Miles and Misra method
میلز اور مشرا طریقہ (یا سطح قابل عمل گنتی) ایک ایسی تکنیک ہے جو مائکروبیولوجی میں بیکٹیریل معطلی یا ہوموجنیٹ میں کالونی بنانے والی اکائیوں کی تعداد کا تعین کرنے کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ اس تکنیک کو پہلی بار 1938 میں میلز، مشرا اور ارون نے بیان کیا تھا جو اس وقت ایل ایس ایچ ٹی ایم میں کام کر رہے تھے۔ میلز اور مشرا طریقہ کار کو درست دکھایا گیا ہے۔ مواد ایک کیلیبریٹڈ ڈراپ پائپٹ، یا خودکار پائپٹ، جو 20 ایم ایل کے قطرے پہنچاتا ہے۔ غذائیت اگر یا دیگر مناسب میڈیم پر مشتمل پیٹری پکوان۔ فاسفیٹ بفرڈ سیلائن (پی بی ایس) یا دیگر مناسب ڈائلیوینٹ۔ بیکٹیریل معطلی یا ہوموجنیٹ۔ طریقہ انوکولم/سسپنشن کو 1x سسپنشن کو 9x ڈائلیوینٹ میں شامل کرکے سیریل ڈائلیوٹ کیا جاتا ہے۔ جب بیکٹیریا کی مقدار معلوم نہ ہو تو کم از کم 10−8 تک ڈائلیوشن کیا جانا چاہیے۔ ہر ڈائلیوشن سیریز کے لیے تین پلیٹوں کی ضرورت ہوتی ہے، شماریاتی وجوہات کی بناء پر اوسطا کم از کم 3 گنتی کی ضرورت ہوتی ہے۔ پلیٹوں کی سطح کو کافی حد تک خشک ہونے کی ضرورت ہے تاکہ 20 ایم ایل ڈراپ کو 15-20 منٹ میں جذب کیا جا سکے۔ پلیٹوں کو مساوی شعبوں میں تقسیم کیا گیا ہے (فی پلیٹ 8 تک استعمال کرنا ممکن ہے)۔ شعبوں کو ڈائلیوشن کے ساتھ لیبل کیا جاتا ہے۔ ہر شعبے میں، مناسب ڈائلیوشن کا 1 x 20 ملی لیٹر اگر کی سطح پر گرایا جاتا ہے اور بوند کو قدرتی طور پر پھیلنے دیا جاتا ہے۔ طریقہ کار کی اصل وضاحت میں 2.5 سینٹی میٹر کی اونچائی سے ایک قطرہ 1.5-2.0 سینٹی میٹر کے رقبے پر پھیلا ہوا ہے۔ پائپیٹ کے ساتھ اگر کی سطح کو چھونے سے گریز کرنا ضروری ہے۔ پلیٹوں کو بینچ پر سیدھا چھوڑ دیا جاتا ہے تاکہ الٹ سے پہلے خشک کیا جا سکے اور انکیوبیشن 37 ڈگری سیلسیس پر 18-24 گھنٹوں کے لیے (یا استعمال شدہ جاندار اور اگر کو مدنظر رکھتے ہوئے مناسب انکیوبیشن حالات)۔ ہر شعبے کا مشاہدہ ترقی کے لیے کیا جاتا ہے، زیادہ ارتکاز ڈراپ کے رقبے، یا بڑی تعداد میں چھوٹی/ضم شدہ کالونیوں کے مقابلے میں متمول ترقی دے گا۔ کالونیوں کو اس شعبے میں شمار کیا جاتا ہے جہاں مکمل سائز کی مجرد کالونیوں کی سب سے زیادہ تعداد دیکھی جا سکتی ہے (عام طور پر 2-20 کالونیوں کے درمیان والے شعبوں کو شمار کیا جاتا ہے)۔ مندرجہ ذیل مساوات اصل الکوٹ/نمونے سے فی ملی لیٹر کالونی بنانے والی اکائیوں (سی ایف یو) کی تعداد کا حساب لگانے کے لیے استعمال کی جاتی ہے: سی ایف یو فی ملی لیٹر = ڈائلیوشن x 50 x ڈائلیوشن فیکٹر کے لیے کالونیوں کی اوسط تعداد۔ فوائد دوسرے طریقوں سے زیادہ تیز۔ کام کرنے والی سطح پر کم بیکٹیریل آلودگی پیدا کریں۔ کالونی بنانے والی اکائی حوالہ جات سیل کلچر تکنیک مائکروبیولوجی تکنیک بھی دیکھیں۔