X-gal
எக்ஸ்-கால் (5-புரோமோ-4-குளோரோ-3-இண்டோலைல்-β-கேலக்டோபைரானோசைடு என்பதற்கான சுருக்கமான பிசிஐஜி) என்பது ஒரு மாற்று இண்டோலுடன் இணைக்கப்பட்ட கேலக்டோஸைக் கொண்ட ஒரு கரிமச் சேர்மமாகும். இந்த கலவை 1964 ஆம் ஆண்டில் ஜெரோம் ஹார்விட்ஸ் மற்றும் ஒத்துழைப்பாளர்களால் ஒருங்கிணைக்கப்பட்டது. முறையான வேதியியல் பெயர் பெரும்பாலும் குறைவான துல்லியமாக சுருக்கப்படுகிறது, ஆனால் புரோமோக்ளோரோயிண்டாக்சில் கேலக்டோசைடு போன்ற குறைவான சிக்கலான சொற்றொடர்களும் உள்ளன. இண்டோக்ஸில் இருந்து வரும் எக்ஸ் எக்ஸ்-கேல் சுருக்கத்தில் எக்ஸ் இன் ஆதாரமாக இருக்கலாம். மூலக்கூறு உயிரியலில் எக்ஸ்-கேல் பெரும்பாலும் ஒரு நொதி, β-கேலக்டோசிடேஸ், அதன் வழக்கமான இலக்கான β-கேலக்டோசைடின் இடத்தில் இருப்பதை சோதிக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது. ஹிஸ்டோ கெமிஸ்ட்ரி மற்றும் பாக்டீரியாலஜியில் இந்த நொதியின் செயல்பாட்டைக் கண்டறியவும் இது பயன்படுத்தப்படுகிறது. என்சைம்-வினையூக்கி நீராற்பகுப்பின் விளைவாக இண்டிகோ சாயத்தைப் போன்ற கரையாத நீல சேர்மங்களை உருவாக்கும் பல இந்தோக்சைல் கிளைகோசைடுகள் மற்றும் எஸ்டர்களில் எக்ஸ்-கால் ஒன்றாகும். குறைவான அளவில் பயன்படுத்தப்படும் ஆனால் மிகவும் ஒத்த (சிரல்) கலவை X-gal (Xαgal, X-α-gal), அல்லது 5-புரோமோ-4-குளோரோ-3-இண்டோலைல்-α-D-கேலக்டோபைரானோசைடு ஆகும், இது β-கேலக்டோசிடேஸுக்கு (EC 3.2.1.23) பதிலாக α-கேலக்டோசிடேஸால் (EC 3.2.1.22) நீராற்பகுக்கப்படுகிறது. X-gal என்பது லாக்டோஸின் அனலாக் ஆகும், எனவே β-கேலக்டோசிடேஸ் நொதியால் நீராற்பகுப்பு செய்யப்படலாம், இது-லாக்டோஸில் உள்ள β-கிளைகோசிடிக் பிணைப்பை பிளவுபடுத்துகிறது. எக்ஸ்-கேல், β-கேலக்டோசிடேஸால் பிளவுபடும் போது, கேலக்டோஸ் மற்றும் 5-புரோமோ-4-குளோரோ-3-ஹைட்ராக்ஸிஇண்டோல்-1 ஐ உற்பத்தி செய்கிறது. பிந்தையது பின்னர் தன்னிச்சையாக டைமெரைஸ் செய்யப்பட்டு 5,5 '-டைப்ரோமோ-4,4'-டைக்ளோரோ-இண்டிகோ-2 ஆக ஆக்சிஜனேற்றப்படுகிறது, இது கரையாத ஒரு தீவிர நீல தயாரிப்பு ஆகும். எக்ஸ்-கேல் நிறமற்றது, எனவே நீல நிற தயாரிப்பு இருப்பது செயலில் உள்ள β-கேலக்டோசிடேஸ் இருப்பதற்கான ஒரு சோதனையாக பயன்படுத்தப்படலாம். இது பாக்டீரியா β-கேலக்டோசிடேஸை (லாக்இசட் என்று அழைக்கப்படுகிறது) பல்வேறு பயன்பாடுகளில் ஒரு நிருபராகப் பயன்படுத்த அனுமதிக்கிறது. இதேபோல், Xαgal என்பது α-கேலக்டோசிடேஸுக்கு ஒரு நிருபர் கலவையாக பயன்படுத்தப்படுகிறது (எ. கா. ஈஸ்ட் உள்ள Mel1). எதிர்வினை குளோனிங் மரபணு குளோனிங்கில், நீல/வெள்ளை திரையிடல் எனப்படும் நுட்பத்தில் ஒரு செல் செயல்பாட்டு β-கேலக்டோசிடேஸ் நொதியை வெளிப்படுத்துகிறதா என்பதற்கான காட்சி அறிகுறியாக எக்ஸ்-கால் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இந்த ஸ்கிரீனிங் முறை ஒரு வெற்றிகரமான குளோனிங் தயாரிப்பை மற்ற தோல்வியுற்றவற்றிலிருந்து வேறுபடுத்துவதற்கான ஒரு வசதியான வழியாகும். நீல/வெள்ளை திரையிடல் முறை β-கேலக்டோசிடேஸ் மரபணுவின் α-முழுமையின் கொள்கையை நம்பியுள்ளது, அங்கு பிளாஸ்மிடில் உள்ள லாக்இசட் மரபணுவின் (லாக்இசட்எம்15) ஒரு துண்டு உயிரணுவில் உள்ள மற்றொரு பிறழ்ந்த லாக்இசட் மரபணுவை (லாக்இசட்எம்15) பூர்த்தி செய்ய முடியும். இரண்டு மரபணுக்களும் தாங்களாகவே செயல்படாத பெப்டைடுகளை உற்பத்தி செய்கின்றன, இருப்பினும், ஒன்றாக வெளிப்படுத்தப்படும்போது, லாக் Z α கொண்ட ஒரு பிளாஸ்மிட் ஒரு லாக் Z δM15 செல்களாக மாற்றப்படும்போது, அவை ஒரு செயல்பாட்டு β-கேலக்டோசிடேஸை உருவாக்குகின்றன. X-gal கொண்ட தட்டுகளில் செல்கள் வளர்க்கப்படும்போது செயலில் உள்ள β-கேலக்டோசிடேஸின் இருப்பு கண்டறியப்படலாம், செல்களுக்குள் வீழ்படிவாக இருக்கும் நீல நிற தயாரிப்பு சிறப்பியல்பு நீல காலனிகளுக்கு வழிவகுத்தது. இருப்பினும், பல குளோனிங் தளம், இதில் ஆர்வமுள்ள ஒரு மரபணு பிளாஸ்மிட் திசையனுடன் இணைக்கப்படலாம், இது லாக் Zα மரபணுவிற்குள் அமைந்துள்ளது. எனவே வெற்றிகரமான பிணைப்பு லாக் Zα மரபணுவை சீர்குலைக்கிறது, எனவே α-முழுமையும் பாதிக்கப்படுகிறது மற்றும் செயல்பாட்டு β-கேலக்டோசிடேஸ் உருவாக முடியாது, இதன் விளைவாக வெள்ளை காலனிகள் உருவாகின்றன. வெற்றிகரமாக இணைக்கப்பட்ட செருகலைக் கொண்ட செல்கள் பின்னர் தோல்வியுற்ற நீல நிறத்திலிருந்து அதன் வெள்ளை நிறத்தால் எளிதில் அடையாளம் காணப்படலாம். இந்த சோதனைக்கு பயன்படுத்தப்படும் குளோனிங் திசையன்களின் எடுத்துக்காட்டு பி. யூ. சி 19, பி. ப்ளூஸ்கிரிப்ட், பி. ஜி. இ. எம்-டி வெக்டர்கள் ஆகும், மேலும் இதற்கு டி. எச் 5α போன்ற குறிப்பிட்ட ஈ. கோலை புரவலன் விகாரங்களின் பயன்பாடும் தேவைப்படுகிறது, இது பிறழ்ந்த லாக்இசட். எம் 15 மரபணுவைக் கொண்டுள்ளது. பெரும்பாலும், எக்ஸ்-கால் கொண்ட தட்டில் ஐபிடிஜி (ஐசோபுரோபைல் β-1-தியோகலாக்டோபைரானோசைடு) உள்ளது. ஐபிடிஜி என்பது லாக்டோஸின் வேதியியல் அமைப்பு அனலாக் ஆகும். இருப்பினும், ஐபிடிஜியை β-கேலக்டோசிடேஸ் மூலம் நீராற்பகுக்க முடியாது. ஐபிடிஜி ஒரு தூண்டியாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது, இது டிஎன்ஏவை வெளியிடும் லாக் ஒடுக்கியுடன் பிணைக்கப்பட்டு டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனை அனுமதிக்கிறது. அகர் தட்டில் ஐபிடிஜி இருப்பது β-கேலக்டோசிடேஸின் தொகுப்பை அதிகரிக்கிறது. எக்ஸ்-கால் மாறுபாடுகள் பல மாறுபாடுகளைக் கொண்டுள்ளன, அவை சிறிய வேறுபாடுகளுடன் ஒத்த மூலக்கூறுகள், முக்கியமாக நீலத்தைத் தவிர வேறு வண்ணங்களை ஒரு சமிக்ஞையாக உருவாக்க உதவுகின்றன. புரத-புரத இடைவினைகள் இரண்டு கலப்பின பகுப்பாய்வுகளில், β-கேலக்டோசிடேஸ் ஒருவருக்கொருவர் தொடர்பு கொள்ளும் புரதங்களை அடையாளம் காண ஒரு நிருபராகப் பயன்படுத்தப்படலாம். இந்த முறையில், ஈஸ்ட் அல்லது பாக்டீரியா அமைப்பைப் பயன்படுத்தி புரதத் தொடர்புக்கு மரபணு நூலகங்கள் திரையிடப்படலாம். திரையிடப்படும் புரதங்களுக்கு இடையே ஒரு வெற்றிகரமான தொடர்பு இருக்கும் இடத்தில், அது ஒரு செயல்படுத்தும் களத்தை ஒரு விளம்பரதாரருடன் பிணைக்கும். ஊக்குவிப்பாளர் ஒரு லாக்இசட் மரபணுவுடன் இணைக்கப்பட்டிருந்தால், எக்ஸ்-கால் முன்னிலையில் நீல நிறமி காலனிகள் உருவாவதற்கு வழிவகுக்கும் β-கேலக்டோசிடேஸ் உற்பத்தி, எனவே புரதங்களுக்கு இடையிலான வெற்றிகரமான தொடர்புகளைக் குறிக்கும். இந்த நுட்பம் சுமார் 106 க்கும் குறைவான அளவிலான திரையிடல் நூலகங்களுக்கு மட்டுப்படுத்தப்படலாம். X-gal இன் வெற்றிகரமான பிளவு இண்டோலின் ஆவியாதல் காரணமாக குறிப்பிடத்தக்க துர்நாற்றத்தை உருவாக்குகிறது. மேலும் காண்க எக்ஸ்-க்ளூக் குறிப்புகள் கேலக்டோசைடுகள் இண்டோல்ஸ் குளோரோஅரென்ஸ் புரோமோஅரென்ஸ்