Proximity extension assay
அருகாமை விரிவாக்க மதிப்பீடு (பி. இ. ஏ) என்பது சீரம் அல்லது பிளாஸ்மா போன்ற உயிரியல் மாதிரியில் உள்ள பல குறிப்பிட்ட புரதங்களின் அளவைக் கண்டறிந்து அளவிடுவதற்கான ஒரு முறையாகும். இந்த முறை புரோட்டியோமிக்ஸ் ஆராய்ச்சித் துறையில் பயன்படுத்தப்படுகிறது, குறிப்பாக அஃபினிட்டி புரோட்டியோமிக்ஸ், இதில் ஒரு பயோமார்க்கராகப் பயன்படுத்த இரத்தத்தில் உள்ள பல குறிப்பிட்ட புரதங்களின் மிகுதியில் உள்ள வேறுபாடுகளைத் தேடுகிறது. பயோமார்க்கர்கள் மற்றும் பயோமார்க்கர் கையொப்ப கலவைகள், நோய் நிலைகள் மற்றும் மருந்து செயல்திறனை தீர்மானிக்க பயனுள்ளதாக இருக்கும். புரதங்களைக் கண்டறிவதற்கான பெரும்பாலான முறைகள் புரத பகுப்பாய்வை முதலில் கைப்பற்றுவதற்கும் நிலைநிறுத்துவதற்கும் ஒரு திடமான கட்டத்தைப் பயன்படுத்துவதை உள்ளடக்கியது, அங்கு எலிசா போன்ற ஒன்று அல்லது ஒரு சில புரதங்களில் அளவிடப்படுகின்றன. இதற்கு மாறாக, PEA ஒரு ஒரே மாதிரியான ஒரு குழாய் எதிர்வினை கரைசலில் ஒரு திடமான கட்டம் இல்லாமல் செய்யப்படுகிறது, அங்கு தனித்துவமான டிஎன்ஏ வரிசை குறிச்சொற்களுடன் இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகளின் தொகுப்புகளில், அருகாமை ஆய்வுகள் என்று அழைக்கப்படுகின்றன, ஒவ்வொரு இலக்கு புரதத்திற்கும் குறிப்பிட்ட ஜோடியாக வேலை செய்கின்றன. PEA பெரும்பாலும் ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தி நிகழ்த்தப்படுகிறது மற்றும் இது ஒரு வகை இம்யூனோஅஸ்ஸே ஆகும். அருகாமை ஆய்வுகள் மூலம் இலக்கு பிணைப்பு டிஎன்ஏ-குறிச்சொற்களின் உள்ளூர் ஒப்பீட்டு பயனுள்ள செறிவை அதிகரிக்கிறது, இது ஒருவருக்கொருவர் பலவீனமான நிரப்புணர்வை கலப்பினமாக்க உதவுகிறது, பின்னர் கண்டறியப்பட்ட ஒவ்வொரு இலக்கு புரதத்திற்கும் குறிப்பிட்ட ஒரு ஐக்கிய டிஎன்ஏ வரிசையை உருவாக்கும் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மத்தியஸ்த நீட்டிப்பை செயல்படுத்துகிறது. 3 'எக்ஸோனியூக்ளீஸ் திறமையான பாலிமரேஸ்களின் பயன்பாடு பின்னணி சத்தத்தைக் குறைக்கிறது மற்றும் ஹைப்பர் தெர்மோஸ்டபிள் பாலிமரேஸ்கள் இயற்கையான சூடான-தொடக்க எதிர்வினையுடன் ஒரு எளிய மதிப்பீட்டை மத்தியஸ்தம் செய்கின்றன. டிஎன்ஏ வரிசையின் விரிவாக்க தயாரிப்புகளின் இந்த உருவாக்கப்பட்ட தொகுப்பு பிசிஆர் மூலம் பெருக்கப்பட்ட பெருக்கிகளை உருவாக்குகிறது, அங்கு ஒவ்வொரு பெருக்கி வரிசையும் இலக்கு புரதங்களின் அடையாளத்துடன் ஒத்திருக்கிறது மற்றும் அளவு அதன் அளவை பிரதிபலிக்கிறது. அதைத் தொடர்ந்து, இந்த பெருக்கிகள் நிகழ்நேர பி. சி. ஆர் அல்லது அடுத்த தலைமுறை டிஎன்ஏ வரிசைமுறை மூலம் டிஎன்ஏ-குறிச்சொல் எண்ணிக்கை மூலம் கண்டறியப்பட்டு அளவிடப்படுகின்றன. விரிவாக்க எதிர்வினையிலிருந்து கண்டறியக்கூடிய டிஎன்ஏ வரிசையை உருவாக்க ஒரு புரதத்திற்கு இரண்டு சரியாக பிணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகளின் கலவை தேவைப்படுவதால், ஒரே நேரத்தில் பல புரதங்களைக் கண்டறிய PEA உதவுகிறது (மல்டிபிளெக்சிங் என்று அழைக்கப்படுகிறது). அறிவாற்றல் ஜோடி வரிசைகள் மட்டுமே உண்மையான சமிக்ஞையாக கண்டறியப்படுகின்றன, இது ஒரு நேரத்தில் சுமார் 30 புரதங்களில் வரையறுக்கப்பட்ட திட கட்ட பிடிப்பு முறைகளுக்கு அப்பால் மல்டிபிளெக்சிங்கை செயல்படுத்துகிறது. டிஎன்ஏ பெருக்க சக்தி ஒரு மைக்ரோலிட்டருக்குக் கீழே கூட நிமிட மாதிரி தொகுதிகளை செயல்படுத்துகிறது. 1000 க்கும் மேற்பட்ட ஆராய்ச்சி வெளியீடுகளில் PEA பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளது. டிஎன்ஏ பாலிமரேஸிற்குப் பதிலாக அருகாமை ஆய்வுகளின் வரிசைகளை ஒன்றிணைக்க டிஎன்ஏ லிகேஸ் நொதியைப் பயன்படுத்தும் அருகாமை பிணைப்பு மதிப்பீட்டில் (பிஎல்ஏ) இருந்து வளர்ச்சி பிஇஏ பெறப்படுகிறது. பி. எல். ஏ மல்டிபிளெக்சிங்கிற்கும் ஏற்றது, ஆனால் சீரம் மற்றும் பிளாஸ்மா மாதிரிகளின் கூறுகளிலிருந்து லிகேஸ் என்சைம்களின் நொதி மாதிரி மாறி தடுப்பால் பாதிக்கப்படுகிறது. டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் என்சைம்கள் அதே தடுப்பை அனுபவிக்காது, மேலும் எளிதில் மல்டிபிளெக்ஸ் செய்யக்கூடியது மற்றும் 384 புரதங்கள் வரை மல்டிபிளெக்ஸ் செய்யப்பட்டுள்ளது. பி. இ. ஏ செயல்திறன் வெப்பநிலை உணர்திறன் கொண்டது, ஏனெனில் இது டிஎன்ஏ கலப்பின அடிப்படையிலான எதிர்வினை. எனவே அறை வெப்பநிலையில் எந்த செயல்பாடும் இல்லாத ஹைப்பர்-தெர்மோஸ்டபிள் பாலிமரேஸ்களின் பயன்பாடு பெஞ்ச் டாப் ரியாக்ஷன் அசெம்பிளியை ஆதரிக்கிறது. குறிப்புகள் புரோட்டியோமிக்ஸ் உயிர்வேதியியல் கண்டறிதல் முறைகள்