Rapid amplification of cDNA ends
சிடிஎன்ஏ முனைகளின் விரைவான பெருக்கம் (ஆர்ஏசிஇ) என்பது மூலக்கூறு உயிரியலில் ஒரு செல்லுக்குள் காணப்படும் ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டின் முழு நீள வரிசையைப் பெற பயன்படுத்தப்படும் ஒரு நுட்பமாகும். RACE விளைவாக ஆர்வமுள்ள ஆர்என்ஏ வரிசையின் சிடிஎன்ஏ நகல் உற்பத்தி செய்யப்படுகிறது, இது தலைகீழ் படியெடுத்தல் மூலம் உற்பத்தி செய்யப்படுகிறது, அதைத் தொடர்ந்து சிடிஎன்ஏ நகல்களின் பிசிஆர் பெருக்கம் (ஆர்டி-பிசிஆர் ஐப் பார்க்கவும்). பெருக்கப்பட்ட சி. டி. என். ஏ பிரதிகள் பின்னர் வரிசைப்படுத்தப்படுகின்றன, மேலும் நீண்ட காலம் இருந்தால், ஒரு தனித்துவமான மரபணு பகுதிக்கு வரைபடமாக்கப்பட வேண்டும். RACE பொதுவாக தனிப்பட்ட ஆர்என்ஏ மூலக்கூறுகளை வரிசைப்படுத்துவதற்கு முன்பு குளோனிங் மூலம் பின்பற்றப்படுகிறது. புதிய டிரான்ஸ்கிரிப்ட் கட்டமைப்புகளை அடையாளம் காண பயனுள்ள ஒரு உயர்-செயல்திறன் மாற்று, அடுத்த தலைமுறை வரிசைமுறை தொழில்நுட்பங்களால் ரேஸ்-தயாரிப்புகளை வரிசைப்படுத்துவதாகும். செயல்முறை ரேஸ் ஒரு ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டின் வரிசையை டிரான்ஸ்கிரிப்டுக்குள் ஒரு சிறிய அறியப்பட்ட வரிசையிலிருந்து ஆர்என்ஏவின் 5 'முனை (5' ரேஸ்-பிசிஆர்) அல்லது 3 'முனை (3' ரேஸ்-பிசிஆர்) வரை வழங்க முடியும். இந்த நுட்பம் சில நேரங்களில் ஒரு பக்க பி. சி. ஆர் அல்லது நங்கூரமிடப்பட்ட பி. சி. ஆர் என்று அழைக்கப்படுகிறது. RACE இன் முதல் படி ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டின் ஒரு பகுதியின் சிடிஎன்ஏ நகலை உருவாக்க தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனைப் பயன்படுத்துவதாகும். இந்த செயல்பாட்டில், ஒரு டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டின் அறியப்படாத இறுதி பகுதி டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டின் மையத்திலிருந்து அறியப்பட்ட வரிசையைப் பயன்படுத்தி நகலெடுக்கப்படுகிறது. நகலெடுக்கப்பட்ட பகுதி 5 'அல்லது 3' முனையில் அறியப்பட்ட வரிசையால் சூழப்பட்டுள்ளது. 5 'அல்லது 3' இனங்களுக்கான நெறிமுறைகள் சற்று வேறுபடுகின்றன. 5 'ஆர். ஏ. சி. இ-பி. சி. ஆர், ஆர்வமுள்ள மரபணுவின் நடுவில் அறியப்பட்ட வரிசையை அங்கீகரிக்கும் ஒரு ஆன்டி-சென்ஸ் (தலைகீழ்) ஒலிகோனியூக்ளியோடைட் ப்ரைமரைப் பயன்படுத்தி முதல் சுற்று சிடிஎன்ஏ தொகுப்பு (அல்லது தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன்) எதிர்வினைக்கு எம்ஆர்என்ஏவை ஒரு வார்ப்புருவாகப் பயன்படுத்தத் தொடங்குகிறது; ப்ரைமர் ஒரு மரபணு குறிப்பிட்ட ப்ரைமர் (ஜிஎஸ்பி) என்று அழைக்கப்படுகிறது. ப்ரைமர் எம்ஆர்என்ஏவுடன் பிணைக்கிறது, மேலும் என்சைம் ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் ஒரு குறிப்பிட்ட ஒற்றை-இழையுள்ள சிடிஎன்ஏ தயாரிப்பை உருவாக்க ப்ரைமரின் 3 'முனையில் அடிப்படை ஜோடிகளைச் சேர்க்கிறது; இது எம்ஆர்என்ஏவின் தலைகீழ் நிரப்பு ஆகும். சி. டி. என். ஏ தொகுப்பைத் தொடர்ந்து, சி. டி. என். ஏவின் 3 'முனையில் ஹோமோபாலிமெரிக் வால் எனப்படும் ஒத்த நியூக்ளியோடைடுகளின் சரத்தைச் சேர்க்க முனைய டியோக்ஸினியூக்ளியோடிடைல் டிரான்ஸ்பரேஸ் (டி. டி. டி) என்சைம் பயன்படுத்தப்படுகிறது. (டி நோவோ சி. டி. என். ஏ தொகுப்பின் முதல் இழைக்கு 3 '-முனைய வரிசையைச் சேர்க்க வேறு சில வழிகள் உள்ளன, அவை ஹோமோபாலிமெரிக் டைலிங்கை விட மிகவும் திறமையானவை, ஆனால் முறையின் உணர்வு அப்படியே உள்ளது). பி. சி. ஆர் பின்னர் மேற்கொள்ளப்படுகிறது, இது அறியப்பட்ட வரிசையுடன் பிணைக்கும் இரண்டாவது ஆன்டி-சென்ஸ் மரபணு குறிப்பிட்ட ப்ரைமரை (ஜி. எஸ். பி 2) பயன்படுத்துகிறது, மேலும் சி. டி. என். ஏ-களின் 3 'முனைகளில் சேர்க்கப்பட்ட ஹோமோபாலிமெரிக் வாலை பிணைக்கும் ஒரு உணர்வு (முன்னோக்கி) உலகளாவிய ப்ரைமர் (யுபி) 5' முனையிலிருந்து ஒரு சி. டி. என். ஏ தயாரிப்பை பெருக்குகிறது. 3 'ஆர். ஏ. சி. இ-பி. சி. ஆர் அனைத்து யூகாரியோடிக் எம். ஆர். என். ஏக்களின் 3' முனையில் இருக்கும் இயற்கையான பாலியா வாலைப் பயன்படுத்துகிறது, எனவே இந்த முறைக்கு டி. டி. டி மூலம் நியூக்ளியோடைடுகளைச் சேர்க்கத் தேவையில்லை. சி. டி. என். ஏக்கள் ஒரு ஒலிகோ-டி. டி-அடாப்டர் ப்ரைமரைப் பயன்படுத்தி உருவாக்கப்படுகின்றன (டியோக்ஸி-தைமின் நியூக்ளியோடைடுகளின் குறுகிய வரிசையைக் கொண்ட ஒரு ப்ரைமர்) இது பாலிஏ நீட்சியை பூர்த்தி செய்கிறது மற்றும் ஒவ்வொரு சி. டி. என். ஏவின் 5 'முனையிலும் ஒரு சிறப்பு அடாப்டர் வரிசையைச் சேர்க்கிறது. பிசிஆர் பின்னர் அறியப்பட்ட பகுதியிலிருந்து 3 'சிடிஎன்ஏவை ஒரு உணர்வு ஜிஎஸ்பி மற்றும் அடாப்டர் வரிசைக்கு நிரப்பு ஒரு உணர்வு எதிர்ப்பு ப்ரைமரைப் பயன்படுத்தி பெருக்க பயன்படுகிறது. RACE-வரிசைமுறை RACE ஆல் உருவாக்கப்படும் சிடிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளை உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறை தொழில்நுட்பங்களைப் பயன்படுத்தி வரிசைப்படுத்தலாம் (மேலும், RACE-SEQ என்றும் அழைக்கப்படுகிறது). மூலக்கூறு குளோனிங் கொண்ட ரேஸ் துண்டுகளின் பாரம்பரிய குணாதிசயத்துடன் ஒப்பிடும்போது ரேஸ் துண்டுகளின் உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறை குணாதிசயமாக்கல் மிகவும் நேர-திறமையானது, அதிக உணர்திறன், குறைந்த விலை மற்றும் தொழில்நுட்ப ரீதியாக சாத்தியமானது, அதைத் தொடர்ந்து ஒரு சில குளோன்களின் சாங்கர் வரிசைமுறை. ஆர்என்ஏ வரிசையின் ஒரு பகுதி அறியப்பட்டு மரபணு-குறிப்பிட்ட ப்ரைமரால் குறிவைக்கப்படும் ஆர்என்ஏ மூலக்கூறுகளின் அறியப்படாத 5 '(5'-ரேஸ்) அல்லது 3 '(3'-ரேஸ்) பகுதிகளை பெருக்க வரலாறு மற்றும் பயன்பாடுகள் ரேஸ் பயன்படுத்தப்படலாம். இந்த பெருக்கப்பட்ட ஆர். ஏ. சி. இ தயாரிப்புகளின் குணாதிசயத்திற்கான உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறையுடன் இணைந்து, எந்த வகையான குறியீட்டு அல்லது குறியீட்டு அல்லாத ஆர். என். ஏ-மூலக்கூறுகளையும் வகைப்படுத்த அணுகுமுறையைப் பயன்படுத்த முடியும். RACE ஐ உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறையுடன் இணைக்கும் யோசனை முதன்முதலில் 2009 ஆம் ஆண்டில் டீப்-ரேஸ் என அறிமுகப்படுத்தப்பட்டது, இது ஒரு செல்-லைனில் 17 மரபணுக்களின் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் தொடக்க தளங்களை (TSS) வரைபடமாக்குகிறது. எடுத்துக்காட்டாக, செயற்கை சிஆர்என்ஏக்களால் இயக்கப்படும் இலக்கு ஆர்என்ஏவின் பிளவு தளங்களை துல்லியமாக வரைபடமாக்க 2014 முதல் ஒரு ஆய்வில், அணுகுமுறைக்கு முதலில் ரேஸ்-செக் என்று பெயரிடப்பட்டது. மேலும், பெருங்குடல் புற்றுநோயில் புதிய டிரான்ஸ்கிரிப்ட்கள் மற்றும் இணைவு டிரான்ஸ்கிரிப்ட்களின் முழு நீள அறியப்படாத பகுதிகளை வகைப்படுத்த இந்த முறை பயன்படுத்தப்பட்டது. lncRNA களின் அறியப்படாத டிரான்ஸ்கிரிப்ட் கட்டமைப்புகளை வகைப்படுத்துவதை நோக்கமாகக் கொண்ட மற்றொரு ஆய்வில், RACE அரை-நீண்ட 454 வரிசைமுறையுடன் இணைந்து பயன்படுத்தப்பட்டது. மூலக்கூறு குளோனிங்ஃ ஒரு ஆய்வக கையேடு (பதிப்புகள். சாம்ப்ரூக், ஜே. அத்தியாயம் 8 நெறிமுறை 9,854-8.60 (கோல்ட் ஸ்பிரிங் ஹார்பர் ஆய்வக அச்சகம், கோல்ட் ஸ்பிரிங் ஹார்பர், நியூயார்க், அமெரிக்கா, 2001) மரபணு கையாளுதல் மற்றும் மரபியல் கோட்பாடுகள், எஸ். பி. ப்ரிம்ரோஸ் மற்றும் ஆர். எம். ட்விமேன், பிளாக்வெல் பப்ளிஷிங், 2006 (7 வது பதிப்பு. ), பக்கங்கள் 111-12. வெளிப்புற இணைப்புகள் வலைப்பதிவு கட்டுரை RACE-SEQ உயிர் வேதியியல் கண்டறிதல் முறைகள் மரபணு வரைபடம் மரபியல் நுட்பங்கள் மூலக்கூறு உயிரியல்