Proximity ligation assay
அருகாமை பிணைப்பு மதிப்பீடு (இன் சிட்டு பி. எல். ஏ) என்பது புரதங்கள், புரத தொடர்புகள், செல்களுக்கு வெளியே உள்ள வெசிகிள்கள் மற்றும் உயர் குறிப்பிட்ட தன்மை மற்றும் உணர்திறன் கொண்ட பிந்தைய மொழிபெயர்ப்பு மாற்றங்களை நேரடியாகக் கண்டறிவது ஆகியவற்றை உள்ளடக்கிய பாரம்பரிய நோயெதிர்ப்பு மண்டலங்களின் திறன்களை விரிவுபடுத்தும் ஒரு தொழில்நுட்பமாகும். புரத இலக்குகளை எளிதில் கண்டறிந்து, ஒற்றை மூலக்கூறு தெளிவுத்திறனுடன் உள்ளூர்மயமாக்கலாம் மற்றும் மாற்றப்படாத செல்கள் மற்றும் திசுக்களில் புறநிலை அளவில் அளவிட முடியும். ஒரு சில உயிரணுக்களை மட்டுமே பயன்படுத்தி, துணை செல்லுலார் நிகழ்வுகள், நிலையற்ற அல்லது பலவீனமான தொடர்புகள் கூட, சூழ்நிலையில் வெளிப்படுகின்றன மற்றும் உயிரணுக்களின் துணை மக்கள்தொகையை வேறுபடுத்தலாம். சில மணி நேரங்களுக்குள், வழக்கமான இணை நோயெதிர்ப்பு தேய்மானம் மற்றும் இணை உள்ளூர்மயமாக்கல் நுட்பங்களின் முடிவுகளை உறுதிப்படுத்த முடியும். பி. எல். ஏ கோட்பாடு வெவ்வேறு இனங்களில் வளர்க்கப்படும் இரண்டு முதன்மை ஆன்டிபாடிகள் ஆர்வமுள்ள புரதங்களில் இலக்கு ஆன்டிஜெனை அடையாளம் காண்கின்றன (படம் 1). பிஎல்ஏ ஆய்வுகள் என்று அழைக்கப்படும் வெவ்வேறு முதன்மை ஆன்டிபாடிகளின் நிலையான பகுதிகளுக்கு எதிராக இயக்கப்படும் இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடிகள் (2o ஏபி) முதன்மை ஆன்டிபாடிகளுடன் பிணைக்கப்படுகின்றன (படம் 2). பி. எல். ஏ ஆய்வுகள் ஒவ்வொன்றும் ஒரு குறுகிய வரிசை குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ இழையுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன. பி. எல். ஏ ஆய்வுகள் அருகாமையில் இருந்தால் (அதாவது, ஆர்வமுள்ள இரண்டு அசல் புரதங்கள் அருகாமையில் இருந்தால், அல்லது ஒரு புரத வளாகத்தின் ஒரு பகுதியாக இருந்தால், புள்ளிவிவரங்களில் காட்டப்பட்டுள்ளபடி), டிஎன்ஏ இழைகள் பொருத்தமான அடி மூலக்கூறுகள் மற்றும் என்சைம்களுடன் மற்ற இரண்டு வரிசை-குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ ஒலிகோனியூக்ளியோடைடுகளைச் சேர்ப்பதன் மூலம் சுழலும் வட்ட டிஎன்ஏ தொகுப்பில் பங்கேற்கலாம் (படம் 3). டிஎன்ஏ தொகுப்பு எதிர்வினை டிஎன்ஏ வட்டத்தின் பல நூறு மடங்கு பெருக்கத்தில் விளைகிறது. அடுத்து, ஃப்ளோரசன்ட்-லேபிள் செய்யப்பட்ட நிரப்பு ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடு ஆய்வுகள் சேர்க்கப்பட்டு, அவை பெருக்கப்பட்ட டிஎன்ஏவுடன் பிணைக்கப்படுகின்றன (படம் 4). இதன் விளைவாக வரும் ஃப்ளோரசன்ஸின் அதிக செறிவு ஒரு ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி மூலம் பார்க்கும்போது ஒரு தனித்துவமான பிரகாசமான புள்ளியாக எளிதில் தெரியும். காட்டப்பட்ட குறிப்பிட்ட வழக்கில் (படம் 5), இது ஒரு பி-செல் லிம்போமா செல் என்பதால் நியூக்ளியஸ் விரிவடைகிறது. ஆர்வமுள்ள இரண்டு புரதங்கள் பி செல் ஏற்பி மற்றும் எம். ஒய். டி 88 ஆகும். சைட்டோபிளாஸத்தில் தொடர்பு கண்டுபிடிப்பது சுவாரஸ்யமானது, ஏனெனில் பி செல் ஏற்பிகள் செல் சவ்வில் அமைந்திருப்பதாக கருதப்படுகின்றன. மேலே விவரிக்கப்பட்டுள்ளபடி பி. எல். ஏ பயன்பாடுகள் பல தலைப்புகளில் விலங்கு வளர்ச்சி மற்றும் மார்பக புற்றுநோயின் அம்சங்களைப் படிக்கப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. மனித திசுக்களில் ஆன்டிபாடி சரிபார்ப்புக்கு ஐ. எச். சி. யை விட பல்வேறு நன்மைகளுடன் உள்ளூரில் அருகாமையில் பிணைப்பு மதிப்பீடுகள் (ஐ. எஸ். பி. எல். ஏ) பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளன, இதில் அதிகரித்த கண்டறிதல் தனித்துவம், குறிப்பிடப்படாத கறையைக் குறைத்தல் மற்றும் சிறந்த உள்ளூர்மயமாக்கல் ஆகியவை அடங்கும். புரதம் மற்றும் ஆர்என்ஏவின் தொடர்பை ஆய்வு செய்ய நுட்பத்தின் மாறுபாடு (ரிஷ்-பிஎல்ஏ) பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளது. இன் சிட்டு பி. எல். ஏ இன் மற்றொரு மாறுபாடு ஒரு மல்டிபிளெக்ஸ் பி. எல். ஏ மதிப்பீட்டை உள்ளடக்கியது, இது பல புரத வளாகங்களை இணையாக காட்சிப்படுத்த உதவுகிறது. பிஎல்ஏவை எலிசா, ப்ளோவ் சைட்டோமெட்ரி போன்ற பிற ரீட் அவுட் வடிவங்களுடனும் இணைக்கலாம். மற்றும் வெஸ்டர்ன் ப்ளோட்டிங் குறிப்புகள் உயிர்வேதியியல் கண்டறிதல் எதிர்வினைகள் நோயெதிர்ப்பு சோதனைகள்