Minusheet perfusion culture system
مائنس شیٹ پرفیوژن کلچر سسٹم کا استعمال ایڈرینٹ خلیوں کے ساتھ مل کر جدید سیل کلچر کے تجربات کے لیے اور منتخب بائیو میٹریلز، خصوصی ٹشو کیریئرز اور ہم آہنگ پرفیوژن کلچر کنٹینرز کے ساتھ مل کر خصوصی ٹشوز تیار کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ مائنس شیٹ پرفیوژن کلچر سسٹم کی تکنیکی ترقی وٹرو حالات کے تحت ایک ایسا ماحول بنانے کے خیال سے کارفرما تھی جو جاندار کے اندر پائے جانے والے خصوصی بافتوں کی صورتحال سے جتنا ممکن ہو اتنا ملتا جلتا ہو۔ اس ایجاد کی بنیاد اس لیے مائنس شیٹ ٹشو کیریئرز میں نصب زیادہ سے زیادہ سیل چپکنے کے لیے انفرادی طور پر منتخب کردہ بائیو میٹریلز ہیں۔ مزید برآں، سانس کی گیس سمیت ہمیشہ تازہ غذائیت پیش کرنے اور ٹشو سے متعلق مخصوص سیال ماحول کی تقلید کرنے کے لیے، ٹشو کیریئرز کو ہم آہنگ پرفیوژن کلچر کنٹینرز میں ڈالا جا سکتا ہے۔ نتیجے کے طور پر، مختلف قسم کی اشاعتیں اس بات کی وضاحت کرتی ہیں کہ اس اختراعی نقطہ نظر سے پیدا ہونے والے بافت ایک بہترین اور مستحکم معیار کی نمائش کرتے ہیں۔ اس طرح، ایک طرف یہ نظام مستقل خلیوں کی افزائش اور خصوصی بافتوں کی نسل کے لیے انتہائی موافقت پذیر بنیاد فراہم کرتا ہے۔ دوسری طرف مائنس شیٹ پرفیوژن کلچر سسٹم روایتی جامد 24 ویل کلچر پلیٹ اور جدید پرفیوژن کلچر ٹیکنالوجی کے درمیان ایک طریقہ کار کے فرق کو ختم کر رہا ہے۔ خصوصی ٹشوز کی اہم نسل کلچر میں خصوصی ٹشوز کی فوری طور پر ضرورت ہوتی ہے جو کہ ری جنریٹو میڈیسن، ٹشو انجینئرنگ، نینو ٹیکنالوجی، بائیو میٹریل ریسرچ اور نئے تیار شدہ دواسازی کی جدید زہریلی جانچ میں ہوتے ہیں۔ تاہم، اکثر یہ مشاہدہ کیا جاتا ہے کہ اٹھائے ہوئے بافت متوقع فعال خصوصیات کی نمائش نہیں کرتے ہیں۔ اس کے بجائے تفریق کا مشاہدہ کیا جاتا ہے [1-4]۔ یہ خلیے کی حیاتیاتی تبدیلیاں خلیوں کی علیحدگی کے بعد پیدا ہوتی ہیں اور کسی ڈش میں جامد کلچر کے دوران سب آپٹیمل سیال ماحول اور بائیو میٹریلز پر معمولی چپکنے کی وجہ سے آگے بڑھتی ہیں۔ غذائیت اور سانس کی گیس کے ساتھ مزید بے قابو فراہمی، میٹابولائٹس اور پیراکرین عوامل کی حد سے زیادہ یا ریولوجیکل تناؤ کی کمی تفریق کی ڈگری میں اضافہ کر سکتی ہے۔ نتیجتا، خصوصی بافتوں کی زیادہ سے زیادہ نسل کے حوالے سے ایک طاقتور حکمت عملی کو زیادہ سے زیادہ ممکنہ نقصان دہ پیرامیٹرز کو خارج کرنا پڑتا ہے، جبکہ بافتوں کی نشوونما کے عمل کی حمایت کرنے والے عوامل کو تیز کرنا ضروری ہے۔ [5] منتخب بائیو میٹریل ٹشو کیریئر کے اندر ترقی کو فروغ دیتے ہیں قدرتی حالات میں ایک بہترین ٹشو کی نشوونما کے لیے ایک شرط ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کے ساتھ سیل مخصوص تعامل ہے، جبکہ وٹرو حالات میں ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کے لیے ایک متبادل کا انتخاب کرنا پڑتا ہے۔ تاہم، اہم مسئلہ یہ ہے کہ بائیو میٹریل ایک پختہ ٹشو کے اندر فعال خصوصیات کی نشوونما کو اچھے اور برے معنوں میں متاثر کر سکتا ہے۔ نتیجتا، ڈی سیلولرائزڈ ایکسٹرا سیلولر میٹرکس، نئے تیار کردہ مصنوعی پولیمر، بائیوڈیگریڈیبل اسکیفولڈز، سیرامکس یا دھاتی مرکب دھاتوں کی مناسبیت کی پیش گوئی نہیں کی جا سکتی لیکن اس کی جانچ کی جانی چاہیے۔ سیل چپکنے اور مواصلات کو مثبت طور پر متاثر کرنے والے پیرامیٹرز کو پورا کرنے کے لیے، تکنیکی تصور ایک مائنس شیٹ ٹشو کیریئر پر مبنی ہے (شکل۔ 1)۔ اس ٹول کی مدد سے سیل کے چپکنے اور ٹشو کی نشوونما کی جانچ انفرادی طور پر منتخب کردہ بائیو میٹریلز سے کی جا سکتی ہے۔ یہ تجربات پہلے جامد (شکل) کے تحت کیے جا سکتے ہیں۔ 2) اور پھر متحرک (شکل۔ 3) ثقافتی حالات [6]۔ دونوں صورتوں میں ایک مائنس شیٹ ٹشو کیریئر نقصان کو روکتا ہے لیکن تجربے کے دوران موجود خلیوں یا ٹشوز کی نشوونما میں مدد کرتا ہے۔ روایتی 24 ویل کلچر پلیٹ کے ساتھ ہم آہنگ رہنے کے لیے ایک منتخب بائیو میٹریل کو 13 ملی میٹر کے قطر میں مکے مارنا ضروری ہے۔ اس شکل میں بہت سے مواد تجارتی طور پر بھی دستیاب ہیں۔ مزید مواد کو فلٹرز، ورقوں، جالوں، لوہے اور سہاروں کی شکل میں لگایا جا سکتا ہے (شکل۔ 1 اے)۔ آسان ہینڈلنگ کے لیے اور ترقی کے دوران نقصان کو روکنے کے لیے منتخب نمونوں کو مائنس شیٹ ٹشو کیریئر کے بنیادی حصے میں رکھا جاتا ہے (شکل۔ 1b)۔ تناؤ کے دائرے کو نیچے دبانے سے بائیو میٹریل کو پوزیشن میں رکھا جاتا ہے (شکل۔ 1 سی)۔ ٹشو کیریئر کو نصب کرنے کے بعد ایک تھیلے میں لپیٹا جاتا ہے اور جراثیم سے پاک کیا جاتا ہے۔ ٹشو کیریئر پر سیل سیڈنگ سیل سیڈنگ کے لیے نصب ٹشو کیریئر کو 24 ویل کلچر پلیٹ میں فورسپس کے ذریعے منتقل کیا جاتا ہے (شکل۔ 2)۔ خلیوں کو ٹشو کیریئر کلچر میڈیم کے اوپر مرکوز کرنے کے لیے ایک سطح پر شامل کیا جاتا ہے تاکہ منتخب کردہ بائیو میٹریل کو صرف گیلا کیا جا سکے۔ پھر خلیوں کا ایک الکوٹ ایک پائپیٹ کے ذریعے نصب شدہ بائیو میٹریل کی سطح پر منتقل کیا جاتا ہے۔ ٹشو کیریئر کے ساتھ ایک معیاری کلچر پروٹوکول کو اوپری جانب خلیوں کو بیج دے کر شروع کیا جا سکتا ہے۔ جب ٹشو کیریئر کو موڑ دیا جاتا ہے، تو خلیوں کو دوسری طرف بھی بیج دیا جا سکتا ہے تاکہ دو مختلف خلیوں کی اقسام کے ساتھ مشترکہ کلچر کے تجربات ممکن ہو جائیں۔ نہ صرف واحد خلیات بلکہ ٹشو کا ایک پتلا ٹکڑا بھی مینی شیٹ ٹشو کیریئر کے اندر بنے ہوئے جال کے دو ٹکڑوں کے درمیان نصب کیا جا سکتا ہے۔ مزید لچکدار مواد جیسے کولیجن شیٹس کو ٹشو کیریئر جیسے ڈھول کی جلد میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔ آخری لیکن کم از کم بہترین نتائج مقامی پیرنچیما کی نشوونما [5,6,8] کے لیے ایک مصنوعی انٹرسٹیٹیئم کے طور پر پالیسٹر اون کو نصب کر کے حاصل کیے گئے۔ یہ واضح ہے کہ ہر مخصوص ٹشو کے لیے ٹشو کیریئر کے اندر بہت انفرادی مقامی ماحول بنایا جا سکتا ہے۔ مطابقت پذیر پرفیوژن کلچر کنٹینرز یہ دکھایا گیا ہے کہ 24 ویل کلچر پلیٹ کے اندر جامد ماحول غذائیت اور ہارمونز میں کمی، میٹابولائٹس میں بے قابو اضافہ اور وقت کے دوران پیراکرین عوامل کی حد سے تجاوز کا باعث بنتا ہے۔ ان وجوہات کی بنا پر 24 ویل کلچر پلیٹ میں سیل سیڈنگ کی مختصر مدت کے لیے ہی مستقل خلیوں کے ساتھ ایک مائنس شیٹ ٹشو کیریئر کا استعمال کیا جاتا ہے۔ نتیجتا، خلیوں کے چپکنے کے بعد ٹشو کیریئر کو ایک متحرک سیال ماحول پیش کرنے کے لیے پرفیوژن کلچر کنٹینر میں منتقل کر دیا جاتا ہے۔ خصوصی بافتوں کی انفرادی ضروریات کو پورا کرنے کے لیے مختلف قسم کے پرفیوژن کلچر کنٹینرز بنائے گئے تھے (شکل۔ 3)۔ پرفیوژن کلچر کنٹینرز میں سے ہر ایک میں کلچر میڈیم کی نقل و حمل کے لیے کم از کم ایک انلیٹ اور ایک آؤٹ لیٹ ہوتا ہے۔ کنٹینر کا ایک بنیادی ورژن مسلسل درمیانے درجے کی نقل و حمل کے تحت بالترتیب بڑھتے ہوئے بافتوں کے خلیوں کے سادہ غسل کی اجازت دیتا ہے (شکل۔ 4 اے)۔ گریڈینٹ کنٹینر میں ٹشو کیریئر کو بیس اور ڈھکن کے درمیان رکھا جاتا ہے تاکہ دونوں اطراف کو انفرادی میڈیا فراہم کیا جا سکے جو اپیتھیلیا کے لیے ایک عام ماحول کی نقل کرتے ہیں (شکل۔ 4b)۔ ایک مزید کلچر کنٹینر ایک شفاف ڈھکن اور بیس سے بنایا جاتا ہے جو ٹشو کی نشوونما کے دوران خوردبین مشاہدے کی اجازت دیتا ہے (شکل۔ 4 سی)۔ اس کے علاوہ، ایک پرفیوژن کلچر کنٹینر ایک لچکدار سلیکون ڈھکن کی نمائش کر سکتا ہے۔ ایک سنکی روٹر کے ذریعے اس ڈھکن پر طاقت کا اطلاق کارٹلیج اور ہڈی کے ٹشو انجینئرنگ میں ضرورت کے مطابق مکینیکل بوجھ کی تقلید کرتا ہے۔ شکل والے بافت جیسے آوریکل یا کارٹلیج کی مختلف شکلیں ایک خصوصی ٹشو انجینئرنگ کنٹینر میں انفرادی سہاروں سے پیدا کی جا سکتی ہیں۔ آخر میں، گردوں کے اسٹیم/پروجینیٹر خلیوں سے حاصل ہونے والی نلیوں کی مقامی توسیع پالسٹر اون سے بنے مصنوعی انٹرسٹیٹیئم سے بھرے پرفیوژن کنٹینر کے اندر حاصل کی جاتی ہے۔ آخر میں، ان تمام کنٹینرز کو ایک خاص پولی کاربونیٹ (میکرولون®) سے تیار کیا جاتا ہے تاکہ ان سب کو متعدد استعمال کے لیے آٹوکلیو کیا جا سکے۔ پرفیوژن کلچر کے تجربات کی کارکردگی پرفیوژن کلچر کنٹینر کے اندر 37 ڈگری سیلسیس کے ضروری درجہ حرارت کو برقرار رکھنے کے لیے، ہفتوں تک کلچر کے تجربات کی کارکردگی کے دوران ایک ہیٹنگ پلیٹ (میڈیکس-نیگل، کیئل، جرمنی) اور ایک کور ڑککن (دکھایا نہیں گیا) استعمال کیا جاتا ہے۔ 5، 7)۔ کلچر میڈیم کی نقل و حمل کو آہستہ آہستہ گھومنے والے پیریسٹالٹک پمپ (آئی ایس ایم اے ٹی ای سی، آئی پی سی این 8، ورتھیم، جرمنی) کا استعمال کرتے ہوئے بہترین طریقے سے انجام دیا جاتا ہے۔ یہ 0.1 اور 5 ملی لیٹر فی گھنٹہ کے درمیان سایڈست اور درست پمپ کی شرح فراہم کرنے کے قابل ہے۔ اسٹوریج بوتل سے پارفیوژن کلچر کنٹینر میڈیم کے ذریعے گزرنے پر موجود خلیات فراہم کرنے کے لیے ایک سوار ٹشو کیریئر کے ساتھ منتقل کیا جاتا ہے۔ پرفیوژن کلچر کنٹینر کے اندر ٹشو کیریئر کی صحیح ہندسی جگہ ہمیشہ تازہ غذائیت اور ہر طرف سے سانس کی گیس کے ساتھ درمیانے درجے کی فراہمی کی نقل و حمل کے دوران ضمانت دیتی ہے۔ ایک ہی وقت میں یہ میٹابولک مصنوعات کے غیر جسمانی جمع اور پیراکرین عوامل کی حد سے تجاوز کو روکتا ہے۔ پورے کلچر کی مدت تک اس کنٹرول شدہ ماحول کو برقرار رکھنے کے لیے، میٹابولائزڈ میڈیم کو ایک علیحدہ فضلہ کی بوتل میں جمع کیا جاتا ہے۔ نتیجتا، میڈیم دوبارہ گردش نہیں کرتا ہے۔ پرفیوژن کلچر کے دوران پی ایچ کا استحکام عام طور پر سیل کلچر کے تجربات سی او 2 انکیوبیٹر میں کیے جاتے ہیں۔ اس طرح کے ماحول میں پرفیوژن کلچر کے تجربات بھی کیے جا سکتے ہیں۔ تاہم، ایک بہت بہتر حل لیبارٹری ٹیبل پر ماحولیاتی ہوا کے نیچے پرفیوژن کلچر تجربات کی کارکردگی ہے، کیونکہ یہ مکمل ہینڈلنگ کو آسان بناتا ہے۔ تاہم، اس صورت میں کلچر میڈیم کو ماحولیاتی ہوا میں ایڈجسٹ کرنا پڑتا ہے۔ ایک انکیوبیٹر کے اندر میڈیا کو 5 فیصد کاربن ڈائی آکسائیڈ کے ماحول میں رکھنا ہمیشہ NaHCO3 کی نسبتا زیادہ مقدار پر مشتمل ہوتا ہے تاکہ 7.2 اور 7.4 کے درمیان مستقل پی ایچ برقرار رہے۔ اگر اس طرح کے تیار کردہ میڈیم کو CO2 انکیوبیٹر کے باہر پرفیوژن کلچر کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، تو ماحولیاتی ہوا میں CO2 (0.3 ٪) کے کم مواد کی وجہ سے پی ایچ جسمانی حد سے بہت زیادہ الکلین اقدار کی طرف منتقل ہو جائے گا۔ اس وجہ سے کاربن ڈائی آکسائیڈ انکیوبیٹر سے باہر پرفیوژن کلچر کے لیے استعمال ہونے والے کسی بھی میڈیم کو NaHCO3 کے ارتکاز کو کم کرکے اور/یا حیاتیاتی بفرز جیسے کہ HEPES (GIBCO/Invitrogen, Karlsruhe، جرمنی) یا BUffer ALL (Sigma-Aldric-Chemie، München، جرمنی) کو شامل کرکے مستحکم کرنا پڑتا ہے۔ حیاتیاتی بفر محلول کی بڑھتی ہوئی مقدار کو میڈیم کے الکوٹ میں ملا کر ضروری رقم کا آسانی سے تعین کیا جا سکتا ہے۔ پھر میڈیم کو ماحولیاتی ہوا کے نیچے 37 ڈگری سیلسیس پر تھرمو پلیٹ پر رات بھر توازن برقرار رکھنا چاہیے۔ مثال کے طور پر، 50 ایم ایم او ایل/ایل ہیپس کا اطلاق یا بفر آل کے مساوی (سی اے۔ 1 فیصد) سے آئی ایم ڈی ایم (اسکوو کا ماڈیفائیڈ ڈولبیکو میڈیم، جی آئی بی سی او/انویٹروجن) لیبارٹری ٹیبل پر ماحولیاتی ہوا کے تحت طویل مدتی پرفیوژن کلچر کے دوران 7.4 کا مستقل پی ایچ برقرار رکھے گا۔ درمیانے درجے میں آکسیجن کی دستیابی پرفیوژن کلچر کے تجربے میں او 2 کی اعلی سنترپتی حاصل کرنے کے لیے آئی ایم ڈی ایم جیسے ایک منتخب میڈیم کو گیس پارगम्य سلیکون ٹیوب کے ذریعے منتقل کرنا پڑتا ہے۔ سلیکون ٹیوب کا استعمال ایک پتلی دیوار (1 ملی میٹر)، چھوٹے اندرونی قطر (1 ملی میٹر) اور اس کی توسیعی لمبائی (1 میٹر) کی وجہ سے پھیلاؤ کے ذریعے گیس کے تبادلے کے لیے ایک بڑی سطح فراہم کرتا ہے۔ مثال کے طور پر، ایک معیاری پرفیوژن کلچر کے تجربے کے دوران ماحولیاتی ہوا کے خلاف متوازن آئی ایم ڈی ایم (3024 ملی گرام/ایل این اے ایچ سی او 3، 50 ایم ایم او ایل/ایل ایچ ای پی ای ایس) کا تجزیہ کم از کم 160 ایم ایم ایچ جی او 2 [7] کے مستقل جزوی دباؤ کو ظاہر کرتا ہے۔ آکسیجن کے مواد کا ماڈیولیشن یہ دکھایا گیا ہے کہ بڑھتے ہوئے خلیوں اور بافتوں کو آکسیجن کی بہت انفرادی ضروریات ہوتی ہیں۔ اس وجہ سے یہ ضروری ہے کہ آکسیجن کے مواد کو انفرادی پرفیوژن کلچر کے تجربات میں ڈھالا جا سکے۔ تکنیکی حل ایک گیس ایکسچینجر ماڈیول ہے جس میں گیس انلیٹ اور آؤٹ لیٹ ہوتا ہے (شکل۔ 6 اے)۔ مزید یہ کہ درمیانے درجے کی نقل و حمل کے لیے ایک لمبی پتلی دیوار والی سلکان ٹیوب کے ساتھ ایک سرپل ماڈیول کے اندر نصب کیا جاتا ہے۔ چونکہ ٹیوب انتہائی گیس پارगम्य ہے، اس لیے یہ گیس ایکسچینج ماڈیول کے کلچر میڈیم اور اندرونی ماحول کے درمیان گیسوں کے زیادہ سے زیادہ پھیلاؤ کی ضمانت دیتی ہے۔ نتیجتا، مطلوبہ گیس کے ماحول کو ماڈیول کے ذریعے ایک مخصوص گیس کے مرکب کے مسلسل بہاؤ سے ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔ اس طرح آکسیجن یا کسی بھی دوسری گیس کے مواد کو پھیلاؤ کے ذریعے میڈیم میں ماڈیول کیا جا سکتا ہے۔ اس سادہ پروٹوکول کو لاگو کرنے سے طویل مدتی کلچر کے تجربات کے دوران ٹرانسپورٹ میڈیم کے اندر آکسیجن کے جزوی دباؤ کو بالکل جراثیم سے پاک حالات میں کم کرنا ممکن ہو گیا۔ [7] نقصان دہ گیس کے بلبلوں کا خاتمہ پرفیوژن کلچر کے تجربات کرتے ہوئے ہمیشہ اس بات پر غور کرنا پڑتا ہے کہ کلچر میڈیم کی سست نقل و حمل کے دوران گیس کے بلبلے بن رہے ہیں۔ وہ اسٹوریج بوتل میں میڈیم کے سکشن کے دوران، ٹیوب کے اندر نقل و حمل کے دوران، کلچر کنٹینر کے اندر تقسیم کے دوران اور فضلہ کی بوتل کے راستے میں اخراج کے دوران پیدا ہوتے ہیں۔ نامعلوم وجوہات کی وجہ سے گیس کے بلبلے خاص طور پر ٹیوبوں، کنیکٹرز اور پرفیوژن کنٹینرز کے درمیان مادی منتقلی پر جمع ہوتے ہیں۔ سب سے پہلے یہ گیس کے بلبلے اتنے چھوٹے ہوتے ہیں کہ انہیں انسانی آنکھ سے نہیں دیکھا جا سکتا، لیکن کلچر میڈیم کی جاری نقل و حمل کے دوران وہ سائز میں بڑھتے ہیں اور ایک ایمبولس بنانے کے قابل ہوتے ہیں جو درمیانے بہاؤ کو بڑے پیمانے پر روکتا ہے۔ کلچر کنٹینر کے اندر گیس کے بلبلے درمیانی فراہمی کی علاقائی قلت کا باعث بن رہے ہیں اور سیال کے تسلسل میں وقفے کا سبب بن رہے ہیں تاکہ بڑے پیمانے پر سیال کے دباؤ میں تبدیلی کا نتیجہ نکل سکے۔ گریڈینٹ پرفیوژن کلچر کنٹینر میں، جہاں دو میڈیا کو بالکل ایک ہی رفتار سے منتقل کیا جاتا ہے، ایمبولک اثرات دباؤ کے فرق کا باعث بن سکتے ہیں جس کے نتیجے میں موجود ایپیٹیلیل رکاوٹ [5,9] کو تباہ کر سکتے ہیں۔ پرفیوژن کلچر کے تجربے کے اندر گیس کے بلبلوں کے ارتکاز سے بچنے کے لیے، ایک گیس ایکسپینڈر ماڈیول تیار کیا گیا تھا (شکل۔ 6b)۔ یہ ماڈیول نقل و حمل کے دوران میڈیم سے گیس کے بلبلوں کو ہٹاتا ہے۔ جب میڈیم گیس ایکسپینڈر ماڈیول میں داخل ہوتا ہے، تو یہ ایک چھوٹے ذخیرے کے اندر اٹھتا ہے اور کسی رکاوٹ سے نیچے گرنے سے پہلے پھیل جاتا ہے۔ اس عمل کے دوران گیس کے بلبلوں کو گیس ایکسپینڈر ماڈیول کے اوپری حصے میں میڈیم سے الگ کیا جاتا ہے۔ نتیجتا، کنٹینر سے نکلنے والا میڈیم آکسیجن سے سیر شدہ ہوتا ہے لیکن گیس کے بلبلوں سے پاک ہوتا ہے [8,9]۔ ایپلی کیشنز کا وسیع دائرہ پچھلے سالوں میں مائنس شیٹ پرفیوژن کلچر سسٹم سے متعلق متعدد مقالے شائع ہوئے۔ وسیع سپیکٹرم اس بات کی وضاحت کرتا ہے کہ ماڈیولر سسٹم کو ٹشو انجینئرنگ، بائیو میٹریل ریسرچ اور ایڈوانسڈ فارماسیوٹیکل ڈرگ ٹوکسائٹی ٹیسٹنگ میں استعمال ہونے والے بہترین سیل حیاتیاتی معیار میں خصوصی ٹشوز پیدا کرنے کے لیے لاگو کیا گیا تھا۔ ان ایپلی کیشنز کی مکمل فہرست ڈیٹا بینک 'پروسیڈنگز ان پرفیوژن کلچر' میں ملتی ہے ('بیرونی لنکس' دیکھیں)۔ جیسا کہ متعدد پیٹنٹ سے ظاہر ہوتا ہے (DE 39 23 279, DE 42 00 446, DE 42 08 805, DE 44 43 902, DE 19530 556, DE 196 48 876 C2, DE 199 52 847 B4, US 5 190 878, US 5 316 945, US 5 665 599, J 2847669, DE 10 2005002 938, PA 10 2004 054 125.6, PA 10 2005001 747.9, پیٹنٹ زیر التواء) ول ڈبلیو منتھ نے پیش کردہ منیشیٹ پرفیوژن کلچر سسٹم ایجاد کیا ہے۔ پچھلے سالوں میں لوسیا ڈینک اور ول ڈبلیو منتھ نے مائنس شیٹ پرفیوژن کلچر سسٹم کے ساتھ متعدد پائلٹ تجربات کیے تھے۔ تجرباتی کام فی الحال زخمی گردوں کے پیرنچیما کی مرمت کے لیے ایک مصنوعی پالئیسٹر انٹرسٹیٹیئم کی تخلیق پر توجہ مرکوز کر رہا ہے۔ 1992 میں منی شیٹ پرفیوژن کلچر سسٹم کو میونخ، جرمنی میں فلپ مورس ریسرچ ایوارڈ 'چیلنج آف دی فیوچر' ملا۔ یہ ایوارڈ ہنری کسنجر، ہنس جوآخم فریڈرکس اور پال مولر نے سونپا۔ مارکیٹ میں مائنس شیٹ پرفیوژن کلچر سسٹم کو متعارف کرانے کے لیے، کیتھرینا لورینز-مینوتھ نے غیر منافع بخش منوسیلز اور منٹسیو ورٹریبس جی ایم بی ایچ (ڈی-93077 بیڈ ایبچ/جرمنی) کی بنیاد رکھی۔ بیرونی روابط پروسیڈنگز ان پرفیوژن کلچر فلپ مورس سٹیفٹنگ مائنشیٹس ویب سائٹ حوالہ جات 1. ایلاؤٹ جی، ہینکنز ٹی، پیپلیو پی، سنائکرز ایس، ونکن ایم، وانہیک ٹی، روجیئرز وی (2006) الگ تھلگ ہیپاٹوسائٹس اور ان کی ثقافتوں کے تفریق کے عمل میں بنیادی سالماتی میکانزم۔ کر ڈرگ میٹاب 7 (6): 629-60۔ 2. شوہ ای، ہوفمین ایس، اسٹاک کے، نوٹبوہم ایچ، مولر آر، روٹر این (2011) 3 ڈی میں کونڈروسائٹ ریڈفرینٹیشن: چپکنے والی سائٹ کی کثافت اور سبسٹریٹ لچک کا اثر۔ جے بائیومیڈ میٹر ریس اے: ڈی او آئی 10.1002/jbm.a.33226۔ 3. ژانگ وائی، لی ٹی ایس، لی ایس ٹی، واوروسکی کے اے، چینگ کے، گلانگ جی، ملیارس کے، ابراہم ایم آر، وانگ سی، ماربن ای (2010) ممالیہ کیڈیومیوسائٹس کی تفریق اور پھیلاؤ 2010 پلس ون 5 (9): ای 12559۔ 4. لیو وائی، جیانگ ایکس، یو ایم کے، ڈونگ جے، ژانگ ایکس، سانگ ایل ایل، چنگ وائی ڈبلیو، لی ٹی، چان ایچ سی (2010) بون میرو سے ماخوذ نیوران سے ایپیٹیلیل خلیوں میں انحراف اور ٹرانس لائنج ریڈ تفریق کے ذریعے تبدیل کرنا۔ سیل بائیول انٹ 34 (11): 1075-83۔ 5. منتھ ڈبلیو ڈبلیو اور ڈینک ایل 2011 ایڈونسٹ خلیوں کے ساتھ ایڈوانسڈ کلچر کے تجربات۔ پرفیوژن کلچر میں واحد خلیوں سے لے کر خصوصی بافتوں تک۔ آئی ایس بی این این آر۔ 978-3-88246-330-9، http://epub.uni-regensburg.de/21484 6۔ منٹ ڈبلیو ڈبلیو، ڈینک ایل، گلاشاؤزر اے 2010 ایک سے زیادہ خصوصی بافتوں کی نسل کے لیے ایک ماڈیولر کلچر سسٹم۔ بائیو میٹریلز 31:2945-2954۔ 7. اسٹریہل آر، شوماکر کے، منتھ ڈبلیو ڈبلیو 2004 نے پرفیوژن کلچر میں جنین کے گردوں میں سانس کی گیس کی ترسیل کو کنٹرول کیا۔ ٹشو اینگ 10 (7-8): 1196-203۔ 8. منٹ ڈبلیو ڈبلیو، اسٹریہل آر، شوماکر کے 2004 ٹشو فیکٹری: فنکشنل ٹشوز کی ان وٹرو نسل کے لیے ایک ماڈیولر سسٹم کا تصوراتی ڈیزائن۔ ٹشو اینگ 10:285-294۔ 9. منٹ ڈبلیو ڈبلیو، ڈینک ایل، روسجر اے 2009 گریڈینٹ پرفیوژن کلچر-بائیو میڈیسن میں اپیتھیلیا کے لیے ٹشو مخصوص ماحول کی تقلید کرنا۔ جے ایپیٹیلیل بائیولوجی اینڈ فارماکولوجی 2:1-13۔ بائیو میٹریلز بائیو میڈیسن سیل کلچر مالیکیولر بائیولوجی تکنیک