SOS chromotest
ایس او ایس کروموٹیسٹ کیمیائی مرکبات کی جینوٹوکسک صلاحیت کا اندازہ لگانے کے لیے ایک حیاتیاتی جانچ ہے۔ یہ ٹیسٹ ایک کلورمیٹرک جانچ ہے جو β-galactosidase کے ساختی جین کے ساتھ فیوژن کے ذریعے Escherichia coli میں جینوٹوکسک ایجنٹوں کے ذریعے پیدا ہونے والے جینوں کے اظہار کی پیمائش کرتا ہے۔ ٹیسٹ نمونوں کی بڑھتی ہوئی تعداد کے ساتھ 96 کنواں مائکرو پلیٹ کے کالموں میں چند گھنٹوں میں کیا جاتا ہے۔ یہ ٹیسٹ جینوٹوکسائٹی کے لیے روایتی امیس ٹیسٹ جانچ کے عملی تکمیل یا متبادل کے طور پر تیار کیا گیا تھا، جس میں اگر پلیٹوں پر بڑھتے ہوئے بیکٹیریا اور ممکنہ طور پر میوٹیجینک مرکبات یا نمونوں سے بے نقاب بیکٹیریا کی اتپریورتن کی شرحوں سے قدرتی اتپریورتن کی شرحوں کا موازنہ کرنا شامل ہے۔ ایس او ایس کروموٹیسٹ کا موازنہ امیس ٹیسٹ جیسے قائم شدہ طریقوں سے درستگی اور حساسیت میں کیا جا سکتا ہے اور یہ جینوٹاکک مرکبات کی جانچ کے لیے ایک مفید ٹول ہے، جو انسانوں میں کارسنجینک ثابت ہو سکتے ہیں، تاکہ مزید گہرائی سے تجزیہ کے لیے کیمیکلز کو الگ کیا جا سکے۔ دیگر بیکٹیریل جینٹوکسائٹی اور میوٹیجینیسیٹی اسیسوں کی طرح، سرگرمی کے لیے میٹابولک ایکٹیویشن کی ضرورت والے مرکبات کی S9 مائکروسومل چوہے کے جگر کے نچوڑ کے اضافے سے تفتیش کی جا سکتی ہے۔ میکانزم ایس او ایس کا ردعمل ای کولی کے جینوٹاکک مرکبات کے ردعمل میں مرکزی کردار ادا کرتا ہے کیونکہ یہ کیمیائی ایجنٹوں کی ایک وسیع صف کا جواب دیتا ہے۔ اس نظام کو متحرک کرنا ڈی این اے کے نقصان کی ابتدائی علامت کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے اور کیا گیا ہے۔ ایس او ایس کے ردعمل میں دو جین کلیدی کردار ادا کرتے ہیں: لیکس اے نظام کے تمام جینوں کے لیے ایک ریپریسر کو انکوڈ کرتا ہے، اور ریک اے ایک پروٹین کو انکوڈ کرتا ہے جو ایس او ایس انڈسنگ سگنل کے ذریعے ایکٹیویشن پر لیکس اے ریپریسر کو توڑنے کے قابل ہوتا ہے (اس معاملے میں جینوٹوکسک کمپاؤنڈ کی موجودگی کی وجہ سے)۔ اگرچہ ایس او ایس ردعمل کا صحیح طریقہ کار ابھی تک معلوم نہیں ہے، لیکن یہ اس وقت پیدا ہوتا ہے جب ڈی این اے کے زخم ڈی این اے کی نقل کو روکتے ہیں یا روکتے ہیں۔ ۔ مختلف اختتامی نکات ایس او ایس سسٹم کے متحرک ہونے کے ممکنہ اشارے ہیں۔ ریکا پروٹین کی سرگرمی، لیکس اے ریپریسر کا پھٹنا، کسی بھی ایس او ایس جین کا اظہار وغیرہ۔ سب سے آسان جانچ میں سے ایک لیک زیڈ کے ساتھ فیوژن کے ذریعے ایس او ایس جین کے اظہار کی نگرانی پر مشتمل ہے، جو ای کولی β-گیلیکٹوسیڈیز کے لیے ساختی جین ہے۔ طریقہ کار ایس او ایس کروموٹیسٹ ای کولی کو جانچنے کے لیے کیمیائی کی بڑھتی ہوئی تعداد کے ساتھ انکیوبیٹ کرنے پر مشتمل ہوتا ہے۔ پروٹین کی ترکیب کے لیے وقت دینے کے بعد، β-galactosidase سرگرمی کی جانچ ایک سادہ رنگین پیمائش کا استعمال کرتے ہوئے کی جاتی ہے۔ ایک لییکٹوز اینالاگ کو شامل کرکے جو انحطاط کے بعد ایک رنگین مرکب پیدا کرتا ہے، رنگ میں آسانی سے قابل مشاہدہ یا قابل مقدار تبدیلی کو میٹرک کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ چونکہ تجربہ شدہ کیمیائی زیادہ ارتکاز پر پروٹین کی ترکیب کو روک سکتا ہے، جس سے بی-گیلیکٹوسیڈیز انڈکشن کا کم اندازہ لگایا جا سکتا ہے، اس لیے خلیوں کی بقا کے لیے ڈیٹا کو پیمانے دینے کے لیے الکلائن فاسفیٹیز کی β-گیلیکٹوسیڈیز کے ساتھ بیک وقت جانچ کی جاتی ہے۔ جانچ آسانی سے کئی گھنٹوں میں مکمل کی جا سکتی ہے۔ اگر مائیکرو پلیٹ ریڈر کا استعمال کیا جاتا ہے، تو ٹیسٹ مقداری ہوتا ہے اور خوراک کے ردعمل کے منحنی خطوط میں ابتدائی لکیری خطہ ہوتا ہے۔ اس لکیری خطے کی ڈھلوان ایک واحد پیرامیٹر، ایس او ایس-انڈسنگ پوٹینسی (ایس او ایس آئی پی) کے ساتھ ہر کمپاؤنڈ کی غیر واضح ایسوسی ایشن کی اجازت دیتی ہے، جو کمپاؤنڈ کی انڈسنگ سرگرمی کی عکاسی کرتی ہے۔ یہ جانچ اسکریننگ کے مقاصد کے لیے کوالٹیٹو (رنگین میلان کا مرئی مشاہدہ)، یا عام طور پر قبول شدہ میٹرکس کے حساب کے لیے مقداری پیمائش (سپیکٹروفوٹومیٹری) دونوں فراہم کرتی ہے۔ مقداری جانچ میں، مرکب کی خوراک-ردعمل (بیٹا-گیلیکٹوسیڈیز کی پیداوار سے منسلک رنگ کی پیداوار) کو پلاٹ کیا جاتا ہے، جس میں ابتدائی لکیری خطے کی ڈھلوان کو عالمگیر پیرامیٹر کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، ایس او ایس-انڈسنگ پوٹینسی (ایس او ایس آئی پی)، جو ایس او ایس ردعمل کو متاثر کرنے کے لیے مرکب کی صلاحیت کی عکاسی کرتا ہے (بالواسطہ طور پر بیٹا-گیلیکٹوسیڈیز کی پیداوار اور لییکٹوز اینالاگ کے ٹوٹنے کے ذریعے ماپا جاتا ہے)۔ عام طور پر، لییکٹوز اینالاگ ایکس-گیل ہوتا ہے، جو بیٹا-گیلیکٹوسیڈیز کے ذریعے الگ ہونے پر نیلا رنگ پیدا کرتا ہے۔ خوراک کے ردعمل کو خلیوں کی بقا کے ذریعے بھی ماپا جاتا ہے، جس کی پیمائش الکلائن فاسفیٹیس (جو پیلا رنگ پیدا کرتا ہے) کے ٹوٹنے کے ذریعے کی جاتی ہے، جس سے ایس او ایس آئی پی کا حساب لگایا جا سکتا ہے۔ اگرچہ ایس او ایس آئی پی ایک ارتکاز پر مبنی میٹرک ہے، لیکن وہی طریقہ پیچیدہ ماحولیاتی مرکب کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے جہاں ارتکاز یا یہاں تک کہ دلچسپی کے مرکبات نامعلوم ہیں۔ انٹرمیڈیٹ ایس او ایس-انڈکشن فیکٹر (ایس او ایس آئی ایف) کے حساب کے ذریعے، جسے نمونوں کی تجزیاتی پیمائش کے بغیر خوراک کے ردعمل کی مثال دینے کے لیے اسی انداز میں ڈائلیوشن کے خلاف پلاٹ کیا جا سکتا ہے۔ فوائد ایس او ایس کروموٹیسٹ کو جینوٹوکسائٹی کے لیے سب سے آسان اور تیز رفتار قلیل مدتی ٹیسٹ سمجھا جاتا ہے۔ یہ کئی وجوہات کی بناء پر روایتی امیس ٹیسٹ کے لیے ایک مفید اور لاگت سے موثر تکمیل کے طور پر کام کرتا ہے۔ سب سے پہلے، اس کی سادگی اور تیزی کی وجہ سے، ایس او ایس کروموٹیسٹ کو بڑی تعداد میں ممکنہ طور پر جینوٹوکسک مرکبات کے لیے اسکریننگ ٹیسٹ کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ دوسرا، یہ جینوٹوکسک کیمیکلز کا پتہ لگانے کی اجازت دے سکتا ہے جو امیس ٹیسٹ میں غلط منفی نتیجہ دیتے ہیں (جیسے ایسٹراڈیول، بڑھتی ہوئی تشویش کا مرکب)۔ تیسرا، یہ امیس ٹیسٹ میں غلط مثبت نتائج میں تفریق کرنے کا ایک موثر طریقہ ثابت ہو سکتا ہے۔ حوالہ جات حیاتیاتی تکنیکیں اور اوزار جینیاتی ٹیسٹ