ELISA
என்சைம்-லிங்க்ட் இம்யூனோசார்பன்ட் அஸ்ஸாய் (ELISA) (,) என்பது பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் பகுப்பாய்வு உயிர் வேதியியல் மதிப்பீடாகும், இது முதன்முதலில் 1971 இல் ஈவா எங்வால் மற்றும் பீட்டர் பெர்ல்மேன் ஆகியோரால் விவரிக்கப்பட்டது. அளவிடப்பட வேண்டிய புரதத்திற்கு எதிராக இயக்கப்படும் ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தி ஒரு திரவ மாதிரியில் ஒரு ஈந்தணைவியின் (பொதுவாக ஒரு புரதம்) இருப்பைக் கண்டறிய இந்த மதிப்பீடு ஒரு திட-கட்ட வகை என்சைம் இம்யூனோஅஸ்ஸே (ஈஐஏ) ஐப் பயன்படுத்துகிறது. எலிஸா மருத்துவம், தாவர நோயியல் மற்றும் உயிரி தொழில்நுட்பத்தில் ஒரு நோயறிதல் கருவியாகவும், பல்வேறு தொழில்களில் தரக் கட்டுப்பாட்டு சோதனையாகவும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. ஒரு எலிசாவின் மிகவும் எளிமையான வடிவத்தில், சோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரியிலிருந்து ஆன்டிஜென்கள் ஒரு மேற்பரப்பில் இணைக்கப்படுகின்றன. பின்னர், பொருந்தக்கூடிய ஆன்டிபாடி மேற்பரப்பில் பயன்படுத்தப்படுகிறது, இதனால் அது ஆன்டிஜெனை பிணைக்க முடியும். இந்த ஆன்டிபாடி ஒரு என்சைமுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளது, பின்னர் எந்த வரம்பற்ற ஆன்டிபாடிகளும் அகற்றப்படுகின்றன. இறுதி கட்டத்தில், நொதியின் அடி மூலக்கூறைக் கொண்ட ஒரு பொருள் சேர்க்கப்படுகிறது. பிணைப்பு இருந்தால், அடுத்தடுத்த எதிர்வினை ஒரு கண்டறியக்கூடிய சமிக்ஞையை உருவாக்குகிறது, பொதுவாக ஒரு வண்ண மாற்றம். ஒரு எலிசாவைச் செய்வது ஒரு குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜெனுக்கான குறிப்பிட்ட தன்மையுடன் குறைந்தபட்சம் ஒரு ஆன்டிபாடியையாவது உள்ளடக்கியது. அறியப்படாத அளவு ஆன்டிஜென் கொண்ட மாதிரி ஒரு திடமான ஆதரவில் (பொதுவாக ஒரு பாலிஸ்டிரீன் மைக்ரோடைட்டர் பிளேட்) குறிப்பாக (மேற்பரப்பில் உறிஞ்சுதல் மூலம்) அல்லது குறிப்பாக (அதே ஆன்டிஜெனுக்கு குறிப்பிட்ட மற்றொரு ஆன்டிபாடியால் பிடிப்பதன் மூலம், ஒரு "சாண்ட்விச்" எலிசாவில்) நிலைநிறுத்தப்படுகிறது. ஆன்டிஜென் நிலைநிறுத்தப்பட்ட பிறகு, கண்டறிதல் ஆன்டிபாடி சேர்க்கப்படுகிறது, இது ஆன்டிஜெனுடன் ஒரு சிக்கலை உருவாக்குகிறது. கண்டறிதல் ஆன்டிபாடி ஒரு நொதியுடன் சகப்பிணைப்புடன் இணைக்கப்படலாம் அல்லது பயோகான்ஜுகேஷன் மூலம் ஒரு நொதியுடன் இணைக்கப்பட்ட இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடி மூலம் கண்டறியப்படலாம். ஒவ்வொரு கட்டத்திற்கும் இடையில், தட்டு பொதுவாக ஒரு லேசான சோப்பு கரைசலுடன் கழுவப்பட்டு, குறிப்பாக பிணைக்கப்படாத புரதங்கள் அல்லது ஆன்டிபாடிகளை அகற்றுகிறது. இறுதி கழுவுதல் கட்டத்திற்குப் பிறகு, ஒரு புலப்படும் சமிக்ஞையை உருவாக்க ஒரு நொதி அடி மூலக்கூறைச் சேர்ப்பதன் மூலம் தட்டு உருவாக்கப்படுகிறது, இது மாதிரியில் உள்ள ஆன்டிஜெனின் அளவைக் குறிக்கிறது. குறிப்பிடத்தக்க வகையில், எலிசா கண்டிப்பாக "இம்யூனோ" மதிப்பீடுகளுக்கு பதிலாக தசைநார் பிணைப்பு மதிப்பீடுகளின் பிற வடிவங்களைச் செய்ய முடியும், இருப்பினும் இந்த முறையின் பொதுவான பயன்பாடு மற்றும் வளர்ச்சியின் வரலாறு காரணமாக இந்த பெயர் அசல் "இம்யூனோ" ஐக் கொண்டிருந்தது. நுட்பத்திற்கு அடிப்படையில் திடமான கட்டத்தில் அசைக்கக்கூடிய எந்தவொரு லிகேட்டிங் வினைப்பொருளும் தேவைப்படுகிறது, இது ஒரு கண்டறிதல் வினைப்பொருளுடன் குறிப்பாக பிணைக்கப்பட்டு, ஒழுங்காக அளவிடக்கூடிய ஒரு சமிக்ஞையை உருவாக்க ஒரு நொதியைப் பயன்படுத்தும். கழுவல்களுக்கு இடையில், ஈந்தணைவியும் அதன் குறிப்பிட்ட பிணைப்பு சகாக்களும் மட்டுமே திடமான கட்டத்திற்கு ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி தொடர்புகளால் குறிப்பாக பிணைக்கப்பட்டுள்ளன அல்லது "நோயெதிர்ப்பு உறிஞ்சப்படுகின்றன", அதே நேரத்தில் குறிப்பிடப்படாத அல்லது பிணைக்கப்படாத கூறுகள் கழுவப்படுகின்றன. மற்ற ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமெட்ரிக் ஈரமான ஆய்வக மதிப்பீட்டு வடிவங்களைப் போலல்லாமல், அதே எதிர்வினை நன்கு (எ. கா., ஒரு குவெட்) கழுவிய பிறகு மீண்டும் பயன்படுத்தப்படலாம், எலிசா தகடுகள் திடமான கட்டத்தில் நோயெதிர்ப்பு உறிஞ்சப்படும் எதிர்வினை தயாரிப்புகளைக் கொண்டுள்ளன, இது தட்டின் ஒரு பகுதியாகும், எனவே அவை எளிதில் மீண்டும் பயன்படுத்தப்படுவதில்லை. கோட்பாடு ஒரு பகுப்பாய்வு உயிர் வேதியியல் மதிப்பீடு மற்றும் ஒரு "ஈரமான ஆய்வக" நுட்பமாக, எலிசா என்பது ஒரு திரவ மாதிரியில் ஒரு பகுப்பாய்வை (அதாவது, அளவு அல்லது தரமான பகுப்பாய்வு செய்யப்படும் குறிப்பிட்ட பொருள்) கண்டறிவதை உள்ளடக்கியது, இது பகுப்பாய்வின் போது திரவ உலைகளை தொடர்ந்து பயன்படுத்தும் ஒரு முறையின் மூலம் (அதாவது, மாதிரியில் உள்ள பகுப்பாய்வின் அளவின் அளவீடாக எளிதில் அளவிடக்கூடிய மற்றும் விளக்கப்படக்கூடிய ஒரு சமிக்ஞையை உருவாக்கும் உயிர்வேதியியல் எதிர்வினைகளின் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட வரிசை) இது திரவமாக உள்ளது மற்றும் எதிர்வினை அறைக்குள் உள்ளது அல்லது எதிர்வினைகளை வைத்திருக்க நன்கு தேவைப்படுகிறது. இது உலர் கீற்றுகளைப் பயன்படுத்தும் "உலர் ஆய்வக" நுட்பங்களுக்கு மாறாக உள்ளது. மாதிரி திரவமாக இருந்தாலும் (எ. கா., ஒரு அளவிடப்பட்ட சிறிய துளி), "உலர்ந்த" பகுப்பாய்வில் இறுதி கண்டறிதல் படி ரிஃப்ளெக்டோமெட்ரி போன்ற முறைகள் மூலம் உலர்ந்த துண்டைப் படிப்பதை உள்ளடக்கியது மற்றும் மாதிரிகளுக்கு இடையில் கசிவு அல்லது கலப்பதைத் தடுக்க எதிர்வினை கட்டுப்பாட்டு அறை தேவையில்லை. ஒரு பன்முக மதிப்பீடாக, எலிஸா பகுப்பாய்வு எதிர்வினை கலவையின் சில கூறுகளை சில கூறுகளை ஒரு திடமான கட்டத்தில் உறிஞ்சுவதன் மூலம் பிரிக்கிறது, இது உடல் ரீதியாக அசைக்கப்படுகிறது. எலிசாவில், ஒரு திரவ மாதிரி சிறப்பு பிணைப்பு பண்புகளுடன் ஒரு நிலையான திட கட்டத்தில் சேர்க்கப்படுகிறது, அதைத் தொடர்ந்து பல திரவ வினையூக்கிகள் தொடர்ச்சியாக சேர்க்கப்பட்டு, அடைகாக்கப்பட்டு, கழுவப்படுகின்றன, அதைத் தொடர்ந்து சில ஒளியியல் மாற்றம் (எ. கா., ஒரு நொதி எதிர்வினையின் விளைபொருளால் நிற வளர்ச்சி) கிணற்றில் இறுதி திரவத்தில் பகுப்பாய்வின் அளவு அளவிடப்படுகிறது. அளவீட்டு "வாசிப்பு" பொதுவாக ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமெட்ரி மூலம் பரவும் ஒளியின் தீவிரத்தைக் கண்டறிவதை அடிப்படையாகக் கொண்டது, இதில் திரவத்தின் வழியாக ஒளியின் சில குறிப்பிட்ட அலைநீளம் பரிமாற்றத்தின் அளவு (அதே போல் பல கிணறு தட்டு வடிவத்தில் கிணற்றின் வெளிப்படையான அடிப்பகுதி) அடங்கும். கண்டறிதலின் உணர்திறன் பகுப்பாய்வு எதிர்வினைகளின் போது சமிக்ஞையின் பெருக்கத்தைப் பொறுத்தது. நொதி எதிர்வினைகள் நன்கு அறியப்பட்ட பெருக்க செயல்முறைகள் என்பதால், சமிக்ஞை என்சைம்களால் உருவாக்கப்படுகிறது, அவை துல்லியமான அளவை அனுமதிக்க நிலையான விகிதத்தில் கண்டறிதல் வினைப்பொருள்களுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன, இதனால் "நொதி-இணைக்கப்பட்ட" என்ற பெயர். பகுப்பாய்வு தசைநார் என்றும் அழைக்கப்படுகிறது, ஏனெனில் இது ஒரு கண்டறிதல் வினைப்பொருளுடன் குறிப்பாக பிணைக்கும் அல்லது இணைக்கும், இதனால் எலிசா தசைநார் பிணைப்பு மதிப்பீடுகளின் பெரிய பிரிவின் கீழ் வருகிறது. தசைநார்-குறிப்பிட்ட பிணைப்பு வினைப்பொருள் "அசைக்க முடியாதது", அதாவது, பொதுவாக வெளிப்படையான அடிப்பகுதியில் பூசப்பட்டு உலர்த்தப்படுகிறது, சில சமயங்களில் கிணற்றின் பக்கச் சுவரும் (திடமான நுண் துகள்கள்/மணிகளுக்கு மாறாக இங்கே நிலையான "திடமான கட்டம்"/"திடமான அடி மூலக்கூறு" கழுவப்படலாம்), இது பொதுவாக "எலிசா தட்டு" என்று அழைக்கப்படும் பல கிணறு தட்டாக கட்டப்படுகிறது. வழக்கமாக, மற்ற வகையான நோய்த்தடுப்பு மருந்துகளைப் போலவே, ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வகை எதிர்வினையின் குறிப்பிட்ட தன்மையும் பயன்படுத்தப்படுகிறது, ஏனெனில் ஒரு ஆன்டிபாடியை குறிப்பாக ஒரு ஆன்டிஜெனுக்கு எதிராக ஒரு வினைப்பொருளாக மொத்தமாக உயர்த்துவது எளிது. மாற்றாக, பகுப்பாய்வு ஒரு ஆன்டிபாடியாக இருந்தால், அதன் இலக்கு ஆன்டிஜெனை பிணைப்பு வினைப்பொருளாகப் பயன்படுத்தலாம். ELISA வளர்ச்சிக்கு முன்பு, ஒரு நோயெதிர்ப்பு மதிப்பீட்டை நடத்துவதற்கான ஒரே வழி ரேடியோ இம்யூனோஅஸ்ஸே ஆகும், இது கதிரியக்கமாக பெயரிடப்பட்ட ஆன்டிஜென்கள் அல்லது ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தும் ஒரு நுட்பமாகும். ரேடியோ இம்யூனோஅஸ்ஸேயில், ரேடியோஆக்டிவிட்டி சமிக்ஞையை வழங்குகிறது, இது மாதிரியில் ஒரு குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடி உள்ளதா என்பதைக் குறிக்கிறது. ரேடியோ இம்யூனோஅஸ்ஸே முதன்முதலில் 1960 இல் வெளியிடப்பட்ட ரோசலின் சுஸ்மான் யலோவ் மற்றும் சாலமன் பெர்சன் ஆகியோரால் ஒரு அறிவியல் கட்டுரையில் விவரிக்கப்பட்டது. கதிரியக்கம் ஒரு சாத்தியமான சுகாதார அச்சுறுத்தலை ஏற்படுத்துவதால், ஒரு பாதுகாப்பான மாற்று தேடப்பட்டது. ரேடியோ இம்யூனோஅஸ்ஸேக்கு பொருத்தமான மாற்று ரேடியோஆக்டிவ் சிக்னலுக்கு பதிலாக ரேடியோஆக்டிவ் அல்லாத சிக்னலை மாற்றும். நொதிகள் (ஹார்ஸ்ரடிஷ் பெராக்ஸிடேஸ் போன்றவை) பொருத்தமான அடி மூலக்கூறுகளுடன் (ஏபிடிஎஸ் அல்லது டிஎம்பி போன்றவை) வினைபுரியும் போது, நிறத்தில் மாற்றம் ஏற்படுகிறது, இது ஒரு சமிக்ஞையாக பயன்படுத்தப்படுகிறது. இருப்பினும், சமிக்ஞை ஆன்டிபாடி அல்லது ஆன்டிஜென் இருப்புடன் தொடர்புடையதாக இருக்க வேண்டும், அதனால்தான் நொதி பொருத்தமான ஆன்டிபாடியுடன் இணைக்கப்பட வேண்டும். இந்த இணைக்கும் செயல்முறை ஸ்ட்ராடிஸ் அவ்ராமியாஸ் மற்றும் ஜி. பி. ஆகியோரால் சுயாதீனமாக உருவாக்கப்பட்டது. பியர்ஸ். எந்தவொரு வரம்பற்ற ஆன்டிபாடி அல்லது ஆன்டிஜெனையும் கழுவுவதன் மூலம் அகற்றுவது அவசியம் என்பதால், ஆன்டிபாடி அல்லது ஆன்டிஜென் கொள்கலனின் மேற்பரப்பில் பொருத்தப்பட வேண்டும்; அதாவது, இம்யூனோசார்பென்ட் தயாராக இருக்க வேண்டும். இதை நிறைவேற்றுவதற்கான ஒரு நுட்பம் 1966 இல் வைட் மற்றும் ஜெர்கர் போரத் ஆகியோரால் வெளியிடப்பட்டது. 1971 ஆம் ஆண்டில், ஸ்வீடனில் உள்ள ஸ்டாக்ஹோம் பல்கலைக்கழகத்தில் பீட்டர் பெர்ல்மேன் மற்றும் ஈவா எங்வால் மற்றும் நெதர்லாந்தில் உள்ள அன்டன் ஷூர்ஸ் மற்றும் பௌக் வான் வீமென் ஆகியோர் சுயாதீனமாக இந்த அறிவை EIA/ELISA ஐச் செய்வதற்கான முறைகளாக ஒருங்கிணைத்த ஆவணங்களை வெளியிட்டனர். பாரம்பரிய எலிசா பொதுவாக குரோமோஜெனிக் நிருபர்கள் மற்றும் அடி மூலக்கூறுகளை உள்ளடக்கியது, அவை ஆன்டிஜென் அல்லது அனலைட்டின் இருப்பைக் குறிக்க ஒருவிதமான கவனிக்கக்கூடிய வண்ண மாற்றத்தை உருவாக்குகின்றன. புதிய எலிசா போன்ற நுட்பங்கள் ஃப்ளோரோஜெனிக், எலக்ட்ரோ கெமிலுமினென்சென்ட் மற்றும் அளவு பி. சி. ஆர் நிருபர்களைப் பயன்படுத்தி அளவிடக்கூடிய சமிக்ஞைகளை உருவாக்குகின்றன. இந்த புதிய நிருபர்கள் அதிக உணர்திறன் மற்றும் மல்டிபிளெக்சிங் உள்ளிட்ட பல்வேறு நன்மைகளைக் கொண்டிருக்கலாம். தொழில்நுட்ப ரீதியாக, இந்த வகையின் புதிய மதிப்பீடுகள் கண்டிப்பாக எலிசாக்கள் அல்ல, ஏனெனில் அவை "என்சைம்-இணைக்கப்பட்டவை" அல்ல, மாறாக சில என்சைம் அல்லாத நிருபர்களுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன. இருப்பினும், இந்த மதிப்பீடுகளில் உள்ள பொதுவான கொள்கைகள் பெரும்பாலும் ஒத்திருப்பதால், அவை பெரும்பாலும் ELISA களின் அதே பிரிவில் தொகுக்கப்படுகின்றன. 2012 ஆம் ஆண்டில், நானோ துகள்களை ஒரு குரோமோஜெனிக் ரிப்போர்ட்டராகப் பயன்படுத்தி ஒரு அல்ட்ராசென்ஸிட்டிவ், என்சைம் அடிப்படையிலான எலிசா சோதனையால் ஒரு நிர்வாண-கண் வண்ண சமிக்ஞையை வழங்க முடிந்தது, வெறும் அனலைட்டின் அட்டோகிராம்களைக் கண்டறிவதிலிருந்து. நேர்மறை முடிவுகளுக்கு நீல நிறமும், எதிர்மறைக்கு சிவப்பு நிறமும் தோன்றும். இந்த கண்டறிதல் பகுப்பாய்வு இருப்பது அல்லது இல்லாததை மட்டுமே உறுதிப்படுத்த முடியும் என்பதை நினைவில் கொள்க, உண்மையான செறிவு அல்ல. பொருத்தமான ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தும் குறிப்பிட்ட மூலக்கூறுகளுக்கு பல எலிசா சோதனைகள் உள்ளன. பகுப்பாய்வுகள் மற்றும் ஆன்டிபாடிகள் எவ்வாறு பிணைக்கப்பட்டு பயன்படுத்தப்படுகின்றன என்பதை அடிப்படையாகக் கொண்டு எலிசா சோதனைகள் பல வகையான சோதனைகளாக பிரிக்கப்பட்டுள்ளன. முக்கிய வகைகள் இங்கே விவரிக்கப்பட்டுள்ளன. நேரடி எலிசா நேரடி எலிசாவின் படிகள் பின்வரும் பொறிமுறையைப் பின்பற்றுகின்றனஃ சோதனை செய்யப்பட வேண்டிய ஆன்டிஜெனின் ஒரு இடையக கரைசல் ஒரு மைக்ரோடிட்டர் தகட்டின் ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் (பொதுவாக 96-கிணறு தகடுகள்) சேர்க்கப்படுகிறது, அங்கு சார்ஜ் இடைவினைகள் மூலம் பிளாஸ்டிக்கை ஒட்டிக்கொள்ள நேரம் வழங்கப்படுகிறது. எதிர்வினையாற்றாத புரதத்தின் ஒரு கரைசல், போவின் சீரம் ஆல்புமின் அல்லது கேசீன் போன்றவை, ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் சேர்க்கப்படுகின்றன, இதனால் கிணற்றில் உள்ள எந்த பிளாஸ்டிக் மேற்பரப்பும் ஆன்டிஜெனால் இணைக்கப்படாமல் இருக்கும். இணைக்கப்பட்ட (இணைக்கப்பட்ட) நொதியுடன் முதன்மை ஆன்டிபாடி சேர்க்கப்படுகிறது, இது கிணற்றின் சோதனை ஆன்டிஜென் பூச்சுடன் குறிப்பாக பிணைக்கிறது. இந்த நொதிக்கு ஒரு அடி மூலக்கூறு பின்னர் சேர்க்கப்படுகிறது. பெரும்பாலும், இந்த அடி மூலக்கூறு நொதியுடன் வினைபுரியும் போது நிறத்தை மாற்றுகிறது. சீரத்தில் இருக்கும் முதன்மை ஆன்டிபாடியின் செறிவு அதிகமாக இருந்தால், வலுவான நிற மாற்றம் ஏற்படும். பெரும்பாலும், வண்ண வலிமைக்கான அளவு மதிப்புகளை வழங்க ஒரு ஸ்பெக்ட்ரோமீட்டர் பயன்படுத்தப்படுகிறது. நொதி ஒரு பெருக்கியாக செயல்படுகிறது; சில நொதியுடன் இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகள் மட்டுமே பிணைக்கப்பட்டிருந்தாலும், நொதி மூலக்கூறுகள் பல சமிக்ஞை மூலக்கூறுகளை உற்பத்தி செய்யும். பொது அறிவு வரம்புகளுக்குள், நொதி காலவரையின்றி நிறத்தை உற்பத்தி செய்ய முடியும், ஆனால் அதிக ஆன்டிபாடி பிணைக்கப்பட்டிருக்கும் போது, நிறம் வேகமாக வளரும். நேரடி எலிசாவின் ஒரு பெரிய குறைபாடு என்னவென்றால், ஆன்டிஜென் நிலைநிறுத்தல் முறை குறிப்பிட்டதல்ல; சோதனை ஆன்டிஜெனின் ஆதாரமாக சீரம் பயன்படுத்தப்படும்போது, மாதிரியில் உள்ள அனைத்து புரதங்களும் மைக்ரோடிட்டர் தட்டில் நன்கு ஒட்டிக்கொள்ளக்கூடும், எனவே சீரத்தில் உள்ள அனலைட்டின் சிறிய செறிவுகள் கிணற்றின் மேற்பரப்பில் பிணைக்கும்போது மற்ற சீரம் புரதங்களுடன் போட்டியிட வேண்டும். சாண்ட்விச் அல்லது மறைமுக எலிசா இந்த சிக்கலுக்கு ஒரு தீர்வை வழங்குகிறது, சோதனை ஆன்டிஜெனுக்கு குறிப்பிட்ட "பிடிப்பு" ஆன்டிபாடியைப் பயன்படுத்தி சீரமின் மூலக்கூறு கலவையிலிருந்து வெளியே இழுக்கிறது. எலிசா ஒரு தரமான அல்லது அளவு வடிவத்தில் இயக்கப்படலாம். தரமான முடிவுகள் ஒரு மாதிரிக்கு ஒரு எளிய நேர்மறை அல்லது எதிர்மறை முடிவை (ஆம் அல்லது இல்லை) வழங்குகின்றன. நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறைக்கு இடையிலான கட்ஆஃப் ஆய்வாளரால் தீர்மானிக்கப்படுகிறது மற்றும் புள்ளிவிவரமாக இருக்கலாம். இரண்டு அல்லது மூன்று முறை நிலையான விலகல் (ஒரு சோதனையில் உள்ளார்ந்த பிழை) பெரும்பாலும் எதிர்மறை மாதிரிகளிலிருந்து நேர்மறையை வேறுபடுத்த பயன்படுத்தப்படுகிறது. அளவீட்டு எலிசாவில், மாதிரியின் ஒளியியல் அடர்த்தி (OD) ஒரு நிலையான வளைவுடன் ஒப்பிடப்படுகிறது, இது பொதுவாக இலக்கு மூலக்கூறின் அறியப்பட்ட செறிவு கரைசலின் தொடர் நீர்த்தலாகும். எடுத்துக்காட்டாக, ஒரு சோதனை மாதிரி 1 இன் OD ஐத் திருப்பித் தந்தால், OD = 1 ஐக் கொடுத்த நிலையான வளைவில் உள்ள புள்ளி மாதிரியின் அதே பகுப்பாய்வு செறிவாக இருக்க வேண்டும். "மறைமுக எலிசா" மற்றும் "நேரடி எலிசா" என்ற பெயர்களின் பயன்பாடு மற்றும் பொருள் இலக்கியத்திலும் வலைத்தளங்களிலும் பரிசோதனையின் சூழலைப் பொறுத்து வேறுபடுகிறது. ஒரு ஆன்டிஜெனின் இருப்பு பகுப்பாய்வு செய்யப்படும்போது, "டைரக்ட் எலிசா" என்ற பெயர் எலிசாவைக் குறிக்கிறது, இதில் பெயரிடப்பட்ட முதன்மை ஆன்டிபாடி மட்டுமே பயன்படுத்தப்படுகிறது, மேலும் "மறைமுக எலிசா" என்ற சொல் எலிசாவைக் குறிக்கிறது, இதில் ஆன்டிஜென் முதன்மை ஆன்டிபாடியால் பிணைக்கப்பட்டுள்ளது, பின்னர் பெயரிடப்பட்ட இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடியால் கண்டறியப்படுகிறது. பிந்தைய வழக்கில் ஒரு சாண்ட்விச் எலிசா ஒரு மறைமுக எலிசாவிலிருந்து தெளிவாக வேறுபடுகிறது. "முதன்மை" ஆன்டிபாடி ஆர்வமாக இருக்கும்போது, எ. கா. நோய்த்தடுப்பு பகுப்பாய்வுகளின் விஷயத்தில், இந்த ஆன்டிபாடி நேரடியாக இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடியால் கண்டறியப்படுகிறது மற்றும் "மறைமுக எலிசா" என்ற சொல் இரண்டு ஆன்டிபாடிகளைக் கொண்ட ஒரு அமைப்புக்கு பொருந்தும். சாண்ட்விச் எலிசா ஒரு "சாண்ட்விச்" எலிசா மாதிரி ஆன்டிஜெனைக் கண்டறிய பயன்படுத்தப்படுகிறது. படிகள்ஃ அறியப்பட்ட அளவு பிடிப்பு ஆன்டிபாடியுடன் ஒரு மேற்பரப்பு தயாரிக்கப்படுகிறது. மேற்பரப்பில் உள்ள எந்தவொரு குறிப்பிட்ட பிணைப்பு தளங்களும் தடுக்கப்பட்டுள்ளன. ஆன்டிஜென் கொண்ட மாதிரி தட்டில் பயன்படுத்தப்பட்டு, ஆன்டிபாடியால் பிடிக்கப்படுகிறது. கட்டுப்படாத ஆன்டிஜெனை அகற்ற தட்டு கழுவப்படுகிறது. ஒரு குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடி சேர்க்கப்பட்டு, ஆன்டிஜெனுடன் பிணைக்கப்படுகிறது (எனவே 'சாண்ட்விச்': ஆன்டிஜென் இரண்டு ஆன்டிபாடிகளுக்கு இடையில் சிக்கியுள்ளது). இந்த முதன்மை ஆன்டிபாடி ஒரு நன்கொடையாளரின் சீரத்தில் இருக்கலாம், இது ஆன்டிஜெனுக்கு எதிர்வினையாற்றுவதற்காக சோதிக்கப்பட வேண்டும். என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடிகள் கண்டறிதல் ஆன்டிபாடிகளாக பயன்படுத்தப்படுகின்றன, அவை குறிப்பாக ஆன்டிபாடியின் எஃப். சி பிராந்தியத்துடன் (குறிப்பிடப்படாதவை) பிணைக்கப்படுகின்றன. வரம்பற்ற ஆன்டிபாடி-என்சைம் இணைப்புகளை அகற்ற தட்டு கழுவப்படுகிறது. நொதியால் ஒரு நிறம், ஒளிரும் அல்லது மின் வேதியியல் சமிக்ஞையாக மாற்ற ஒரு இரசாயனம் சேர்க்கப்படுகிறது. தட்டின் கிணறுகளின் உறிஞ்சுதல், ஒளிரும் தன்மை அல்லது மின் வேதியியல் சமிக்ஞை (எ. கா., மின்னோட்டம்) ஆன்டிஜெனின் இருப்பு மற்றும் அளவை தீர்மானிக்க அளவிடப்படுகிறது. வலதுபுறத்தில் உள்ள படத்தில் ஒரு நொதியுடன் இணைக்கப்பட்ட இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடியின் பயன்பாடு அடங்கும், இருப்பினும், தொழில்நுட்ப அர்த்தத்தில், முதன்மை ஆன்டிபாடி ஒரு நொதியுடன் இணைக்கப்பட்டால் இது தேவையில்லை (இது நேரடி எலிசாவாக இருக்கும்). இருப்பினும், இரண்டாம் நிலை-ஆன்டிபாடி கான்ஜுகேட்டைப் பயன்படுத்துவது ஒருவர் கண்டறிய விரும்பும் ஒவ்வொரு ஆன்டிஜெனுக்கும் என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகளை உருவாக்கும் விலையுயர்ந்த செயல்முறையைத் தவிர்க்கிறது. பிற ஆன்டிபாடிகளின் எஃப். சி பகுதியை பிணைக்கும் என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடியைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், இதே என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடியை பல்வேறு சூழ்நிலைகளில் பயன்படுத்தலாம். "பிடிப்பு" ஆன்டிபாடியின் முதல் அடுக்கு இல்லாமல், மாதிரியில் உள்ள எந்த புரதங்களும் (சீரம் புரதங்கள் உட்பட) தட்டு மேற்பரப்பில் போட்டித்தன்மையுடன் உறிஞ்சப்படலாம், இது நிலைநிறுத்தப்பட்ட ஆன்டிஜெனின் அளவைக் குறைக்கும். ஆன்டிஜெனை பிளாஸ்டிக்குடன் இணைக்க சுத்திகரிக்கப்பட்ட குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடியைப் பயன்படுத்துவது, அளவீட்டுக்கு முன் சிக்கலான கலவைகளிலிருந்து ஆன்டிஜெனைச் சுத்திகரிக்க வேண்டிய அவசியத்தை நீக்குகிறது, மதிப்பீட்டை எளிதாக்குகிறது, மேலும் மதிப்பீட்டின் தனித்துவத்தையும் உணர்திறனையும் அதிகரிக்கிறது. எனவே, ஆராய்ச்சிக்கு பயன்படுத்தப்படும் ஒரு சாண்ட்விச் எலிசாவுக்கு தவறான நேர்மறையான முடிவுகளின் அபாயத்தைக் குறைக்க பெரும்பாலும் சரிபார்ப்பு தேவைப்படுகிறது. ELISA இன் மூன்றாவது பயன்பாடு போட்டி பிணைப்பு வழியாகும். இந்த எலிசாவுக்கான படிகள் முதல் இரண்டு எடுத்துக்காட்டுகளிலிருந்து சற்றே வேறுபட்டவைஃ பெயரிடப்படாத ஆன்டிபாடி அதன் ஆன்டிஜென் (மாதிரி) முன்னிலையில் அடைகாக்கப்படுகிறது. இந்த பிணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடி/ஆன்டிஜென் வளாகங்கள் பின்னர் ஆன்டிஜென் பூசப்பட்ட கிணற்றில் சேர்க்கப்படுகின்றன. தட்டு கழுவப்படுகிறது, எனவே வரம்பற்ற ஆன்டிபாடிகள் அகற்றப்படுகின்றன. (மாதிரியில் அதிக ஆன்டிஜென் இருந்தால், அதிக ஏஜி-ஆப் காம்ப்ளக்ஸ் உருவாகிறது, எனவே கிணற்றில் உள்ள ஆன்டிஜெனுடன் பிணைக்க குறைவான வரம்பற்ற ஆன்டிபாடிகள் கிடைக்கின்றன, எனவே "போட்டி"). முதன்மை ஆன்டிபாடிக்கு குறிப்பிட்ட இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடி சேர்க்கப்படுகிறது. இந்த இரண்டாவது ஆன்டிபாடி நொதியுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளது. ஒரு அடி மூலக்கூறு சேர்க்கப்படுகிறது, மீதமுள்ள நொதிகள் ஒரு குரோமோஜெனிக் அல்லது ஃப்ளோரசன்ட் சமிக்ஞையை வெளிப்படுத்துகின்றன. சமிக்ஞையின் இறுதியில் செறிவூட்டலைத் தடுக்க எதிர்வினை நிறுத்தப்படுகிறது. சில போட்டி ELISA கருவிகளில் நொதியுடன் இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகளை விட நொதியுடன் இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிஜென் அடங்கும். பெயரிடப்பட்ட ஆன்டிஜென் மாதிரி ஆன்டிஜெனுடன் (பெயரிடப்படாத) முதன்மை ஆன்டிபாடி பிணைப்பு தளங்களுக்கு போட்டியிடுகிறது. மாதிரியில் குறைவான ஆன்டிஜென், அதிக பெயரிடப்பட்ட ஆன்டிஜென் கிணற்றில் தக்கவைக்கப்பட்டு, சமிக்ஞை வலுவாக இருக்கும். பொதுவாக, ஆன்டிஜென் முதலில் கிணற்றில் வைக்கப்படுவதில்லை. எச்ஐவி ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிய, மைக்ரோடிட்டர் பிளேட்டின் கிணறுகள் எச்ஐவி ஆன்டிஜெனுடன் பூசப்படுகின்றன. இரண்டு குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, ஒன்று நொதியுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளது, மற்றொன்று சீரத்தில் உள்ளது (சீரம் ஆன்டிபாடிக்கு நேர்மறையாக இருந்தால்). ஒரே ஆன்டிஜெனுக்கான இரண்டு ஆன்டிபாடிகளுக்கு இடையில் ஒட்டுமொத்த போட்டி ஏற்படுகிறது, இதனால் ஒரு வலுவான சமிக்ஞை காணப்படுகிறது. சோதனை செய்ய வேண்டிய செரா இந்த கிணறுகளில் சேர்க்கப்பட்டு 37 டிகிரி செல்சியஸில் அடைகாக்கப்பட்டு, பின்னர் கழுவப்படுகிறது. ஆன்டிபாடிகள் இருந்தால், ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி எதிர்வினை ஏற்படுகிறது. நொதி-பெயரிடப்பட்ட குறிப்பிட்ட எச். ஐ. வி ஆன்டிபாடிகளுக்கு எந்த ஆன்டிஜெனும் எஞ்சியிருக்கவில்லை. இந்த ஆன்டிபாடிகள் சேர்க்கப்பட்டவுடன் இலவசமாக இருக்கும் மற்றும் கழுவும் போது கழுவப்படுகின்றன. அடி மூலக்கூறு சேர்க்கப்படுகிறது, ஆனால் அதில் செயல்பட எந்த நொதியும் இல்லை, எனவே ஒரு நேர்மறையான முடிவு எந்த நிற மாற்றத்தையும் காட்டாது. தலைகீழ் எலிசா (மறைமுக எலிசா) நான்காவது எலிசா சோதனை பாரம்பரிய கிணறுகளைப் பயன்படுத்தாது. இந்த சோதனை ஆன்டிஜென்களை சோதனை திரவத்தில் தொங்கவிடுகிறது. பெயரிடப்படாத ஆன்டிபாடி அதன் ஆன்டிஜென் (மாதிரி) முன்னிலையில் அடைகாக்கப்படுகிறது, ஆன்டிபாடிகள் ஆன்டிஜென்களுடன் பிணைக்க அனுமதிக்க போதுமான அடைகாக்கும் காலம் வழங்கப்படுகிறது. மாதிரி பின்னர் தோட்டி கொள்கலன் வழியாக அனுப்பப்படுகிறது. இது ஒரு சோதனைக் குழாய் அல்லது கால்வாய் வழியாக குறிப்பாக வடிவமைக்கப்பட்ட ஓட்டமாக இருக்கலாம். தோட்டி கொள்கலன் அல்லது கால்வாயின் மேற்பரப்பில் "தோட்டி ஆன்டிஜென்ஸ்" பிணைக்கப்பட்டுள்ளது. இவை இலவச ஆன்டிபாடிகள் பிணைக்கும் முதன்மை ஆன்டிஜென்களுக்கு ஒத்ததாகவோ அல்லது போதுமான அளவு ஒத்ததாகவோ இருக்கலாம். ஸ்காவெஞ்சர் கொள்கலன் போதுமான மேற்பரப்பு பரப்பளவைக் கொண்டிருக்க வேண்டும் மற்றும் ஸ்காவெஞ்சர் ஆன்டிஜென்ஸ் மாதிரியில் அறிமுகப்படுத்தப்பட்ட அனைத்து அதிகப்படியான ஆன்டிபாடிகளுடன் பிணைக்க போதுமான நேரத்தைக் கொண்டிருக்க வேண்டும். இப்போது குறிக்கப்பட்ட மற்றும் பிணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகளைக் கொண்ட மாதிரி, ஒரு டிடெக்டர் வழியாக அனுப்பப்படுகிறது. இந்த சாதனம் ஒரு ஓட்டம் சைட்டோமீட்டர் அல்லது குறிச்சொற்களை ஒளிரச் செய்து பதிலைப் பதிவு செய்யும் பிற சாதனமாக இருக்கலாம். இந்த சோதனை பல ஆன்டிஜென்களை ஒரே நேரத்தில் குறிக்கவும் கணக்கிடவும் அனுமதிக்கிறது. இது பாக்டீரியாவின் குறிப்பிட்ட விகாரங்களை இரண்டு (அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட) வெவ்வேறு வண்ண குறிச்சொற்களால் அடையாளம் காண அனுமதிக்கிறது. இரண்டு குறிச்சொற்களும் ஒரு செல்லில் இருந்தால், செல் அந்த குறிப்பிட்ட திரிபு ஆகும். ஒன்று மட்டுமே இருந்தால், அது இல்லை. இந்த சோதனை, பொதுவாக, ஒரு நேரத்தில் ஒரு சோதனை செய்யப்படுகிறது மற்றும் மைக்ரோடிட்டர் தட்டு மூலம் செய்ய முடியாது. தேவைப்படும் உபகரணங்கள் பொதுவாக குறைவான சிக்கலானவை மற்றும் வயலில் பயன்படுத்தப்படலாம். பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் நொதி குறிப்பான்கள் பின்வரும் அட்டவணை ELISA மதிப்பீடுகளில் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் நொதி குறிப்பான்களை பட்டியலிடுகிறது, இது மதிப்பீட்டின் முடிவுகளை முடிந்ததும் அளவிட அனுமதிக்கிறது. ஓபிடி (ஓ-ஃபெனைலினெடியமைன் டைஹைட்ரோகுளோரைடு) எச்ஆர்பி (ஹார்ஸ்ரடிஷ் பெராக்ஸிடேஸ்) ஐக் கண்டறிய அம்பரை மாற்றுகிறது, இது பெரும்பாலும் இணைக்கப்பட்ட புரதமாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. டி. எம். பி (3,3 ', 5,5'-டெட்ராமெத்தில்பென்சைடின்) எச். ஆர். பி. யைக் கண்டறியும் போது நீல நிறமாக மாறுகிறது மற்றும் கந்தக அல்லது பாஸ்பரஸ் அமிலத்தைச் சேர்த்த பிறகு மஞ்சள் நிறமாக மாறுகிறது. எச்ஆர்பி கண்டறியும் போது ஏபிடிஎஸ் (2,2 '-அஜினோபிஸ் [3-எத்தில்பென்சோதியாஜோலின்-6-சல்போனிக் அமிலம்]-டையமோனியம் உப்பு) பச்சை நிறமாக மாறுகிறது. அல்கலைன் பாஸ்பேடேஸைக் கண்டறியும் போது பி. என். பி. பி (பி-நைட்ரோபீனைல் பாஸ்பேட், டிஸோடியம் உப்பு) மஞ்சள் நிறமாக மாறுகிறது. பயன்பாடுகள் ஒரு மாதிரியில் ஆன்டிஜென் இருப்பது அல்லது ஆன்டிபாடி இருப்பதை மதிப்பிடுவதற்கு எலிசா செய்யப்படலாம் என்பதால், இது சீரம் ஆன்டிபாடி செறிவுகளை (எச். ஐ. வி சோதனை அல்லது வெஸ்ட் நைல் வைரஸ் போன்றவை) தீர்மானிக்க ஒரு பயனுள்ள கருவியாகும். பால், வேர்க்கடலை, அக்ரூட் பருப்புகள், பாதாம் மற்றும் முட்டைகள் போன்ற சாத்தியமான உணவு ஒவ்வாமைகளைக் கண்டறிவதிலும், செலியாக் நோய்க்கான செரோலாஜிக்கல் இரத்த பரிசோதனையிலும் இது உணவுத் துறையில் பயன்பாடுகளைக் கண்டறிந்துள்ளது. சில வகை மருந்துகளுக்கான விரைவான அனுமானத் திரையாக நச்சுயியல் துறையிலும் எலிசா பயன்படுத்தப்படலாம். அதிக உணர்திறன் காரணமாக எச். ஐ. வி. க்கு பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் முதல் திரையிடல் சோதனை எலிசா ஆகும். ஒரு எலிசாவில், ஒரு நபரின் சீரம் 400 முறை நீர்த்துப்போகச் செய்யப்பட்டு, எச். ஐ. வி ஆன்டிஜென்கள் இணைக்கப்பட்டுள்ள ஒரு தட்டில் பயன்படுத்தப்படுகிறது. எச்ஐவிக்கான ஆன்டிபாடிகள் சீரத்தில் இருந்தால், அவை இந்த எச்ஐவி ஆன்டிஜென்களுடன் பிணைக்கப்படலாம். பின்னர் சீரத்தின் மற்ற அனைத்து கூறுகளையும் அகற்ற தட்டு கழுவப்படுகிறது. ஒரு விசேஷமாக தயாரிக்கப்பட்ட "இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடி"-மற்ற ஆன்டிபாடிகளுடன் பிணைக்கும் ஒரு ஆன்டிபாடி-பின்னர் தட்டில் பயன்படுத்தப்படுகிறது, அதைத் தொடர்ந்து மற்றொரு கழுவுதல். இந்த இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடி வேதியியல் ரீதியாக ஒரு நொதியுடன் முன்கூட்டியே இணைக்கப்பட்டுள்ளது. எனவே, தட்டில் பிணைக்கப்பட்ட இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடியின் அளவின் விகிதத்தில் நொதி இருக்கும். நொதிக்கு ஒரு அடி மூலக்கூறு பயன்படுத்தப்படுகிறது, மேலும் நொதி மூலம் வினையூக்கம் நிறம் அல்லது ஒளிரும் மாற்றத்திற்கு வழிவகுக்கிறது. எலிசா முடிவுகள் ஒரு எண்ணாக தெரிவிக்கப்படுகின்றன; இந்த சோதனையின் மிகவும் சர்ச்சைக்குரிய அம்சம் ஒரு நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறை முடிவுக்கு இடையிலான "கட்-ஆஃப்" புள்ளியை தீர்மானிப்பதாகும். ஒரு கட்-ஆஃப் புள்ளியை அறியப்பட்ட தரத்துடன் ஒப்பிடுவதன் மூலம் தீர்மானிக்கப்படலாம். பணியிடத்தில் மருந்து பரிசோதனைக்கு ஒரு எலிசா சோதனை பயன்படுத்தப்பட்டால், ஒரு கட்-ஆஃப் செறிவு, 50 ng/ml, எடுத்துக்காட்டாக, நிறுவப்படுகிறது, மேலும் அனலைட்டின் நிலையான செறிவு கொண்ட ஒரு மாதிரி தயாரிக்கப்படும். அறியப்பட்ட மாதிரியை விட வலுவான சமிக்ஞையை உருவாக்கும் அறியப்படாதவை "நேர்மறை" ஆகும். பலவீனமான சமிக்ஞையை உருவாக்கும் சமிக்ஞைகள் எதிர்மறையாக இருக்கும். டெங்கு, மலேரியா, சாகஸ் நோய், ஜான்ஸ் நோய் மற்றும் பிற பல்வேறு வகையான நோய்களைக் கண்டறிய எலிசா சோதனைகள் உள்ளன. மருத்துவ ஆய்வகங்களில் இன் விட்ரோ நோயறிதலுக்கும் எலிசா சோதனைகள் விரிவாக பயன்படுத்தப்படுகின்றன. எலிசாவின் பிற பயன்பாடுகளில் பின்வருவன அடங்கும்ஃ இரத்த மாதிரிகளில் SARS-CoV-2 ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிதல் மேலும் காண்க ஒருங்கிணைப்பு-பி. சி. ஆர். நோயெதிர்ப்பு திரையிடல் பக்கவாட்டு ஓட்ட சோதனை காந்த நோயெதிர்ப்பு தட்டு மைக்ரோடிட்டர் தட்டு நெஃபெலோமெட்ரி பிளேக் குறைப்பு நடுநிலையாக்கம் சோதனை பிளேட் ரீடர் சுரப்பு மதிப்பீடு குறிப்புகள் மற்றும் குறிப்புகள் வெளிப்புற இணைப்புகள் "எலிசா செயல்பாட்டின் அறிமுகம்"-அரிசோனா பல்கலைக்கழகத்தில் அனிமேஷன்கள் உட்பட எச். ஐ. வி கண்டறிய பயன்படுத்தப்படும் எலிசாவின் தொடக்க நடைப்பயணம் "எலிசா மதிப்பீட்டுக் கோட்பாடு"-ஒரு எலிசாவின் கொள்கையின் கண்ணோட்டம் மற்றும் மதிப்பீட்டு ஜீனி நோயறிதல் வைராலஜி நோயெதிர்ப்பு சோதனைகளில் பகுப்பாய்வுகளைக் கண்டறிவதற்கான கருவிகள்