T7 expression system
டி7 வெளிப்பாடு அமைப்பு நுண்ணுயிரியல் துறையில் ஈ. கோலியின் விகாரங்களைப் பயன்படுத்தி மறுசீரமைப்பு டிஎன்ஏவை குளோன் செய்ய பயன்படுத்தப்படுகிறது. ஈ. கோலியில் மறுசீரமைப்பு புரதங்களை வெளிப்படுத்த இது மிகவும் பிரபலமான அமைப்பாகும். 2021 வாக்கில், இந்த அமைப்பு 220,000 க்கும் மேற்பட்ட ஆராய்ச்சி வெளியீடுகளில் விவரிக்கப்பட்டுள்ளது. வளர்ச்சி டி 7 பாக்டீரியோபேஜின் மரபணுவின் வரிசைமுறை மற்றும் சிறுகுறிப்பு 1980 களில் அமெரிக்க எரிசக்தித் துறையின் ப்ரூக்ஹேவன் தேசிய ஆய்வகத்தில் மூத்த உயிர் இயற்பியலாளர் எஃப். வில்லியம் ஸ்டூடியரின் கீழ் நடந்தது. விரைவில், ஆய்வகத்தால் டி 7 ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸை குளோன் செய்து, சக்திவாய்ந்த டி 7 விளம்பரதாரருடன் சேர்ந்து, கிட்டத்தட்ட எந்த மரபணுவின் ஏராளமான அளவுகளையும் படியெடுத்துப் பயன்படுத்த முடிந்தது. T7 வெளிப்பாடு முறையின் வளர்ச்சி ப்ரூக்ஹேவன் தேசிய ஆய்வகத்தில் உருவாக்கப்பட்ட மிகவும் வெற்றிகரமான உயிரி தொழில்நுட்பமாகக் கருதப்படுகிறது, இது 900 க்கும் மேற்பட்ட நிறுவனங்களால் உரிமம் பெற்றது, இது ஆய்வகத்திற்கு $55 மில்லியனுக்கும் அதிகமாக சம்பாதித்துள்ளது. ஒரு வெளிப்பாடு திசையன், பொதுவாக pET வெளிப்பாடு திசையன், இரண்டு அத்தியாவசிய கூறுகளை ஒருங்கிணைக்க வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளதுஃ ஒரு T7 ஊக்குவிப்பாளர் மற்றும் ஊக்குவிப்பாளரின் கீழ்நிலை மற்றும் அதன் கட்டுப்பாட்டின் கீழ் ஆர்வமுள்ள மரபணு. வெளிப்பாடு திசையன் ஈ. கோலியின் பல தொடர்புடைய விகாரங்களில் ஒன்றாக மாற்றப்படுகிறது, பெரும்பாலும் பிஎல் 21 (டிஇ 3). ஈ. கோலை செல் அதன் சொந்த குரோமோசோமைக் கொண்டுள்ளது, இது டி 7 ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸை உற்பத்தி செய்ய வெளிப்படும் ஒரு மரபணுவைக் கொண்டுள்ளது. (இந்த பாலிமரேஸ் T7 ஃபேஜ் என்ற பாக்டீரியோபேஜ் வைரஸிலிருந்து உருவாகிறது, இது ஈ. கோலை பாக்டீரியா உயிரணுக்களைப் பாதிக்கிறது மற்றும் அதன் டிஎன்ஏவை ஹோஸ்ட் டிஎன்ஏவுடன் ஒருங்கிணைக்கும் திறன் கொண்டது, அதே போல் அதன் செல்லுலார் இயந்திரங்களை மாற்றியமைத்து அதன் அதிக நகல்களை உற்பத்தி செய்கிறது. டி7 ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸ் என்பது மாற்றப்பட்ட திசையனின் டி7 ஊக்குவிப்பாளரிடம் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனைத் தொடங்குவதற்கு பொறுப்பாகும். T7 மரபணு ஒரு லாக் ஊக்குவிப்பாளரின் கட்டுப்பாட்டில் உள்ளது. பொதுவாக, லாக் ஊக்குவிப்பாளர் மற்றும் டி 7 ஊக்குவிப்பாளர் இருவரும் ஈ. கோலை செல்லில் லாக் ஒடுக்கியால் ஒடுக்கப்படுகிறார்கள். டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனைத் தொடங்க, ஒரு தூண்டுபவர் லாக் ஒடுக்கியுடன் பிணைக்க வேண்டும் மற்றும் டி 7 மரபணுவின் மரபணு வெளிப்பாட்டைத் தடுப்பதைத் தடுக்க வேண்டும். இது நடந்தவுடன், டி 7 ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸை உற்பத்தி செய்ய மரபணுவை பொதுவாக படியெடுத்துக்கொள்ளலாம். T7 ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸ், இதையொட்டி, வெளிப்பாடு திசையனில் உள்ள T7 விளம்பரதாரருடன் பிணைக்கப்பட்டு, அதன் கீழ்நிலை ஆர்வமுள்ள மரபணுவை படியெடுத்தல் தொடங்கலாம். இந்த செயல்முறையைத் தூண்டுவதற்கு, தூண்டல் ஐபிடிஜியை கணினியில் சேர்க்கலாம். ஐபிடிஜி என்பது அலோலாக்டோஸின் கட்டமைப்பைப் பிரதிபலிக்கும் ஒரு வினைப்பொருளாகும், எனவே இது லாக் ஒடுக்கியுடன் பிணைக்கப்பட்டு மரபணு வெளிப்பாட்டைத் தடுக்கிறது. போதுமான ஐபிடிஜி சேர்க்கப்பட்டவுடன், டி 7 மரபணு பொதுவாக படியெடுத்தல் செய்யப்படுகிறது, எனவே டி 7 விளம்பரதாரரின் ஆர்வமுள்ள மரபணுவின் கீழ்நிலைப் படியெடுத்தலும் தொடங்குகிறது. ஈ. கோலை ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸ் கட்டுப்பாட்டின் கீழ் உள்ள புரத வெளிப்பாட்டை விட டி7 விளம்பரதாரரின் கட்டுப்பாட்டின் கீழ் ஒரு மறுசீரமைப்பு புரதத்தின் வெளிப்பாடு 8 மடங்கு வேகமாக உள்ளது. உயிரணுவில் உள்ள டி7 ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸின் வெளிப்பாட்டின் அடிப்படை அளவுகளும் பாக்டீரியோபேஜ் டி7 லைசோசைமால் தடுக்கப்படுகின்றன, இதன் விளைவாக லைசோசைமிக் செயல்பாடு நிறைவுறும் வரை டி7 ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸ் குவிப்பதில் தாமதம் ஏற்படுகிறது. பயன்பாடு கோவிட்-19 தொற்றுநோய்களின் போது, வைரஸ் பரவுவதை எதிர்த்துப் போராடுவதற்காக மாடர்னா மற்றும் ஃபைசர் ஆகியோரால் எம்ஆர்என்ஏ தடுப்பூசிகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. மாடர்னா மற்றும் ஃபைசர் ஆகிய இரண்டும் தடுப்பூசிகளை உற்பத்தி செய்யத் தேவையான பெரிய அளவிலான எம்ஆர்என்ஏவை உருவாக்க டி 7 வெளிப்பாடு அமைப்பை நம்பியுள்ளன. குறிப்புகள் நுண்ணுயிரியல் குளோனிங்