Monocyte monolayer assay
இரத்தமேற்றுதல் பெறுபவர்களால் உற்பத்தி செய்யப்படும் அலோஆண்டிபாடிகளின் மருத்துவ முக்கியத்துவத்தை தீர்மானிக்க மோனோசைட் மோனோலேயர் மதிப்பீடு (எம். எம். ஏ) பயன்படுத்தப்படுகிறது. பொருந்தாத செல்லுலார் இரத்தப் பொருட்கள் இரத்த சோகை நோயாளிக்கு மாற்றப்படும்போது இன்ட்ராவாஸ்குலர் ஹீமோலிசிஸின் திறனை மதிப்பிடுவதற்கு இந்த மதிப்பீடு பயன்படுத்தப்படுகிறது. நன்கொடையாளர் உயிரணுக்கள் பெறுநரால் உற்பத்தி செய்யப்படாத பொருட்களைக் கொண்டிருக்கும்போது, பெறுநரின் நோயெதிர்ப்பு அமைப்பு அந்த பொருளுக்கு எதிராக ஆன்டிபாடிகளை உருவாக்குகிறது; இவை அலோஆண்டிபாடிகள் என்று அழைக்கப்படுகின்றன. மோனோசைட்டுகள் என்று அழைக்கப்படும் குறிப்பிட்ட வெள்ளை இரத்த அணுக்கள், வெளிப்புற பொருட்களை உட்கொள்ளும் பணியைச் செய்கின்றன மற்றும் சில அழற்சி நிகழ்வுகளின் போது செயல்படுத்தப்படுகின்றன. இந்த செயல்படுத்தப்பட்ட மோனோசைட்டுகள் ஆன்டிபாடி-உணர்திறன் கொண்ட சிவப்பு இரத்த அணுக்களுடன் (ஆர். பி. சி) தொடர்பு கொள்கின்றன, மேலும் பாகோசைட்டோசிஸை (உட்கொள்ளுதல்) வெளிப்படுத்தலாம் அல்லது இல்லாமல் இருக்கலாம் மற்றும் நன்கொடையாளர் சிவப்பு இரத்த அணுக்களை அழிக்கலாம். மோனோசைட்டுகள் ஆர்பிசியை அழித்தால், அந்த ஆர்பிசியுடன் இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடி மருத்துவ ரீதியாக குறிப்பிடத்தக்கதாகக் கருதப்படுகிறது. பின்னணி இரத்த வங்கி என்பது ஒரு மருத்துவ ஆய்வகத்திற்குள் ஒரு செறிவு ஆகும், இது இரத்தமேற்றுதல் பெறுநர்களின் மாதிரிகளை பகுப்பாய்வு செய்கிறது மற்றும் அந்த நோயாளியின் கவனிப்புக்கு பொறுப்பான சுகாதாரக் குழுவிற்கு இணக்கமான இரத்த தயாரிப்புகளை வழங்குகிறது. இரத்த தட்டச்சு (ஏபிஓ/ஆர்எச் நிலையை தீர்மானித்தல்), ஆன்டிபாடி ஸ்கிரீனிங், செரோலாஜிக் குறுக்கு-பொருத்தம், நேரடி ஆன்டிக்ளோபூலின் சோதனை மற்றும் ஆன்டிபாடி அடையாளம் உள்ளிட்ட பல வழக்கமான சோதனைகள் செய்யப்படுகின்றன. ஏபிஓ மற்றும் ஆர்எச் (டி) இரத்தக் குழு ஆன்டிஜென்களுக்கு இயற்கையாக நிகழும் ஆன்டிபாடிகள் (ஐசோஹெமாக்ளூட்டினின்கள்) இருப்பதைத் தாண்டி, கூடுதல் நோயெதிர்ப்பு-தூண்டப்பட்ட ஆன்டிபாடிகள் எதிர்பாராத அலோஆண்டிபாடிகளாக கருதப்படுகின்றன. எதிர்பாராத ஆன்டிபாடிகளை அடையாளம் காண்பது ஒரு உழைப்பு-தீவிரமான செயல்முறையாகும், மேலும் சில நேரங்களில் ஆன்டிபாடியை சரியான முறையில் அடையாளம் காண உதவ சிறப்பு ஆய்வக நுட்பங்களைச் சேர்க்க வேண்டும். இந்த நுட்பங்களில் எல்யூஷன்ஸ், உறிஞ்சுதல் மற்றும் நொதி சிகிச்சை ஆகியவை அடங்கும். சில நோயாளிகள் அதிக அதிர்வெண் ஆன்டிஜென்களுக்கு ஆன்டிபாடிகளை உற்பத்தி செய்கிறார்கள். அதாவது, சிவப்பு செல் ஆன்டிஜென்கள் மனித மக்கள்தொகையில் கணிசமான பகுதியில் உள்ளன. ஆன்டிபாடி மருத்துவ ரீதியாக குறிப்பிடத்தக்கதாக கருதப்படுகிறதா இல்லையா என்பதை மதிப்பிடுவது கேள்விக்குரியதாகவும் மிகவும் கடினமாகவும் இருக்கலாம். மருத்துவ ரீதியாக குறிப்பிடத்தக்க ஆன்டிபாடி என்பது இன் விட்ரோ ஹீமோலிசிஸ் அல்லது மாற்றப்பட்ட நன்கொடையாளர் சிவப்பு இரத்த அணுக்களின் உயிர்வாழ்வைக் குறைக்கும் திறன் கொண்ட ஒரு ஆன்டிபாடி ஆகும். உயர் அதிர்வெண் ஆன்டிஜென்களுக்கான ஆன்டிபாடிகள் மோனோசைட் மோனோலேயர் மதிப்பீட்டைப் பயன்படுத்தி மருத்துவ முக்கியத்துவத்திற்காக மதிப்பீடு செய்யப்படலாம். ஹீமோலிடிக் இரத்தமேற்றுதல் எதிர்வினை இரத்தமேற்றுதலுக்கு பல்வேறு வகையான அசாதாரண எதிர்வினைகள் உள்ளன. இவற்றில், உயிருக்கு ஆபத்தான எதிர்வினை ஹீமோலிடிக் டிரான்ஸ்ஃப்யூஷன் எதிர்வினை என்று அழைக்கப்படுகிறது. இது ஒரு நோயெதிர்ப்பு மத்தியஸ்த எதிர்வினையாகும், அங்கு பெறுநர் ஆன்டிபாடிகள் நன்கொடையாளர் சிவப்பு இரத்த செல் ஆன்டிஜென் (களை) தாக்கி, நன்கொடையாளர் உயிரணுக்களின் ஹீமோலிசிஸை ஏற்படுத்துகின்றன. எதிர்வினை போது, உடனடியாக, அல்லது 28 நாட்களுக்குப் பிறகு ஏற்படலாம். முதல் 24 மணி நேரத்திற்குள் ஒரு கடுமையான எதிர்வினை காணப்படுகிறது, அதே நேரத்தில் இரத்தமேற்றலுக்குப் பிறகு 24 மணி நேரம் முதல் 28 நாட்களுக்கு இடையில் தாமதமான எதிர்வினை காணப்படுகிறது. அலோஆண்டிபாடி உருவாக்கம் மற்றும் மருத்துவ முக்கியத்துவம் ஏபிஓ இரத்தக் குழு அமைப்பைப் பற்றி பேசும்போது, ஒரு தனிநபரிடம் ஏ மற்றும்/அல்லது பி ஆன்டிஜென் இருந்தால், அவை இந்த ஆன்டிஜென்களுக்கு ஆன்டிபாடிகளை உருவாக்காது என்று லேண்ட்ஸ்டீனரின் சட்டம் கூறுகிறது. இருப்பினும், ஒரு நபருக்கு ஏ அல்லது பி ஆன்டிஜென்கள் இல்லையென்றால், அவை இயற்கையாகவே ஏ மற்றும் பி எதிர்ப்பு ஆன்டிபாடிகளை உற்பத்தி செய்யும். இன்டர்நேஷனல் சொசைட்டி ஆஃப் பிளட் டிரான்ஸ்ஃப்யூஷன் (ஐ. எஸ். பி. டி) படி, நூற்றுக்கணக்கான வெவ்வேறு சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் ஆன்டிஜென்களைக் கொண்ட 43 இரத்தக் குழு அமைப்புகள் விவரிக்கப்பட்டுள்ளன. சில விதிவிலக்குகளுடன், பல ஏபிஓ அல்லாத இரத்தக் குழு அமைப்பு ஆன்டிஜென்களுக்கு ஆன்டிபாடி உற்பத்தியைத் தூண்டுவதற்கு ஒரு உணர்திறன் நிகழ்வு தேவைப்படுகிறது. வேறு வார்த்தைகளில் கூறுவதானால், சட்டவிரோத ஆன்டிபாடி உற்பத்திக்கு நோயெதிர்ப்பு அமைப்பு ஆன்டிஜெனுக்கு ஆளாக வேண்டும். இரத்தமேற்றுதல், ஸ்டெம் செல்/எலும்பு மஜ்ஜை மாற்று அறுவை சிகிச்சை மற்றும் கர்ப்பம் ஆகியவற்றின் மூலம் ஆன்டிஜென்களின் வெளிப்பாடு ஏற்படலாம். ஒரு அலோஆண்டிபாடியின் மருத்துவ முக்கியத்துவம் நன்கொடையாளர் சிவப்பு இரத்த அணுக்களின் உயிர்வாழ்வில் குறைவை ஏற்படுத்தும் திறனைப் பொறுத்தது. மருத்துவ ரீதியாக குறிப்பிடத்தக்க அலோஆண்டிபாடிகளின் சிறப்பியல்புகள் பின்வருமாறுஃ இம்யூனோகுளோபூலின் ஜி ஆன்டிபாடி துணைப்பிரிவு, உடல் வெப்பநிலையில் வினைத்திறன் மற்றும் மறைமுக ஆன்டிக்ளோபூலின் சோதனையில் மனித எதிர்ப்பு குளோபுலின் (ஏ. எச். ஜி) முன்னிலையில் சிவப்பு இரத்த அணுக்களின் திரட்சியை ஏற்படுத்தும் திறன். சில நேரங்களில், ஒரு ஆன்டிபாடியின் மருத்துவ முக்கியத்துவத்தை தீர்மானிப்பது கடினமாக இருக்கலாம். அதிக பரவலான சிவப்பு செல் ஆன்டிஜென்களுக்கான ஆன்டிபாடிகள் சில நேரங்களில் மருத்துவ ரீதியாக குறிப்பிடத்தக்க அலோஆண்டிபாடிகளைக் கண்டறிவதை மறைக்கலாம், ஏனெனில் தொடர்புடைய ஆன்டிஜென் பெரும்பாலானவற்றில் உள்ளது, இல்லையென்றால் அனைத்தும், இந்த ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறியப் பயன்படுத்தப்படும் திரையிடல் சிவப்பு இரத்த அணுக்களில் ஆன்டிஜென் உள்ளது. இங்குதான் மோனோசைட் மோனோலேயர் மதிப்பீடு பயனுள்ளதாக இருக்கும். கோட்பாடு எம். எம். ஏ என்பது மிகவும் உழைப்பு மிகுந்த, கையால் செய்யக்கூடிய ஆய்வக சோதனை முறையாகும். இந்த மதிப்பீட்டில் பின்வரும் படிகள் செய்யப்படுகின்றனஃ சாதாரண, ஆரோக்கியமான நபர்களிடமிருந்து ஆன்டிகோஆகுலேட்டட் இரத்தம் சேகரிக்கப்படுகிறது. அமில சிட்ரேட் டெக்ஸ்ட்ரோஸ் விரும்பப்படுகிறது. பக்கவாட்டு இரத்த மோனோ நியூக்ளியர் செல்கள் (பி. பி. எம். சி) ஃபிகோல்-பாக் அடர்த்தி சாய்வைப் பயன்படுத்தி இரத்த மாதிரியிலிருந்து அறுவடை செய்யப்படுகின்றன. பி. பி. எம். சி. க்கள் பாஸ்பேட்-பஃபர் உப்பு (பி. பி. எஸ்) பயன்படுத்தி கழுவப்பட்டு, பின்னர் மோனோசைட்டுகளை சாத்தியமானதாக வைத்திருப்பதற்காக திசு வளர்ப்பு ஊடகத்தில் தொங்கவிடப்படுகின்றன. பி. பி. எம். சி-மீடியா கலவை பின்னர் திசு வளர்ப்பு அறை ஸ்லைடில் சேர்க்கப்படுகிறது. மோனோசைட்டுகள் ஒரு மோனோசைட் மோனோலேயரை உருவாக்கும் கண்ணாடி ஸ்லைடுடன் ஒட்டிக்கொள்ளும். சீரம் கலக்கப்பட்டு, உடல் வெப்பநிலையில் (37 டிகிரி செல்சியஸ்) 5 சதவீதம் குழு ஓ ஆர். பி. சி சஸ்பென்ஷனுடன் அடைகாக்கப்படுகிறது. (இந்த படி ஆர். பி. சி. யை ஆன்டிபாடிகளுடன் உணர்த்துகிறது அல்லது பூசுகிறது) உணர்திறன் கொண்ட ஆர். பி. சி. க்கள் எந்த வரம்பற்ற ஆன்டிபாடிகளையும் அல்லது குறுக்கிடும் பொருட்களையும் அகற்ற பி. பி. எஸ் உடன் கழுவப்படுகின்றன. கழுவப்பட்ட, உணர்திறன் கொண்ட ஆர். பி. சி பின்னர் மோனோசைட் மோனோலேயர் திசு கலாச்சார அறை ஸ்லைடில் சேர்க்கப்படுகிறது. 60 நிமிட, 37 டிகிரி செல்சியஸ் அடைகாப்பிற்குப் பிறகு, அறை ஸ்லைடுகளிலிருந்து சூப்பர்னேட்டன்ட் அகற்றப்பட்டு பிபிஎஸ் மூலம் கழுவப்படுகிறது. ஸ்லைடு முற்றிலும் உலர்ந்தவுடன், அது ரைட்ஸ்-கீம்சா கறை படிந்திருக்கும். ஆர். பி. சி பாகோசைட்டோசிஸின் சான்றுகளுக்காக நுண்ணோக்கியின் கீழ் குறைந்தது 600 (நேர்மறை 20 சதவீதத்திற்கும் அதிகமாக இருந்தால் 200) மோனோசைட்டுகள் காணப்படுகின்றன. தர உத்தரவாதத்திற்காக நோயாளியின் மாதிரியுடன் இணைந்து ஒரு நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறை கட்டுப்பாடு செய்யப்படுகிறது. நேர்மறை அல்லது எதிர்மறை கட்டுப்பாடுகள் தோல்வியுற்றால், முழு சோதனை செயல்முறையும் செல்லாதது மற்றும் மீண்டும் மீண்டும் செய்யப்பட வேண்டும். நேர்மறையான எம். எம். ஏ-க்கான அளவுகோல்கள் ஆய்வகத்திற்கு ஏற்ப மாறுபடும், இருப்பினும் சாண்ட்ரா நான்ஸ் மற்றும் பலர் முதலில் நிறுவிய வரம்பு> 20 சதவீதம் பாகோசைடிக் செயல்பாடு ஆகும். மருத்துவ ரீதியாக, ஒரு நேர்மறையான எம்எம்ஏ மதிப்பீட்டில் பயன்படுத்தப்படும் நோயாளியின் சீரம் மருத்துவ ரீதியாக குறிப்பிடத்தக்க ஆன்டிபாடிகளைக் கொண்டுள்ளது என்பதைக் குறிக்கும், அவை ஆன்டிபாடி-மத்தியஸ்தம் செய்யப்பட்ட பாகோசைட்டோசிஸை ஏற்படுத்தும் திறன் கொண்டவை. மேலும் காண்கஃ கடுமையான ஹீமோலிடிக் இரத்தமேற்றுதல் எதிர்வினை ஆன்டிபாடி ஒப்சோனைசேஷன் அலோஆண்டிபாடிஸ் குறிப்புகள் இரத்தமேற்றுதல் மருந்து இரத்த பரிசோதனைகள்