H2AFX
H2A ஹிஸ்டோன் குடும்ப உறுப்பினர் X (பொதுவாக H2AX என சுருக்கமாக அழைக்கப்படுகிறது) என்பது H2A குடும்பத்திலிருந்து H2AFX மரபணுவால் குறியிடப்பட்ட ஒரு வகை ஹிஸ்டோன் புரதமாகும். ஒரு முக்கியமான பாஸ்போரிலேட்டட் வடிவம் γH2AX (S139) ஆகும், இது இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் முறிவுகள் தோன்றும் போது உருவாகிறது. மனிதர்கள் மற்றும் பிற யூகாரியோட்டுகளில், டிஎன்ஏ ஹிஸ்டோன் ஆக்டேமர்களைச் சுற்றி மூடப்பட்டிருக்கும், இதில் கோர் ஹிஸ்டோன்கள் எச் 2 ஏ, எச் 2 பி, எச் 3 மற்றும் எச் 4 ஆகியவை குரோமாடினை உருவாக்குகின்றன. H2AX நியூக்ளியோசோம்-உருவாக்கம், குரோமாட்டின்-மறுவடிவமைப்பு மற்றும் டிஎன்ஏ பழுதுபார்ப்பு ஆகியவற்றிற்கு பங்களிக்கிறது, மேலும் டிஎஸ்டிஎன்ஏவில் இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் முறிவுகளுக்கான மதிப்பீடாக இன் விட்ரோவும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. γH2AX H2AX இன் உருவாக்கம் செரின் 139 இல் பாஸ்பரிலேட்டட் ஆகி, பின்னர் γH2AX என்று அழைக்கப்படுகிறது, இது டிஎன்ஏ இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் முறிவுகளில் (டிஎஸ்பி) ஒரு எதிர்வினையாக உள்ளது. பிஐ3-குடும்பத்தின் கைனேஸ்கள் (அட்டாக்ஸியா டெலங்கியெக்டாசியா பிறழ்வு, ஏடிஆர் மற்றும் டிஎன்ஏ-பிகேசி) இந்த பாஸ்போரிலேஷனுக்கு காரணமாகின்றன, குறிப்பாக ஏடிஎம். ரெப்ளிகேஷன் ஃபோர்க் சரிவின் போது அல்லது அயனியாக்கும் கதிர்வீச்சுக்கு பதிலளிக்கும் போது, ஆனால் V (D) J மறுசீரமைப்பு போன்ற கட்டுப்படுத்தப்பட்ட உடலியல் செயல்முறைகளின் போதும் இந்த மாற்றம் தற்செயலாக நிகழலாம். γH2AX என்பது செல்களில் உள்ள டி. எஸ். பி. களைப் பார்ப்பதற்கான ஒரு உணர்திறன் இலக்காகும். இருப்பினும், γH2AX இருப்பது DSB களின் சான்றுகள் அல்ல. டிஎன்ஏ பழுதுபார்ப்பில் ஹிஸ்டோனின் பாஸ்போரிலேட்டட் வடிவத்தின் பங்கு விவாதத்தில் உள்ளது, ஆனால் மாற்றத்தின் காரணமாக டிஎன்ஏ குறைவாக ஒடுக்கப்படுகிறது என்பது அறியப்படுகிறது, இது டி. எஸ். பி. க்களை பழுதுபார்க்கும் போது தேவையான புரதங்களை ஆட்சேர்ப்பு செய்ய இடத்தை அனுமதிக்கிறது. முடஜெனெசிஸ் சோதனைகள் இரட்டை இழைகள் உடைவதற்கு பதிலளிக்கும் வகையில் அயனியாக்கும் கதிர்வீச்சு தூண்டப்பட்ட மையங்களின் சரியான உருவாக்கத்திற்கு மாற்றம் அவசியம் என்பதைக் காட்டுகின்றன, ஆனால் டி. எஸ். பி. களின் தளத்திற்கு புரதங்களை ஆட்சேர்ப்பு செய்ய இது தேவையில்லை. செயல்பாட்டு டிஎன்ஏ சேத பதில் ஹிஸ்டோன் மாறுபாடு எச்2ஏஎக்ஸ் பாலூட்டி குரோமாடினில் உள்ள எச்2ஏ ஹிஸ்டோன்களின் 2-25% ஐ உருவாக்குகிறது. டிஎன்ஏவில் இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் இடைவெளி ஏற்படும் போது, H2AX மாற்றப்படும் நிகழ்வுகளின் வரிசை ஏற்படுகிறது. இரட்டை அடுக்கு இடைவெளிக்குப் பிறகு, குரோமாட்டின் கட்டமைப்புடன் தொடர்பு கொண்டு பாதிக்கும் ஒரு குறிப்பிட்ட புரதம் பாஸ்பரிலேட்டட் செய்யப்பட்டு பின்னர் குரோமாடினிலிருந்து வெளியிடப்படுகிறது. இந்த புரதம், ஹெட்டோரோக்ரோமாட்டின் புரதம் 1 (HP1)-பீட்டா (CBX1), லைசின் 9 (H3K9me) இல் மெத்திலேட்டட் செய்யப்பட்ட ஹிஸ்டோன் H3 உடன் பிணைக்கப்பட்டுள்ளது. சேதமடைந்த டிஎன்ஏவிலிருந்து எச். பி. 1-பீட்டாவின் அரை அதிகபட்ச வெளியீடு ஒரு வினாடிக்குள் நிகழ்கிறது. குரோமாட்டின் கட்டமைப்பில் ஒரு மாறும் மாற்றம் HP1-பீட்டா வெளியீட்டால் தூண்டப்படுகிறது. குரோமாட்டின் கட்டமைப்பில் இந்த மாற்றம் ஏடிஎம், ஏடிஆர் மற்றும் டிஎன்ஏ-பிகே மூலம் எச்2ஏஎக்ஸ் பாஸ்பரிலேஷனை ஊக்குவிக்கிறது, இது γH2AX (செரின் 139 இல் எச்2ஏஎக்ஸ் பாஸ்பரிலேட்டட்) உருவாக அனுமதிக்கிறது. உயிரணுக்களின் கதிர்வீச்சு ஏற்பட்ட 20 விநாடிகளுக்குப் பிறகு γH2AX ஐக் கண்டறிய முடியும் (டிஎன்ஏ இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் முறிவு உருவாக்கத்துடன்), மேலும் γH2AX இன் அரை அதிகபட்ச குவிப்பு ஒரு நிமிடத்தில் நிகழ்கிறது. பாஸ்பரிலேட்டட் γH2AX கொண்ட குரோமாட்டின் டிஎன்ஏ இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் முறிவுகளின் ஒவ்வொரு பக்கத்திலும் சுமார் ஒரு மில்லியன் அடிப்படை ஜோடிகள் வரை நீண்டுள்ளது. எம். டி. சி 1 (டிஎன்ஏ சேத சோதனைச் சாவடி புரதம் 1 இன் மத்தியஸ்தர்) பின்னர் γH2AX மற்றும் γH2AX/MDC1 வளாகத்துடன் பிணைக்கப்பட்டு பின்னர் இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் இடைவெளி பழுதுபார்ப்பில் மேலும் தொடர்புகளை ஒழுங்கமைக்கிறது. ஆர்என்எப்8 மற்றும் ஆர்என்எப்168 ஆகிய எங்கும் காணப்படும் ஈந்தணைவிகள் γH2AX/எம்டிசி1 சேர்மத்துடன் பிணைக்கப்பட்டு, மற்ற குரோமாட்டின் கூறுகளையும் எங்கும் இணைக்கின்றன. இது நீண்ட, மாற்றியமைக்கப்பட்ட γH2AX/MDC1 குரோமாடினுக்கு BRCA1 மற்றும் 53BP1 ஐ ஆட்சேர்ப்பு செய்ய அனுமதிக்கிறது. விரிவான γH2AX-மாற்றியமைக்கப்பட்ட குரோமாடினில் நிலையாக ஒன்றுகூடும் பிற புரதங்கள் எம்ஆர்என் காம்ப்ளக்ஸ் (எம்ஆர்இ11, ராட்50 மற்றும் என்பிஎஸ்1 ஆகியவற்றைக் கொண்ட ஒரு புரத காம்ப்ளக்ஸ்), ஆர்ஏடி51 மற்றும் ஏடிஎம் கைனேஸ் ஆகும். RAD52 மற்றும் RAD54 போன்ற டிஎன்ஏ பழுதுபார்க்கும் கூறுகள், γH2AX-மாற்றியமைக்கப்பட்ட குரோமாடினுடன் தொடர்புடைய முக்கிய கூறுகளுடன் விரைவாகவும் தலைகீழாகவும் தொடர்பு கொள்கின்றன. உயிரணுக்களில் γH2AX வெளிப்பாட்டின் அமைப்பு நிலை, வெளிப்புற முகவர்களால் சிகிச்சையளிக்கப்படாமல், செல்லுலார் சுவாசத்தின் போது உருவாக்கப்படும் எண்டோஜெனஸ் ஆக்சிஜனேற்றிகளால் டிஎன்ஏ சேதத்தை குறிக்கிறது. குரோமாட்டின் மறுவடிவமைப்பில் யூகாரியோடிக் டிஎன்ஏவை குரோமாடினில் பேக்கிங் செய்வது அனைத்து டிஎன்ஏ அடிப்படையிலான செயல்முறைகளுக்கும் ஒரு தடையாக உள்ளது, அவை அவற்றின் செயல்பாட்டு தளங்களுக்கு என்சைம்களை ஆட்சேர்ப்பு செய்ய வேண்டும். டிஎன்ஏ பழுதுபார்ப்பை அனுமதிக்க, குரோமாட்டின் மறுவடிவமைக்கப்பட வேண்டும். H2AX இன் பாஸ்போரிலேட்டட் வடிவமான γH2AX, டிஎன்ஏ இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் முறிவுகளுக்குப் பிறகு குரோமாட்டின் டிகாண்டென்சேஷனுக்கு வழிவகுக்கும் படிகளில் ஈடுபட்டுள்ளது. γH2AX, குரோமாட்டின் டிகாண்டென்சேஷனை ஏற்படுத்தாது, ஆனால் அயனியாக்கும் கதிர்வீச்சின் 30 விநாடிகளுக்குள், RNF8 புரதத்தை γH2AX உடன் இணைந்து கண்டறிய முடியும். நியூக்ளியோசோம் மறுவடிவமைப்பு மற்றும் டீசிடைலேஸ் காம்ப்ளக்ஸ் நியூஆர்டி ஆகியவற்றின் ஒரு அங்கமான சிஎச்டி 4 உடன் அதன் அடுத்தடுத்த தொடர்பு மூலம் ஆர்என்எஃப்8 விரிவான குரோமாட்டின் டிகாண்டென்சேஷனை மத்தியஸ்தம் செய்கிறது. இரட்டை அடுக்கு முறிவுகளுக்கான மதிப்பீடாக γH2AX γH2AX க்கான ஒரு மதிப்பீடு பொதுவாக டி. என். ஏவில் இரட்டை அடுக்கு முறிவுகளின் இருப்பை பிரதிபலிக்கிறது, இருப்பினும் மதிப்பீடு மற்ற சிறிய நிகழ்வுகளையும் குறிக்கலாம். ஒருபுறம், முழுமையான விளைச்சல் மற்றும் ஒரு யூனிட் டோஸுக்கு தூண்டப்பட்ட விநியோகங்களின் அடிப்படையில், அயனியாக்கும் கதிர்வீச்சு வெளிப்பாட்டைத் தொடர்ந்து γH2AX ஃபோசிஸ் உருவாக்கம் மற்றும் டிஎன்ஏ இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் பிரேக் தூண்டல் ஆகியவற்றுக்கு இடையே ஒரு வலுவான, அளவு சார்ந்த தொடர்பை மிகப்பெரிய சான்றுகள் ஆதரிக்கின்றன. மறுபுறம், தனித்துவமான γH2AX மையங்களின் உருவாக்கம் மட்டுமல்லாமல், பான்-நியூக்ளியர் γH2AX சமிக்ஞைகளின் தூண்டலும் அயனியாக்கும் கதிர்வீச்சைத் தவிர பல்வேறு அழுத்தங்களுக்கு செல்லுலார் எதிர்வினையாக பதிவாகியுள்ளன. சேதமடையாத குரோமாடினை விட டிஎன்ஏ இரட்டை-ஸ்ட்ராண்ட் முறிவுகளில் γH2AX சமிக்ஞை எப்போதும் வலுவாக இருக்கும். சேதமடையாத குரோமாடினில் உள்ள γH2AX செயல்படுத்தப்பட்ட கைனேஸ்களால் H2AX இன் நேரடி பாஸ்போரிலேஷன் மூலம் உருவாக்கப்படலாம் என்று கருதப்படுகிறது, இது பெரும்பாலும் டிஎன்ஏ சேத தளங்களிலிருந்து பரவுகிறது. இரட்டை இழைகள் உடைவதற்கான குறிப்பானாக γH2AX ஐப் பயன்படுத்துவதில், இது டிஎன்ஏ சேத பழுதுபார்ப்பைக் குறிக்க பயனுள்ளதாக இருக்கும் ஒரு டவுன்-ஸ்ட்ரீம் ப்ராக்ஸி என்பதை அங்கீகரிப்பது முக்கியம். இது இரட்டை இழைகள் தங்களைத் தாங்களே உடைத்துக்கொள்வதைக் குறிக்கவில்லை, அத்தகைய மதிப்பீடுகளிலிருந்து தரவைப் புரிந்துகொள்ளும் போது இது கவனமாக பரிசீலிக்கப்பட வேண்டும். γH2AX-மதிப்பீட்டில் பல குறைபாடுகள் உள்ளன, எனவே புதிய மதிப்பீடுகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. H2AX தொடர்புகள் BARD1, BRCA1 ப்ளூம் சிண்ட்ரோம் புரதம், MDC1, நிப்ரின் மற்றும் TP53BP1 ஆகியவற்றுடன் தொடர்பு கொள்வதாக காட்டப்பட்டுள்ளது. குறிப்புகள் மேலும் வாசிப்பு மரபணுக்களின் டிஎன்ஏ பழுதுபார்ப்பு