P-site
பி-தளம் (பெப்டிடைலுக்கு) ரைபோசோமில் உள்ள டி. ஆர். என். ஏ-க்கான இரண்டாவது பிணைப்பு தளமாகும். மற்ற இரண்டு தளங்கள் ஏ-தளம் (அமினோஅசைல்) ஆகும், இது ரைபோசோமின் முதல் பிணைப்பு தளமாகும், மேலும் ஈ-தளம் (வெளியேறும்), மூன்றாவது. புரத மொழிபெயர்ப்பின் போது, பி-தளம் வளரும் பாலிபெப்டைட் சங்கிலியுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ள டி. ஆர். என். ஏவை வைத்திருக்கிறது. ஒரு ஸ்டாப் கோடானை அடையும் போது, பி-தளத்தில் அமைந்துள்ள டி. ஆர். என். ஏவின் பெப்டிடைல்-டி. ஆர். என். ஏ பிணைப்பு பிளவுபட்டு புதிதாக ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட புரதத்தை வெளியிடுகிறது. நீளம் கட்டத்தின் இடமாற்ற கட்டத்தின் போது, எம்ஆர்என்ஏ ஒரு கோடானால் மேம்படுத்தப்படுகிறது, இது ரைபோசோமல் ஏ முதல் பி மற்றும் பி முதல் ஈ தளங்களுக்கு டிஆர்என்ஏக்களின் இயக்கத்துடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளது, இது நீளம் காரணி ஈஎஃப்-ஜி மூலம் ஊக்குவிக்கப்படுகிறது. கண்ணோட்டம் ரைபோசோமல் பி-தளம் மொழிபெயர்ப்பின் அனைத்து கட்டங்களிலும் முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது. துவக்கம் என்பது பி-தளத்தில் துவக்க டி. ஆர். என். ஏ மூலம் தொடக்க கோடானை (ஏ. யூ. ஜி) அங்கீகரிப்பதை உள்ளடக்கியது, நீளம் என்பது பி தளத்தின் வழியாக பல நீளமான டி. ஆர். என். ஏக்களை கடந்து செல்வதை உள்ளடக்கியது, முடித்தல் என்பது டி. ஆர். என். ஏவிலிருந்து பி-தளத்திற்கு பிணைக்கப்பட்ட முதிர்ந்த பாலிபெப்டைடின் நீராற்பகுப்பை உள்ளடக்கியது, மற்றும் ரைபோசோம் மறுசுழற்சி என்பது டிசைலேட்டட் டி. ஆர். என். ஏ வெளியீட்டை உள்ளடக்கியது. எம்ஆர்என்ஏ முன்னிலையில் பி-தளத்துடன் ஒரு டிஆர்என்ஏவை பிணைப்பது கோடான்-ஆன்டிகோடான் தொடர்புகளை நிறுவுகிறது, மேலும் டிஆர்என்ஏவிற்கான சிறிய துணை அலகு ரைபோசோம் (30எஸ்) தொடர்புகளுக்கு இந்த தொடர்பு முக்கியமானது. கிளாசிக்கல் இரு-நிலை மாதிரி ரைபோசோம் tRNA, P-தளம் மற்றும் A-தளத்திற்கான இரண்டு பிணைப்பு தளங்களைக் கொண்டுள்ளது என்று முன்மொழிகிறது. ஏ-தளம் உள்வரும் அமினோஅசைல்-டிஆர்என்ஏ உடன் பிணைக்கிறது, இது ஏ-தளத்தில் வழங்கப்பட்ட எம்ஆர்என்ஏவில் தொடர்புடைய கோடானுக்கான ஆன்டி-கோடானைக் கொண்டுள்ளது. வளர்ந்து வரும் பாலிபெப்டைட் சங்கிலியின் சி-முனைய கார்பனைல் குழுவிற்கும் (பி-தள பிணைக்கப்பட்ட டி. ஆர். என். ஏ உடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளது) அமினோஅசைல்-டி. ஆர். என். ஏ (ஏ-தள பிணைக்கப்பட்ட) அமினோ குழுவிற்கும் இடையில் பெப்டைட் உருவான பிறகு, பாலிபெப்டைட் சங்கிலி பின்னர் இணைக்கப்பட்டுள்ளது ஏ-தளத்தில் உள்ள டி. ஆர். என். ஏ உடன். டிசைலேட்டட் டிஆர்என்ஏ பி-தளத்தில் உள்ளது மற்றும் பெப்டிடைல்-டிஆர்என்ஏ பி-தளத்திற்கு மாற்றப்பட்டவுடன் வெளியிடப்படுகிறது. சுழற்சியை முடிக்க ஏ-தளத்திலிருந்து பி-தளத்திற்கு பெப்டிடைல்-டி. ஆர். என். ஏ இடமாற்றம் எவ்வாறு அடையப்படுகிறது? ஒரு இடைநிலை கலப்பின கட்டமைப்பை உருவாக்குவதன் மூலம், ஒருவருக்கொருவர் இரண்டு ரைபோசோமல் துணை அலகுகளின் இயக்கத்தின் மூலம் இது இரண்டு படிகளில் செய்யப்பட வேண்டும் என்று முன்மொழியப்பட்டதுஃ ஒரு துணைக்குழுவின் ஏ-தளம் மற்ற துணைக்குழுவின் பி-தளத்துடன். இது ஒரு பெரிய பொருளை நகர்த்துவதற்கு ஒத்ததாகும்ஃ நீங்கள் முதலில் ஒரு முனையையும், பின்னர் மற்றொன்றையும் நகர்த்துகிறீர்கள். இரசாயன மாற்ற சோதனைகள் இந்த கலப்பின மாதிரியின் ஆதாரங்களை வழங்கின, இதில் டி. ஆர். என். ஏக்கள் நீளமான கட்டத்தில் (இடமாற்றத்திற்கு முந்தைய படி) பிணைப்பின் கலப்பின நிலையை மாதிரி செய்ய முடியும். பிணைப்பின் இந்த கலப்பின நிலைகளில், டி. ஆர். என். ஏ இன் ஏற்பி மற்றும் ஆன்டி-கோடான் முனைகள் வெவ்வேறு தளங்களில் (ஏ, பி மற்றும் ஈ) உள்ளன. இரசாயன ஆய்வு முறைகளைப் பயன்படுத்தி, ரைபோசோமல் ஆர். என். ஏவில் பைலோஜெனெட்டிக்கலாக பாதுகாக்கப்பட்ட தளங்களின் தொகுப்பு, அங்கு டி. ஆர். என். ஏ பிணைப்புகள் பரிசோதிக்கப்பட்டுள்ளன, மேலும் இது புரோக்கரியோடிக் ரைபோசோமுடன் டி. ஆர். என். ஏவை பிணைப்பதில் நேரடியாக ஈடுபடுவதாக பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. ஆர். ஆர். என். ஏவில் உள்ள அத்தகைய தள-குறிப்பிட்ட பாதுகாக்கப்பட்ட தளங்களின் தொடர்பு மற்றும் ஏ, பி மற்றும் ஈ தளங்களின் ஆக்கிரமிப்பு ஆகியவை இந்த தளங்களின் நோயறிதல் மதிப்பீடுகளை மொழிபெயர்ப்பு சுழற்சியின் எந்தவொரு குறிப்பிட்ட நிலையிலும் டி. ஆர். என். ஏவின் இருப்பிடத்தை ஆய்வு செய்ய அனுமதித்துள்ளன. ஆசிரியர்கள் ஒரு கலப்பின மாதிரியை முன்மொழிந்தனர், இதில் 50S துணைக்குழுவின் E மற்றும் P தளங்களுக்கு செயலிழக்கப்பட்ட tRNA மற்றும் பெப்டைட் tRNA இன் அதிக தொடர்பு, வெப்ப இயக்கவியல் ரீதியாக P/P முதல் P/E மற்றும் A/A முதல் A/P மாற்றங்களுக்கு சாதகமாக உள்ளது, அவை கிரையோ-EM சோதனைகள் மூலம் மேலும் நிரூபிக்கப்பட்டன. மேலும், ஒற்றை மூலக்கூறு FRET ஆய்வுகள் tRNA களின் நிலைகளில் ஏற்ற இறக்கங்களைக் கண்டறிந்துள்ளன, இது tRNA களின் கிளாசிக்கல் (A/A-P/P) மற்றும் கலப்பின நிலைகள் (A/P-P/E) நிச்சயமாக மாறும் சமநிலையில் உள்ளன என்ற முடிவுக்கு வழிவகுக்கிறது. பெப்டைட் பிணைப்பு உருவாவதற்கு முன்பு, ஒரு அமினோஅசைல்-டி. ஆர். என். ஏ ஏ-தளத்தில் பிணைக்கப்பட்டுள்ளது, ஒரு பெப்டிடைல்-டி. ஆர். என். ஏ பி-தளத்தில் பிணைக்கப்பட்டுள்ளது, மற்றும் ஒரு டிஸிலேட்டட் டி. ஆர். என். ஏ (ரைபோசோமில் இருந்து வெளியேற தயாராக உள்ளது) ஈ-தளத்தில் பிணைக்கப்பட்டுள்ளது. மொழிபெயர்ப்பு ஏ-தளத்திலிருந்து பி-மற்றும் ஈ-தளங்கள் வழியாக டி. ஆர். என். ஏவை நகர்த்துகிறது, துவக்குபவர் டி. ஆர். என். ஏவைத் தவிர, இது பி-தளத்துடன் நேரடியாக பிணைக்கிறது. சமீபத்திய சோதனைகள் புரத மொழிபெயர்ப்பு ஏ-தளத்திலிருந்து தொடங்கலாம் என்று தெரிவித்துள்ளன. டோ பிரிண்டிங் மதிப்பீட்டைப் பயன்படுத்தி, கிரிக்கெட் பக்கவாதம் வைரஸில் (சிஆர்பிவி) ரைபோசோமின் (யூகாரியோடிக்) ஏ-தளத்திலிருந்து புரதத் தொகுப்பு தொடங்குகிறது என்பது நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. ஐஜிஆர்-ஐஆர்இஎஸ் (இன்ட்ராஜெனிக் ரீஜன்ஸ்-இன்டெர்னல் ரைபோசோம் நுழைவு தளங்கள்) 40எஸ் மற்றும் 60எஸ் ரைபோசோமல் துணை அலகுகளிலிருந்து 80எஸ் ரைபோசோம்களை ஈஐஎஃப்2, மெட்-டிஆர்என்ஏஐ அல்லது ஜிடிபி ஹைட்ரோலிசிஸ் இல்லாத நிலையில் மற்றும் ரைபோசோமல் பி-தளத்தில் குறியீட்டு மூன்று மடங்கு இல்லாமல் ஒருங்கிணைக்க முடியும். என்-முனைய எச்சம் மெத்தியோனின் இல்லாத ஒரு புரதத்தின் நேரடி மொழிபெயர்ப்பை ஐ. ஜி. ஆர்-ஐ. ஆர். இ. எஸ் செய்ய முடியும் என்றும் ஆசிரியர்கள் காட்டினர். கட்டமைப்பு டி. தெர்மோபிலஸ் 70எஸ் ரைபோசோமின் முழுமையான முப்பரிமாண அமைப்பு எக்ஸ்-ரே படிகவியலைப் பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்பட்டது, இதில் எம்ஆர்என்ஏ மற்றும் டிஆர்என்ஏக்கள் பி மற்றும் இ தளங்களுடன் 5.5 Å தெளிவுத்திறனிலும், ஏ தளத்துடன் 7 Å தெளிவுத்திறனிலும் பிணைக்கப்பட்டுள்ளன. ரைபோசோமின் மூன்று டிஆர்என்ஏ பிணைப்பு தளங்களும் (ஏ, பி மற்றும் இ) அந்தந்த மூன்று டிஆர்என்ஏக்களையும் அவற்றின் கட்டமைப்புகளின் உலகளவில் பாதுகாக்கப்பட்ட பகுதிகளில் தொடர்பு கொள்வதை ஆசிரியர்கள் கண்டறிந்தனர். இது ரைபோசோம் வெவ்வேறு டி. ஆர். என். ஏ இனங்களை துல்லியமாக ஒரே வழியில் பிணைக்க அனுமதிக்கிறது. புரதத் தொகுப்பின் இடமாற்ற நடவடிக்கைக்கு டி. ஆர். என். ஏக்கள் 20 Å அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட இயக்கங்கள் தேவைப்படுகின்றன, ஏனெனில் அவை ஏ முதல் பி வரை ஈ தளங்களுக்கு டி. ஆர். என். ஏ-இலக்கு நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகள் ஆக்சசோலிடின்கள் (எ. கா. லைன்சோலிட்) பி-தளத்தில் துவக்க டி. ஆர். என். ஏ பிணைப்பைத் தடுக்கிறது. ஆக்சசோலிடைன்கள் துவக்க-tRNA பிணைப்பு, EF-P (நீளம் காரணி P)-பெப்டைட் பிணைப்புகளின் தூண்டப்பட்ட தொகுப்பு மற்றும் P-தளத்திற்குள் துவக்க-tRNA இன் EF-G-மத்தியஸ்த இடமாற்றத்தை பிளியோட்ரோபிக்கலாக பாதிக்கின்றன என்பது நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகளின் மேக்ரோலைடு, லின்கோசாமைடு மற்றும் ஸ்ட்ரெப்டோகிராமின் வகுப்புகள் பெப்டைட் பிணைப்பு உருவாக்கம் மற்றும்/அல்லது ரைபோசோமின் ஏ-தளத்திலிருந்து பி-தளத்திற்கு டி. ஆர். என். ஏ இடமாற்றம் செய்யப்படுவதைத் தடுக்கின்றன, இது இறுதியில் நீளம் படிநிலையில் குறுக்கிடுவதற்கு வழிவகுக்கிறது, இதனால் புரத மொழிபெயர்ப்பைத் தடுக்கிறது. குறிப்புகள் ரைபோசோமல் ஆர்என்ஏ