Terminal deoxynucleotidyl transferase
டெர்மினல் டியோக்ஸினியூக்ளியோடிடைல் டிரான்ஸ்பரேஸ் (டிடிடி), டிஎன்ஏ நியூக்ளியோடிடைல்க்ஸோட்ரான்ஸ்ஃபெரேஸ் (டிஎன்டிடி) அல்லது டெர்மினல் டிரான்ஸ்பரேஸ் என்றும் அழைக்கப்படுகிறது, இது முதிர்ச்சியற்ற, முன்-பி, முன்-டி லிம்பாய்டு செல்கள் மற்றும் கடுமையான லிம்போபிளாஸ்டிக் லுகேமியா/லிம்போமா செல்களில் வெளிப்படுத்தப்படும் ஒரு சிறப்பு டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் ஆகும். டிடிடி ஆன்டிபாடி மரபணு மறுசீரமைப்பின் போது டி. சி. ஆர் மற்றும் பி. சி. ஆர் மரபணுக்களின் வி, டி மற்றும் ஜே எக்ஸான்களில் என்-நியூக்ளியோடைடுகளைச் சேர்க்கிறது, இது சந்தி பன்முகத்தன்மையின் நிகழ்வை செயல்படுத்துகிறது. மனிதர்களில், முனைய இடமாற்றம் டிஎன்டிடி மரபணுவால் குறியிடப்படுகிறது. டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் என்சைம்களின் எக்ஸ் குடும்பத்தின் உறுப்பினராக, இது பாலிமரேஸ் λ மற்றும் பாலிமரேஸ் μ உடன் இணைந்து செயல்படுகிறது, இவை இரண்டும் ஒரே எக்ஸ் குடும்ப பாலிமரேஸ் என்சைம்களைச் சேர்ந்தவை. டிடிடியால் அறிமுகப்படுத்தப்பட்ட பன்முகத்தன்மை முதுகெலும்புள்ள நோயெதிர்ப்பு மண்டலத்தின் பரிணாம வளர்ச்சியில் முக்கிய பங்கு வகித்துள்ளது, இது நோய்க்கிருமிகளை எதிர்த்துப் போராட ஒரு உயிரணு பொருத்தப்பட்டிருக்கும் பல்வேறு வகையான ஆன்டிஜென் ஏற்பிகளை கணிசமாக அதிகரிக்கிறது. டிடிடி நாக் அவுட் எலிகளைப் பயன்படுத்தும் ஆய்வுகள் சாதாரண அல்லது காட்டு வகை அமைப்புகளுடன் ஒப்பிடும்போது டி-செல் ஏற்பி (டி. சி. ஆர்) பன்முகத்தன்மையில் கடுமையான குறைப்புகளை (10 மடங்கு) கண்டறிந்துள்ளன. ஒரு உயிரினத்தில் உள்ள டி. சி. ஆர்களின் அதிக பன்முகத்தன்மை நோய்த்தொற்றுக்கு அதிக எதிர்ப்புக்கு வழிவகுக்கிறது. 1960 ஆம் ஆண்டில் பாலூட்டிகளில் அடையாளம் காணப்பட்ட முதல் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களில் டிடிடி ஒன்றாகும் என்றாலும், இது அனைத்து டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களிலும் மிகக் குறைவாக புரிந்து கொள்ளப்பட்ட ஒன்றாகும். 2016-18 இல், டிடிடி டிரான்ஸ் டெம்ப்ளேட் சார்பு நடத்தையில் நிரூபிக்கக் கண்டறியப்பட்டது, மேலும் அதன் மிகவும் பரவலாக அறியப்பட்ட டெம்ப்ளேட் சுயாதீன நடத்தை டிடிடி கருவின் கல்லீரல் எச்எஸ்சிகளில் இல்லை, இது கருவின் காலத்தில் பி-செல்களில் சந்தி பன்முகத்தன்மையை கணிசமாக குறைக்கிறது. செயல்பாடு மற்றும் ஒழுங்குமுறை பொதுவாக, டி. டி. டி ஒரு டிஎன்ஏ மூலக்கூறின் 3 'முனையத்திற்கு நியூக்ளியோடைடுகளைச் சேர்ப்பதை ஊக்குவிக்கிறது. பெரும்பாலான டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களைப் போலல்லாமல், இதற்கு ஒரு டெம்ப்ளேட் தேவையில்லை. இந்த நொதியின் விருப்பமான அடி மூலக்கூறு 3 '-ஓவர்ஹாங் ஆகும், ஆனால் இது அப்பட்டமான அல்லது குழிவான 3' முனைகளுக்கு நியூக்ளியோடைடுகளையும் சேர்க்கலாம். மேலும், விவோவில் உள்ள கரைசலில் உள்ள இலவச நியூக்ளியோடைடுகளிலிருந்து 2-15 nt டிஎன்ஏ பாலிமர்களின் தொகுப்பை ஊக்குவிக்கும் ஒரே பாலிமரேஸ் டிடிடி ஆகும். இன் விட்ரோவில், இந்த நடத்தை குறிப்பிட்ட நீளம் இல்லாமல் டிஎன்ஏ பாலிமர்களின் பொதுவான உருவாக்கத்தை ஊக்குவிக்கிறது. விவோவில் உற்பத்தி செய்யப்படும் 2-15 nt டிஎன்ஏ துண்டுகள் டிஎன்ஏ பழுதுபார்ப்பு மற்றும்/அல்லது மறுசீரமைப்பு இயந்திரங்கள் தொடர்பான சமிக்ஞை பாதைகளில் செயல்படுவதாக கருதப்படுகின்றன. பல பாலிமரேஸ்களைப் போலவே, டி. டி. டி. க்கும் ஒரு டைவலன்ட் கேஷன் கோஃபாக்டர் தேவைப்படுகிறது, இருப்பினும், டி. டி. டி, மற்றும் போன்ற பரந்த அளவிலான கேஷன்களைப் பயன்படுத்தும் திறனில் தனித்துவமானது. என்சைம் செயல்பாட்டின் விகிதம் கிடைக்கக்கூடிய டைவலன்ட் நேர்மின் அயனிகள் மற்றும் நியூக்ளியோடைடு சேர்க்கப்படுவதைப் பொறுத்தது. டிடிடி பெரும்பாலும் தைமஸ் மற்றும் எலும்பு மஜ்ஜை போன்ற முதன்மை நிணநீர் உறுப்புகளில் வெளிப்படுகிறது. அதன் வெளிப்பாட்டின் ஒழுங்குமுறை பல பாதைகள் வழியாக நிகழ்கிறது. டி. டி. ஐ. எஃப்1 போன்ற புரத-புரத தொடர்புகள் இதில் அடங்கும். டிடிஐஎஃப்1 என்பது டிடிடி பாலிமரேஸின் டிஎன்ஏ பிணைப்பு பகுதியை மறைப்பதன் மூலம் அதன் செயல்பாட்டைத் தடுக்க டிடிடியுடன் தொடர்பு கொள்ளும் மற்றொரு புரதமாகும். டிடிடி வெளிப்பாட்டின் ஒழுங்குமுறை டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் மட்டத்திலும் உள்ளது, கட்ட-குறிப்பிட்ட காரணிகளால் கட்டுப்படுத்தப்படுகிறது, மேலும் இது வளர்ச்சிக்கு கட்டுப்படுத்தும் வகையில் நிகழ்கிறது. வெளிப்பாடு பொதுவாக முதன்மை நிணநீர் உறுப்புகளில் இருப்பதாகக் கண்டறியப்பட்டாலும், டி-செல்களுக்கான தைமஸுக்கு வெளியே மரபணு மறுசீரமைப்புக்குத் தேவையான பிற என்சைம்களுடன் ஆன்டிஜென் வழியாக தூண்டுதல் இரண்டாம் நிலை டிடிடி வெளிப்பாட்டை ஏற்படுத்தக்கூடும் என்று சமீபத்திய ஆய்வுகள் தெரிவிக்கின்றன. கடுமையான லிம்போபிளாஸ்டிக் லுகேமியா உள்ள நோயாளிகள் டி. டி. டி. யை அதிகமாக உற்பத்தி செய்கிறார்கள். இந்த நோயாளிகளிடமிருந்து பெறப்பட்ட செல் கோடுகள் தூய டி. டி. டியின் முதல் ஆதாரங்களில் ஒன்றாக செயல்பட்டன, மேலும் மனித மற்றும் கால்நடை ஐசோஃபார்ம்களுக்கு இடையில் செயல்பாட்டில் வேறுபாடுகள் உள்ளன என்ற கண்டுபிடிப்புக்கு வழிவகுத்தன. பல பாலிமரேஸ்களைப் போலவே, டி. டி. டி. யின் வினையூக்கி தளமும் அதன் பனை களத்தில் இரண்டு டைவலன்ட் நேர்மின் அயனிகளைக் கொண்டுள்ளது, அவை நியூக்ளியோடைடு பிணைப்புக்கு உதவுகின்றன, 3 '-ஓ. எச் குழுவின் பி. கே. ஏ. வைக் குறைக்க உதவுகின்றன, மேலும் இறுதியில் விளைந்த பைரோபாஸ்பேட் துணை தயாரிப்பின் புறப்பாட்டை எளிதாக்குகின்றன. ஐசோஃபார்ம் மாறுபாடு TdT இன் பல ஐசோஃபார்ம்கள் எலிகள், கால்நடைகள் மற்றும் மனிதர்களில் காணப்படுகின்றன. இன்றுவரை, எலிகளில் இரண்டு வகைகள் அடையாளம் காணப்பட்டுள்ளன, அதே நேரத்தில் மூன்று மனிதர்களில் அடையாளம் காணப்பட்டுள்ளன. எலிகளில் அடையாளம் காணப்பட்ட இரண்டு ஸ்ப்லைஸ் வகைகளும் அவற்றின் நீளத்திற்கு ஏற்ப பெயரிடப்பட்டுள்ளனஃ டிடிடிஎஸ் 509 அமினோ அமிலங்களைக் கொண்டுள்ளது, அதே நேரத்தில் டிடிடிஎல், நீண்ட மாறுபாடு, 529 அமினோ அமிலங்களைக் கொண்டுள்ளது. டிடிடிஎஸ் மற்றும் டிடிடிஎல் இடையேயான வேறுபாடுகள் டிஎன்ஏ மற்றும் நியூக்ளியோடைடுகளை பிணைக்கும் பகுதிகளுக்கு வெளியே நிகழ்கின்றன. 20 அமினோ அமில வேறுபாடு நொதி செயல்பாட்டை பாதிக்கிறது என்பது சர்ச்சைக்குரியது, சிலர் டிடிடிஎல்லின் மாற்றங்கள் எக்ஸோ நியூக்ளியேஸ் செயல்பாட்டை வழங்குகின்றன என்று வாதிடுகின்றனர், மற்றவர்கள் டிடிடிஎல் மற்றும் டிடிடிஎஸ் கிட்டத்தட்ட ஒரே மாதிரியான விட்ரோ செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளன என்று வாதிடுகின்றனர். கூடுதலாக, டிடிடிஎல் ஒரு அறியப்படாத பொறிமுறையின் மூலம் விவோவில் டிடிடிஎஸ் இன் வினையூக்கி செயல்பாட்டை மாற்றியமைக்க முடியும் என்று கூறப்படுகிறது. V (D) J மறுசீரமைப்பில் TdT இன் பங்கை ஒழுங்குபடுத்த இது உதவுகிறது என்று பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. மனித டிடிடி ஐசோஃபார்ம்கள் டிடிடிஎல்1, டிடிடிஎல்2 மற்றும் டிடிடிஎஸ் ஆகிய மூன்று வகைகளைக் கொண்டுள்ளன. டிடிடிஎல் 1 பரவலாக நிணநீர் செல் கோடுகளில் வெளிப்படுத்தப்படுகிறது, அதே நேரத்தில் டிடிடிஎல் 2 முக்கியமாக சாதாரண சிறிய நிணநீர் செல்களில் வெளிப்படுத்தப்படுகிறது. வெளிப்படுத்தப்படும் போது இரண்டும் அணுக்கருவில் உள்ளூர்மயமாக்கப்படுகின்றன, மேலும் இரண்டும் 3 '-> 5' எக்ஸோ நியூக்ளியேஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளன. இதற்கு மாறாக, டிடிடிஎஸ் ஐசோஃபார்ம்கள் எக்ஸோ நியூக்ளியேஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டிருக்கவில்லை மற்றும் வி (டி) ஜே மறுசீரமைப்பின் போது தேவையான நீளத்தை செய்கின்றன. முரைன் டி. டி. டி. எல் இல் கருதப்பட்ட இதேபோன்ற எக்ஸோ நியூக்ளியேஸ் செயல்பாடு மனித மற்றும் கால்நடை டி. டி. டி. எல் இல் காணப்படுவதால், கால்நடை மற்றும் மனித டி. டி. டி. எல் ஐசோஃபார்ம்கள் எலிகளில் முன்மொழியப்பட்டதைப் போலவே டி. டி. டி. எஸ் ஐசோஃபார்ம்களை ஒழுங்குபடுத்துகின்றன என்று சிலர் கருதுகின்றனர். மேலும், டிடிடிஎல் 2 மற்றும்/அல்லது டிடிடிஎஸ் செயல்பாட்டை ஒழுங்குபடுத்துவதில் டிடிடிஎல் 1 ஈடுபட்டிருக்கலாம் என்று சிலர் கருதுகின்றனர். வி (டி) ஜே மறுசீரமைப்பில் பங்கு ஆர்ஏஜி 1/2 என்சைம்களின் செயல்பாட்டின் போது, பிளவுபட்ட இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏ பிளவு நிகழ்வால் உருவாக்கப்பட்ட ஒவ்வொரு டிஎன்ஏ பிரிவின் முடிவிலும் ஹேர்பின் கட்டமைப்புகளுடன் விடப்படுகிறது. ஹேர்பின்கள் இரண்டும் ஆர்ட்டெமிஸ் வளாகத்தால் திறக்கப்படுகின்றன, இது பாஸ்போரிலேட் செய்யப்படும்போது எண்டோநியூக்ளீஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது, இது டிடிடி செயல்படுவதற்கு இலவச 3 'ஓஎச் முனைகளை வழங்குகிறது. ஆர்ட்டெமிஸ் வளாகம் அதன் வேலையைச் செய்து, புதிதாகத் திறக்கப்பட்ட டிஎன்ஏ ஹேர்பின்களில் பாலிண்ட்ரோமிக் நியூக்ளியோடைடுகளை (பி-நியூக்ளியோடைடுகள்) சேர்த்தவுடன், டிடிடி அதன் வேலையைச் செய்ய மேடை அமைக்கப்பட்டுள்ளது. டிடிடி இப்போது பாலிமரேஸ்கள் செயல்படுவதாக அறியப்படும் 5 'முதல் 3' திசையில் இருக்கும் பி-நியூக்ளியோடைடுகளுக்குள் வந்து என்-நியூக்ளியோடைடுகளைச் சேர்க்க முடியும். ஆர்ட்டெமிஸ் வளாகத்தின் செயல்பாட்டிற்குப் பிறகு உருவாக்கப்படும் ஒவ்வொரு 3 'முனையிலும் சராசரியாக 2 முதல் 5 சீரற்ற அடிப்படை ஜோடிகள் சேர்க்கப்படுகின்றன. புதிதாக ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட இரண்டு எஸ். எஸ். டி. என். ஏ பிரிவுகள் சாதாரண வாட்சன்-கிரிக் அடிப்படை இணைப்பு முறைகளின்படி (ஏ-டி, சி-ஜி) இணைக்கப்படும் போது மைக்ரோஹோமாலஜி சீரமைப்பிற்கு உட்படுத்தப்படுவதற்கு சேர்க்கப்பட்ட தளங்களின் எண்ணிக்கை போதுமானது. அங்கிருந்து இணைக்கப்படாத நியூக்ளியோடைடுகள் ஆர்ட்டெமிஸ் காம்ப்ளக்ஸ் போன்ற ஒரு எக்ஸோ நியூக்ளியேஸ் மூலம் வெளியேற்றப்படுகின்றன (இது எண்டோநியூக்ளியேஸ் செயல்பாட்டிற்கு கூடுதலாக எக்ஸோ நியூக்ளியேஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது), பின்னர் வார்ப்புரு-சார்ந்த பாலிமரேஸ்கள் இடைவெளிகளை நிரப்ப முடியும், இறுதியாக புதிய குறியீட்டு மூட்டை உருவாக்குகிறது. டிடிடி நான்கு அடிப்படை ஜோடிகளை என்-நியூக்ளியோடைடு பிரிவுகளில் சேர்க்கும்போது பாகுபாடு காட்டவில்லை என்றாலும், இது குவானைன் மற்றும் சைட்டோசின் அடிப்படை ஜோடிகளுக்கு ஒரு சார்பைக் காட்டியுள்ளது. டெம்ப்ளேட் சார்பு செயல்பாடு ஒரு டெம்ப்ளேட் சார்பு முறையில், பெரும்பாலான பாலிமரேஸ்களில் காணப்படும் இன் சிஸ் பொறிமுறைக்கு மாறாக டிரான்ஸில் குறிப்பிடப்படும் வகையில் இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவில் ஸ்ட்ராண்ட் பிரேக்குகளில் நியூக்ளியோடைடுகளை டிடிடி இணைக்க முடியும். இது இழைகளுக்கு இடையில் ஒரு அடிப்படை-ஜோடி இடைவெளியுடன் உகந்த முறையில் நிகழ்கிறது, மேலும் குறைவான இடைவெளி அதிகரித்து வருகிறது. லூப் 1 எனப்படும் டி. டி. டி. யின் உட்பிரிவு மூலம் இது எளிதாக்கப்படுகிறது, இது இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவில் குறுகிய இடைவெளிகளைத் தேர்ந்தெடுத்து ஆராய்கிறது. மேலும், இந்த வார்ப்புரு சார்ந்த செயல்பாட்டின் கண்டுபிடிப்பு V (D) J மறுசீரமைப்பில் N பகுதிகளின் சேர்த்தல்களின் நீளங்களின் விநியோகம் எவ்வாறு எழுகிறது என்பது குறித்து மிகவும் நம்பத்தகுந்த இயந்திரவியல் கருதுகோள்களுக்கு வழிவகுத்துள்ளது. பாலிமரேஸ் μ மற்றும் பாலிமரேஸ் λ ஆகியவை டிடிடிக்கு டிரான்ஸ் டெம்ப்ளேட்டட் சார்பு செயற்கை செயல்பாட்டில் ஒத்தவை, ஆனால் கீழ்நிலை இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவில் ஒத்த சார்பு இல்லாமல். மேலும், பாலிமரேஸ் λ இதே போன்ற டெம்ப்ளேட்-சுயாதீனமான செயற்கை செயல்பாட்டை வெளிப்படுத்துவதாகவும் கண்டறியப்பட்டுள்ளது. ஒரு முனைய பரிமாற்றமாக செயல்பாட்டுடன், இது மிகவும் பொதுவான வார்ப்புரு-சார்ந்த பாணியில் செயல்படுவதாகவும் அறியப்படுகிறது. டிடிடி மற்றும் பாலிமரேஸ் மியூ இடையே உள்ள ஒற்றுமைகள் அவை பரிணாம ரீதியாக நெருக்கமாக தொடர்புடையவை என்பதைக் குறிக்கின்றன. யூஸ் டெர்மினல் டிரான்ஸ்பரேஸ் மூலக்கூறு உயிரியலில் பயன்பாடுகளைக் கொண்டுள்ளது. நியூக்ளியோடைடுகளைச் சேர்க்க RACE இல் இதைப் பயன்படுத்தலாம், பின்னர் அவை அடுத்தடுத்த பி. சி. ஆரில் ஒரு ப்ரைமருக்கான வார்ப்புருவாகப் பயன்படுத்தப்படலாம். கதிரியக்க ஐசோடோப்புகளுடன் பெயரிடப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகளைச் சேர்க்கவும் இதைப் பயன்படுத்தலாம், எடுத்துக்காட்டாக டியூனல் மதிப்பீட்டில் (டெர்மினல் டியோக்ஸினியூக்ளியோடிடைல் டிரான்ஸ்பரேஸ் டி. யு. டி. பி நிக் எண்ட் லேபிளிங்) அப்போப்டொசிஸின் செயல்விளக்கத்திற்காக (இது ஓரளவு, துண்டு துண்டான டிஎன்ஏவால் குறிக்கப்படுகிறது). கடுமையான லிம்போபிளாஸ்டிக் லுகேமியாவைக் கண்டறிவதற்கான இம்யூனோஃப்ளோரசன்ஸ் மதிப்பீட்டிலும் இது பயன்படுத்தப்படுகிறது. இம்யூனோஹிஸ்டோகெமிஸ்ட்ரி மற்றும் ப்ளோவ் சைட்டோமெட்ரியில், முதிர்ச்சியடையாத டி மற்றும் பி செல்கள் மற்றும் ஆன்டிஜெனைக் கொண்ட ப்ளூரிபோடென்ட் ஹீமாடோபோயிடிக் ஸ்டெம் செல்கள் இருப்பதை நிரூபிக்க டி. டி. டி. க்கு ஆன்டிபாடிகள் பயன்படுத்தப்படலாம், அதே நேரத்தில் முதிர்ந்த நிணநீர் செல்கள் எப்போதும் டி. டி. டி-நெகட்டிவ் ஆகும். டிடிடி-பாசிட்டிவ் செல்கள் ஆரோக்கியமான நிணநீர் கணுக்கள் மற்றும் டான்சில்களில் சிறிய எண்ணிக்கையில் காணப்பட்டாலும், கடுமையான லிம்போபிளாஸ்டிக் லுகேமியாவின் வீரியம் மிக்க செல்களும் டிடிடி-பாசிட்டிவ் ஆகும், எனவே, இந்த நோயைக் கண்டறிவதற்கும், குழந்தைப் பருவத்தின் சிறிய செல் கட்டிகளிலிருந்து வேறுபடுத்துவதற்கும் ஆன்டிபாடியை ஒரு குழுவின் ஒரு பகுதியாகப் பயன்படுத்தலாம். ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடுகளின் டி நோவோ தொகுப்பில் சமீபத்திய பயன்பாட்டையும் டிடிடி கண்டுள்ளது, டிடிடி-டிஎன்டிபி இணைக்கப்பட்ட ஒப்புமைகளுடன் ஒரு நேரத்தில் 1 நாட் மூலம் ப்ரைமர் நீட்டிப்பு திறன் கொண்டது. வேறு வார்த்தைகளில் கூறுவதானால், டிடிடி என்சைம் ஒரு ப்ரைமர் வரிசையில் ஒரு நேரத்தில் ஒரு எழுத்தைச் சேர்ப்பதன் மூலம் செயற்கை டிஎன்ஏவை உருவாக்கும் திறனை நிரூபித்துள்ளது. மேலும் காண்க டிஎன்ஏ டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் குறிப்புகள் மேலும் வாசிப்பு வெளிப்புற இணைப்புகள் ஈசி 2.7.7