Massive parallel sequencing
மாபெரும் இணையான வரிசைமுறை அல்லது மாபெரும் இணையான வரிசைமுறை என்பது மாபெரும் இணையான செயலாக்கக் கருத்தைப் பயன்படுத்தி டிஎன்ஏ வரிசைமுறைக்கான பல உயர்-செயல்திறன் அணுகுமுறைகளில் ஒன்றாகும்; இது அடுத்த தலைமுறை வரிசைமுறை (என்ஜிஎஸ்) அல்லது இரண்டாம் தலைமுறை வரிசைமுறை என்றும் அழைக்கப்படுகிறது. இந்த தொழில்நுட்பங்களில் சில 1993 மற்றும் 1998 க்கு இடையில் தோன்றி 2005 முதல் வணிக ரீதியாக கிடைக்கின்றன. இந்த தொழில்நுட்பங்கள் ஒரு கருவி ஓட்டத்திற்கு 1 மில்லியன் முதல் 43 பில்லியன் குறுகிய வாசிப்புகள் (தலா 50 முதல் 400 தளங்கள்) வரிசைப்படுத்த மினியேச்சர் மற்றும் இணையான தளங்களைப் பயன்படுத்துகின்றன. பல என்ஜிஎஸ் தளங்கள் பொறியியல் உள்ளமைவுகள் மற்றும் வரிசை வேதியியலில் வேறுபடுகின்றன. அவை ஒரு ஓட்டம் செல்லில் இடஞ்சார்ந்த பிரிக்கப்பட்ட, குளோனலி பெருக்கப்பட்ட டிஎன்ஏ வார்ப்புருக்கள் அல்லது ஒற்றை டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகள் வழியாக பெரிய இணையான வரிசைமுறையின் தொழில்நுட்ப முன்னுதாரணத்தைப் பகிர்ந்து கொள்கின்றன. இந்த வடிவமைப்பு சாங்கர் வரிசைமுறையிலிருந்து மிகவும் வேறுபட்டது-இது கேபில்லரி வரிசைமுறை அல்லது முதல் தலைமுறை வரிசைமுறை என்றும் அழைக்கப்படுகிறது-இது தனிப்பட்ட வரிசைமுறை எதிர்வினைகளில் உற்பத்தி செய்யப்படும் சங்கிலி-முடிவு தயாரிப்புகளின் எலக்ட்ரோபோரேடிக் பிரிப்பை அடிப்படையாகக் கொண்டது. இந்த முறை வரிசைமுறையை பெரிய அளவில் முடிக்க அனுமதிக்கிறது. வணிக ரீதியாக கிடைக்கக்கூடிய என்ஜிஎஸ் இயங்குதளங்களுடன் என்ஜிஎஸ் இயங்குதளங்களின் டிஎன்ஏ வரிசைமுறை பொதுவாக பின்வரும் படிகளுடன் நடத்தப்படுகிறது. முதலாவதாக, டிஎன்ஏ வரிசைமுறை நூலகங்கள் பிசிஆர் இன் விட்ரோ மூலம் குளோனல் பெருக்கம் மூலம் உருவாக்கப்படுகின்றன. இரண்டாவதாக, டிஎன்ஏ தொகுப்பு மூலம் வரிசைப்படுத்தப்படுகிறது, அதாவது டிஎன்ஏ வரிசை சங்கிலி-முடிவு வேதியியல் மூலம் அல்லாமல் நிரப்பு இழையில் நியூக்ளியோடைடுகளைச் சேர்ப்பதன் மூலம் தீர்மானிக்கப்படுகிறது. மூன்றாவதாக, இடஞ்சார்ந்த பிரிக்கப்பட்ட, பெருக்கப்பட்ட டிஎன்ஏ வார்ப்புருக்கள் உடல் ரீதியான பிரிப்பு நடவடிக்கையின் தேவை இல்லாமல் ஒரே நேரத்தில் பெருமளவில் இணையான பாணியில் வரிசைப்படுத்தப்படுகின்றன. இந்த படிகள் பெரும்பாலான என்ஜிஎஸ் தளங்களில் பின்பற்றப்படுகின்றன, ஆனால் ஒவ்வொன்றும் வெவ்வேறு மூலோபாயத்தைப் பயன்படுத்துகின்றன. வரிசைமுறை எதிர்வினைகளின் என்ஜிஎஸ் இணையாக்கம் ஒரு கருவியின் ஓட்டத்தில் படிக்கப்படும் நியூக்ளியோடைடு வரிசையின் ஜிகாபேஸ்களுக்கு நூற்றுக்கணக்கான மெகாபேஸ்களை உருவாக்குகிறது. இது கிடைக்கக்கூடிய வரிசை தரவுகளில் கடுமையான அதிகரிப்பை ஏற்படுத்தியுள்ளது மற்றும் உயிரியல் மருத்துவ அறிவியலில் மரபணு வரிசைமுறை அணுகுமுறைகளை அடிப்படையில் மாற்றியுள்ளது. புதிதாக வளர்ந்து வரும் என்ஜிஎஸ் தொழில்நுட்பங்கள் மற்றும் கருவிகள் ஒரு மரபணு வரிசைமுறைக்கு $1000 என்ற அளவை நெருங்கும் வரிசைமுறை செலவில் குறிப்பிடத்தக்க குறைப்புக்கு மேலும் பங்களித்துள்ளன. 2014 ஆம் ஆண்டு நிலவரப்படி, பெருமளவில் இணையான வரிசைமுறை தளங்கள் வணிக ரீதியாக கிடைக்கின்றன, மேலும் அவற்றின் அம்சங்கள் அட்டவணையில் சுருக்கமாக உள்ளன. என்ஜிஎஸ் தொழில்நுட்பங்களின் வேகம் வேகமாக முன்னேறி வருவதால், தொழில்நுட்ப விவரக்குறிப்புகள் மற்றும் விலை மாறுபடும் நிலையில் உள்ளன. ஒற்றை-முனை வரிசைப்படுத்தலுக்கான ஒரு ஓட்டத்திற்கு இயக்க நேரங்கள் மற்றும் ஜிகாபேஸ் (ஜிபி) வெளியீடு குறிப்பிடப்பட்டுள்ளன. ஜோடி-இறுதி வரிசைமுறையைச் செய்யும்போது இயக்க நேரங்கள் மற்றும் வெளியீடுகள் தோராயமாக இரட்டிப்பாகும். ‡ ரோச் 454 மற்றும் ஹெலிகோஸ் பயோசைன்ஸ் இயங்குதளங்களுக்கான சராசரி வாசிப்பு நீளம். என்ஜிஎஸ்-க்கான வார்ப்புரு தயாரிப்பு முறைகள் என்ஜிஎஸ் எதிர்வினைகளுக்கான வார்ப்புருக்களைத் தயாரிப்பதில் இரண்டு முறைகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றனஃ ஒற்றை டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளிலிருந்து உருவாகும் பெருக்கப்பட்ட வார்ப்புருக்கள் மற்றும் ஒற்றை டிஎன்ஏ மூலக்கூறு வார்ப்புருக்கள். ஒற்றை ஒளிரும் நிகழ்வுகளைக் கண்டறிய முடியாத இமேஜிங் அமைப்புகளுக்கு, டிஎன்ஏ வார்ப்புருக்கள் பெருக்கம் தேவைப்படுகிறது. குழம்பு பிசிஆர் (எம்பிசிஆர்), உருளும் வட்டம் மற்றும் திட-கட்ட பெருக்கம் ஆகியவை மிகவும் பொதுவான மூன்று பெருக்க முறைகள் ஆகும். வார்ப்புருக்களின் இறுதி விநியோகம் இடஞ்சார்ந்த சீரற்ற அல்லது ஒரு கட்டத்தில் இருக்கலாம். குழம்பு பிசிஆர் முறைகளில், ஒரு டிஎன்ஏ நூலகம் முதலில் மரபணு டிஎன்ஏவின் சீரற்ற துண்டு துண்டாக உருவாக்கப்படுகிறது. ஒற்றை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏ துண்டுகள் (வார்ப்புருக்கள்) மணிகளின் மேற்பரப்பில் அடாப்டர்கள் அல்லது லிங்கர்களுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன, மேலும் ஒரு மணிகள் டிஎன்ஏ நூலகத்திலிருந்து ஒரு ஒற்றை டிஎன்ஏ துண்டுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன. மணிகளின் மேற்பரப்பில் டிஎன்ஏ துண்டுகளை பிணைக்கும் அடாப்டர்களுக்கு நிரப்பு வரிசைகளுடன் கூடிய ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடு ஆய்வுகள் உள்ளன. மணிகள் பின்னர் நீர்-எண்ணெய் குழம்பு நீர்த்துளிகளாக பிரிக்கப்படுகின்றன. நீரிய நீர்-எண்ணெய் குழம்பில், ஒரு மணியைப் பிடிக்கும் ஒவ்வொரு நீர்த்துளிகளும் ஒரு பி. சி. ஆர் மைக்ரோ ரியாக்டர் ஆகும், இது ஒற்றை டிஎன்ஏ வார்ப்புருவின் பெருக்கப்பட்ட நகல்களை உருவாக்குகிறது. சுருட்டப்பட்ட உருளும் வட்டம் நானோபால்கள் கரைசலில் சுழலும் வட்டம் பெருக்கம் மூலம் ஒற்றை டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளின் எண்ணிக்கையை பெருக்குவது, அதைத் தொடர்ந்து டிஎன்ஏக்களை விட சிறியதாக இருக்கும் புள்ளிகளின் கட்டத்தின் மீது பிடிக்கப்படுகிறது. டிஎன்ஏ காலனி உருவாக்கம் (பாலம் பெருக்கம்) முன்னோக்கி மற்றும் தலைகீழ் ப்ரைமர்கள் ஒரு ஓட்ட செல்லில் ஸ்லைடுக்கு அதிக அடர்த்தியில் சகப்பிணைப்புடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன. ஆதரவில் உள்ள வார்ப்புருவின் ப்ரைமர்களின் விகிதம் பெருக்கப்பட்ட கிளஸ்டர்களின் மேற்பரப்பு அடர்த்தியை வரையறுக்கிறது. ஃப்லோ செல் பாலிமரேஸ் அடிப்படையிலான நீட்டிப்புக்கான வினைப்பொருள்களுக்கு வெளிப்படுகிறது, மேலும் மேற்பரப்பில் ஒரு நிரப்பு ஒலிகோவுடன் இணைக்கப்பட்ட துண்டு "பாலங்கள்" இன் இலவச/தொலைதூர முனையாக ப்ரைமிங் நிகழ்கிறது. தொடர்ச்சியான சிதைவு மற்றும் விரிவாக்கம் ஓட்ட செல் மேற்பரப்பில் மில்லியன் கணக்கான தனித்தனி இடங்களில் டிஎன்ஏ துண்டுகளின் உள்ளூர்மயமாக்கப்பட்ட பெருக்கத்திற்கு வழிவகுக்கிறது. திட-கட்ட பெருக்கம் 100-200 மில்லியன் இடஞ்சார்ந்த பிரிக்கப்பட்ட வார்ப்புரு கிளஸ்டர்களை உருவாக்குகிறது, இது இலவச முனைகளை வழங்குகிறது, இதற்கு ஒரு உலகளாவிய வரிசைமுறை ப்ரைமர் பின்னர் வரிசைமுறை எதிர்வினையைத் தொடங்க கலப்பினமாக்கப்படுகிறது. இந்த தொழில்நுட்பம் 1997 ஆம் ஆண்டில் கிளாக்ஸோ-வெல்கமின் ஜெனீவா பயோமெடிக்கல் ரிசர்ச் இன்ஸ்டிடியூட் (ஜிபிஆர்ஐ), பாஸ்கல் மேயர், எரிக் கவாஷிமா மற்றும் லாரண்ட் ஃபரினெல்லி ஆகியோரால் காப்புரிமைக்காக தாக்கல் செய்யப்பட்டது, மேலும் 1998 ஆம் ஆண்டில் முதல் முறையாக பகிரங்கமாக வழங்கப்பட்டது. 1994 ஆம் ஆண்டில் கிறிஸ் ஆடம்ஸ் மற்றும் ஸ்டீவ் க்ரோன் ஆகியோர் இதேபோன்ற, ஆனால் குளோனல் அல்லாத, மேற்பரப்பு பெருக்க முறைக்கு காப்புரிமையை தாக்கல் செய்தனர், இது 1997 ஆம் ஆண்டில் சர்ச் மற்றும் மித்ராவால் குளோனல் பெருக்கத்திற்காக மாற்றியமைக்கப்பட்ட "பிரிட்ஜ் பெருக்கம்" என்று பெயரிடப்பட்டது. டிஎன்ஏ பெருக்கம் தேவைப்படும் ஒற்றை மூலக்கூறு வார்ப்புருக்கள் நெறிமுறைகள் பெரும்பாலும் செயல்படுத்த சிக்கலானவை மற்றும் வரிசைமுறை பிழைகளை அறிமுகப்படுத்தலாம். ஒற்றை மூலக்கூறு வார்ப்புருக்கள் தயாரிப்பது மிகவும் நேரடியானது மற்றும் பி. சி. ஆர் தேவையில்லை, இது பெருக்கப்பட்ட வார்ப்புருக்களில் பிழைகளை அறிமுகப்படுத்தலாம். ஏடி-ரிச் மற்றும் ஜிசி-ரிச் இலக்கு வரிசைகள் பெரும்பாலும் பெருக்க சார்பைக் காட்டுகின்றன, இதன் விளைவாக மரபணு சீரமைப்புகள் மற்றும் கூட்டங்களில் அவற்றின் குறைவான பிரதிநிதித்துவம் ஏற்படுகிறது. ஒற்றை மூலக்கூறு வார்ப்புருக்கள் பொதுவாக குறைந்தது மூன்று வெவ்வேறு அணுகுமுறைகளில் ஒன்றைப் பயன்படுத்தி திடமான ஆதரவுகளில் அசைக்கப்படுகின்றன. முதல் அணுகுமுறையில், இடஞ்சார்ந்த விநியோகிக்கப்பட்ட தனிப்பட்ட ப்ரைமர் மூலக்கூறுகள் திடமான ஆதரவுடன் சகப்பிணைப்புடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன. தொடக்க பொருளை தோராயமாக சிறிய அளவுகளாக (எடுத்துக்காட்டாக, ~ 200-250 bp) துண்டு முனைகளில் பொதுவான அடாப்டர்களைச் சேர்ப்பதன் மூலம் தயாரிக்கப்படும் வார்ப்புரு, பின்னர் அசையாத ப்ரைமருடன் கலப்பினமாக்கப்படுகிறது. இரண்டாவது அணுகுமுறையில், இடஞ்சார்ந்த விநியோகிக்கப்பட்ட ஒற்றை மூலக்கூறு வார்ப்புருக்கள் திடமான ஆதரவுடன் சகப்பிணைப்புடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன, அவை நிலையான ப்ரைமர்களிலிருந்து ஒற்றை-இழைகள் கொண்ட, ஒற்றை-மூலக்கூறு வார்ப்புருக்கள் ப்ரைமிங் மற்றும் நீட்டிக்கப்படுகின்றன. ஒரு பொதுவான ப்ரைமர் பின்னர் வார்ப்புருவிற்கு கலப்பினமாக்கப்படுகிறது. இரண்டு அணுகுமுறைகளிலும், டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் என்ஜிஎஸ் எதிர்வினையைத் தொடங்குவதற்கு அசையாத முதன்மையான வார்ப்புரு கட்டமைப்புடன் பிணைக்க முடியும். மேற்கூறிய இரண்டு அணுகுமுறைகளும் ஹெலிகோஸ் பயோ சயின்சஸால் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. மூன்றாவது அணுகுமுறையில், இடஞ்சார்ந்த விநியோகிக்கப்பட்ட ஒற்றை பாலிமரேஸ் மூலக்கூறுகள் திடமான ஆதரவுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன, அதனுடன் ஒரு முதன்மையான வார்ப்புரு மூலக்கூறு பிணைக்கப்பட்டுள்ளது. இந்த அணுகுமுறை பசிபிக் பயோ சயின்சஸ் மூலம் பயன்படுத்தப்படுகிறது. பெரிய டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகள் (பல்லாயிரக்கணக்கான அடிப்படை ஜோடிகள் வரை) இந்த நுட்பத்துடன் பயன்படுத்தப்படலாம், மேலும் முதல் இரண்டு அணுகுமுறைகளைப் போலல்லாமல், மூன்றாவது அணுகுமுறையை நிகழ்நேர முறைகளுடன் பயன்படுத்தலாம், இதன் விளைவாக நீண்ட வாசிப்பு நீளம் கிடைக்கும். வரிசைமுறை அணுகுமுறைகள் தொகுப்பு மூலம் வரிசைமுறை தொகுப்பு (எஸ். பி. எஸ்) மூலம் வரிசைமுறை வரிசைமுறைக்கான நோக்கம் ஒரு டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மூலம் ஒரு நியூக்ளியோடைடு இணைக்கப்படுவதைக் கண்டறிவதன் மூலம் டிஎன்ஏ மாதிரியின் வரிசைமுறையைத் தீர்மானிப்பதாகும். டிஎன்ஏவின் ஒற்றை இழையின் நகலை ஒருங்கிணைக்க ஒரு வடிவமைக்கப்பட்ட பாலிமரேஸ் பயன்படுத்தப்படுகிறது மற்றும் ஒவ்வொரு நியூக்ளியோடைடின் இணைப்பும் கண்காணிக்கப்படுகிறது. தொகுப்பின் மூலம் வரிசைப்படுத்தும் கொள்கை முதன்முதலில் 1993 இல் விவரிக்கப்பட்டது, சில ஆண்டுகளுக்குப் பிறகு மேம்பாடுகள் வெளியிடப்பட்டன. முக்கிய பாகங்கள் எஸ். பி. எஸ்ஸின் அனைத்து உருவகங்களுக்கும் மிகவும் ஒத்தவை மற்றும் (1) அடுத்தடுத்த சமிக்ஞையை மேம்படுத்துவதற்கும், டிஎன்ஏவை ஒரு திடமான ஆதரவுடன் வரிசைப்படுத்துவதற்கும் டிஎன்ஏவின் பெருக்கம், (2) திடமான ஆதரவில் ஒற்றை சிக்கலான டிஎன்ஏ உருவாக்கம், (3) ஒரு பொறிக்கப்பட்ட பாலிமரேஸைப் பயன்படுத்தி நியூக்ளியோடைடுகளை இணைத்தல் மற்றும் (4) நியூக்ளியோடைடைடு இணைப்பதைக் கண்டறிதல் ஆகியவை அடங்கும். பின்னர் 3 முதல் 4 படிகள் மீண்டும் மீண்டும் செய்யப்படுகின்றன மற்றும் படி 4 இல் பெறப்பட்ட சமிக்ஞைகளிலிருந்து வரிசை ஒருங்கிணைக்கப்படுகிறது. 454, பாக்பியோ, அயன் டொரண்ட், இல்லுமினா மற்றும் எம்ஜிஐ உள்ளிட்ட கிட்டத்தட்ட அனைத்து பெரிய இணையான வரிசைமுறை கருவிகளுக்கும் இந்த வரிசைமுறை-மூலம்-தொகுப்பு கொள்கை பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளது. பைரோசீக்வென்சிங் கொள்கை முதன்முதலில் 1993 ஆம் ஆண்டில் 3 'முதல் 5' எக்ஸோனியூக்லீஸ் செயல்பாடு (ஆதார-வாசிப்பு) மற்றும் ஃபயர்ஃபிளை லூசிஃபெரேஸைப் பயன்படுத்தி ஒளிரும் நிகழ்நேர கண்டறிதல் இல்லாத ஒரு வடிவமைக்கப்பட்ட டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் உடன் ஒரு திடமான ஆதரவை இணைப்பதன் மூலம் விவரிக்கப்பட்டது. தொகுப்பின் மூலம் வரிசைமுறையின் அனைத்து முக்கிய கருத்துக்களும் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டன, இதில் (1) அடுத்தடுத்த சமிக்ஞையை மேம்படுத்துவதற்கும், வரிசைப்படுத்தப்பட வேண்டிய டிஎன்ஏவை (வார்ப்புரு) ஒரு திடமான ஆதரவுடன் இணைப்பதற்கும் டிஎன்ஏவின் பெருக்கம், (2) திடமான ஆதரவில் ஒற்றை சிக்கலான டிஎன்ஏவின் உருவாக்கம், 3) பொறிக்கப்பட்ட பாலிமரேஸைப் பயன்படுத்தி நியூக்ளியோடைடுகளை இணைத்தல் மற்றும் (4) நிகழ்நேரத்தில் ஒளி கண்டறிதல் மூலம் இணைக்கப்பட்ட நியூக்ளியோடைடைக் கண்டறிதல் ஆகியவை அடங்கும். ஒரு பின்தொடர்தல் கட்டுரையில், கருத்து மேலும் உருவாக்கப்பட்டது மற்றும் 1998 இல், ஒரு கட்டுரை வெளியிடப்பட்டது, அதில் ஆசிரியர்கள் இணைக்கப்படாத நியூக்ளியோடைடுகளை நான்காவது நொதி (அபிரேஸ்) மூலம் அகற்ற முடியும் என்பதைக் காட்டினர், இது தொகுப்பு மூலம் வரிசைமுறையை செயல்படுத்த அனுமதிக்கிறது. இந்த அணுகுமுறை நியூக்ளியோடைடு ஒருங்கிணைப்பு, ஃப்ளோரசன்ஸ் இமேஜிங் மற்றும் பிளவு ஆகியவற்றை உள்ளடக்கிய ஒரு சுழற்சி முறையில் தலைகீழ் டெர்மினேட்டர்-பிணைக்கப்பட்ட டி. என். டி. பி. க்களைப் பயன்படுத்துகிறது. ஒவ்வொரு டிஎன்டிபி சேர்க்கப்படுவதால் ஒரு ஒளிரும்-பெயரிடப்பட்ட டெர்மினேட்டர் படம்பிடிக்கப்படுகிறது, பின்னர் அடுத்த தளத்தை இணைக்க அனுமதிக்கும் வகையில் பிளவுபடுத்தப்படுகிறது. இந்த நியூக்ளியோடைடுகள் வேதியியல் ரீதியாக தடுக்கப்படுகின்றன, இதனால் ஒவ்வொரு இணைப்பும் ஒரு தனித்துவமான நிகழ்வாகும். ஒரு இமேஜிங் படி ஒவ்வொரு அடிப்படை ஒருங்கிணைப்பு படிநிலையையும் பின்பற்றுகிறது, பின்னர் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மூலம் அடுத்த இணைப்புக்கு ஒவ்வொரு இழையையும் தயாரிக்க தடுக்கப்பட்ட குழு வேதியியல் ரீதியாக அகற்றப்படுகிறது. பயனர் வரையறுக்கப்பட்ட கருவி அமைப்புகளால் தீர்மானிக்கப்பட்டபடி, ஒரு குறிப்பிட்ட எண்ணிக்கையிலான சுழற்சிகளுக்கு இந்த தொடர் படிகள் தொடர்கின்றன. 3 'தடுப்பு குழுக்கள் முதலில் நொதி அல்லது இரசாயன தலைகீழ் என கருதப்பட்டன இரசாயன முறை சோலெக்ஸா மற்றும் இல்லுமினா இயந்திரங்களுக்கு அடிப்படையாக இருந்து வருகிறது. ரிவர்சிபிள் டெர்மினேட்டர் வேதியியல் மூலம் வரிசைப்படுத்துவது இல்லுமினா/சோலெக்ஸா போன்ற நான்கு வண்ண சுழற்சியாக இருக்கலாம் அல்லது ஹெலிகோஸ் பயோ சயின்சஸ் போன்ற ஒரு வண்ண சுழற்சியாக இருக்கலாம். ஹெலிகோஸ் பயோ சயின்சஸ் "மெய்நிகர் டெர்மினேட்டர்களைப்" பயன்படுத்தியது, அவை ஒரு தடுப்பானாக செயல்படும் இரண்டாவது நியூக்ளியோசைடு அனலாக் கொண்ட அன்லாக் செய்யப்பட்ட டெர்மினேட்டர்கள் ஆகும். இந்த டெர்மினேட்டர்கள் குழுக்களை நிறுத்துவதற்கோ அல்லது தடுப்பதற்கோ பொருத்தமான மாற்றங்களைக் கொண்டுள்ளன, இதனால் டிஎன்ஏ தொகுப்பு ஒற்றை அடிப்படை கூட்டலுக்குப் பிறகு நிறுத்தப்படுகிறது. இந்த அணுகுமுறையில், வரிசை நீட்டிப்பு எதிர்வினை பாலிமரேஸ்களால் மேற்கொள்ளப்படுவதில்லை, மாறாக டிஎன்ஏ லிகேஸ் மற்றும் ஒரு-அடிப்படை-குறியிடப்பட்ட ஆய்வுகள் அல்லது இரண்டு-அடிப்படை-குறியிடப்பட்ட ஆய்வுகள் மூலம் மேற்கொள்ளப்படுகிறது. அதன் எளிமையான வடிவத்தில், ஒரு ஒளிரும் பெயரிடப்பட்ட ஆய்வு முதன்மையான வார்ப்புருவை ஒட்டியுள்ள அதன் நிரப்பு வரிசைக்கு கலப்பினமாக்குகிறது. டிஎன்ஏ லிகேஸ் பின்னர் டை-லேபிள் செய்யப்பட்ட ஆய்வில் ப்ரைமருடன் சேர சேர்க்கப்படுகிறது. இணைக்கப்படாத ஆய்வுகள் கழுவப்படுகின்றன, அதைத் தொடர்ந்து இணைக்கப்பட்ட ஆய்வின் அடையாளத்தைத் தீர்மானிக்க ஃப்ளோரசன்ஸ் இமேஜிங் செய்யப்படுகிறது. ஃப்ளோரசன்ட் சாயத்தை அகற்ற பிளவுபடுத்தக்கூடிய ஆய்வுகளைப் பயன்படுத்தி அடுத்தடுத்த பிணைப்பு சுழற்சிகளுக்கு (சங்கிலியால் பிணைக்கப்பட்ட பிணைப்பு) 5′-PO4 குழுவை மீண்டும் உருவாக்குவதன் மூலமோ அல்லது வார்ப்புருவில் (சங்கிலியால் பிணைக்கப்படாத பிணைப்பு) ஒரு புதிய ப்ரைமரை அகற்றி கலப்பினமாக்குவதன் மூலமோ இந்த சுழற்சியை மீண்டும் செய்யலாம். பாஸ்போலிங்க் ஃப்ளோரசன்ட் நியூக்ளியோடைடுகள் அல்லது நிகழ்நேர வரிசைமுறை பசிபிக் பயோசைன்ஸ் தற்போது இந்த முறையை வழிநடத்துகிறது. நிகழ்நேர வரிசைமுறை முறை டிஎன்ஏ தொகுப்பின் போது சாய-பெயரிடப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகளை தொடர்ந்து இணைப்பதை இமேஜிங் செய்வதை உள்ளடக்கியதுஃ ஒற்றை டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மூலக்கூறுகள் தனிப்பட்ட பூஜ்ஜிய-முறை அலை வழிகாட்டி கண்டுபிடிப்பாளர்களின் (இசட்எம்டபுள்யூ டிடெக்டர்கள்) கீழ் மேற்பரப்பில் இணைக்கப்பட்டுள்ளன, அவை வரிசை தகவல்களைப் பெற முடியும், அதே நேரத்தில் பாஸ்போளிங்க் செய்யப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகள் வளர்ந்து வரும் ப்ரைமர் ஸ்ட்ராண்டில் இணைக்கப்படுகின்றன. பசிபிக் பயோசைன்ஸ் ஒரு தனித்துவமான டிஎன்ஏ பாலிமரேஸைப் பயன்படுத்துகிறது, இது பாஸ்போலிங்க் செய்யப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகளை சிறப்பாக உள்ளடக்கியது மற்றும் மூடிய வட்ட வார்ப்புருக்கள் மறுசீரமைக்க உதவுகிறது. ஒற்றை-வாசிப்பு துல்லியம் 87 சதவீதமாக இருக்கும்போது, பல கிலோபேஸ் வாசிப்பு நீளங்களுடன் ஒருமித்த துல்லியம் 99.999 சதவீதமாக நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. 2015 ஆம் ஆண்டில், பசிபிக் பயோசைன்ஸ் சீக்வெல் சிஸ்டம் என்ற புதிய வரிசைமுறை கருவியை வெளியிட்டது, இது தோராயமாக 6.5-fold திறனை அதிகரிக்கிறது. மேலும் காண்க மருத்துவ மெட்டஜெனோமிக் வரிசைமுறை முதல் தலைமுறை வரிசைமுறை மூன்றாம் தலைமுறை வரிசைமுறை ஆர்என்ஏ வேகம் குறிப்புகள் டிஎன்ஏ வரிசைமுறை முறைகள்