Bicinchoninic acid assay
பைசின்கோனினிக் அமில மதிப்பீடு (பிசிஏ மதிப்பீடு), ஸ்மித் மதிப்பீடு என்றும் அழைக்கப்படுகிறது, அதன் கண்டுபிடிப்பாளரான பியர்ஸ் கெமிக்கல் கம்பெனியில் பால் கே. ஸ்மித், இப்போது தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிபிக் நிறுவனத்தின் ஒரு பகுதியாகும், இது ஒரு கரைசலில் புரதத்தின் மொத்த செறிவை தீர்மானிப்பதற்கான ஒரு உயிர்வேதியியல் மதிப்பீடாகும் (0.5 மி. கி/மில்லி முதல் 1.5 மி. கி/மில்லி வரை), லோரி புரத மதிப்பீடு, பிராட்போர்டு புரத மதிப்பீடு அல்லது பியூரெட் உலை போன்றது. புரத செறிவு விகிதத்தில் பச்சை நிறத்தில் இருந்து ஊதா நிறத்திற்கு மாதிரி கரைசலின் நிற மாற்றத்தால் மொத்த புரத செறிவு வெளிப்படுத்தப்படுகிறது, பின்னர் வண்ண அளவீட்டு நுட்பங்களைப் பயன்படுத்தி அளவிட முடியும். பிசிஏ மதிப்பீடு 1989 ஆம் ஆண்டில் பியர்ஸ் கெமிக்கல் நிறுவனத்தால் காப்புரிமை பெற்றது மற்றும் காப்புரிமை 2006 இல் காலாவதியானது. பொறிமுறை ஒரு பங்கு பிசிஏ கரைசல் pH 11.25 உடன் அதிக கார கரைசலில் பின்வரும் பொருட்களைக் கொண்டுள்ளதுஃ பைசின்கோனினிக் அமிலம், சோடியம் கார்பனேட், சோடியம் பைகார்பனேட், சோடியம் டார்ட்ரேட் மற்றும் செம்பு (II) சல்பேட் பென்டாஹைட்ரேட். பிசிஏ மதிப்பீடு முதன்மையாக இரண்டு எதிர்வினைகளை நம்பியுள்ளது. முதலாவதாக, புரதத்தில் உள்ள பெப்டைட் பிணைப்புகள் தாமிர (II) சல்பேட்டிலிருந்து கியூ2 + அயனிகளை கியூ1 + (வெப்பநிலையை சார்ந்த எதிர்வினை) ஆகக் குறைக்கின்றன. குறைக்கப்பட்ட கியூ2 + அளவு கரைசலில் உள்ள புரதத்தின் அளவிற்கு விகிதாசாரமாகும். அடுத்து, பைசின்கோனினிக் அமிலத்தின் இரண்டு மூலக்கூறுகள் ஒவ்வொரு கியூ 1 + அயனியுடனும் செலேட் செய்கின்றன, இது ஒரு ஊதா நிற வளாகத்தை உருவாக்குகிறது, இது 562 என்எம் அலைநீளத்தில் ஒளியை வலுவாக உறிஞ்சுகிறது. பைசின்கோனினிக் அமிலம் கியூ 1 + காம்ப்ளக்ஸ் புரத மாதிரிகளில் சிஸ்டைன்/சிஸ்டைன், டைரோசின் மற்றும் டிரிப்டோபான் பக்க சங்கிலிகள் இருப்பதால் பாதிக்கப்படுகிறது. அதிக வெப்பநிலையில் (37 முதல் 60 டிகிரி செல்சியஸ் வரை), பெப்டைட் பிணைப்புகள் வினைச் சேர்மத்தை உருவாக்க உதவுகின்றன. சமமற்ற அமினோ அமில கலவையால் ஏற்படும் மாறுபாடுகளைக் குறைக்கும் அதே வேளையில் மதிப்பீட்டு உணர்திறனை அதிகரிப்பதற்கான ஒரு வழியாக அதிக வெப்பநிலையில் பிசிஏ மதிப்பீட்டை இன்குபேஷன் செய்வது பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. ஒரு கரைசலில் இருக்கும் புரதத்தின் அளவை உறிஞ்சுதல் நிறமாலையை அளவிடுவதன் மூலமும், அறியப்பட்ட செறிவு கொண்ட புரதக் கரைசல்களுடன் ஒப்பிடுவதன் மூலமும் அளவிட முடியும். வரம்புகள் பிசிஏ மதிப்பீடு பெரும்பாலும் குறைக்கும் முகவர்கள் மற்றும் உலோக செலேட்டர்களுடன் பொருந்தாது, இருப்பினும் சுவடு அளவுகள் பொறுத்துக்கொள்ளப்படலாம். பிசிஏ மதிப்பீடு பொதுவான சவ்வு கொழுப்புகள் மற்றும் பாஸ்போலிப்பிட்களுக்கு பதிலளிப்பதாக கூறப்படுகிறது. பிசிஏ மதிப்பீட்டின் சில மாற்று வகைகள் உள்ளனஃ அசல் பிசிஏ மதிப்பீடு ஸ்மித் விவரித்தபடி, அசல் பிசிஏ மதிப்பீடு இரண்டு-கூறு நெறிமுறையாகும். இரண்டு வினையூக்கிகளும் "அறை வெப்பநிலையில் காலவரையின்றி நிலையானவை". குறைந்தபட்சம் இரண்டு வணிக விற்பனையாளர்களிடமிருந்து நவீன (அநேகமாக துல்லியமான அல்லது மிகவும் ஒத்த) சூத்திரங்கள் கிடைக்கின்றன. பிசிஏ வேலை செய்யும் தீர்வு 50:1 விகிதத்தில் உலை ஏ மற்றும் உலை பி கலப்பதன் மூலம் உருவாக்கப்படுகிறது, மேலும் வாரந்தோறும் (இது மிதமான நிலையானது) அல்லது தேவைக்கேற்ப தயாரிக்கப்படலாம். உலை ஏ 1 சதவீதம் டபிள்யூ/வி பிசிஏ-நா 2 (சிஏஎஸ்ஃ 979-88-4) 2 சதவீதம் டபிள்யூ/வி நா 2 சிஓ 3 · எச் 2 ஓ (சிஏஎஸ்ஃ 5968-11-6) 0.16% டபிள்யூ/வி நா 2 டார்ட்ரேட் (சிஏஎஸ்ஃ 868-18-8) 4 சதவீதம் டபிள்யூ/வி நா ஓ எச் (சிஏஎஸ்ஃ 1310-73-2) 0.95% டபிள்யூ/வி நாக் ஓ 3 (சிஏஎஸ்ஃ 144-55-8) 50 சதவீதம் நா ஓ எச் அல்லது திடமான நாக் ஓ 3 ஐச் சரிசெய்யச் சேர்க்கவும். குறிப்பிடத்தக்க வகையில், ஸ்மித் ஐசாடின் மற்றும் அசிட்டோயினின் பிஃபிட்ஸிங்கர் எதிர்வினை மூலம் தங்கள் சொந்த பிசிஏவை ஒருங்கிணைத்து, NaOH ஐ KOH க்கு மாற்றாக மாற்றினார், இல்லையெனில் லெசீன் மற்றும் ஹென்ஸின் செயற்கை முறையைப் பின்பற்றினார், ஏனெனில் அந்த நேரத்தில் வணிக விற்பனையாளர்களிடமிருந்து கிடைக்கும் பிசிஏ அவற்றின் பயன்பாட்டிற்கு மிகவும் தூய்மையற்றதாக இருந்தது. மதிப்பீட்டிற்கு போதுமான அளவு சுத்திகரிக்க 70 டிகிரி செல்சியஸ் தண்ணீரிலிருந்து அவற்றின் ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட பிசிஏவின் குறைந்தது மூன்று தொடர்ச்சியான மறு படிகமாக்கல்கள் தேவைப்பட்டன. வினையூக்கி பி 4 சதவீதம் டபிள்யூ/வி கியூஎஸ்ஓ 4·5எச்2ஓ மைக்ரோ பிசிஏ மதிப்பீடு (நீர்த்த கரைசல்களுக்கு) பிசிஏ மைக்ரோ பிசிஏ மதிப்பீடு என்பது 3-கூறு நெறிமுறையாகும், இது பியூரெட் எதிர்வினை, பிசிஏ மற்றும் செம்பு (II) வினையூக்கிகளின் செறிவூட்டப்பட்ட பங்குகளைப் பயன்படுத்துகிறது. இது அசல் பிசிஏ மதிப்பீட்டின் ~ 2-40 மைக்ரோ கிராம்/மில்லி மற்றும் 20-2000 மைக்ரோ கிராம்/மில்லி ஆகியவற்றின் மேம்பட்ட உணர்திறனை அனுமதிக்கிறது. இருப்பினும், இது ஒரு வித்தியாசமான, பொதுவாக மிகவும் உணர்திறன் வாய்ந்த, புரதம் அல்லாத கூறுகளின் குறுக்கீட்டைக் கொண்டுள்ளது. மைக்ரோ பிசிஏ மதிப்பீட்டிற்கான கருவிகள் குறைந்தது இரண்டு வணிக விற்பனையாளர்களிடமிருந்து கிடைக்கின்றன. குறிப்பிடத்தக்க வகையில், ஒரு "மைக்ரோ பிசிஏ உலை மற்றும் நெறிமுறை" இன் கலவை மற்றும் பயன்பாடு ஸ்மித் எழுதிய அசல் கையெழுத்துப் பிரதியில் விவரிக்கப்பட்டுள்ளது, மேலும் நவீன கருவிகள் ஒரு துல்லியமான அல்லது மிகவும் ஒத்த சூத்திரத்தைக் கொண்டிருக்கலாம். இந்த நெறிமுறையானது மைக்ரோ-உலை பி மற்றும் செம்பு கரைசல் 25:1 ஐக் கலந்து மைக்ரோ-உலை சி (எம்சி) ஐ உருவாக்குகிறது, இது அடுக்கு நிலையானது அல்ல, புதிதாகத் தயாரிக்கப்பட வேண்டும், பின்னர் எம்சி 1:1 ஐ மைக்ரோ-உலை ஏ உடன் கலந்து இறுதி (மேலும் நிலையற்ற) மதிப்பீட்டு வேலை செய்யும் கரைசலை உருவாக்குகிறது. மைக்ரோ-ரியாசென்ட் ஏ, மைக்ரோ-ரியாசென்ட் பி மற்றும் செம்பு கரைசல் ஆகியவை அறை வெப்பநிலையில் காலவரையின்றி நிலையானவை. மைக்ரோ-உலை ஏ (எம்ஏ) 8 சதவீதம் டபிள்யூ/வி நா2சிஓ3 · எச்2ஓ (சிஏஎஸ்ஃ 5968-11-6) 1.6 சதவீதம் டபிள்யூ/வி நா2 டார்ட்ரேட் (சிஏஎஸ்ஃ 1310-73-2) 1.6 சதவீதம் டபிள்யூ/வி நா2 டார்ட்ரேட் (சிஏஎஸ்ஃ 868-18-8) (மேலே உள்ள அசல் பிசிஏ மதிப்பீட்டில் உலை ஏ ஆக 10x செறிவு) போதுமான NaHCO3 (சிஏஎஸ்ஃ 144-55-8) pH ஐ 11.25 மைக்ரோ-உலை பி (எம்பி) 4 சதவீதம் டபிள்யூ/வி பிசிஏ-நா2 (சிஏஎஸ்ஃ 979-88-4) (மேலே உள்ள அசல் பிசிஏ மதிப்பீட்டில் உலை ஏ ஆக 4x செறிவு) காப்பர் எஸ் இது குறைக்கும் முகவர்களுடன் அதிக பொருந்தக்கூடிய தன்மையை அனுமதித்தாலும், மதிப்பீடு மற்ற புரதம் அல்லாத கூறுகளிலிருந்து வேறுபட்ட குறுக்கீடு சுயவிவரத்தைக் கொண்டுள்ளது. ரேபிட் கோல்டு பிசிஏ இந்த வகை பிசிஏ மதிப்பீடு தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிபிக் நிறுவனத்திடமிருந்து மட்டுமே கிடைக்கும் என்று தெரிகிறது. இது ஒரு தனித்துவமான [தனியுரிம] செம்பு செலேட்டருடன் பாரம்பரிய பிசிஏ புரத மதிப்பீட்டைப் போலவே அதே செம்பு குறைப்பு முறையைப் பயன்படுத்துகிறது. இது 562 நானோமீட்டருக்கு பதிலாக 480 நானோமீட்டரில் உறிஞ்சப்படுகிறது. இந்த உரிமையாளர் செலேட்டர் மற்றும் உகந்ததாக கருதப்படும் பியூரெட் எதிர்வினை உருவாக்கம் அசல் பிசிஏ மதிப்பீட்டின் 37 டிகிரி செல்சியஸ் + அடைகாப்பு இல்லாமல் விரைவான (<5 நிமிடம்) முடிவுகளை வழங்க மதிப்பீட்டை அனுமதிக்கிறது. இருப்பினும் மதிப்பீடு மற்ற புரதம் அல்லாத கூறுகளிலிருந்து வேறுபட்ட குறுக்கீடு சுயவிவரத்தைக் கொண்டுள்ளது. பியர்ஸ் அளவு வண்ண அளவீட்டு பெப்டைட் மதிப்பீடு (இப்போது தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிபிக் நிறுவனத்திற்குச் சொந்தமானது மற்றும் கிடைக்கக்கூடியது) இதே போன்ற அல்லது ஒத்த 480 என்எம் உறிஞ்சும் தனியுரிம செம்பு செலேட்டரைப் பயன்படுத்துவதாகத் தெரிகிறது. பியூரெட் சோதனை பிராட்போர்டு மதிப்பீடு கொலாயிடல் தங்க புரத மதிப்பீடு குறிப்புகள் வெளிப்புற இணைப்புகள் ஓபன்வெட்ட்வேர் பிசிஏ மதிப்பீடு வேதியியல் உயிர்வேதியியல் முறைகள் வேதியியல் சோதனைகள் டிஃ பிசின்கோனின்சோர்