Endospore staining
اینڈوسپور سٹیننگ ایک ایسی تکنیک ہے جو بیکٹیریا کے نمونے میں اینڈوسپورس کی موجودگی کی شناخت کے لیے بیکٹیریاولوجی میں استعمال ہوتی ہے۔ بیکٹیریا کے اندر، اینڈوسپورس حفاظتی ڈھانچے ہوتے ہیں جو انتہائی حالات سے بچنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں، بشمول اعلی درجہ حرارت جو انہیں کیمیکلز کے لیے انتہائی مزاحم بناتے ہیں۔ اینڈوسپورس میں بہت کم یا کوئی اے ٹی پی نہیں ہوتا ہے جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ وہ کتنے غیر فعال ہو سکتے ہیں۔ اینڈوسپورس میں کیریٹن سے بنی ایک سخت بیرونی کوٹنگ ہوتی ہے جو انہیں نیوکلک ڈی این اے کے ساتھ ساتھ دیگر موافقت سے بھی بچاتی ہے۔ اینڈوسپورز نباتاتی خلیوں میں دوبارہ پیدا ہونے کے قابل ہوتے ہیں، جو ایک حفاظتی نوعیت فراہم کرتے ہیں جس کی وجہ سے انہیں عام تکنیکوں جیسے سادہ داغ اور چنے کے داغ کا استعمال کرتے ہوئے داغ لگانا مشکل ہو جاتا ہے۔ اینڈوسپور سٹیننگ کے لیے خصوصی تکنیکوں میں شیفر-فلٹن سٹین اور مولر سٹین شامل ہیں۔ اینڈاسپورس کی تاریخ کا مطالعہ پہلی بار 1876 میں سائنسدانوں کوہن اور کوچ نے کیا تھا۔ یہ پایا گیا کہ میتھلین بلیو، سفرینن، اور کاربول فوچن جیسے سادہ داغوں کا استعمال کرتے ہوئے اینڈوسپورس کو داغدار نہیں کیا جا سکتا۔ ان سائنسدانوں نے چند دیگر افراد کے ساتھ مل کر دریافت کیا کہ بیج غیر فعال اور گرمی کے خلاف مزاحم تھے۔ 1900 کی دہائی کے اوائل میں، محققین ان اینڈوسپورس سے بیماری اور انفیکشن کو بہتر بنانے کے متبادل طریقے تلاش کرنے کی کوشش کر رہے تھے۔ 1922 میں، ڈورنر نے اینڈوسپورس کو داغدار کرنے کا ایک طریقہ شائع کیا۔ انہوں نے ایک تفریقی داغ لگانے کی تکنیک دریافت کی جہاں اینڈوسپورس سبز دکھائی دیتے ہیں اور نباتاتی خلیات گلابی سرخ دکھائی دیتے ہیں۔ ڈورنر نے اس عمل میں حرارت کو ایک قدم کے طور پر استعمال کیا، لیکن اس میں وقت لگتا تھا، اس لیے 1933 میں شیفر اور فلٹن نے اپنے طریقہ کار میں ترمیم کی۔ شیفر اور فلٹن نے بنسن برنر کا استعمال کرکے حرارتی عمل کو بہت تیز کر دیا۔ اگرچہ یہ طریقہ سب سے زیادہ فائدہ مند نہیں تھا، لیکن یہ ڈورنر کے طریقہ سے کہیں زیادہ آسان تھا۔ اس بہتر طریقہ کار نے ایک تیز اور آسان جانچ فراہم کی اور بیج کو رنگوں کے لیے زیادہ حساس ہونے کی اجازت دی۔ آج تک، بیکٹیریا کی شناخت میں مدد کے لیے شیفر-فلٹن داغ اب بھی کیا جاتا ہے۔ مثال کے طور پر اینڈوسپورس کئی مشکل حالات میں دہائیوں تک رہنے کے قابل ہوتے ہیں، جیسے کہ خشک ہونا اور منجمد ہونا۔ اس کی وجہ یہ ہے کہ اینڈوسپور کے اندر ڈی این اے طویل عرصے تک زندہ رہنے کے قابل ہوتا ہے۔ زیادہ تر بیکٹیریا اپنی اعلی مزاحمت کی وجہ سے اینڈوسپورس بنانے سے قاصر ہیں، لیکن کچھ عام انواع جنرا بیسیلس (100 سے زیادہ پرجاتیوں) اور کلوسٹریڈیم (160 سے زیادہ پرجاتیوں) ہیں۔ - بیسیلس اینتھریس، جو اینتھراکس کا سبب بنتا ہے-بیسیلس سیریس-دو قسم کے فوڈ پوائزننگ کا سبب بن سکتا ہے: ایمیٹک اور اسہال-بیسیلس سبٹیلس-جو مٹی میں پایا جاتا ہے-کلوسٹریڈیم ٹیٹانی،-وہ بیج جو لاک جبڑے (ٹیٹنس) اور سخت فالج کا سبب بنتا ہے۔ کلوسٹریڈیم بوٹولینم-ایسی غذاؤں میں پائے جانے والے بیج جن کو مناسب طریقے سے ڈبے میں بند نہیں کیا گیا ہے۔ کلوسٹریڈیم بوٹولینم کو بعض اوقات بوٹوکس کے طور پر فروخت کیا جاتا ہے اور اعصاب کی منتقلی کو روکتا ہے۔ - کلوسٹریڈیم ڈفیسائل-بڑی آنت میں سوزش کا سبب بنتا ہے، اکثر دیگر اینٹی بائیوٹکس سے۔ علامات میں اسہال، پیٹ میں درد اور بخار شامل ہیں۔ شکل اور مقام اینڈوسپورس کی اقسام جن کی شناخت کی جا سکتی ہے ان میں فری اینڈوسپورس، سنٹرل اینڈوسپورس (خلیے کے وسط میں)، سب ٹرمینل (خلیے کے آخر اور وسط کے درمیان)، اور ٹرمینل (خلیے کے آخر میں) اینڈوسپورس شامل ہیں۔ ٹرمینل یا سب ٹرمینل کا مجموعہ بھی ہو سکتا ہے۔ اینڈوسپورس کو شکل کی بنیاد پر الگ کیا جا سکتا ہے، یا تو گول یا انڈاکار (انڈاکار)، خلیے سے متعلق سائز، اور آیا وہ خلیے کو سوجنے کا سبب بنتے ہیں یا نہیں۔ سٹیننگ میکانزم شیفر-فلٹن سٹیننگ طریقہ کار میں، ایک بنیادی داغ جس میں میلاکائٹ گرین ہوتا ہے، بیکٹیریا کو بھاپ میں ڈال کر بیج میں زبردستی ڈال دیا جاتا ہے۔ بیج پر داغ لگانے کے لیے میلیکائٹ گرین کو سلائیڈ پر 15 منٹ یا اس سے زیادہ وقت کے لیے چھوڑا جا سکتا ہے۔ بیج کو ان کی کثافت کی وجہ سے داغ لگنے میں کافی وقت لگتا ہے، اس لیے اس تفریقی داغ کو انجام دیتے وقت گرمی مورڈنٹ کے طور پر کام کرتی ہے۔ ملاکائٹ گرین پانی میں گھلنشیل ہوتا ہے لہذا نباتاتی خلیوں اور سپور مدر خلیوں کو آستین شدہ پانی سے بے رنگ کیا جا سکتا ہے اور 0.5 فیصد سیفرانن کے ساتھ اس کا مقابلہ کیا جا سکتا ہے۔ آخر میں، ایک مناسب سمیر اینڈوسپور کو سرخ یا گلابی رنگ کے خلیے کے اندر سبز نقطے کے طور پر دکھائے گا۔ مائیکوبیکٹیریم ایک رکاوٹ ہے جس کا سامنا اس قسم کے داغ لگانے کے عمل سے ہوتا ہے کیونکہ یہ اب بھی سبز رنگ کا داغ لگاتا ہے حالانکہ یہ کوئی اینڈوسپورس پیدا نہیں کرتا ہے۔ یہ اس کی مومی خلیے کی دیوار کی وجہ سے ہے جو ڈی کلرائزنگ کے عمل کے بعد بھی میلاکائٹ سبز رنگ کو برقرار رکھتی ہے۔ اس مخصوص قسم کے جراثیم کے بارے میں مزید معلومات حاصل کرنے کے لیے ایسڈ فاسٹ سٹین نامی ایک مختلف قسم کا داغ لگانا پڑے گا۔ داغ لگانے کا طریقہ جراثیم کش تکنیک کا استعمال کرتے ہوئے مطلوبہ جاندار کے ساتھ تیار اور ہوا میں خشک گرمی فکسڈ سلائیڈ۔ ابلتے پانی کا غسل تیار کریں۔ سلائیڈ کو کاغذ کے تولیے کے ٹکڑے سے ڈھانپیں اور پانی کے غسل خانے کے اوپر داغدار ریک پر رکھیں۔ کاغذ کے تولیے کو سلائیڈ پر ملاکائٹ گرین (بنیادی داغ) سے بھریں۔ سلائیڈ کو 5 سے 7 منٹ (مورڈنٹ) تک بھاپ میں ڈالیں۔ وقت ختم ہونے کے بعد، فورسیپس کا استعمال کرتے ہوئے پانی کے غسل سے سلائیڈ کو احتیاط سے ہٹا دیں۔ کاغذی ٹاور کو ہٹا دیں۔ سلائیڈ کو ٹھنڈا ہونے دیں، اور پھر داغدار ریک کے اوپر فورسیپس کا استعمال کرتے ہوئے، ہلکے سے آستین والے پانی سے دھوئیں جب تک کہ بہاؤ صاف نہ ہو جائے (ڈی کلرائزر)۔ کسی بھی اضافی پانی کو ڈالو اور اسٹیننگ ریک پر سلائیڈ لگائیں اور ایک منٹ کے لیے سیفرانن (کاؤنٹر اسٹین) کے ساتھ فلڈ کریں۔ کسی بھی اضافی سفرینن کو آستین والے پانی سے آہستہ سے دھو لیں اور احتیاط سے دونوں طرف سے خشک کریں۔ جب سلائیڈ خشک ہو تو تیل وسرجن مقصد (100X) کے تحت خوردبین کے نیچے سلائیڈ دیکھیں۔ حوالہ جات سٹیننگ مائکروبیولوجی تکنیک بیکٹیریاولوجی مائکروسکوپی