PBR322
pBR322 ஒரு பிளாஸ்மிட் மற்றும் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் முதல் ஈ. கோலை குளோனிங் திசையன்களில் ஒன்றாகும். 1977 ஆம் ஆண்டில் சான் பிரான்சிஸ்கோவில் உள்ள கலிபோர்னியா பல்கலைக்கழகத்தில் ஹெர்பர்ட் பாயரின் ஆய்வகத்தில் உருவாக்கப்பட்டது, இது பிந்தைய முனைவர் ஆராய்ச்சியாளரான பிரான்சிஸ்கோ பொலிவர் ஜாபாட்டா மற்றும் ரேமண்ட் எல். ரோட்ரிக்ஸ் ஆகியோரின் பெயரால் பெயரிடப்பட்டது. பி என்பது "பிளாஸ்மிட்" மற்றும் பிஆர் என்பது "பொலிவர்" மற்றும் "ரோட்ரிக்ஸ்" ஆகியவற்றைக் குறிக்கிறது. pBR322 என்பது நீளத்தில் 4361 அடிப்படை ஜோடிகள் மற்றும் இரண்டு ஆண்டிபயாடிக் எதிர்ப்பு மரபணுக்களைக் கொண்டுள்ளது-ஆம்பிசிலின் எதிர்ப்பு (ஆம்பிஆர்) புரதத்தை குறியாக்கம் செய்யும் மரபணு ப்ளா மற்றும் டெட்ராசைக்ளின் எதிர்ப்பு (டெட்டர்) புரதத்தை குறியாக்கம் செய்யும் மரபணு டெட்டா. இது pMB1 இன் பிரதி உருவாக்கத்தின் தோற்றத்தையும், ரோப் மரபணுவையும் கொண்டுள்ளது, இது பிளாஸ்மிட் நகல் எண்ணின் கட்டுப்பாட்டாளரைக் குறியாக்கம் செய்கிறது. பிளாஸ்மிட்டில் நாற்பதுக்கும் மேற்பட்ட கட்டுப்பாட்டு என்சைம்களுக்கான தனித்துவமான கட்டுப்பாட்டு தளங்கள் உள்ளன. இந்த நாற்பது தளங்களில் பதினொரு தளங்கள் TETR மரபணுவிற்குள் உள்ளன. டெட்டர் மரபணுவின் ஊக்குவிப்பாளருக்குள் ஹிந்த் III மற்றும் கிளாய் என்ற கட்டுப்பாட்டு நொதிகளுக்கு இரண்டு தளங்கள் உள்ளன. இந்த ஆண்டிபயாடிக் எதிர்ப்பு மரபணுக்களின் மூலத்திற்குள் ஆறு முக்கிய கட்டுப்பாட்டு தளங்கள் உள்ளன, அவை டெட்ராசைக்ளினுக்கு பி. எஸ். சி 101 மற்றும் ஆம்பிசிலினுக்கு ஆர். எஸ். எஃப் 2124 ஆகும். 0 என்பது தனித்துவமான ஈக்கோஆர்ஐ தளத்தின் நடுவில் இருக்கும் வகையில் வட்ட வரிசை எண்ணப்படுகிறது மற்றும் டெட்டர் மரபணு மூலம் எண்ணிக்கை அதிகரிக்கிறது. உதாரணமாக, நாம் ஆம்பிசிலினை அகற்ற வேண்டுமானால், PstI க்கு எதிராக கட்டுப்பாடு எண்டோநியூக்ளீஸ் அல்லது மூலக்கூறு கத்தரிக்கோலைப் பயன்படுத்த வேண்டும், பின்னர் pBR322 ஆம்பிசிலினுக்கு எதிர்ப்புத் திறன் கொண்டதாக மாறும். செருகும் செயலிழப்பின் அதே செயல்முறையை டெட்ராசைக்ளினுக்கும் பயன்படுத்தலாம். ஆம்பிஆர் மரபணு பென்சிலின் பீட்டா-லாக்டமேஸ் ஆகும். ஊக்குவிப்பாளர்கள் பி1 மற்றும் பி3 ஆகியவை பீட்டா-லாக்டமேஸ் மரபணுவுக்கானவை. P3 என்பது இயற்கையான ஊக்குவிப்பு, மற்றும் P1 என்பது இரண்டு வெவ்வேறு டிஎன்ஏ துண்டுகளின் பிணைப்பால் செயற்கை முறையில் உருவாக்கப்பட்டு pBR322 ஐ உருவாக்குகிறது. பி 2 பி 1 இன் அதே பகுதியில் உள்ளது, ஆனால் இது எதிர் இழையில் உள்ளது மற்றும் டெட்ராசைக்ளின் எதிர்ப்பு மரபணுவின் திசையில் படியெடுத்தலைத் தொடங்குகிறது. பின்னணி ஆரம்பகால குளோனிங் சோதனைகள் கோல்இ 1 மற்றும் பி. எஸ். சி 101 போன்ற இயற்கை பிளாஸ்மிட்களைப் பயன்படுத்தி நடத்தப்படலாம். இந்த பிளாஸ்மிட்கள் ஒவ்வொன்றும் அதன் நன்மைகள் மற்றும் தீமைகளைக் கொண்டிருக்கலாம். எடுத்துக்காட்டாக, கோல்இ1 பிளாஸ்மிட் மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்கள் அதிக நகல் எண்ணின் நன்மையைக் கொண்டுள்ளன, மேலும் பிளாஸ்மிட்டின் குளோராம்ஃபெனிகோல் பெருக்கம் பிளாஸ்மிட்டின் அதிக விளைச்சலை உருவாக்க அனுமதிக்கிறது, இருப்பினும் கொலிசின் ஈ1 நோய் எதிர்ப்பு சக்திக்கான திரையிடல் தொழில்நுட்ப ரீதியாக எளிதானது அல்ல. சால்மோனெல்லா பனாமாவின் இயற்கையான பிளாஸ்மிட் பிளாஸ்மிட் பி. எஸ். சி 101, டெட்ராசைக்ளின் எதிர்ப்பை வழங்குகிறது, இது ஆண்டிபயாடிக் தேர்வுடன் எளிமையான ஸ்கிரீனிங் செயல்முறையை அனுமதிக்கிறது, ஆனால் இது குறைந்த நகல் எண் பிளாஸ்மிட் ஆகும், இது பிளாஸ்மிட்டின் அதிக விளைச்சலைக் கொடுக்காது. மற்றொரு பிளாஸ்மிட், ஆர். எஸ். எஃப் 2124, இது கோல்இ 1 இன் வழித்தோன்றலாகும், இது ஆம்பிசிலின் எதிர்ப்பை வழங்குகிறது, ஆனால் பெரியது. குளோனிங் நோக்கத்திற்காக சிறந்த ஒன்றை உருவாக்க பல பிளாஸ்மிட்கள் செயற்கை முறையில் கட்டப்பட்டன, மேலும் பிபிஆர் 322 பலரால் மிகவும் பல்துறை திறன் கொண்டதாக கண்டறியப்பட்டது, எனவே இது மிகவும் பிரபலமாக பயன்படுத்தப்பட்டது. இது இரண்டு ஆண்டிபயாடிக் எதிர்ப்பு மரபணுக்களைக் கொண்டுள்ளது, தேர்ந்தெடுக்கக்கூடிய குறிப்பான்கள் மற்றும் பல வசதியான தனித்துவமான கட்டுப்பாட்டு தளங்கள் ஒரு குளோனிங் திசையனாக பொருத்தமானவை. பிளாஸ்மிட் 3 முக்கிய மூலங்களிலிருந்து மரபணு பொருட்களுடன் கட்டப்பட்டது-பி. எஸ். சி 101 இன் டெட்ராசைக்ளின் எதிர்ப்பு மரபணு, ஆர். எஸ். எஃப் 2124 இன் ஆம்பிசிலின் எதிர்ப்பு மரபணு மற்றும் கோல்இ 1 பிளாஸ்மிட்டின் நெருங்கிய உறவினரான பி. எம். பி 1 இன் பிரதி கூறுகள். பிபிஆர் 322 ஐ அடிப்படையாகக் கொண்ட ஏராளமான பிற பிளாஸ்மிட்கள் பல்வேறு வகையான நோக்கங்களுக்காக குறிப்பாக வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளன. எடுத்துக்காட்டுகளில் பி. யூ. சி தொடர் பிளாஸ்மிட்கள் அடங்கும். எக்ஸ்ட்ரா குரோமோசோமல் புரத வெளிப்பாடு மற்றும் ஷட்டில் திசையன்களுக்கான பெரும்பாலான வெளிப்பாடு திசையன்கள் பிரதிபலிப்பின் pBR322 தோற்றத்தைக் கொண்டுள்ளன, மேலும் pBR322 இன் துண்டுகள் இன்ட்ரா ஸ்பீஷீஸ் ஷட்டில் அல்லது பைனரி திசையன்கள் மற்றும் குறிக்கோள் ஒருங்கிணைப்பு மற்றும் குரோமோசோமிலிருந்து டி. என். ஏவை அகற்றுவதற்கான திசையன்களின் கட்டுமானத்தில் மிகவும் பிரபலமாக உள்ளன. டிஎன்ஏ வரிசை pBR322 இல் உள்ள வரிசை மேலும் காண்க கட்டுப்பாடு நொதி வெட்டும் தளங்களின் பட்டியல் குறிப்புகள் வெளிப்புற இணைப்புகள் pBR322 வரைபடம் pBR322 அம்சங்கள் pBR322 டிஎன்ஏ நடமாடும் மரபணு கூறுகள் மூலக்கூறு உயிரியல் நுட்பங்கள் பிளாஸ்மிட்கள்