Tetramer assay
ஒரு டெட்ராமர் மதிப்பீடு (டெட்ராமர் கறை என்றும் அழைக்கப்படுகிறது) என்பது ஒரு இரத்த மாதிரியில் கொடுக்கப்பட்ட ஆன்டிஜெனுக்கு குறிப்பிட்ட டி செல்களைக் கண்டறிந்து அளவிட டெட்ராமெரிக் புரதங்களைப் பயன்படுத்தும் ஒரு செயல்முறையாகும். மதிப்பீட்டில் பயன்படுத்தப்படும் டெட்ராமர்கள் நான்கு முக்கிய ஹிஸ்டோகாம்பாடிபிலிட்டி காம்ப்ளக்ஸ் (எம். எச். சி) மூலக்கூறுகளால் ஆனவை, அவை உடலில் உள்ள பெரும்பாலான உயிரணுக்களின் மேற்பரப்பில் காணப்படுகின்றன. எம். எச். சி மூலக்கூறுகள் ஒரு செல்லில் வைரஸ்கள், பாக்டீரியாக்கள், புற்றுநோய் பிறழ்வுகள் அல்லது பிற ஆன்டிஜென்களின் இருப்பைத் தொடர்புகொள்வதற்கான ஒரு வழியாக டி-செல்களுக்கு பெப்டைட்களை வழங்குகின்றன. ஒரு டி-செல்லின் ஏற்பி ஒரு எம். எச். சி மூலக்கூறால் வழங்கப்படும் பெப்டைட் உடன் பொருந்தினால், ஒரு நோயெதிர்ப்பு பதில் தூண்டப்படுகிறது. எனவே, ஒரு குறிப்பிட்ட பெப்டைடை வழங்குவதற்காக உயிர் பொறியியலாக்கப்பட்ட எம். எச். சி டெட்ராமர்கள் அந்த பெப்டைடுடன் பொருந்தக்கூடிய ஏற்பிகளுடன் டி-செல்களைக் கண்டறிய பயன்படுத்தப்படலாம். டெட்ராமர்கள் ஒரு ஃப்ளோரோஃபோர் மூலம் பெயரிடப்பட்டுள்ளன, இது டெட்ராமர்-பிணைக்கப்பட்ட டி-செல்களை ப்ளோவ் சைட்டோமெட்ரி மூலம் பகுப்பாய்வு செய்ய அனுமதிக்கிறது. ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரி மூலம் டி-செல்களை அளவிடுதல் மற்றும் வரிசைப்படுத்துவது, வைரஸ் தொற்று மற்றும் தடுப்பூசி நிர்வாகத்திற்கான நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியையும், ஆன்டிஜென்-குறிப்பிட்ட டி-செல்களின் செயல்பாட்டையும் ஆராய ஆராய்ச்சியாளர்களுக்கு உதவுகிறது. பொதுவாக, ஒரு நபரின் நோயெதிர்ப்பு அமைப்பு ஒரு நோய்க்கிருமியை எதிர்கொண்டிருந்தால், அந்த நபர் அந்த நோய்க்கிருமியில் சில பெப்டைட் மீது குறிப்பிட்ட டி செல்களைக் கொண்டிருப்பார். எனவே, ஒரு நோய்க்கிருமி பெப்டைடுக்கு குறிப்பிட்ட ஒரு டெட்ராமர் கறை ஒரு நேர்மறையான சமிக்ஞையை விளைவித்தால், இது நபரின் நோயெதிர்ப்பு அமைப்பு அந்த நோய்க்கிருமிக்கு ஒரு பதிலை எதிர்கொண்டுள்ளது மற்றும் உருவாக்கியுள்ளது என்பதைக் குறிக்கலாம். இந்த முறை முதன்முதலில் 1996 ஆம் ஆண்டில் ஸ்டான்போர்ட் பல்கலைக்கழகத்தின் ஆய்வகத்தால் வெளியிடப்பட்டது. ஆன்டிஜென்-குறிப்பிட்ட டி-செல்களை அளவிடுவதற்கான முந்தைய முயற்சிகள் குறைவான துல்லியமான கட்டுப்படுத்தும் நீர்த்தல் மதிப்பீட்டை உள்ளடக்கியது, இது டி-செல்களின் எண்ணிக்கையை அவற்றின் உண்மையான நிலைகளை விட 50-500 நேரங்களில் மதிப்பிடுகிறது. டி-செல் ஏற்பிகள் மற்றும் எம். எச். சி-பெப்டைட் மோனோமர்களின் குறைந்த பிணைப்பு தொடர்பு காரணமாக கரையக்கூடிய எம். எச். சி மோனோமர்களைப் பயன்படுத்தும் கறைகளும் தோல்வியடைந்தன. எம். எச். சி டெட்ராமர்கள் இலக்கு டி-செல்லில் ஒன்றுக்கு மேற்பட்ட ஏற்பிகளுடன் பிணைக்க முடியும், இதன் விளைவாக மொத்த பிணைப்பு வலிமை மற்றும் குறைந்த விலகல் விகிதங்கள் அதிகரிக்கும். சிடி8 + டி-செல்களைப் பயன்படுத்துகிறது டெட்ராமர் கறைகள் பொதுவாக சைட்டோடாக்ஸிக் டி லிம்போசைட் (சிடிஎல்) மக்கள்தொகையை பகுப்பாய்வு செய்கின்றன. சிடிஎல்கள் சிடி8 + டி-செல்கள் என்றும் அழைக்கப்படுகின்றன, ஏனெனில் அவை எம்எச்ஸி வகுப்பு I மூலக்கூறுகளுடன் பிணைக்கும் சிடி8 இணை ஏற்பிகளைக் கொண்டுள்ளன. உடலில் உள்ள பெரும்பாலான செல்கள் எம். எச். சி கிளாஸ் I மூலக்கூறுகளை வெளிப்படுத்துகின்றன, அவை இன்ட்ராசெல்லுலர் ஆன்டிஜென்களை செயலாக்குவதற்கும் செல்லின் மேற்பரப்பில் இருப்பதற்கும் பொறுப்பாகும். எம். எச். சி வகுப்பு I மூலக்கூறுகளால் வழங்கப்படும் பெப்டைடுகள் அந்நியமாக இருந்தால்-எடுத்துக்காட்டாக, உயிரணுவின் சொந்த புரதங்களுக்கு பதிலாக வைரஸ் புரதங்களிலிருந்து பெறப்பட்டவை-பெப்டைடுடன் பொருந்தக்கூடிய ஏற்பியைக் கொண்ட சி. டி. எல் உயிரணுவை அழிக்கும். டெட்ராமர் கறைகள் ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரி மூலம் இந்த உயிரணுக்களை காட்சிப்படுத்துதல், அளவிடுதல் மற்றும் வரிசைப்படுத்த அனுமதிக்கின்றன, இது நோயெதிர்ப்பு மண்டலத்தில் மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும். டி-செல் எண்ணிக்கையை ஒரு வைரஸின் காலப்பகுதியில் அல்லது ஒரு தடுப்பூசி பயன்படுத்திய பிறகு கண்காணிக்க முடியும். டெட்ராமர் கறைகளை ELIspot போன்ற செயல்பாட்டு மதிப்பீடுகளுடன் இணைக்கலாம், இது ஒரு மாதிரியில் சைட்டோகைன் சுரக்கும் செல்களின் எண்ணிக்கையைக் கண்டறிகிறது. எம். எச். சி கிளாஸ் I டெட்ராமர் கட்டுமானம் ஒரு ஆய்வகத்தில் உருவாக்கப்பட்ட எம். எச். சி டெட்ராமர் மூலக்கூறுகள் உயிரணுக்களில் உள்ள ஆன்டிஜென் வழங்கும் சிக்கலைப் பிரதிபலிக்கலாம் மற்றும் ஆன்டிஜெனை அடையாளம் காணும் டி-செல்களுடன் பிணைக்கலாம். வகுப்பு I எம். எச். சி மூலக்கூறுகள் ஒரு மாறாத ஒளி சங்கிலி பீட்டா-2 மைக்ரோக்ளோபுலின் (β2m) உடன் தொடர்புடைய பாலிமார்பிக் கனமான α-சங்கிலியால் ஆனவை. எஸ்செரிச்சியா கோலை ஒளிச் சங்கிலியையும், பயோட்டின் 15 அமினோ அமில அங்கீகாரக் குறியீட்டை உள்ளடக்கிய கனமான சங்கிலியின் சுருக்கமான பதிப்பையும் ஒருங்கிணைக்கப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இந்த எம். எச். சி சங்கிலிகள் பிஆர்ஏ நொதியுடன் பயோடினைலேட்டட் செய்யப்பட்டு, ஆர்வமுள்ள ஆன்டிஜெனிக் பெப்டைட் மூலம் மீண்டும் மடிக்கப்படுகின்றன. பயோட்டின் என்பது ஸ்ட்ரெப்டாவிடின் எனப்படும் மற்றொரு புரதத்துடன் வலுவான பிணைப்பை உருவாக்கும் ஒரு சிறிய மூலக்கூறு ஆகும். ஃப்ளோரோஃபோர் குறியிடப்பட்ட ஸ்ட்ரெப்டாவிடின் உயிர் பொறியியல் எம். எச். சி மோனோமர்களில் சேர்க்கப்படுகிறது, மேலும் பயோட்டின்-ஸ்ட்ரெப்டாவிடின் தொடர்பு நான்கு எம். எச். சி மோனோமர்களை ஸ்ட்ரெப்டாவிடினுடன் பிணைத்து ஒரு டெட்ராமரை உருவாக்குகிறது. டெட்ராமர்கள் இரத்த மாதிரியுடன் கலக்கும்போது, அவை பொருத்தமான ஆன்டிஜென் குறிப்பிட்ட ஏற்பியை வெளிப்படுத்தும் டி-செல்களுடன் பிணைக்கப்படும். பிணைக்கப்படாத எந்த எம். எச். சி டெட்ராமர்களும் ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரி மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்படுவதற்கு முன்பு மாதிரியிலிருந்து கழுவப்படுகின்றன. மறுசீரமைப்பு எம். எச். சி மூலக்கூறுகளுக்குள் சமீபத்திய முன்னேற்றங்கள் பெப்டைட் எம். எச். சி சிக்கலான உருவாக்கம் மற்றும் அடுத்தடுத்த பன்முகப்படுத்தல் ஆகியவற்றை ஜனநாயகப்படுத்தியுள்ளன. பரந்த அளவிலான எம். எச். சி வகுப்பு I மூலக்கூறுகளின் மிகவும் சுறுசுறுப்பான சூத்திரங்கள் இப்போது நிபுணர்கள் அல்லாத பயனர்கள் சிறப்பு உபகரணங்கள் இல்லாமல் எந்த ஆய்வகத்திலும் அன்றாடம் தங்கள் சொந்த தனிப்பயன் பெப்டைட்-எம். எச். சி வளாகங்களை உருவாக்க அனுமதிக்கிறது. உதவி டி-செல்களுடன் பிணைக்கும் சிடி4 + டி-செல்கள் டெட்ராமர்களும் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. உதவி டி-செல்கள் அல்லது சிடி4 + டி-செல்கள் சிடி4 இணை ஏற்பிகளை வெளிப்படுத்துகின்றன. அவை இரண்டாம் வகுப்பு எம். எச். சி மூலக்கூறுகளுடன் பிணைக்கப்படுகின்றன, அவை டென்ட்ரிடிக் செல்கள் அல்லது மேக்ரோபேஜ்கள் போன்ற தொழில்முறை ஆன்டிஜென்-வழங்கும் செல்களில் மட்டுமே வெளிப்படுத்தப்படுகின்றன. வகுப்பு II எம். எச். சி மூலக்கூறுகள் செல்களுக்கு வெளியே உள்ள ஆன்டிஜென்களை வழங்குகின்றன, இது உதவி டி-செல்களை பாக்டீரியா, பூஞ்சை மற்றும் ஒட்டுண்ணிகளைக் கண்டறிய அனுமதிக்கிறது. வகுப்பு II எம். எச். சி டெட்ராமர் பயன்பாடு மிகவும் பொதுவானதாகி வருகிறது, ஆனால் வகுப்பு I டெட்ராமர்களை விட டெட்ராமர்களை உருவாக்குவது மிகவும் கடினம் மற்றும் உதவியாளர் டி-செல்கள் மற்றும் எம். எச். சி மூலக்கூறுகளுக்கு இடையிலான பிணைப்பு இன்னும் பலவீனமாக உள்ளது. இயற்கை கொலையாளி டி-செல்கள் இயற்கை கொலையாளி டி-செல்கள் (என். கே. டி செல்கள்) டெட்ராமர் தொழில்நுட்பத்துடன் காட்சிப்படுத்தப்படலாம். என். கே. டி செல்கள் கொழுப்பு அல்லது கிளைகோலிப்பிட் ஆன்டிஜென்களை வழங்கும் புரதங்களுடன் பிணைக்கப்படுகின்றன. என். கே. டி செல்கள் பிணைக்கும் ஆன்டிஜென் வழங்கும் காம்ப்ளக்ஸ் சிடி 1 புரதங்களை உள்ளடக்கியது, எனவே சிடி 1 ஆல் செய்யப்பட்ட டெட்ராமர்களை என். கே. டி செல்களுக்கு கறை செய்ய பயன்படுத்தலாம். எடுத்துக்காட்டுகள் எச். ஐ. வி நோய்த்தொற்றுக்கான செல்-மத்தியஸ்த நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியில் கவனம் செலுத்திய டெட்ராமர் தொழில்நுட்பத்தின் ஆரம்ப பயன்பாடு. எம். எச். சி டெட்ராமர்கள் எச். ஐ. வி ஆன்டிஜென்களை வழங்குவதற்காக உருவாக்கப்பட்டன, மேலும் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளின் இரத்த மாதிரிகளில் அந்த எச். ஐ. வி ஆன்டிஜென்களுக்கு குறிப்பிட்ட சி. டி. எல்-களின் சதவீதத்தைக் கண்டறிய பயன்படுத்தப்பட்டன. எச். ஐ. வி நோய்த்தொற்றில் சி. டி. எல்-களின் செயல்பாட்டை வகைப்படுத்த இது சைட்டோடாக்ஸிக் மதிப்பீடுகள் மற்றும் பிளாஸ்மா ஆர்என்ஏ வைரஸ் சுமைகளின் முடிவுகளுடன் ஒப்பிடப்பட்டது. சைட்டோகைன் சுரப்பைப் பகுப்பாய்வு செய்வதற்காக டெட்ராமர்களுடன் பிணைக்கப்பட்ட சி. டி. எல். க்கள் ஈ. எல். ஐ. ஸ்பாட் கிணறுகளாக வரிசைப்படுத்தப்பட்டன. மற்றொரு ஆய்வு ஒரு இன்ஃப்ளூயன்ஸா தடுப்பூசி விநியோக முறையின் செயல்திறனை ஆராய எம். எச். சி டெட்ராமர் வளாகங்களைப் பயன்படுத்தியது. எலிகளுக்கு இன்ஃப்ளூயன்ஸாவுக்கான சருமத்தின் கீழ் மற்றும் இன்ட்ரானசல் தடுப்பூசிகள் வழங்கப்பட்டன, மேலும் தடுப்பூசியில் பயன்படுத்தப்படும் ஆன்டிஜெனுக்கு குறிப்பிட்ட சி. டி. எல்-களை அளவிடுவதற்கு ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரியுடன் இணைந்த டெட்ராமர் கறைகள் பயன்படுத்தப்பட்டன. இது இரண்டு வெவ்வேறு தடுப்பூசி விநியோக முறைகளில் நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியை (ஒரு வைரஸை குறிவைக்கும் டி-செல்களின் எண்ணிக்கை) ஒப்பிட அனுமதித்தது. குறிப்புகள் மேலும் வாசிப்பு இரத்த சோதனைகள் ஓட்டம் சைட்டோமெட்ரி