پولیمیرس ε "سرکردہ" ڈی این اے اسٹرینڈ پر ڈی این اے کو مسلسل ترکیب کرتا ہے کیونکہ یہ اسی سمت کی طرف اشارہ کر رہا ہے جس طرح ڈی این اے کو ریپلیسوم کے ذریعے کھولا جاتا ہے۔ اس کے برعکس، پولیمریز δ "لیجنگ" اسٹرینڈ پر ڈی این اے کی ترکیب کرتا ہے، جو کہ مخالف ڈی این اے ٹیمپلیٹ اسٹرینڈ ہے، ٹکڑے ٹکڑے یا متضاد انداز میں۔ لیجنگ اسٹرینڈ پر ڈی این اے ریپلیکیشن پروڈکٹس کے غیر متزلزل حصوں کو اوکازاکی ٹکڑوں کے نام سے جانا جاتا ہے اور یوکرائیوٹک ریپلیکیشن کانٹوں پر لمبائی میں تقریبا 100 سے 200 بیس ہوتے ہیں۔ پسماندہ اسٹرینڈ میں عام طور پر سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کے لمبے حصے ہوتے ہیں جو سنگل اسٹرینڈڈ بائنڈنگ پروٹین کے ساتھ لیپت ہوتے ہیں، جو ثانوی ڈھانچے کی تشکیل کو روک کر سنگل اسٹرینڈڈ ٹیمپلیٹس کو مستحکم کرنے میں مدد کرتے ہیں۔ یوکرائٹس میں، یہ سنگل اسٹرینڈڈ بائنڈنگ پروٹین ایک ہیٹروٹریمیرک کمپلیکس ہیں جسے ریپلیکیشن پروٹین اے (آر پی اے) کہا جاتا ہے۔ ہر اوکازاکی ٹکڑے سے پہلے ایک آر این اے پرائمر ہوتا ہے، جو ترکیب کے دوران اگلے اوکازاکی ٹکڑے کے جلوس سے بے گھر ہو جاتا ہے۔ آر نیس ایچ ڈی این اے: آر این اے ہائبرڈ کو پہچانتا ہے جو آر این اے پرائمرز کے استعمال سے پیدا ہوتے ہیں اور ایک پرائمر: ٹیمپلیٹ جنکشن کو پیچھے چھوڑ کر نقل شدہ اسٹرینڈ سے انہیں ہٹانے کے لیے ذمہ دار ہوتے ہیں۔ ڈی این اے پولیمریز α، ان مقامات کو پہچانتا ہے اور پرائمر ہٹانے سے چھوڑے گئے وقفوں کو لمبا کرتا ہے۔ یوکرائیوٹک خلیوں میں، آر این اے پرائمر کے فورا اوپر کی طرف ڈی این اے کے حصے کی ایک چھوٹی سی مقدار بھی بے گھر ہو جاتی ہے، جس سے ایک فلیپ ڈھانچہ پیدا ہوتا ہے۔ اس فلیپ کو پھر اینڈو نیوکلیز کے ذریعے الگ کیا جاتا ہے۔ ریپلیکیشن فورک پر، فلیپ کو ہٹانے کے بعد ڈی این اے میں موجود خلا کو ڈی این اے لیگیز I کے ذریعے سیل کیا جاتا ہے، جو نئے ترکیب شدہ اسٹرینڈ کے 3 '-OH اور 5' فاسفیٹ کے درمیان رہ جانے والے نک کی مرمت کرتا ہے۔ یوکرائیوٹک اوکازاکی ٹکڑے کی نسبتا مختصر نوعیت کی وجہ سے، ڈی این اے کی نقل کی ترکیب جو پسماندہ اسٹرینڈ پر مسلسل ہوتی ہے، لیڈنگ اسٹرینڈ کی ترکیب سے کم موثر اور زیادہ وقت طلب ہوتی ہے۔ ایک بار جب تمام آر این اے پرائمرز کو ہٹا دیا جاتا ہے اور نک کی مرمت ہو جاتی ہے تو ڈی این اے کی ترکیب مکمل ہو جاتی ہے۔ لیڈنگ اسٹرینڈ ڈی این اے ریپلیکیشن کے دوران، ریپلیسوم پیرنٹل ڈوپلیکس ڈی این اے کو 5 'سے 3' سمت میں دو سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے ٹیمپلیٹ ریپلیکیشن کانٹے میں کھول دے گا۔ لیڈنگ اسٹرینڈ ٹیمپلیٹ اسٹرینڈ ہے جو اسی سمت میں نقل کیا جا رہا ہے جس طرح ریپلیکیشن کانٹے کی حرکت ہوتی ہے۔ یہ اصل اسٹرینڈ کی تکمیل کرنے والے نئے ترکیب شدہ اسٹرینڈ کو اسی سمت میں 5 'سے 3' کی ترکیب کرنے کی اجازت دیتا ہے جس طرح نقل کانٹے کی حرکت ہوتی ہے۔ ایک بار جب ایک آر این اے پرائمر کو پرائمیز کے ذریعے لیڈنگ اسٹرینڈ کے 3 'سرے پر شامل کیا جاتا ہے، تو ڈی این اے کی ترکیب لیڈنگ اسٹرینڈ کے حوالے سے 3' سے 5 'سمت میں بلا تعطل جاری رہے گی۔ ڈی این اے پولیمیرس ε ٹیمپلیٹ اسٹرینڈ میں نیوکلیوٹائڈز کو مسلسل شامل کرے گا لہذا لیڈنگ اسٹرینڈ کی ترکیب بنانے کے لیے صرف ایک پرائمر کی ضرورت ہوتی ہے اور اس میں بلاتعطل ڈی این اے پولیمیرس سرگرمی ہوتی ہے۔ لیجنگ اسٹرینڈ پر لیجنگ اسٹرینڈ ڈی این اے کی نقل غیر متزلزل ہے۔ پسماندہ اسٹرینڈ کی ترکیب میں، نقل کے کانٹے کی مخالف سمت میں ڈی این اے پولیمریز کی حرکت کے لیے متعدد آر این اے پرائمرز کے استعمال کی ضرورت ہوتی ہے۔ ڈی این اے پولیمریز ڈی این اے کے چھوٹے ٹکڑوں کی ترکیب کرے گا جنہیں اوکازاکی ٹکڑے کہا جاتا ہے جو پرائمر کے 3 'سرے پر شامل کیے جاتے ہیں۔ یہ ٹکڑے یوکرائٹس میں 100 اور 400 نیوکلیوٹائڈز کے درمیان کہیں بھی ہو سکتے ہیں۔ اوکازاکی ٹکڑے کی ترکیب کے اختتام پر، ڈی این اے پولیمریز δ پچھلے اوکازاکی ٹکڑے میں چلا جاتا ہے اور اس کے 5 'سرے کو بے گھر کر دیتا ہے جس میں آر این اے پرائمر اور ڈی این اے کا ایک چھوٹا سا حصہ ہوتا ہے۔ یہ ایک آر این اے-ڈی این اے سنگل اسٹرینڈ فلیپ پیدا کرتا ہے، جسے الگ کرنا ضروری ہے، اور دو اوکازاکی ٹکڑوں کے درمیان نک کو ڈی این اے لیگیز I کے ذریعے سیل کرنا ضروری ہے۔ اس عمل کو اوکازاکی ٹکڑے کی پختگی کے نام سے جانا جاتا ہے اور اسے دو طریقوں سے سنبھالا جا سکتا ہے: ایک طریقہ کار مختصر فلیپس پر عمل کرتا ہے، جبکہ دوسرا طویل فلیپس سے متعلق ہے۔ ڈی این اے پولیمرس δ ڈی این اے یا آر این اے کے 2 سے 3 نیوکلیوٹائڈز کو اس کے پولیمرائزیشن سے پہلے ہٹانے کے قابل ہے، جس سے فین 1 کے لیے ایک مختصر "فلیپ" سبسٹریٹ پیدا ہوتا ہے، جو فلیپ سے نیوکلیوٹائڈز کو ہٹا سکتا ہے، ایک وقت میں ایک نیوکلیوٹائڈ۔ اس عمل کے چکروں کو دہرانے سے، ڈی این اے پولیمریز δ اور فین 1 آر این اے پرائمرز کو ہٹانے میں ہم آہنگی پیدا کر سکتے ہیں اور پسماندہ اسٹرینڈ پر ڈی این اے نک چھوڑ سکتے ہیں۔ یہ تجویز کیا گیا ہے کہ یہ تکراری عمل خلیے کے لیے بہتر ہے کیونکہ یہ سختی سے منظم ہوتا ہے اور بڑے فلیپس پیدا نہیں کرتا ہے جنہیں نکالنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ ڈی ریگولیٹڈ فین 1/ڈی این اے پولیمریز δ سرگرمی کی صورت میں، خلیہ ڈی این اے 2 کا استعمال کرتے ہوئے لمبے فلیپس پیدا کرنے اور ان پر عمل کرنے کے لیے ایک متبادل طریقہ کار کا استعمال کرتا ہے، جس میں ہیلیکیس اور نیوکلیز دونوں سرگرمیاں ہوتی ہیں۔ ان لمبے فلیپس کو ہٹانے کے لیے ڈی این اے 2 کی نیوکلیز سرگرمی کی ضرورت ہوتی ہے، جس سے فین 1 کے ذریعے ایک مختصر فلیپ پر کارروائی کی جاتی ہے۔ الیکٹران مائکروسکوپی کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ پسماندہ اسٹرینڈ پر نیوکلیوسوم کی لوڈنگ ترکیب کی جگہ کے بہت قریب ہوتی ہے۔ اس طرح، اوکازاکی ٹکڑے کی پختگی ایک موثر عمل ہے جو نوزائیدہ ڈی این اے کی ترکیب کے فورا بعد ہوتا ہے۔ ریپلیکیٹو ڈی این اے پولیمرس ریپلیکیٹو ہیلیکیس کے والدین کے ڈی این اے ڈوپلیکس کو کھولنے کے بعد، دو سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے ٹیمپلیٹس کو بے نقاب کرنے کے بعد، والدین کے جینوم کی دو کاپیاں تیار کرنے کے لیے ریپلیکیٹو پولیمرس کی ضرورت ہوتی ہے۔ ڈی این اے پولیمرس فنکشن انتہائی خصوصی ہے اور مخصوص ٹیمپلیٹس اور تنگ لوکلائزیشن میں نقل کو پورا کرتا ہے۔ یوکرائیوٹک ریپلیکیشن کانٹے پر، تین الگ الگ ریپلیکیٹو پولیمرس کمپلیکس ہوتے ہیں جو ڈی این اے ریپلیکیشن میں معاون ہوتے ہیں: پولیمرس α، پولیمرس δ، اور پولیمرس ε۔ یہ تینوں پولیمرس خلیے کی عملداری کے لیے ضروری ہیں۔ چونکہ ڈی این اے پولیمریز کو ایک پرائمر کی ضرورت ہوتی ہے جس پر ڈی این اے کی ترکیب شروع کرنے کے لیے، پولیمریز α (پول α) ایک نقل پرائمیز کے طور پر کام کرتا ہے۔ پول α ایک آر این اے پرائمیز سے وابستہ ہے اور یہ کمپلیکس ایک پرائمر کی ترکیب کرکے پرائمنگ کا کام انجام دیتا ہے جس میں آر این اے کا ایک مختصر 10 نیوکلیوٹائڈ پھیلاؤ ہوتا ہے جس کے بعد 10 سے 20 ڈی این اے بیس ہوتے ہیں۔ اہم بات یہ ہے کہ یہ ابتدائی عمل لیڈنگ اسٹرینڈ کی ترکیب شروع کرنے کے لیے ابتداء میں نقل کے آغاز پر اور پسماندہ اسٹرینڈ پر ہر اوکازاکی ٹکڑے کے 5 'سرے پر بھی ہوتا ہے۔ تاہم، پول α ڈی این اے کی نقل کو جاری رکھنے کے قابل نہیں ہے اور ڈی این اے کی ترکیب کو جاری رکھنے کے لیے اسے دوسرے پولیمرس سے تبدیل کرنا ضروری ہے۔ پولی میریز سوئچنگ کے لیے کلیمپ لوڈرز کی ضرورت ہوتی ہے اور یہ ثابت ہو چکا ہے کہ عام ڈی این اے نقل کے لیے تینوں ڈی این اے پولی میریز کے مربوط اقدامات کی ضرورت ہوتی ہے: پرائمنگ سنتھسیس کے لیے پول α، لیڈنگ اسٹرینڈ ریپلیکیشن کے لیے پول ε، اور پول δ، جو مسلسل لوڈ ہوتا ہے، لیگنگ اسٹرینڈ سنتھسیس کے دوران اوکازاکی کے ٹکڑے پیدا کرنے کے لیے۔ پولیمیرس α (پول α): ایک کمپلیکس بناتا ہے جس میں ایک چھوٹا اتپریرک ذیلی یونٹ (پی آر آئی ایس) اور ایک بڑا غیر اتپریرک (پی آر آئی ایل) ذیلی یونٹ ہوتا ہے۔ سب سے پہلے، آر این اے پرائمر کی ترکیب ڈی این اے پولیمریز الفا کے ذریعے ڈی این اے کی ترکیب کی اجازت دیتی ہے۔ ایک بار سب سے آگے والے اسٹرینڈ پر اور ہر اوکازاکی ٹکڑے کے شروع میں پسماندہ اسٹرینڈ پر ہوتا ہے۔ پری ذیلی اکائیاں ایک پرائمیز کے طور پر کام کرتی ہیں، جو ایک آر این اے پرائمر کی ترکیب کرتی ہیں۔ ڈی این اے پول α نو تشکیل شدہ پرائمر کو ڈی این اے نیوکلیوٹائڈز کے ساتھ لمبا کرتا ہے۔ تقریبا 20 نیوکلیوٹائڈز کے بعد، لمبائی پول ε کے ذریعے لیڈنگ اسٹرینڈ پر اور پول δ کے ذریعے لیگنگ اسٹرینڈ پر لے لی جاتی ہے۔ پولیمیرس δ (پول δ): انتہائی عمل آور اور اس میں پروف ریڈنگ ہوتی ہے، 3 '-> 5' ایکسونیوکلیز سرگرمی۔ ویو میں، یہ اہم پولیمرس ہے جو پسماندہ اسٹرینڈ اور لیڈنگ اسٹرینڈ کی ترکیب دونوں میں شامل ہے۔ پولیمیرس ε (پول ε): انتہائی عمل آور اور اس میں پروف ریڈنگ ہوتی ہے، 3 '-> 5' ایکسونیوکلیز سرگرمی۔ پول δ سے انتہائی متعلق، ویو میں یہ بنیادی طور پر پول δ کی غلطی کی جانچ میں کام کرتا ہے۔ سی ڈی سی 45-ایم سی ایم-جی آئی این ایس ہیلیکیس کمپلیکس ڈی این اے ہیلیکیس اور پولیمرس کو ریپلیکیشن کانٹے پر قریبی رابطے میں رہنا چاہیے۔ اگر ان وائنڈنگ ترکیب سے بہت پہلے ہو جاتی ہے، تو سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کے بڑے حصے بے نقاب ہو جاتے ہیں۔ یہ ڈی این اے نقصان سگنلنگ کو چالو کر سکتا ہے یا ڈی این اے کی مرمت کے عمل کو متحرک کر سکتا ہے۔ ان مسائل کو ناکام بنانے کے لیے، یوکرائیوٹک ریپلیسوم میں خصوصی پروٹین ہوتے ہیں جو ریپلیکیشن کانٹے سے پہلے ہیلیکیس سرگرمی کو منظم کرنے کے لیے بنائے جاتے ہیں۔ یہ پروٹین ہیلیکیس اور پولیمرس کے درمیان جسمانی تعامل کے لیے ڈاکنگ سائٹس بھی فراہم کرتے ہیں، اس طرح اس بات کو یقینی بناتے ہیں کہ ڈوپلیکس ان وائنڈنگ ڈی این اے کی ترکیب کے ساتھ مل کر ہو۔ ڈی این اے پولیمریز کے کام کرنے کے لیے، ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے ہیلکس کو بے نقاب کرنا پڑتا ہے تاکہ نقل کے لیے دو سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے ٹیمپلیٹس کو بے نقاب کیا جا سکے۔ ڈی این اے ہیلیکیس کروموسوم کی نقل کے دوران ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کو کھولنے کے لیے ذمہ دار ہیں۔ یوکرائیوٹک خلیوں میں ہیلیکیس قابل ذکر حد تک پیچیدہ ہوتے ہیں۔ ہیلیکیس کا اتپریرک مرکز چھ منی کروموسوم کی دیکھ بھال (میک ایم 2-7) پروٹینوں پر مشتمل ہوتا ہے، جو ایک ہیکسامیرک رنگ بناتا ہے۔ ڈی این اے سے دور، میک ایم 2-7 پروٹین ایک ہیٹرو ہیکسامر بناتے ہیں اور ڈی این اے کی نقل کی ابتدا میں ایک غیر فعال شکل میں ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کے ارد گرد سر سے سر ڈبل ہیکسامرز کے طور پر بھرے ہوتے ہیں۔ میک ایم پروٹین کو نقل کی ابتداء کے لیے بھرتی کیا جاتا ہے اور پھر ایس مرحلے کے دوران جینومک ڈی این اے میں دوبارہ تقسیم کیا جاتا ہے، جو نقل کے کانٹے میں ان کی لوکلائزیشن کی نشاندہی کرتا ہے۔ میک ایم پروٹین کی لوڈنگ صرف سیل سائیکل کے جی 1 کے دوران ہی ہو سکتی ہے، اور پھر بھری ہوئی کمپلیکس کو ایس مرحلے کے دوران سی ڈی سی 45 پروٹین اور جی آئی این ایس کمپلیکس کی بھرتی کے ذریعے فعال کیا جاتا ہے تاکہ ڈی این اے ریپلیکیشن فورکس پر فعال سی ڈی سی 45-ایم سی ایم-جی آئی این ایس (سی ایم جی) ہیلیکیس تشکیل دی جا سکے۔ ڈی این اے کی نقل کے لیے پورے ایس مرحلے میں میک ایم سرگرمی کی ضرورت ہوتی ہے۔ مختلف قسم کے ریگولیٹری عوامل سی ایم جی ہیلیکیس کے ارد گرد جمع ہوتے ہیں تاکہ 'ریپلیسوم پروگریشن کمپلیکس' تیار کیا جا سکے جو ڈی این اے پولیمریز کے ساتھ مل کر یوکرائیوٹک ریپلیسوم بناتا ہے، جس کی ساخت اب بھی اس کے بیکٹیریل ہم منصب کے مقابلے میں کافی ناقص طور پر بیان کی گئی ہے۔ الگ تھلگ سی ایم جی ہیلیکیس اور ریپلیسوم پروگریشن کمپلیکس میں ایک واحد میک ایم پروٹین رنگ کمپلیکس ہوتا ہے جس سے یہ پتہ چلتا ہے کہ ابتدا میں میک ایم پروٹین کے بھری ہوئی ڈبل ہیکسامیر کو ابتدائی عمل کے حصے کے طور پر دو واحد ہیکسامیرک رنگوں میں توڑا جا سکتا ہے، جس میں ہر میک ایم پروٹین کمپلیکس رنگ ہر اصل سے قائم دو نقل کانٹوں پر سی ایم جی ہیلیکیس کا بنیادی حصہ بناتا ہے۔ مکمل سی ایم جی کمپلیکس ڈی این اے کو کھولنے کے لیے ضروری ہے، اور سی ڈی سی 45-ایم سی ایم-جی آئی این ایس کا کمپلیکس یوکرائیوٹک خلیوں میں فعال ڈی این اے ہیلیکیس ہے۔ سی ٹی ایف 4 اور اینڈ 1 پروٹین سی ایم جی کمپلیکس سی ٹی ایف 4 اور اینڈ 1 پروٹین کے ساتھ تعامل کے ذریعے ریپلیسوم کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ سی ٹی ایف 4/اور 1 پروٹین سی ایم جی کمپلیکس اور ڈی این اے پولیمرس α دونوں کے ساتھ تعامل کرتے ہیں۔ سی ٹی ایف 4 ایک پولیمرس α آلات عنصر ہے، جو پولیمرس α کی بھرتی کے لیے نقل کی ابتداء کے لیے ضروری ہے۔ ایم آر سی 1 اور کلاسپین پروٹین ایم آر سی 1/کلاسپین پروٹین جوڑے سی ایم جی کمپلیکس ہیلیکیس سرگرمی کے ساتھ لیڈنگ اسٹرینڈ سنتھسیس۔ ایم آر سی 1 پولیمریز ε کے ساتھ ساتھ میک ایم پروٹین کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ ہیلیکیس اور لیڈنگ-اسٹرینڈ پولیمریز کے درمیان اس براہ راست ربط کی اہمیت کلچرڈ انسانی خلیوں کے نتائج سے واضح ہوتی ہے، جہاں موثر نقل کانٹے کی ترقی کے لیے ایم آر سی 1/کلاسپین کی ضرورت ہوتی ہے۔ ان نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ موثر ڈی این اے نقل کے لیے ہیلیکیس کے جوڑے اور لیڈنگ اسٹرینڈ کی ترکیب کی بھی ضرورت ہوتی ہے۔ پرولیفریٹنگ سیل نیوکلیئر اینٹیجن ڈی این اے پولیمرس کو ڈی این اے کی نقل کی حمایت کرنے کے لیے اضافی عوامل کی ضرورت ہوتی ہے۔ ڈی این اے پولیمریز میں ایک سیمی کلوزڈ 'ہینڈ' ڈھانچہ ہوتا ہے، جو پولیمریز کو ڈی این اے پر لوڈ کرنے اور منتقلی شروع کرنے کی اجازت دیتا ہے۔ یہ ڈھانچہ ڈی این اے پولیمرس کو سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے ٹیمپلیٹ کو پکڑنے، فعال سائٹ پر ڈی این ٹی پیز کو شامل کرنے، اور نو تشکیل شدہ ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کو جاری کرنے کی اجازت دیتا ہے۔ تاہم، ڈی این اے پولیمریز کی ساخت ٹیمپلیٹ ڈی این اے کے ساتھ مسلسل مستحکم تعامل کی اجازت نہیں دیتی ہے۔ پولیمریز اور ٹیمپلیٹ ڈی این اے کے درمیان تعامل کو مضبوط کرنے کے لیے، ڈی این اے سلائڈنگ کلیمپس پولیمریز کے ساتھ منسلک ہوتے ہیں تاکہ ریپلیکیٹو پولیمریز کی عمل کاری کو فروغ دیا جا سکے۔ یوکیریوٹس میں، سلائڈنگ کلیمپ ایک ہوموٹریمر رنگ ڈھانچہ ہے جسے پرولیفریٹنگ سیل نیوکلیئر اینٹیجن (پی سی این اے) کہا جاتا ہے۔ پی سی این اے رنگ میں ایسی سطحوں کے ساتھ قطعیت ہوتی ہے جو ڈی این اے پولیمریز کے ساتھ تعامل کرتی ہیں اور انہیں ڈی این اے ٹیمپلیٹ سے محفوظ طریقے سے جوڑتی ہیں۔ ڈی این اے پولیمریز کے پی سی این اے پر منحصر استحکام کا ڈی این اے کی نقل پر نمایاں اثر پڑتا ہے کیونکہ پی سی این اے پولیمریز کے عمل کو 1,000 گنا تک بڑھانے کے قابل ہوتے ہیں۔ پی سی این اے ایک لازمی کوفیکٹر ہے اور اسے ریپلیکیشن فورک پر متعدد عمل کو ایڈجسٹ کرنے کے لیے ریپلیسوم میں سب سے عام تعامل پلیٹ فارم میں سے ایک ہونے کا امتیاز حاصل ہے، اور اس لیے پی سی این اے کو ڈی این اے پولیمرس کے لیے ایک ریگولیٹری کوفیکٹر کے طور پر بھی دیکھا جاتا ہے۔ ریپلیکیشن فیکٹر سی پی سی این اے ڈی این اے ٹیمپلیٹ اسٹرینڈ کو مکمل طور پر گھیرے ہوئے ہے اور اسے ریپلیکیشن کانٹے پر ڈی این اے پر لوڈ کیا جانا چاہیے۔ لیڈنگ اسٹرینڈ پر، پی سی این اے کو لوڈ کرنا ایک غیر معمولی عمل ہے، کیونکہ لیڈنگ اسٹرینڈ پر ڈی این اے کی نقل اس وقت تک جاری رہتی ہے جب تک کہ نقل ختم نہ ہو جائے۔ تاہم، پسماندہ اسٹرینڈ پر، ڈی این اے پولیمریز δ کو ہر اوکازاکی ٹکڑے کے آغاز میں مسلسل لوڈ کرنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ اوکازاکی ٹکڑے کی ترکیب کے اس مسلسل آغاز کے لیے موثر ڈی این اے نقل کے لیے بار بار پی سی این اے لوڈنگ کی ضرورت ہوتی ہے۔ پی سی این اے لوڈنگ ریپلیکیشن فیکٹر سی (آر ایف سی) کمپلیکس کے ذریعے مکمل کی جاتی ہے۔ آر ایف سی کمپلیکس پانچ اے ٹی پیز پر مشتمل ہے: آر ایف سی 1، آر ایف سی 2، آر ایف سی 3، آر ایف سی 4 اور آر ایف سی 5۔ آر ایف سی پرائمر-ٹیمپلیٹ جنکشن کو پہچانتا ہے اور ان مقامات پر پی سی این اے کو لوڈ کرتا ہے۔ پی سی این اے ہوموٹریمر کو آر ایف سی کے ذریعے اے ٹی پی ہائیڈرولیسس کے ذریعے کھولا جاتا ہے اور پھر پولیمرس کے ساتھ اس کے تعلق کو آسان بنانے کے لیے مناسب سمت میں ڈی این اے پر لوڈ کیا جاتا ہے۔ کلیمپ لوڈر ڈی این اے سے پی سی این اے کو بھی اتار سکتے ہیں ؛ ایک ایسا طریقہ کار جس کی ضرورت ہوتی ہے جب نقل کو ختم کیا جانا چاہیے۔ ریپلیکیشن فورک پر رکے ہوئے ریپلیکیشن فورک ڈی این اے ریپلیکیشن کو ڈی آکسینوکلیوٹائڈ ٹرائی فاسفیٹس (ڈی این ٹی پیز) کی کمی یا ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان سے روکا جا سکتا ہے، جس کے نتیجے میں ریپلیکیشن کا دباؤ پیدا ہوتا ہے۔ نقل کے اس رکنے کو رکے ہوئے نقل کے کانٹے کے طور پر بیان کیا گیا ہے۔ پروٹین کا ایک کانٹا حفاظتی کمپلیکس نقل کے کانٹے کو اس وقت تک مستحکم کرتا ہے جب تک کہ ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان یا نقل کے دیگر مسائل کو ٹھیک نہیں کیا جا سکتا۔ طویل عرصے تک نقل کرنے والا کانٹا رکنے سے ڈی این اے کو مزید نقصان پہنچ سکتا ہے۔ رکنے والے سگنلز کو غیر فعال کر دیا جاتا ہے اگر ریپلیکیشن فورک کا سبب بننے والے مسائل حل ہو جائیں۔ یوکرائیوٹک ڈی این اے کی نقل کو ختم کرنے کے لیے مختلف عمل کی ضرورت ہوتی ہے جس کا انحصار اس بات پر ہوتا ہے کہ کروموسوم سرکلر ہیں یا لکیری۔ لکیری مالیکیولز کے برعکس، سرکلر کروموسوم پورے مالیکیول کی نقل تیار کرنے کے قابل ہوتے ہیں۔ تاہم، دونوں ڈی این اے مالیکیول ایک دوسرے سے جڑے رہیں گے۔ اس مسئلے کو ٹائپ II ٹوپو آئسومیرس کے ذریعے دو ڈی این اے مالیکیولز کے ڈیکیٹینیشن کے ذریعے نمٹا جاتا ہے۔ ٹائپ II ٹوپو آئسومیرس کو لکیری اسٹرینڈز کو الگ کرنے کے لیے بھی استعمال کیا جاتا ہے کیونکہ وہ خلیے کے اندر ایک نیوکلیوسوم میں پیچیدہ طور پر جوڑ دیے جاتے ہیں۔ جیسا کہ پہلے ذکر کیا گیا ہے، لکیری کروموسوم ایک اور مسئلے کا سامنا کرتے ہیں جو سرکلر ڈی این اے کی نقل میں نہیں دیکھا جاتا ہے۔ اس حقیقت کی وجہ سے کہ ڈی این اے کی ترکیب کے آغاز کے لیے آر این اے پرائمر کی ضرورت ہوتی ہے، پسماندہ اسٹرینڈ پورے کروموسوم کی نقل تیار کرنے میں نقصان دہ ہوتا ہے۔ جبکہ سرکردہ اسٹرینڈ نقل کرنے والے ڈی این اے اسٹرینڈ کے 5 'ٹرمینس کو بڑھانے کے لیے ایک واحد آر این اے پرائمر کا استعمال کر سکتا ہے، متعدد آر این اے پرائمرز پیچھے رہ جانے والے اسٹرینڈ کی ترکیب کے لیے ذمہ دار ہیں، جس سے اوکازاکی کے ٹکڑے بنتے ہیں۔ یہ اس حقیقت کی وجہ سے ایک مسئلہ کا باعث بنتا ہے کہ ڈی این اے پولیمریز صرف ڈی این اے اسٹرینڈ کے 3 'سرے میں اضافہ کرنے کے قابل ہے۔ جب اوکازاکی کے ٹکڑوں کی مرمت کی جاتی ہے تو پیرنٹ اسٹرینڈ کے ساتھ ڈی این اے پولیمریز کا 3 '-5' عمل پیرنٹ اسٹرینڈ کے 3 'سرے پر ایک مختصر سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے (ایس ایس ڈی این اے) خطہ چھوڑ دیتا ہے۔ چونکہ نقل پیرنٹ کروموسوم کے مخالف سروں پر مخالف سمتوں میں ہوتی ہے، اس لیے ہر اسٹرینڈ ایک سرے پر ایک پسماندہ اسٹرینڈ ہوتا ہے۔ وقت گزرنے کے ساتھ اس کے نتیجے میں دونوں بیٹی کروموسوم بتدریج مختصر ہو جائیں گے۔ اسے اختتامی نقل کا مسئلہ کہا جاتا ہے۔ اختتامی نقل کا مسئلہ یوکرائیوٹک خلیوں میں ٹیلومیر علاقوں اور ٹیلومیرس کے ذریعے نمٹا جاتا ہے۔ ٹیلومیرس والدین کے کروموسوم کے 3 'سرے کو بیٹی کے اسٹرینڈ کے 5' سرے سے آگے بڑھاتے ہیں۔ یہ سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے ڈھانچہ نقل کی ابتدا کے طور پر کام کر سکتا ہے جو ٹیلومیرس کو بھرتی کرتا ہے۔ ٹیلومیرس ایک خصوصی ڈی این اے پولیمرس ہے جو متعدد پروٹین ذیلی اکائیوں اور ایک آر این اے جزو پر مشتمل ہوتا ہے۔ ٹیلومیرس کا آر این اے جزو ٹیمپلیٹ ڈی این اے کے واحد پھنسے ہوئے 3 'سرے تک پہنچ جاتا ہے اور اس میں ٹیلومیرک ترتیب کی 1.5 کاپیاں ہوتی ہیں۔ ٹیلومیرس میں ایک پروٹین ذیلی یونٹ ہوتا ہے جو ایک ریورس ٹرانسکرپٹیس ہوتا ہے جسے ٹیلومیرس ریورس ٹرانسکرپٹیس یا ٹی ای آر ٹی کہا جاتا ہے۔ ٹی ای آر ٹی ٹیمپلیٹ ٹیلومیرس آر این اے کے اختتام تک ڈی این اے کی ترکیب کرتا ہے اور پھر الگ ہوجاتا ہے۔ اس عمل کو والدین کے ڈی این اے مالیکیول کے 3 'سرے کی توسیع کے ساتھ ضرورت کے مطابق کئی بار دہرایا جا سکتا ہے۔ یہ 3 'اضافہ اسٹرینڈ ڈی این اے کی ترکیب کو پیچھے چھوڑ کر ڈٹر اسٹرینڈ کے 5' سرے کی توسیع کے لیے ایک ٹیمپلیٹ فراہم کرتا ہے۔ ٹیلومیرس سرگرمی کا ضابطہ ٹیلومیر بائنڈنگ پروٹین کے ذریعے سنبھالا جاتا ہے۔ ریپلیکیشن فورک رکاوٹیں پروکیریوٹک ڈی این اے ریپلیکیشن دو طرفہ ہے۔ ایک ریپلیکیٹو اصل کے اندر، ریپلیکیشن کمپلیکس ریپلیکیشن اصل کے ہر سرے پر بنائے جاتے ہیں اور ریپلیسوم ابتدائی نقطہ آغاز سے ایک دوسرے سے دور ہو جاتے ہیں۔ پروکیریوٹس میں، دو طرفہ نقل سرکلر کروموسوم پر ایک نقل کی ابتدا پر شروع ہوتی ہے اور ابتدا کے ابتدائی آغاز سے مخالف مقام پر ختم ہوتی ہے۔ ان اختتامی علاقوں میں ڈی این اے کی ترتیب ہوتی ہے جسے ٹیر سائٹس کہا جاتا ہے۔ یہ ٹر سائٹس ٹس پروٹین سے بندھے ہوئے ہیں۔ ٹیر-ٹس کمپلیکس نقل کو ختم کرتے ہوئے ہیلیکیس سرگرمی کو روکنے کے قابل ہے۔ یوکرائیوٹک خلیوں میں، نقل کا خاتمہ عام طور پر دو فعال نقل کی ابتداء کے درمیان دو نقل کے کانٹوں کے تصادم کے ذریعے ہوتا ہے۔ تصادم کا مقام اصل فائرنگ کے وقت کے لحاظ سے مختلف ہوتا ہے۔ اس طرح، اگر کوئی نقل کا کانٹا کسی خاص جگہ پر رک جاتا ہے یا گر جاتا ہے، تو اس جگہ کی نقل کو اس وقت بچایا جا سکتا ہے جب مخالف سمت میں سفر کرنے والا نقل اس علاقے کی نقل مکمل کر لے۔ پورے جینوم میں مختلف مقامات پر آر ایف بی پروٹین سے منسلک پروگرام شدہ ریپلیکیشن فورک رکاوٹیں (آر ایف بی) ہوتی ہیں، جو ریپلیکیشن فورکس کو ختم کرنے یا روکنے کے قابل ہوتی ہیں، اور ریپلیسوم کی ترقی کو روکتی ہیں۔ نقل کی فیکٹریاں یہ پایا گیا ہے کہ نقل سیل نیوکلئس میں مقامی انداز میں ہوتی ہے۔ رکے ہوئے ڈی این اے کے ساتھ نقل کرنے والے کانٹوں کو منتقل کرنے کے روایتی نظریہ کے برعکس، نقل کرنے والی فیکٹریوں کا ایک تصور ابھرا، جس کا مطلب ہے کہ نقل کرنے والے کانٹے کچھ غیر متحرک 'فیکٹری' علاقوں کی طرف مرکوز ہوتے ہیں جن کے ذریعے ٹیمپلیٹ ڈی این اے اسٹرینڈز کنویر بیلٹ کی طرح گزرتے ہیں۔ سیل سائیکل ریگولیشن ڈی این اے نقل ایک مضبوطی سے آرکیسٹریٹڈ عمل ہے جو سیل سائیکل کے تناظر میں کنٹرول کیا جاتا ہے۔ سیل سائیکل کے ذریعے پیش رفت اور اس کے نتیجے میں ڈی این اے کی نقل کو پری ریپلیکیٹو کمپلیکس (پری-آر سی) کی تشکیل اور ایکٹیویشن کے ذریعے مضبوطی سے منظم کیا جاتا ہے جو سائکلین پر منحصر کنیسز (سی ڈی کے، سی ڈی کے) کی ایکٹیویشن اور غیر فعالیت کے ذریعے حاصل کیا جاتا ہے۔ خاص طور پر یہ سائکلین اور سائکلین پر منحصر کنیز کی تعاملات ہیں جو جی 1 سے ایس مرحلے میں منتقلی کے لیے ذمہ دار ہیں۔ سیل سائیکل کے جی 1 مرحلے کے دوران سی ڈی کے سرگرمی کی سطح کم ہوتی ہے۔ سی ڈی کے سرگرمی کی یہ کم سطح نئے پری-آر سی کمپلیکس کی تشکیل کی اجازت دیتی ہے لیکن نئے تشکیل شدہ پری-آر سی کے ذریعے ڈی این اے کی نقل شروع کرنے کے لیے کافی نہیں ہے۔ سیل سائیکل کے بقیہ مراحل کے دوران سی ڈی کے سرگرمی کی سطح بلند ہوتی ہے۔ سی ڈی کے کی یہ اعلی سطح کی سرگرمی ڈی این اے کی نقل شروع کرنے کے ساتھ ساتھ آر سی سے پہلے کی نئی پیچیدہ تشکیل کو روکنے کے لیے ذمہ دار ہے۔ ایک بار جب ڈی این اے کی نقل شروع ہو جاتی ہے تو پری آر سی کمپلیکس ٹوٹ جاتا ہے۔ اس حقیقت کی وجہ سے کہ سیل سائیکل کے ایس مرحلے، جی 2، اور ایم مراحل کے دوران سی ڈی کے کی سطح زیادہ رہتی ہے، کوئی نیا پری آر سی کمپلیکس نہیں بنایا جا سکتا۔ یہ سب اس بات کو یقینی بنانے میں مدد کرتا ہے کہ خلیوں کی تقسیم مکمل ہونے تک کوئی آغاز نہیں ہو سکتا۔ سائیکلن پر منحصر کنیز کے علاوہ سی ڈی ٹی 1 کے ڈاؤن ریگولیشن کے ذریعے نقل کے ایک نئے دور کو روکنے کے بارے میں سوچا جاتا ہے۔ یہ سی ڈی ٹی 1 کے انحطاط کے ساتھ ساتھ جیمینن کے نام سے جانے والے پروٹین کے روک تھام کے اقدامات کے ذریعے حاصل کیا جاتا ہے۔ جیمینن سی ڈی ٹی 1 سے مضبوطی سے جڑا ہوا ہے اور اسے دوبارہ نقل کرنے کا سب سے بڑا رکاوٹ سمجھا جاتا ہے۔ جیمینن سب سے پہلے ایس-فیز میں ظاہر ہوتا ہے اور ممکنہ طور پر انافس پروموٹنگ کمپلیکس (اے پی سی) کے ذریعے ہر جگہ پھیلنے کے ذریعے، میٹا فیز-انافس منتقلی میں خراب ہو جاتا ہے۔ سیل سائیکل کے پورے دور میں مختلف سیل سائیکل چیک پوائنٹ موجود ہوتے ہیں جو اس بات کا تعین کرتے ہیں کہ آیا سیل مکمل طور پر تقسیم کے ذریعے ترقی کرے گا یا نہیں۔ اہم طور پر نقل میں G1، یا پابندی، چیک پوائنٹ اس بات کا تعین کرتا ہے کہ نقل کا آغاز شروع ہوگا یا نہیں یا خلیے کو آرام کے مرحلے میں رکھا جائے گا جسے G0 کہا جاتا ہے۔ سیل سائیکل کے G0 مرحلے میں خلیوں کو نقل کا ایک دور شروع کرنے سے روکا جاتا ہے کیونکہ منی کروموسوم کی دیکھ بھال کے پروٹین کا اظہار نہیں ہوتا ہے۔ ایس مرحلے میں منتقلی اس بات کی نشاندہی کرتی ہے کہ نقل شروع ہو چکی ہے۔ نقل چیک پوائنٹ پروٹین خلیوں کی تقسیم کے دوران جینیاتی معلومات کو محفوظ رکھنے کے لیے، ڈی این اے کی نقل کو اعلی وفاداری کے ساتھ مکمل کیا جانا چاہیے۔ اس کام کو حاصل کرنے کے لیے، یوکرائیوٹک خلیوں میں نقل کے عمل میں کچھ نکات کے دوران پروٹین ہوتے ہیں جو ڈی این اے نقل کے دوران کسی بھی غلطی کا پتہ لگانے کے قابل ہوتے ہیں اور جینومک سالمیت کو برقرار رکھنے کے قابل ہوتے ہیں۔ یہ چیک پوائنٹ پروٹین ڈی این اے کی مرمت کے لیے وقت دینے کے لیے سیل سائیکل کو مائٹوسس میں داخل ہونے سے روکنے کے قابل ہوتے ہیں۔ چیک پوائنٹ پروٹین ڈی این اے کی مرمت کے کچھ راستوں میں بھی شامل ہوتے ہیں، جبکہ وہ مزید نقصان سے بچنے کے لیے نقل کے کانٹے کی ساخت کو مستحکم کرتے ہیں۔ یہ چیک پوائنٹ پروٹین اتپریورتن یا دیگر کروموسومل انحراف کو اولاد میں منتقل کرنے سے بچنے کے لیے ضروری ہیں۔ یوکرائیوٹک چیک پوائنٹ پروٹین اچھی طرح سے محفوظ ہوتے ہیں اور ان میں دو فاسفیٹائڈائلینوسوٹول 3-کینیس سے متعلق کینیسز (پی آئی کے کے)، اے ٹی آر اور اے ٹی ایم شامل ہوتے ہیں۔ اے ٹی آر اور اے ٹی ایم دونوں ایک ہدف فاسفوریلیشن ترتیب، ایس کیو/ٹی کیو موٹف کا اشتراک کرتے ہیں، لیکن خلیوں میں ان کے انفرادی کردار مختلف ہوتے ہیں۔ اے ٹی آر ڈی این اے ڈبل اسٹرینڈڈ بریکس کے جواب میں سیل سائیکل کو روکنے میں شامل ہے۔ اے ٹی آر کا ایک لازمی چیک پوائنٹ پارٹنر، اے ٹی آر-انٹرایکٹنگ-پروٹین (اے ٹی آر آئی پی) ہوتا ہے، اور یہ دونوں پروٹین مل کر سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کے پھیلاؤ کے لیے ذمہ دار ہوتے ہیں جو ریپلیکیشن پروٹین اے (آر پی اے) کے ذریعے لیپت ہوتے ہیں۔ سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کی تشکیل اکثر ہوتی ہے، زیادہ تر نقل کشیدگی کے دوران۔ اے ٹی آر-اے ٹی آر آئی پی جینوم کی سالمیت کو برقرار رکھنے کے لیے سیل سائیکل کو روکنے کے قابل ہے۔ اے ٹی آر ایس مرحلے کے دوران کرومیٹن پر پایا جاتا ہے، جو آر پی اے اور کلاسپین کی طرح ہے۔ نقل کے نقصان کے نیچے کی طرف چیک پوائنٹ کے راستوں کو شروع کرنے میں سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے ٹریکٹس کی نسل اہم ہے۔ ایک بار جب سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے کافی لمبا ہو جاتا ہے، تو آر پی اے کے ساتھ لیپت سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے اے ٹی آر-اے ٹی آر آئی پی کو بھرتی کرنے کے قابل ہوتا ہے۔ مکمل طور پر فعال ہونے کے لیے، اے ٹی آر کینیز سینسر پروٹینوں پر انحصار کرتا ہے جو یہ سمجھتے ہیں کہ آیا چیک پوائنٹ پروٹین ڈی این اے نقل کشیدگی کی درست جگہ پر مقامی ہیں یا نہیں۔ آر اے ڈی 9-ایچ یو ایس 1-ریڈ 1 (9-1-1) ہیٹروٹریمیرک کلیمپ اور اس کا کلیمپ لوڈر آر ایف سی ریڈ 17 گیپڈ یا نکڈ ڈی این اے کو پہچاننے کے قابل ہیں۔ RFCRad17 کلیمپ لوڈر خراب شدہ ڈی این اے پر 9-1-1 لوڈ کرتا ہے۔ ڈی این اے پر 9-1-1 کی موجودگی اے ٹی آر-اے ٹی آر آئی پی اور پروٹین کے ایک گروپ کے درمیان تعامل کو آسان بنانے کے لیے کافی ہے جسے چیک پوائنٹ ثالث کہا جاتا ہے، جیسے ٹی او پی بی پی 1 اور ایم آر سی 1/کلاسپین۔ ٹی او پی بی پی 1 9-1-1 کے فاسفوریلیٹڈ ریڈ 9 جزو کے ساتھ تعامل کرتا ہے اور اسے بھرتی کرتا ہے اور اے ٹی آر-اے ٹی آر آئی پی کو باندھتا ہے، جو سی ایچ کے 1 کو فاسفوریلیٹ کرتا ہے۔ اے ٹی آر-اے ٹی آر آئی پی کے مکمل ایکٹیویشن کے لیے بھی ایم آر سی 1/کلاسپین کی ضرورت ہوتی ہے جو فاسفوریلیٹس سی ایچ کے 1، جو کہ اہم ڈاون اسٹریم چیک پوائنٹ ایفیکٹر کینیز ہے۔ کلاسپین ریپلیسوم کا ایک جزو ہے اور اس میں Chk1 کے ساتھ ڈاکنگ کے لیے ایک ڈومین ہوتا ہے، جو ڈی این اے ریپلیکیشن کے دوران کلاسپین کے ایک مخصوص کام کو ظاہر کرتا ہے: ریپلیسوم پر چیک پوائنٹ سگنلنگ کو فروغ دینا۔ سی ایچ کے 1 سگنلنگ سیل سائیکل کو روکنے اور خلیوں کو نامکمل ڈی این اے نقل یا ڈی این اے نقصان کے ساتھ مائٹوسس میں داخل ہونے سے روکنے کے لیے اہم ہے۔ اے ٹی آر-سی ایچ کے 1 چیک پوائنٹ کے کام کے لیے اور سیل سائیکل کو روکنے اور ڈی این اے کی مرمت کے طریقہ کار کو مکمل کرنے کے لیے کافی وقت دینے کے لیے سی ایچ کے 1 پر منحصر سی ڈی کے کی روک تھام اہم ہے، جو بدلے میں خراب ڈی این اے کی وراثت کو روکتا ہے۔ اس کے علاوہ، سی ایچ کے 1 پر منحصر سی ڈی کے کی روک تھام ایس مرحلے کے دوران اصل فائرنگ کو روکنے میں اہم کردار ادا کرتی ہے۔ یہ طریقہ کار ڈی این اے کی مسلسل ترکیب کو روکتا ہے اور نقل کشیدگی اور ممکنہ جینوٹوکسک حالات کی موجودگی میں جینوم کے تحفظ کے لیے ضروری ہے۔ اس طرح، اے ٹی آر-سی ایچ کے 1 سرگرمی پورے جینوم میں نقل کے آغاز کو روک کر واحد نقل کی ابتداء کی سطح پر ممکنہ نقل کے مسائل کو مزید روکتی ہے، جب تک کہ سیل سائیکل گرفتاری کو برقرار رکھنے والے سگنلنگ کیسکیڈ کو بند نہیں کیا جاتا ہے۔ نیوکلیوسومز کے ذریعے نقل یوکرائیوٹک ڈی این اے کو نیوکلئس کی محدود جگہ کے اندر فٹ ہونے کے لیے مضبوطی سے کمپیکٹ کیا جانا چاہیے۔ کروموسوم کو ہسٹون پروٹین کے آکٹمر کے ارد گرد 147 نیوکلیوٹائڈز کو لپیٹ کر پیک کیا جاتا ہے، جس سے نیوکلیوسوم بنتا ہے۔ نیوکلیوسوم آکٹمر میں ہر ہسٹون H2A، H2B، H3، اور H4 کی دو کاپیاں شامل ہیں۔ ڈی این اے کے ساتھ ہسٹون پروٹین کی سخت وابستگی کی وجہ سے، یوکرائیوٹک خلیوں میں پروٹین ہوتے ہیں جو ریپلیکیشن کانٹے سے پہلے ہسٹون کو دوبارہ تیار کرنے کے لیے بنائے جاتے ہیں، تاکہ ریپلیسوم کی ہموار ترقی کی اجازت دی جا سکے۔ نیوکلیوسوم کی تشکیل کو دوبارہ قائم کرنے کے لیے نقل کے کانٹے کے پیچھے ہسٹون کو دوبارہ جمع کرنے میں بھی پروٹین شامل ہوتے ہیں۔ کئی ہسٹون چیپرونز ہیں جو نقل کے بعد نیوکلیوسوم اسمبلی میں شامل ہونے کے لیے جانے جاتے ہیں۔ ایف اے سی ٹی کمپلیکس کو ڈی این اے پولیمریز α-پرائمس کمپلیکس کے ساتھ تعامل کرنے کے لیے پایا گیا ہے، اور ایف اے سی ٹی کمپلیکس کی ذیلی اکائیوں نے جینیاتی طور پر نقل کے عوامل کے ساتھ تعامل کیا ہے۔ ایف اے سی ٹی کمپلیکس ایک ہیٹروڈائمر ہے جو اے ٹی پی کو ہائیڈرولائز نہیں کرتا ہے، لیکن نیوکلیوسومز میں ہسٹونز کو "ڈھیلا" کرنے میں سہولت فراہم کرنے کے قابل ہے، لیکن کس طرح ایف اے سی ٹی کمپلیکس ڈی این اے کو ہٹانے کے لیے ہسٹونز کی سخت ایسوسی ایشن کو دور کرنے کے قابل ہے اس کا جواب نہیں ملتا ہے۔ ایک اور ہسٹون چیپرون جو ریپلیسوم کے ساتھ منسلک ہوتا ہے وہ اے ایس ایف 1 ہے، جو ہسٹون ڈائمرز ایچ 3-ایچ 4 پر منحصر میک ایم کمپلیکس کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ اے ایس ایف 1 نئے ترکیب شدہ ایچ 3-ایچ 4 ڈائمر کو نقل کے کانٹے کے پیچھے جمع ہونے والے عوامل میں منتقل کرنے کے قابل ہے اور یہ سرگرمی ایچ 3-ایچ 4 ہسٹون ڈائمر کو نقل کے فورا بعد ہسٹون جمع ہونے کی جگہ پر دستیاب کراتی ہے۔ اے ایس ایف 1 (اور اس کے ساتھی آر ٹی ٹی 109) کو ایس مرحلے کے دوران نقل شدہ جینوں سے جین کے اظہار کو روکنے میں بھی شامل کیا گیا ہے۔ ہیٹروٹریمیرک چیپرون کرومیٹن اسمبلی فیکٹر 1 (سی اے ایف-1) ایک کرومیٹن بنانے والا پروٹین ہے جو کرومیٹن بنانے کے لیے دونوں نئے نقل شدہ ڈی این اے اسٹرینڈز پر ہسٹون جمع کرنے میں شامل ہوتا ہے۔ سی اے ایف-1 میں پی سی این اے بائنڈنگ موٹف ہوتا ہے، جسے پی آئی پی باکس کہا جاتا ہے، جو سی اے ایف-1 کو پی سی این اے کے ذریعے ریپلیسوم کے ساتھ منسلک کرنے کی اجازت دیتا ہے اور ہسٹون ایچ 3-ایچ 4 ڈائمرز کو نئے ترکیب شدہ ڈی این اے پر جمع کرنے کے قابل ہوتا ہے۔ آر ٹی ٹی 106 چیپرون بھی اس عمل میں شامل ہے، اور کرومیٹن کی تشکیل کے دوران سی اے ایف-1 اور ایچ 3-ایچ 4 ڈائمرز سے وابستہ ہے۔ یہ عمل نئے ترکیب شدہ ہسٹون کو ڈی این اے پر لوڈ کرتے ہیں۔ ہسٹون H3-H4 کے جمع ہونے کے بعد، نیوکلیوسومز ہسٹون H2A-H2B کی ایسوسی ایشن سے بنتے ہیں۔ خیال کیا جاتا ہے کہ یہ عمل ایف اے سی ٹی کمپلیکس کے ذریعے ہوتا ہے، کیونکہ یہ پہلے سے ہی ریپلیسوم سے وابستہ ہے اور آزاد ایچ 2 اے-ایچ 2 بی کو باندھنے کے قابل ہے، یا ایک اور ایچ 2 اے-ایچ 2 بی چیپرون، این اے پی 1 کا امکان ہے۔ الیکٹران مائکروسکوپی کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ یہ بہت تیزی سے ہوتا ہے، کیونکہ نیوکلیوسومز کو نقل کے کانٹے کے بعد صرف چند سو بیس جوڑے بناتے ہوئے دیکھا جا سکتا ہے۔ لہذا، نئے نیوکلیوسومز بنانے کا پورا عمل ریپلیکیشن کے فورا بعد ہوتا ہے جس کی وجہ ہسٹون چیپرونز کا ریپلیسوم سے جوڑنا ہوتا ہے۔ پروکیریوٹک اور یوکیریوٹک ڈی این اے نقل کے درمیان موازنہ جب پروکیریوٹک ڈی این اے نقل کے مقابلے میں، یوکیریوٹک ڈی این اے نقل کی تکمیل زیادہ پیچیدہ ہوتی ہے اور اسے پورا کرنے کے لیے نقل اور نقل پروٹین کے متعدد ماخذ شامل ہوتے ہیں۔ پروکیریوٹک ڈی این اے ایک سرکلر شکل میں ترتیب دیا جاتا ہے، اور جب نقل شروع ہوتی ہے تو اس کی صرف ایک نقل ہوتی ہے۔ اس کے برعکس، یوکرائیوٹک ڈی این اے لکیری ہے۔ جب نقل کی جاتی ہے تو، نقل کے ایک ہزار ماخذ ہوتے ہیں۔ یوکرائیوٹک ڈی این اے دو طرفہ ہے۔ یہاں دو طرفہ لفظ کے معنی مختلف ہیں۔ یوکرائیوٹک لکیری ڈی این اے کی بہت سی ابتداء (جسے او کہا جاتا ہے) اور ٹرمینی (جسے ٹی کہا جاتا ہے) ہیں۔ "T" "O" کے دائیں طرف موجود ہے۔ ایک "او" اور ایک "ٹی" مل کر ایک نقل بناتے ہیں۔ پری انیشی ایشن کمپلیکس کی تشکیل کے بعد، جب ایک ریپلیکن لمبا ہونا شروع ہوتا ہے، تو انیشی ایشن دوسرے ریپلیکن میں شروع ہوتی ہے۔ اب، اگر پہلی نقل گھڑی کی سمت میں حرکت کرتی ہے، تو دوسری نقل گھڑی کی مخالف سمت میں حرکت کرتی ہے، یہاں تک کہ پہلی نقل کے "T" تک پہنچ جاتی ہے۔ "ٹی" پر، دونوں نقلیں نقل کے عمل کو مکمل کرنے کے لیے ضم ہو جاتی ہیں۔ دریں اثنا، دوسری نقل بھی آگے کی سمت میں آگے بڑھ رہی ہے، تیسری نقل سے ملنے کے لیے۔ دو نقلوں کی گھڑی کی سمت اور گھڑی کی مخالف سمت حرکت کو دو طرفہ نقل کہا جاتا ہے۔ یوکرائیوٹک ڈی این اے کی نقل کے لیے تمام ڈی این اے پولیمریز اور متعلقہ پروٹین کے عین مطابق ہم آہنگی کی ضرورت ہوتی ہے تاکہ ہر بار جب کوئی خلیہ تقسیم ہوتا ہے تو پورے جینوم کی نقل تیار کی جا سکے۔ یہ عمل نقل کی ابتداء پر پروٹین اسمبلیوں کے مراحل کی ایک سیریز کے ذریعے حاصل کیا جاتا ہے، بنیادی طور پر ڈی این اے کے ساتھ ایم سی ایم ہیلیکیس کی ایسوسی ایشن پر ڈی این اے کی نقل کے ضابطے پر توجہ مرکوز کرتا ہے۔ نقل کی یہ ابتداء پروٹین کمپلیکس کی تعداد کو ہدایت کرتی ہیں جو نقل شروع کرنے کے لیے تشکیل پائیں گے۔ پروکیریوٹک میں ڈی این اے ریپلیکیشن ریگولیشن ڈی این اے سے ڈی این اے شروع کرنے والے پروٹین کے پابند ہونے پر مرکوز ہے، جس میں ایک خلیے کے چکر کے دوران متعدد بار ریپلیکیشن کا آغاز ہوتا ہے۔ پروکیریوٹک اور یوکیریوٹک دونوں ڈی این اے ہیلیکیس لوڈنگ کو براہ راست کرنے کے لیے اے ٹی پی بائنڈنگ اور ہائیڈرولیسس کا استعمال کرتے ہیں اور دونوں صورتوں میں ہیلیکیس کو غیر فعال شکل میں لوڈ کیا جاتا ہے۔ تاہم، یوکیریوٹک ہیلیکیسز ڈبل ہیکسامرس ہوتے ہیں جو ڈبل اسٹرینڈڈ ڈی این اے پر لدے ہوتے ہیں جبکہ پروکیریوٹک ہیلیکیسز سنگل ہیکسامرس ہوتے ہیں جو سنگل اسٹرینڈڈ ڈی این اے پر لدے ہوتے ہیں۔ کروموسوم کی علیحدگی پروکیریوٹک اور یوکیریوٹک خلیوں کے درمیان ایک اور فرق ہے۔ تیزی سے تقسیم ہونے والے خلیات، جیسے بیکٹیریا، اکثر کروموسوم کو الگ کرنا شروع کر دیتے ہیں جو اب بھی نقل کے عمل میں ہیں۔ یوکرائیوٹک خلیوں میں کروموسوم کو بیٹی کے خلیوں میں الگ کرنا اس وقت تک شروع نہیں کیا جاتا جب تک کہ تمام کروموسوم میں نقل مکمل نہ ہو جائے۔ تاہم، ان اختلافات کے باوجود، نقل کا بنیادی عمل پروکیریوٹک اور یوکیریوٹک ڈی این اے دونوں کے لیے یکساں ہے۔ یوکرائیوٹک ڈی این اے نقل پروٹین کی فہرست یوکرائیوٹک ڈی این اے نقل میں شامل بڑے پروٹین کی فہرست: ڈی این اے نقل پروکرائیوٹک ڈی این اے نقل عمل بھی دیکھیں حوالہ جات ڈی این اے نقل