Nucleic acid test
நியூக்ளிக் அமில சோதனை (என்ஏடி) என்பது ஒரு குறிப்பிட்ட நியூக்ளிக் அமில வரிசையைக் கண்டறியப் பயன்படுத்தப்படும் ஒரு நுட்பமாகும், இதனால் பொதுவாக ஒரு குறிப்பிட்ட இனங்கள் அல்லது உயிரினத்தின் கிளையினங்களைக் கண்டறிந்து அடையாளம் காணும், பெரும்பாலும் ஒரு வைரஸ் அல்லது பாக்டீரியா இரத்தம், திசு, சிறுநீர் போன்றவற்றில் நோய்க்கிருமியாக செயல்படுகிறது. ஆன்டிஜென்கள் அல்லது ஆன்டிபாடிகளை விட மரபணு பொருட்களை (ஆர்என்ஏ அல்லது டிஎன்ஏ) கண்டறிவதில் என்ஏடிக்கள் மற்ற சோதனைகளிலிருந்து வேறுபடுகின்றன. மரபணு பொருட்களைக் கண்டறிவது ஒரு நோயை முன்கூட்டியே கண்டறிய அனுமதிக்கிறது, ஏனெனில் ஆன்டிஜென்கள் மற்றும்/அல்லது ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிவதற்கு அவை இரத்த ஓட்டத்தில் தோன்றத் தொடங்க நேரம் தேவைப்படுகிறது. ஒரு குறிப்பிட்ட மரபணு பொருளின் அளவு பொதுவாக மிகவும் சிறியதாக இருப்பதால், பல NAT களில் மரபணு பொருளை பெருக்கும் ஒரு படி அடங்கும்-அதாவது, அதன் பல நகல்களை உருவாக்குகிறது. இத்தகைய என்ஏடிக்கள் நியூக்ளிக் அமில பெருக்க சோதனைகள் (என்ஏஏடி) என்று அழைக்கப்படுகின்றன. பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை (பி. சி. ஆர்), ஸ்ட்ராண்ட் இடப்பெயர்ச்சி மதிப்பீடு (எஸ். டி. ஏ) அல்லது டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மத்தியஸ்த மதிப்பீடு (டி. எம். ஏ) உள்ளிட்ட பெருக்கத்திற்கு பல வழிகள் உள்ளன. கிட்டத்தட்ட அனைத்து நியூக்ளிக் அமில பெருக்க முறைகள் மற்றும் கண்டறிதல் தொழில்நுட்பங்கள் வாட்சன்-கிரிக் அடிப்படை இணைப்பின் தனித்துவத்தைப் பயன்படுத்துகின்றன; ஒற்றை-இழைகள் கொண்ட ஆய்வு அல்லது ப்ரைமர் மூலக்கூறுகள் டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ இலக்கு மூலக்கூறுகளை நிரப்பு இழைகளின் மூலம் கைப்பற்றுகின்றன. எனவே, கண்டறிதலின் உணர்திறன் மற்றும் குறிப்பிட்ட தன்மையை அதிகரிக்க ஆய்வு இழைகளின் வடிவமைப்பு மிகவும் குறிப்பிடத்தக்கதாகும். இருப்பினும், பல்வேறு மனித நோய்களுக்கு மரபணு அடிப்படையை உருவாக்கும் பிறழ்வுகள் பொதுவாக சாதாரண நியூக்ளிக் அமிலங்களிலிருந்து சற்று வேறுபட்டவை. பெரும்பாலும், அவை ஒரே அடித்தளத்தில் மட்டுமே வேறுபடுகின்றன, எ. கா., செருகுதல், நீக்குதல் மற்றும் ஒற்றை-நியூக்ளியோடைடு பாலிமார்பிசம் (எஸ்என்பி). இந்த விஷயத்தில், அபூரணமான ஆய்வு-இலக்கு பிணைப்பு எளிதில் ஏற்படலாம், இதன் விளைவாக நோய்க்கிருமியாக இருக்கும் ஒரு திரிபுக்கு ஒத்ததாக இருக்கும் ஒரு திரிபைத் தவறாக கருதுவது போன்ற தவறான-நேர்மறையான விளைவுகள் ஏற்படலாம். ஒற்றை-அடிப்படை தனித்துவத்தை அடைவதற்கு நிறைய ஆராய்ச்சிகள் அர்ப்பணிக்கப்பட்டுள்ளன. மேம்பாடுகள் நியூக்ளிக் அமிலம் (டிஎன்ஏ மற்றும் ஆர்என்ஏ) இழைகள் தொடர்புடைய வரிசைகளுடன் ஜோடி வாரியாக சங்கிலிகளில் ஒன்றாக ஒட்டிக்கொள்கின்றன, வெல்க்ரோ ஒரு துணி உலர்த்தியில் விழுந்ததைப் போல ஜிப் செய்கின்றன. ஆனால் சங்கிலியின் ஒவ்வொரு முனையும் மிகவும் ஒட்டாததாக இல்லை, எனவே இரட்டை இழைகள் கொண்ட சங்கிலி தொடர்ந்து ஓரளவு ஜிப் இல்லாமல் வந்து சுற்றுப்புற அதிர்வுகளின் தாக்கத்தின் கீழ் தன்னை மீண்டும் ஜிப் செய்கிறது (வெப்ப சத்தம் அல்லது பிரவுனியன் இயக்கம் என்று குறிப்பிடப்படுகிறது). நீண்ட இணைப்புகள் மிகவும் நிலையானவை. நியூக்ளிக் அமில சோதனைகள் ஒரு "ப்ரோப்" ஐப் பயன்படுத்துகின்றன, இது ஒரு குறுகிய இழையுடன் நீண்ட இழையாகும். நீண்ட ப்ரைமர் ஸ்ட்ராண்ட் கண்டறியப்பட்ட நோய் உயிரினத்திலிருந்து ஒரு "இலக்கு" ஸ்ட்ராண்டிற்கு தொடர்புடைய (நிரப்பு) வரிசையைக் கொண்டுள்ளது. நோய் இழைகள் நீண்ட ப்ரைமர் இழையின் ("டோஹோல்ட்" என்று அழைக்கப்படும்) வெளிப்படும் பகுதியில் இறுக்கமாக ஒட்டிக்கொள்கின்றன, பின்னர் படிப்படியாக, ஆய்விலிருந்து குறுகிய "பாதுகாவலர்" இழையை இடமாற்றம் செய்கிறது. இறுதியில், குறுகிய பாதுகாவலர் ஸ்ட்ராண்ட் எதற்கும் கட்டுப்படுவதில்லை, மேலும் வரம்பற்ற குறுகிய ப்ரைமர் கண்டறியக்கூடியது. இந்தப் பிரிவின் எஞ்சிய பகுதி இந்த செயல்முறையை ஒரு பயனுள்ள சோதனையாக மாற்றியமைக்க தேவையான ஆராய்ச்சியின் சில வரலாற்றை வழங்குகிறது. 2012 ஆம் ஆண்டில், யினின் ஆராய்ச்சிக் குழு நியூக்ளிக் அமில கலப்பினத்தின் தனித்துவத்தை மேம்படுத்துவது பற்றி ஒரு கட்டுரையை வெளியிட்டது. அவர்கள் ஒரு 'டோஹோல்ட் எக்ஸ்சேஞ்ச் ப்ரோப் (பிசி)' ஐ அறிமுகப்படுத்தினர், இது ஒரு முன் கலப்பின நிரப்பு ஸ்ட்ராண்ட் சி மற்றும் ஒரு ப்ரொடெக்டர் ஸ்ட்ராண்ட் பி ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளது. இலக்கு வரிசையுடன் நிரப்பு முற்றிலும் நிரப்பு ஆகும். சரியான இலக்கு (எக்ஸ்) டோஹோல்ட் எக்ஸ்சேஞ்ச் ப்ரோப் (பிசி) உடன் வினைபுரியும் போது, பி வெளியிடப்பட்டு கலப்பின தயாரிப்பு எக்ஸ். சி உருவாகிறது. எதிர்வினையின் நிலையான இலவச ஆற்றல் ( விசாரணா) பூஜ்ஜியத்திற்கு அருகில் உள்ளது. மறுபுறம், டோஹோல்ட் எக்ஸ்சேஞ்ச் ப்ரோப் (பிசி) போலி இலக்கு (எஸ்) உடன் வினைபுரிந்தால், எதிர்வினை முன்னோக்கி, ஆனால் நிலையான இலவச ஆற்றல் குறைந்த வெப்ப இயக்கவியல் சாதகமாக இருக்கும். நிலையான இலவச ஆற்றல் வேறுபாடு ( விசாரணா) விளைச்சலில் வெளிப்படையான பாகுபாட்டைக் கொடுக்கும் அளவுக்கு குறிப்பிடத்தக்கதாகும். பாகுபாடு காரணி Q கணக்கிடப்படுகிறது, சரியான இலக்கு கலப்பினத்தின் விளைச்சல் போலியான இலக்கு கலப்பினத்தின் விளைச்சலால் வகுக்கப்படுகிறது. 5 சரியான இலக்குகள் மற்றும் 55 போலி இலக்குகளுடன் ஆற்றல்மிக்க பிரதிநிதித்துவ ஒற்றை-அடிப்படை மாற்றங்களுடன் (மாற்றீடுகள், நீக்குதல் மற்றும் செருகுதல்) வெவ்வேறு டோஹோல்ட் பரிமாற்ற ஆய்வுகள் மீதான சோதனைகள் மூலம், யினின் குழு இந்த ஆய்வுகளின் பாகுபாடு காரணிகள் 3 முதல் 100 + வரை நடுத்தர 26 உடன் இருப்பதாக முடிவு செய்தது. ஆய்வுகள் 10 டிகிரி செல்சியஸ் முதல் 37 டிகிரி செல்சியஸ் வரையிலும், 1 எம்எம் முதல் 47 எம்எம் வரையிலும், நியூக்ளிக் அமில செறிவுகள் 1 என்எம் முதல் 5 எம் வரையிலும் வலுவாக செயல்படுகின்றன. ஆர்என்ஏ கண்டறிதலில் கூட டோஹோல்ட் பரிமாற்ற ஆய்வுகள் வலுவாக செயல்படுகின்றன என்பதையும் அவர்கள் கண்டுபிடித்தனர். அதன்பிறகு மேலும் ஆய்வுகள் மேற்கொள்ளப்பட்டன. 2013 ஆம் ஆண்டில், சீலிக்ஸ் குழு ஃப்ளோரசன்ட் மூலக்கூறு ஆய்வுகள் பற்றி ஒரு கட்டுரையை வெளியிட்டது, இது டோஹோல்ட் பரிமாற்ற எதிர்வினையையும் பயன்படுத்துகிறது. இது சரியான இலக்கு மற்றும் எஸ்என்பி இலக்கை ஒளியியல் ரீதியாகக் கண்டறிய உதவியது. ஈ. கோலை-பெறப்பட்ட மாதிரிகளில் எஸ். என். பி. களைக் கண்டறிவதிலும் அவர்கள் வெற்றி பெற்றனர். 2015 ஆம் ஆண்டில், டேவிட்டின் குழு 'போட்டி கலவைகள்' என்று அழைக்கப்படும் அமைப்பை அறிமுகப்படுத்துவதன் மூலம் ஒற்றை-நியூக்ளியோடைடு வகைகளின் (எஸ். என். வி) மிக உயர்ந்த (1,000 +) தேர்வை அடைந்தது. இந்த அமைப்பில், அவர்கள் உகந்த அளவுரு மதிப்புகளைக் கணிக்க அடிப்படை கலப்பினமாக்கல் செயல்முறைகளின் இயக்க எதிர்வினை மாதிரியை உருவாக்கினர், இது எஸ். என். வி மற்றும் வைல்ட் வகை (டபிள்யூ. டி) வரிசைகளின் அடிப்படையில் மாறுபடும், ஆய்வு மற்றும் மூழ்கியின் வடிவமைப்பு கட்டமைப்பு மற்றும் உலை செறிவுகள் மற்றும் மதிப்பீட்டு நிலைமைகள் ஆகியவற்றின் அடிப்படையில் மாறுபடும். அவர்களின் மாதிரி 44 புற்றுநோய் தொடர்பான டிஎன்ஏ எஸ்என்வி-களுக்கான சராசரி 890 மடங்கு தேர்வில் வெற்றி பெற்றது, குறைந்தபட்சம் 200 உடன், இது முந்தைய கலப்பின அடிப்படையிலான மதிப்பீடுகளை விட குறைந்தது 30 மடங்கு முன்னேற்றத்தைக் குறிக்கிறது. கூடுதலாக, பிசிஆரைத் தொடர்ந்து மனித மரபணு டிஎன்ஏவிலிருந்து குறைந்த விஏஎஃப் காட்சிகளை மதிப்பிடுவதற்கும், செயற்கை ஆர்என்ஏ காட்சிகளுக்கு நேரடியாகவும் அவர்கள் இந்த தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தினர். நிபுணத்துவத்தின் அடிப்படையில், அவர்கள் பிளாக்கர் இடப்பெயர்ச்சி பெருக்கம் (பி. டி. ஏ) என்ற புதிய பி. சி. ஆர் முறையை உருவாக்கினர். இது ஒரு வெப்பநிலை-ரோப் பி. சி. ஆர் ஆகும், இது தோராயமாக 20 என். டி சாளரத்திற்குள் அனைத்து வரிசை மாறுபாடுகளையும் காட்டு வகை வரிசைகளுக்கு மேல் 1000 மடங்கு பெருக்குகிறது, இது நூற்றுக்கணக்கான சாத்தியமான மாறுபாடுகளை எளிதில் கண்டறிந்து அளவிட அனுமதிக்கிறது. பி. டி. ஏ 56 டிகிரி செல்சியஸ் முதல் 64 டிகிரி செல்சியஸ் வரையிலான அனியல் வெப்பநிலையில் இதேபோன்ற செறிவூட்டல் செயல்திறனை அடைகிறது. இந்த வெப்பநிலை வலிமை மரபணு முழுவதும் பல வேறுபட்ட வகைகளின் பன்முக செறிவூட்டலை எளிதாக்குகிறது, மேலும் அரிய டிஎன்ஏ மாறுபாட்டைக் கண்டறிய மலிவான மற்றும் சிறிய தெர்மோசைக்ளிங் கருவிகளைப் பயன்படுத்த உதவுகிறது. நுரையீரல் புற்றுநோய் நோயாளிகளின் இரத்த பிளாஸ்மாவிலிருந்து சேகரிக்கப்பட்ட மருத்துவ செல் இல்லாத டிஎன்ஏ மாதிரிகள் உட்பட மாதிரி வகைகளிலும் கூட பிடிஏ சரிபார்க்கப்பட்டுள்ளது. பயன்பாடுகள் கோனோகோக்கல் மற்றும் பிற நீசேரியல் நோய்த்தொற்றுகளின் நோயறிதல்ஃ கண்டறிவதற்கான குறிப்பிட்ட என். கோனோரியா டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ வரிசைகளின் பெருக்கம். சிறுநீர்ப்பை சி. டிராக்கோமாடிஸ் நோய்த்தொற்றுகளின் நோயறிதல் எச். ஐ. வி ஆர்என்ஏவின் மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோய் கண்டறிதல் அல்லது ஜூனோடிக் கரோனாவைரஸ்களின் டிஎன்ஏ கண்டறிதல் SARS-CoV-2 க்கான நோயறிதல் சோதனை ஆண்டிபயாடிக் சிகிச்சையைத் தொடர்ந்து ஆண்டிபயாடிக் எதிர்ப்பு பாக்டீரியாவைக் கண்டறிதல் குறிப்புகள் நிபுணர் கவனம் தேவைப்படும் மரபியல் கட்டுரைகள் மரபியல் நுட்பங்கள் மருத்துவ சோதனைகள்