Hit selection
உயர்-செயல்திறன் திரையிடலில் (எச். டி. எஸ்), முக்கிய குறிக்கோள்களில் ஒன்று சேர்மங்களைத் தேர்ந்தெடுப்பது (சிறிய மூலக்கூறுகள், சிஆர்என்ஏக்கள், எஸ்ஆர்என்ஏ, மரபணுக்கள் மற்றும் பலர் உட்பட). விரும்பிய அளவு தடுப்பு அல்லது செயல்படுத்தும் விளைவுகளுடன். ஒரு எச். டி. எஸ் திரையில் விரும்பிய அளவிலான விளைவுகளைக் கொண்ட ஒரு கலவை ஹிட் என்று அழைக்கப்படுகிறது. வெற்றிகளைத் தேர்ந்தெடுக்கும் செயல்முறை வெற்றி தேர்வு என்று அழைக்கப்படுகிறது. பொதுவான எச். டி. எஸ் சோதனைகளில் ஹிட் தேர்வுக்கான முறைகள் பல்லாயிரக்கணக்கான (அல்லது மில்லியன் கணக்கான) சேர்மங்களை விரைவாக திரையிடும் திறனைக் கொண்டுள்ளன. எனவே, ஹிட் செலக்சன் செயல்பாட்டில் தரவுகளின் மேடுகளிலிருந்து இரசாயன/உயிர்வேதியியல் முக்கியத்துவத்தை சேகரிப்பது ஒரு சவாலாகும். இந்த சவாலை எதிர்கொள்ள, ஹிட் தேர்வுக்கு பொருத்தமான பகுப்பாய்வு முறைகள் பின்பற்றப்பட்டுள்ளன. பெரிய விளைவுகளைக் கொண்ட வெற்றிகளைத் தேர்ந்தெடுப்பதில் இரண்டு முக்கிய உத்திகள் உள்ளன. ஒன்று, சேர்மங்களை அவற்றின் விளைவுகளால் தரவரிசைப்படுத்த மற்றும்/அல்லது வகைப்படுத்த சில மெட்ரிக் (களை) பயன்படுத்துவது, பின்னர் சரிபார்ப்பு மதிப்பீடுகளுக்கு நடைமுறையான அதிக எண்ணிக்கையிலான சக்திவாய்ந்த சேர்மங்களைத் தேர்ந்தெடுப்பது. மற்றொரு உத்தி என்னவென்றால், ஒரு கலவை முன்கூட்டியே நிர்ணயிக்கப்பட்ட அளவை அடைய போதுமான வலுவான விளைவுகளைக் கொண்டிருக்கிறதா என்பதைச் சோதிப்பதாகும். இந்த மூலோபாயத்தில், தவறான-எதிர்மறை விகிதங்கள் (எஃப்என்ஆர்) மற்றும்/அல்லது தவறான-நேர்மறை விகிதங்கள் (எஃப். பி. ஆர்) கட்டுப்படுத்தப்பட வேண்டும். எச். டி. எஸ் சோதனைகளில் இரண்டு முக்கிய வகைகள் உள்ளன, ஒன்று பிரதி இல்லாமல் (பொதுவாக முதன்மை திரைகளில்) மற்றும் பிரதி கொண்ட ஒன்று (பொதுவாக உறுதிப்படுத்தல் திரைகளில்). ஹிட் தேர்வுக்கான பகுப்பாய்வு முறைகள் அந்த இரண்டு வகையான எச். டி. எஸ் சோதனைகளில் வேறுபடுகின்றன. எடுத்துக்காட்டாக, ரெப்ளிகேட்டுகள் இல்லாத திரைகளுக்கு இசட்-ஸ்கோர் முறை பொருத்தமானது, அதே நேரத்தில் டி-புள்ளிவிவரம் ரெப்ளிகேட்டுகள் கொண்ட திரைகளுக்கு ஏற்றது. ரெப்ளிகேட்டுகள் இல்லாத திரைகளுக்கான எஸ். எஸ். எம். டி கணக்கீடும் ரெப்ளிகேட்டுகள் கொண்ட திரைகளிலிருந்து வேறுபடுகிறது. பிரதிகள் இல்லாத திரைகள் பிரதிகள் இல்லாமல் முதன்மை திரைகளில் ஹிட் தேர்வுக்கு பல அளவீடுகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. எளிதில் விளக்கமுடியாதவை மடிப்பு மாற்றம், சராசரி வேறுபாடு, சதவீதம் தடுப்பு மற்றும் சதவீதம் செயல்பாடு ஆகும். இருப்பினும், இந்த அளவீடுகள் அனைத்திற்கும் பொதுவான குறைபாடு என்னவென்றால், அவை தரவு மாறுபாட்டை திறம்பட கைப்பற்றுவதில்லை. இந்த சிக்கலை தீர்க்க, ஆராய்ச்சியாளர்கள் பின்னர் இசட்-ஸ்கோர் முறை அல்லது எஸ். எஸ். எம். டி. க்கு திரும்பினர், இது எதிர்மறை குறிப்புகளில் தரவு மாறுபாட்டைப் பிடிக்க முடியும். ஒரு தட்டில் உள்ள அனைத்து ஆய்வு செய்யப்பட்ட சேர்மங்களின் அளவிடப்பட்ட மதிப்புகள் (பொதுவாக பதிவு அளவுகோலில் ஒளிரும் தீவிரம்) இயல்பான பரவலைக் கொண்டுள்ளன என்ற அனுமானத்தை அடிப்படையாகக் கொண்டது இசட்-ஸ்கோர் முறை. எஸ். எஸ். எம். டி இயல்பான அனுமானத்தின் கீழ் சிறப்பாக செயல்படுகிறது. இருப்பினும், பெரிய விளைவுகளைக் கொண்ட உண்மையான தாக்கங்கள் பெரும்பாலான சேர்மங்களிலிருந்து மிகவும் வித்தியாசமாக செயல்பட வேண்டும், எனவே அவை வெளிப்புறமாக இருக்கும். வலுவான மதிப்பீட்டு கலைப்பொருட்கள் வெளிப்புறமாகவும் செயல்படக்கூடும். எனவே, HTS சோதனைகளில் அவுட்லையர்கள் அசாதாரணமானவை அல்ல. இசட்-ஸ்கோர் மற்றும் எஸ். எஸ். எம். டி ஆகியவற்றின் வழக்கமான பதிப்புகள் அவுட்லையர்களுக்கு உணர்திறன் கொண்டவை மற்றும் சிக்கலானவை. இதன் விளைவாக, z *-ஸ்கோர் முறை, எஸ். எஸ். எம். டி *, பி-ஸ்கோர் முறை மற்றும் அளவு அடிப்படையிலான முறை போன்ற வலுவான முறைகள் முன்மொழியப்பட்டு, பிரதிகள் இல்லாமல் முதன்மை திரைகளில் ஹிட் தேர்வுக்கு ஏற்றுக்கொள்ளப்பட்டுள்ளன. பிரதிகள் இல்லாத முதன்மைத் திரையில், ஒவ்வொரு சேர்மமும் ஒரு முறை மட்டுமே அளவிடப்படுகிறது. இதன் விளைவாக, ஒவ்வொரு சேர்மத்திற்கும் தரவு மாறுபாட்டை நாம் நேரடியாக மதிப்பிட முடியாது. அதற்கு பதிலாக, ஒவ்வொரு சேர்மமும் திரையில் உள்ள ஒரு தட்டில் உள்ள எதிர்மறை குறிப்புக்கு சமமான மாறுபாட்டைக் கொண்டுள்ளது என்ற வலுவான அனுமானத்தை செய்வதன் மூலம் தரவு மாறுபாட்டை மறைமுகமாக மதிப்பிடுகிறோம். இசட்-ஸ்கோர், இசட் *-ஸ்கோர் மற்றும் பி-ஸ்கோர் ஆகியவை இந்த வலுவான அனுமானத்தை நம்பியுள்ளன; அதேபோல் எஸ். எஸ். எம். டி மற்றும் எஸ். எஸ். எம். டி * ரெப்ளிகேட்டுகள் இல்லாத நிகழ்வுகளுக்கும் உள்ளன. ரெப்ளிகேட்டுகள் கொண்ட திரைகள் ஒவ்வொரு சேர்மத்திற்கும் தரவு மாறுபாட்டை நாம் நேரடியாக மதிப்பிடலாம், இதனால் ரெப்ளிகேட்டுகள் மற்றும் டி-புள்ளிவிவரங்களைக் கொண்ட நிகழ்வுகளுக்கு எஸ். எஸ். எம். டி போன்ற சக்திவாய்ந்த முறைகளைப் பயன்படுத்தலாம், அவை இசட்-ஸ்கோர் மற்றும் இசட் *-ஸ்கோர் நம்பியுள்ளன என்ற வலுவான அனுமானத்தை நம்பியிருக்காது. டி-புள்ளிவிவர மற்றும் அதனுடன் தொடர்புடைய பி-மதிப்புகளைப் பயன்படுத்துவதில் உள்ள ஒரு சிக்கல் என்னவென்றால், அவை மாதிரி அளவு மற்றும் விளைவு அளவு ஆகிய இரண்டாலும் பாதிக்கப்படுகின்றன. அவை சராசரி வேறுபாடு இல்லாத சோதனையிலிருந்து வருகின்றன, எனவே சிறிய மூலக்கூறு அல்லது சிஆர்என்ஏ விளைவுகளின் அளவை அளவிட வடிவமைக்கப்படவில்லை. ஹிட் தேர்வுக்கு, முக்கிய ஆர்வம் ஒரு சோதிக்கப்பட்ட சிறிய மூலக்கூறு அல்லது siRNA இல் விளைவின் அளவு ஆகும். எஸ். எஸ். எம். டி நேரடியாக விளைவுகளின் அளவை மதிப்பிடுகிறது. பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் பிற விளைவு அளவுகளை விட எஸ். எஸ். எம். டி சிறந்தது என்றும் நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. எஸ். எஸ். எம். டி. யின் மக்கள்தொகை மதிப்பு சோதனைகள் முழுவதும் ஒப்பிடத்தக்கது, எனவே எஸ். எஸ். எம். டி. யின் மக்கள்தொகை மதிப்புக்கு அதே வெட்டு முறையைப் பயன்படுத்தி எஸ். ஐ. ஆர். என். ஏ விளைவுகளின் அளவை அளவிட முடியும். தரவு மாறுபாட்டைப் பிடிக்க முடியாத சராசரி மடிப்பு மாற்றத்தின் குறைபாட்டை எஸ். எஸ். எம். டி சமாளிக்க முடியும். மறுபுறம், எஸ். எஸ். எம். டி என்பது சராசரி மற்றும் நிலையான விலகல் விகிதமாக இருப்பதால், நிலையான விலகல் மிகவும் சிறியதாக இருக்கும்போது, சராசரி சிறியதாக இருந்தாலும் கூட, பெரிய எஸ். எஸ். எம். டி மதிப்பைப் பெறலாம். சில சந்தர்ப்பங்களில், மிகச் சிறிய சராசரி மதிப்பு உயிரியல் தாக்கத்தை ஏற்படுத்தாது. எனவே, பெரிய எஸ். எஸ். எம். டி மதிப்புகள் (அல்லது வேறுபாடுகள்) ஆனால் மிகச் சிறிய சராசரி மதிப்புகள் கொண்ட சேர்மங்கள் ஆர்வமாக இருக்காது. இந்த சிக்கலை தீர்க்க இரட்டை ஃப்ளாஷ்லைட் பிளாட் என்ற கருத்து முன்மொழியப்பட்டுள்ளது. ஒரு இரட்டை-ஃப்ளாஷ்லைட் பிளாட்டில், ஒரு பரிசோதனையில் ஆராயப்பட்ட அனைத்து சேர்மங்களுக்கும் முறையே y-மற்றும் x-அச்சுகளில் எஸ். எஸ். எம். டி மற்றும் சராசரி பதிவு மடிப்பு-மாற்றத்தை (அல்லது சராசரி சதவீதம் தடுப்பு/செயல்படுத்தல்) திட்டமிடுகிறோம். இரட்டை ஃப்ளாஷ்லைட் பிளாட் மூலம், படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, மரபணுக்கள் அல்லது சேர்மங்கள் ஒவ்வொரு வகையிலும் விளைவு அளவுகளில் எவ்வாறு விநியோகிக்கப்படுகின்றன என்பதைக் காணலாம். இதற்கிடையில், ஒவ்வொரு சேர்மத்திற்கும் சராசரி மடிப்பு மாற்றத்தையும் நாம் காணலாம். மேலும் காண்க விளைவு அளவு உயர்-செயல்திறன் திரையிடல் Z-ஸ்கோர் எஸ். எஸ். எம். டி எஸ். எம். சி. வி டூயல்-ஃப்ளாஷ்லைட் பிளாட் மேலும் வாசிப்பு ஜாங் எக்ஸ். எச். டி (2011) "உகந்த உயர்-செயல்திறன் திரையிடல்ஃ மரபணு அளவிலான ஆர்என்ஏஐ ஆராய்ச்சிக்கான நடைமுறை சோதனை வடிவமைப்பு மற்றும் தரவு பகுப்பாய்வு, கேம்பிரிட்ஜ் பல்கலைக்கழக பத்திரிகை" குறிப்புகள் மருந்து கண்டுபிடிப்பு மருத்துவ ஆராய்ச்சி