Reversed-phase chromatography
தலைகீழ்-கட்ட திரவ நிறமூர்த்தம் (ஆர். பி.-எல். சி.) என்பது திரவ நிறமூர்த்தத்தின் ஒரு முறையாகும், இதில் துருவமற்ற நிலையான கட்டம் மற்றும் துருவ நடமாடும் கட்டங்கள் கரிம காமவுண்டுகளைப் பிரிக்கப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. சமீபத்திய ஆண்டுகளில் உயர் செயல்திறன் திரவ நிறமூர்த்தம்-எச். பி. எல். சி ஐப் பயன்படுத்தி பெரும்பாலான பிரிப்புகள் மற்றும் பகுப்பாய்வுகள் தலைகீழ் கட்ட முறையைப் பயன்படுத்தி செய்யப்படுகின்றன. தலைகீழ் கட்ட முறையில், மாதிரி கூறுகள் அமைப்பில் தக்கவைக்கப்படுகின்றன, அவை அதிக ஹைட்ரோபோபிக் ஆகும். தலைகீழ் கட்ட குரோமடோகிராஃபிக் அமைப்பில் கரைப்பான்களின் தக்கவைப்பு மற்றும் பிரிப்பை பாதிக்கும் காரணிகள் பின்வருமாறுஃ நிலையான கட்டத்தின் வேதியியல் தன்மை, அதாவது, அதன் மேற்பரப்பில் பிணைக்கப்பட்ட ஈந்தணைவிகள், அத்துடன் அவற்றின் பிணைப்பு அடர்த்தி, அதாவது அவற்றின் பரப்புதலின் அளவு. பி. நடமாடும் கட்டத்தின் கலவை. மொத்த கரைப்பான்களின் வகை, அவற்றின் கலவைகள் நடமாடும் கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை பாதிக்கின்றன, எனவே நடமாடும் கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை பாதிக்க ஒரு கரைப்பானுக்கான பெயர் மாற்றியமைப்பாளர் சேர்க்கப்பட்டது. சி. இடையகங்கள் போன்ற சேர்க்கைகள், நடமாடும் கட்டத்தின் pH ஐ பாதிக்கின்றன, இது கரைப்பான்களின் அயனியாக்கம் நிலை மற்றும் அவற்றின் துருவமுனைப்பை பாதிக்கிறது. கலவைகளில் கரிம கூறுகளைத் தக்கவைத்துக்கொள்வதற்காக, நெடுவரிசைகளுக்குள் நிரம்பியிருக்கும் நிலையான கட்டங்கள், ஒரு ஹைட்ரோபோபிக் அடி மூலக்கூறுகளைக் கொண்டுள்ளன, அவை பல்வேறு வடிவவியல்களில் (கோள, ஒழுங்கற்ற) நுண்ணிய சிலிக்கா-ஜெல் துகள்களின் மேற்பரப்புடன் பிணைக்கப்பட்டுள்ளன, வெவ்வேறு விட்டங்களில் (துணை-2,3,5,7,10 உம்), வெவ்வேறு துளை விட்டங்களுடன் (60,100,150,300, ஏ). துகள் மேற்பரப்பு C3, C4, C8, C18 போன்ற வேதியியல் பிணைக்கப்பட்ட ஹைட்ரோகார்பன்களால் மூடப்பட்டுள்ளது. நிலையான கட்டத்துடன் தொடர்புடைய ஹைட்ரோகார்பன் எவ்வளவு நீண்டதாக இருக்கிறதோ, மாதிரி கூறுகள் நீண்ட நேரம் தக்கவைக்கப்படும். சில நிலையான கட்டங்கள் ஹைட்ரோபோபிக் பாலிமெரிக் துகள்கள் அல்லது கலப்பின சிலிக்கா-கரிம குழுக்கள் துகள்களால் செய்யப்படுகின்றன, இதில் தீவிர pH இல் மொபைல் கட்டங்கள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. உயிரியல் மருத்துவப் பொருட்களைப் பிரிப்பதற்கான பெரும்பாலான தற்போதைய முறைகள் சி-18 நெடுவரிசைகளைப் பயன்படுத்துகின்றன, அவை சில நேரங்களில் ஓ. டி. எஸ் (ஆக்டாடெசைல்சிலேன்) அல்லது ஆர். பி-18 போன்ற வர்த்தகப் பெயர்களால் அழைக்கப்படுகின்றன. நடமாடும் நிலைகள் நீர் மற்றும் துருவ கரிம கரைப்பான்களின் கலவைகளாகும், அவற்றில் பெரும்பாலானவை மெத்தனால் மற்றும் அசிட்டோனிட்ரில் ஆகும். இந்த கலவைகள் பொதுவாக இடையகங்கள் (அசிடேட், பாஸ்பேட், சிட்ரேட்) மற்றும்/அல்லது சர்பாக்டண்டுகள் (அல்கைல் அமீன்கள் அல்லது அல்கைல் சல்போனேட்டுகள்) மற்றும்/அல்லது சிறப்பு சேர்க்கைகள் (EDTA) போன்ற பல்வேறு சேர்க்கைகளைக் கொண்டுள்ளன. ஒரு வகையான அல்லது மற்றொரு வகையான சப்ளிமெண்ட்ஸைப் பயன்படுத்துவதன் குறிக்கோள் செயல்திறன் மற்றும்/அல்லது தேர்ந்தெடுப்பதை அதிகரிப்பதும், கரைசல் தக்கவைப்பைக் கட்டுப்படுத்துவதும் ஆகும். மேஜர்ஸ், டோலன், கார் மற்றும் ஸ்னைடர் ஆகியோரின் ஒரு கட்டுரையில் விவரங்களில் விவரிக்கப்பட்டுள்ள தலைகீழ் கட்ட நிலையான கட்டங்களின் வரலாறு மற்றும் பரிணாமம் 1970 களில், பெரும்பாலான திரவ குரோமடோகிராஃபி ஓட்டங்கள் திடத் துகள்களை நிலையான கட்டங்களாகப் பயன்படுத்தி நிகழ்த்தப்பட்டன, அவை மாற்றப்படாத சிலிக்கா-ஜெல் அல்லது அலுமினாவால் செய்யப்பட்டன. இந்த வகை நுட்பம் இப்போது சாதாரண-கட்ட குரோமடோகிராஃபி என்று குறிப்பிடப்படுகிறது. இந்த நுட்பத்தில் நிலையான கட்டம் ஹைட்ரோஃபிலிக் மற்றும் நடமாடும் கட்டம் ஒரு துருவமாக இருப்பதால், ஹெக்ஸேன் மற்றும் ஹெப்டேன் போன்ற துருவமற்ற கரிம கரைப்பான்களைக் கொண்டிருப்பதால், மாதிரியில் ஹைட்ரோஃபிலிக் பண்புகளைக் கொண்ட உயிரணு மூலக்கூறுகள் நிலையான கட்டத்துடன் அதிக தொடர்பைக் கொண்டிருந்தன, எனவே அவை வலுவாக உறிஞ்சப்படுகின்றன. மேலும், அவை நடமாடும் கட்ட கரைப்பான்களில் எளிதில் கரைக்கப்படவில்லை. அதே நேரத்தில் ஹைட்ரோபோபிக் மூலக்கூறுகள் துருவ நிலையான கட்டத்துடன் குறைவான தொடர்பை அனுபவிக்கின்றன, மேலும் போதுமான தக்கவைப்பு இல்லாத நிலையில் அதன் வழியாக முன்கூட்டியே வெளியேறுகின்றன. 1970 களில் சிலிக்கா அடிப்படையிலான துகள்கள் ஹைட்ரோகார்பன்களுடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டு, அவற்றின் மேற்பரப்பில் அசையாமல் அல்லது பிணைக்கப்பட்டன, மேலும் உயிர் மருத்துவ பொருட்களுக்கு இடமளிக்க, நடமாடும் கட்டங்கள் இயற்கையில் நீர் மற்றும் துருவத்திற்கு மாற்றப்பட்டன. ஒரு ஹைட்ரோபோபிக் நிலையான கட்டம் மற்றும் துருவ மொபைல் கட்டங்களின் பயன்பாடு அடிப்படையில் சாதாரண கட்ட குரோமடோகிராஃபியின் தலைகீழ் ஆகும், ஏனெனில் மொபைல் மற்றும் நிலையான கட்டங்களின் துருவமுனைப்பு தலைகீழாக உள்ளது-எனவே தலைகீழ்-கட்ட குரோமடோகிராஃபி என்ற சொல். இதன் விளைவாக, துருவ நடமாடும் கட்டத்தில் உள்ள ஹைட்ரோபோபிக் மூலக்கூறுகள் ஹைட்ரோபோபிக் நிலையான கட்டத்திற்கு உறிஞ்சப்படுகின்றன, மேலும் மாதிரியில் உள்ள ஹைட்ரோஃபிலிக் மூலக்கூறுகள் நெடுவரிசை வழியாக சென்று முதலில் வெளியேற்றப்படுகின்றன. ஹைட்ரோபோபிக் மூலக்கூறுகள் ஒரு கரிம (துருவமற்ற) கரைப்பானைப் பயன்படுத்தி நடமாடும் கட்டத்தின் துருவமுனைப்பைக் குறைப்பதன் மூலம் நெடுவரிசையிலிருந்து வெளியேற்றப்படலாம், இது ஹைட்ரோபோபிக் தொடர்புகளைக் குறைக்கிறது. மூலக்கூறு எவ்வளவு ஹைட்ரோபோபிக் ஆக இருக்கிறதோ, அவ்வளவு வலுவாக அது நிலையான கட்டத்துடன் பிணைக்கப்படும், மேலும் மூலக்கூறை வெளியேற்றுவதற்கு தேவைப்படும் கரிம கரைப்பானின் செறிவு அதிகமாக இருக்கும். குரோமடோகிராஃபி கோட்பாட்டின் பல கணித அளவுருக்கள் மற்றும் பிற குரோமடோகிராஃபிக் முறைகளில் பயன்படுத்தப்படும் சோதனைக் கருத்தாய்வுகள் ஆர். பி.-எல். சி. க்கும் பொருந்தும் (எடுத்துக்காட்டாக, தேர்ந்தெடுக்கும் காரணி, குரோமடோகிராஃபிக் தீர்மானம், தட்டு எண்ணிக்கை போன்றவை). பல்வேறு வகையான மூலக்கூறுகளைப் பிரிக்க இது பயன்படுத்தப்படலாம். இது பொதுவாக புரதங்களைப் பிரிப்பதற்கு பயன்படுத்தப்படுகிறது, ஏனெனில் சாதாரண-கட்ட நிறமாற்றத்தில் பயன்படுத்தப்படும் கரிம கரைப்பான்கள் பல புரதங்களை சிதைக்கக்கூடும். இன்று, ஆர். பி-எல். சி என்பது அடிக்கடி பயன்படுத்தப்படும் பகுப்பாய்வு நுட்பமாகும். ஆர்பி-எல். சி. யில் பயன்படுத்துவதற்கு பல்வேறு வகையான நிலையான கட்டங்கள் உள்ளன, இது பிரிப்பு முறைகளின் வளர்ச்சியில் பெரும் நெகிழ்வுத்தன்மையை அனுமதிக்கிறது. சிலிக்கா அடிப்படையிலான நிலையான கட்டங்கள் சிலிக்கா ஜெல் துகள்கள் பொதுவாக உயர் செயல்திறன் திரவ நிறமாற்றத்தில் (எச். பி. எல். சி) ஒரு நிலையான கட்டமாக பல காரணங்களுக்காகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, அவற்றுள் பின்வருவன அடங்கும்ஃ உயர் மேற்பரப்பு பகுதிஃ சிலிக்கா ஜெல் துகள்கள் அதிக மேற்பரப்பு பரப்பளவைக் கொண்டுள்ளன, இது கரைப்பான்களுடன் நேரடி தொடர்புகளை அனுமதிக்கிறது அல்லது மாதிரி மூலக்கூறுகளுடன் பல்துறை தொடர்புகளுக்கு பல்வேறு வகையான ஈந்தணைவிகளின் பிணைப்புக்குப் பிறகு, சிறந்த பிரிவினைக்கு வழிவகுக்கிறது. இரசாயன மற்றும் வெப்ப நிலைத்தன்மை மற்றும் மந்தத்தன்மைஃ சிலிக்கா ஜெல் வேதியியல் ரீதியாக நிலையானது, ஏனெனில் இது வழக்கமாக நடமாடும் கட்டத்தின் கரைப்பான்கள் அல்லது சேர்மங்கள் பிரிக்கப்படுவதில்லை, இதன் விளைவாக துல்லியமான, மீண்டும் மீண்டும் செய்யக்கூடிய மற்றும் நம்பகமான பகுப்பாய்வுகள் ஏற்படுகின்றன. பரந்த பயன்பாடுஃ சிலிக்கா ஜெல் பல்துறை மற்றும் பல்வேறு செயல்பாட்டுக் குழுக்களுடன் மாற்றியமைக்கப்படலாம், இது பரந்த அளவிலான பகுப்பாய்வுகள் மற்றும் பயன்பாடுகளுக்கு ஏற்றது. திறமையான பிரிப்புஃ சிலிக்கா ஜெல் துகள்களின் தனித்துவமான பண்புகள், அவற்றின் உயர் மேற்பரப்பு பரப்பளவு மற்றும் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட சராசரி துகள் விட்டம் கொண்ட துளை அளவுடன் இணைந்து, எச். பி. எல். சி. யில் சேர்மங்களை திறம்பட மற்றும் துல்லியமாக பிரிக்க உதவுகிறது. இனப்பெருக்கத்தன்மைஃ சிலிக்கா ஜெல் துகள்கள் உயர் தொகுதி முதல் தொகுதி இனப்பெருக்கத்தன்மையை வழங்க முடியும், இது பல தசாப்தங்களாக நிலையான மற்றும் நம்பகமான எச். பி. எல். சி பகுப்பாய்வுகளுக்கு முக்கியமானது. துகள் விட்டம் மற்றும் துளை அளவு கட்டுப்பாடுஃ சிலிக்கா ஜெல் குறிப்பிட்ட துளை அளவுகளைக் கொண்டிருக்க வடிவமைக்கப்படலாம், இது மூலக்கூறு அளவின் அடிப்படையில் பிரிப்பதில் துல்லியமான கட்டுப்பாட்டை செயல்படுத்துகிறது. செலவு பயனுள்ளஃ சிலிக்கா பூமியில் மிகவும் ஏராளமான உறுப்பு, எனவே அதன் ஜெல் எச். பி. எல். சி பயன்பாடுகளுக்கு செலவு குறைந்த தேர்வாகும், இது ஆய்வகங்களில் பரவலாக ஏற்றுக்கொள்ளப்படுகிறது. யுனைடெட் ஸ்டேட்ஸ் பார்மகோபியா (யுஎஸ்பி) எச். பி. எல். சி நெடுவரிசைகளை எல் #வகைகளால் வகைப்படுத்தியுள்ளது. இந்த வகைப்பாட்டில் மிகவும் பிரபலமான நெடுவரிசை ஒரு ஆக்டாடெசைல் கார்பன் சங்கிலி (சி 18)-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா (யுஎஸ்பி வகைப்பாடு எல் 1) ஆகும். இதைத் தொடர்ந்து C8-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா (L7), தூய சிலிக்கா (L3), சயனோ-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா (CN) (L10) மற்றும் ஃபீனைல்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா (L11) உள்ளன. சி 18, சி 8 மற்றும் ஃபீனைல் ஆகியவை ஒதுக்கப்பட்ட தலைகீழ்-கட்ட நிலையான கட்டங்கள் என்பதை நினைவில் கொள்க, அதே நேரத்தில் சி. என் நெடுவரிசைகளை பகுப்பாய்வு மற்றும் மொபைல் கட்ட நிலைமைகளைப் பொறுத்து தலைகீழ்-கட்ட பயன்முறையில் பயன்படுத்தலாம். அனைத்து C18 நெடுவரிசைகளும் ஒரே மாதிரியான தக்கவைப்பு பண்புகளைக் கொண்டிருக்கவில்லை. சிலிக்காவின் மேற்பரப்பு செயல்பாட்டை மோனோமெரிக் அல்லது பாலிமெரிக் எதிர்வினையில் வெவ்வேறு குறுகிய சங்கிலி ஆர்கனோசிலேன்களுடன் இரண்டாவது கட்டத்தில் மீதமுள்ள சிலனால் குழுக்களை (எண்ட்-கேப்பிங்) மறைக்க பயன்படுத்தலாம். ஒட்டுமொத்த தக்கவைப்பு பொறிமுறை ஒரே மாதிரியாக இருக்கும்போது, வெவ்வேறு நிலையான கட்டங்களின் மேற்பரப்பு வேதியியல் நுட்பமான வேறுபாடுகள் தேர்ந்தெடுப்பில் மாற்றங்களுக்கு வழிவகுக்கும். நவீன நெடுவரிசைகள் நிலையான கட்டத்துடன் பிணைக்கப்பட்ட ஈந்தணைவியைப் பொறுத்து வெவ்வேறு துருவமுனைப்பைக் கொண்டுள்ளன. PFP என்பது பெண்டாஃப்ளூர்பீனைல் ஆகும். சிஎன் என்பது சயனோ ஆகும். NH2 என்பது அமினோ ஆகும். ODS என்பது ஆக்டாடெசைல் அல்லது C18 ஆகும். ODCN என்பது C18 மற்றும் நைட்ரைல் ஆகியவற்றைக் கொண்ட ஒரு கலப்பு முறை நெடுவரிசை ஆகும். குரோமடோகிராஃபிக் ஆதரவு மற்றும் திரவ குரோமடோகிராஃபிக் (எல். சி.) கருவிகளுக்கான சமீபத்திய முன்னேற்றங்கள் பல்வேறு நிலையான கட்ட வடிவவியல்களைப் பயன்படுத்தி விரைவான மற்றும் மிகவும் திறமையான பிரிப்புகளை எளிதாக்குகின்றன. பல்வேறு பகுப்பாய்வு உத்திகள் முன்மொழியப்பட்டுள்ளன, சிலிக்கா அடிப்படையிலான மோனோலிதிக் சப்போர்ட்கள், உயர்த்தப்பட்ட மொபைல் கட்ட வெப்பநிலை மற்றும் துணை-3 மைக்ரோமீட்டர் மேலோட்டமாக நுண்ணிய துகள்கள் (இணைக்கப்பட்ட அல்லது திடமான கோர்) அல்லது துணை-2 மைக்ரோமீட்டர் முழுமையாக நுண்ணிய துகள்களுடன் நிரம்பிய நெடுவரிசைகள் அல்ட்ரா-உயர் அழுத்த எல். சி அமைப்புகளில் (யு. எச். பி. எல். சி) பயன்படுத்தப்படுகின்றன. மொபைல் கட்டங்கள் தலைகீழ் கட்ட குரோமடோகிராஃபியில் மொபைல் கட்டத் தேர்வின் நவீன போக்குகள் மற்றும் சிறந்த நடைமுறைகள் குறித்த விரிவான கட்டுரை பாய்ஸ் மற்றும் டாங் ஆகியோரால் வெளியிடப்பட்டது. தலைகீழ் கட்ட குரோமடோகிராஃபியில் ஒரு நடமாடும் கட்டம் நீர் அல்லது நீரிய இடையகங்களின் கலவைகளைக் கொண்டுள்ளது, இதில் கரிம கரைப்பான்கள் சேர்க்கப்படுகின்றன, இது ஒரு தலைகீழ் கட்ட நெடுவரிசையிலிருந்து தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட முறையில் பகுப்பாய்வுகளை வெளியேற்றுகிறது. சேர்க்கப்பட்ட கரிம கரைப்பான்கள் தண்ணீருடன் கலக்கக்கூடியதாக இருக்க வேண்டும், மேலும் பயன்படுத்தப்படும் இரண்டு பொதுவான கரிம கரைப்பான்கள் அசிட்டோனிட்ரைல், மெத்தனால் ஆகும். எத்தனால் அல்லது 2-புரோபனால் (ஐசோபுரோபைல் ஆல்கஹால்) மற்றும் டெட்ராஹைட்ரோஃபுரான் (டி. எச். எஃப்) போன்ற பிற கரைப்பான்களையும் பயன்படுத்தலாம். கரிம கரைப்பான் ஒரு மாற்றியமைப்பவர் என்றும் அழைக்கப்படுகிறது, ஏனெனில் இது நடமாடும் கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை மாற்றுவதற்காக நடமாடும் கட்டத்தில் நீரிய கரைசலில் சேர்க்கப்படுகிறது. தலைகீழ் கட்ட நடமாடும் கட்டத்தில் நீர் மிகவும் துருவக் கரைப்பானாக உள்ளது, எனவே, மாற்றிகளைச் சேர்ப்பதன் மூலம் நடமாடும் கட்டத்தின் துருவமுனைப்பைக் குறைப்பது அதன் எல்யூஷன் வலிமையை மேம்படுத்துகிறது. அசிட்டோனிட்ரைல் மிகவும் பிரபலமான தேர்வாக இருந்தாலும், அசிட்டோனிட்ரைல் மற்றும் மெத்தனால் ஆகியவை மிகவும் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் இரண்டு கரிம மாற்றிகளாகும். ஐசோப்ரோபனால் (2-புரோபனால்) அதன் வலுவான எல்யூட்டிங் பண்புகள் காரணமாகவும் பயன்படுத்தப்படலாம், ஆனால் அதன் பயன்பாடு அதன் அதிக பாகுத்தன்மையால் மட்டுப்படுத்தப்பட்டுள்ளது, இதன் விளைவாக அதிக பின்னடைவுகள் ஏற்படுகின்றன. அசிட்டோனிட்ரில் மற்றும் மெத்தனால் இரண்டும் ஐசோப்ரோபனாலை விட குறைவான பிசுபிசுப்பு கொண்டவை, இருப்பினும் 50:50% மெத்தனால்ஃ நீரின் கலவையும் மிகவும் பிசுபிசுப்பானது மற்றும் அதிக பின்னடைவுகளை ஏற்படுத்துகிறது. மூன்று கரைப்பான்களும் அடிப்படையில் புற ஊதா வெளிப்படைத்தன்மை கொண்டவை. மாதிரி கூறுகள் பொதுவாக புற ஊதா கண்டறிதல்களால் கண்டறியப்படுவதால், பொதுவான தலைகீழ் கட்ட குரோமடோகிராஃபிக்கு இது ஒரு முக்கியமான பண்பு ஆகும். குறைந்த புற ஊதா அலைநீள வரம்பில் உள்ள மற்றவற்றை விட அசிட்டோனிட்ரைல் மிகவும் வெளிப்படையானது, எனவே பெப்டைடுகள் போன்ற பலவீனமான அல்லது குரோமோஃபர்கள் இல்லாத (புற ஊதா-விஐஎஸ் உறிஞ்சும் குழுக்கள்) மூலக்கூறுகளைப் பிரிக்கும் போது இது கிட்டத்தட்ட பிரத்தியேகமாக பயன்படுத்தப்படுகிறது. பெரும்பாலான பெப்டைடுகள் புற ஊதா நிறமாலையில் (பொதுவாக 225 நானோமீட்டருக்கும் குறைவான) குறைந்த அலைநீளங்களில் மட்டுமே உறிஞ்சப்படுகின்றன, மேலும் அசிட்டோனிட்ரைல் மற்ற பொதுவான கரைப்பான்களை விட குறைந்த அலைநீளங்களில் மிகக் குறைந்த பின்னணி உறிஞ்சுதலை வழங்குகிறது. நடமாடும் கட்டத்தின் pH ஒரு பகுப்பாய்வை தக்கவைப்பதில் முக்கிய பங்கு வகிக்க முடியும் மற்றும் சில பகுப்பாய்வுகளின் தேர்ந்தெடுக்கும் தன்மையை மாற்றலாம். அமின்கள், கார்பாக்சில்கள், பாஸ்பேட்டுகள், பாஸ்போனேட்டுகள், சல்பேட்டுகள் மற்றும் சல்போனேட்டுகள் போன்ற அயனியாக்கப்பட்ட செயல்பாட்டுக் குழுக்களுடன் கூடிய கரைசல்களைக் கொண்ட மாதிரிகளுக்கு, இந்த குழுக்களின் அயனியாக்கத்தை நடமாடும் கட்ட இடையகங்களைப் பயன்படுத்தி கட்டுப்படுத்தலாம். எடுத்துக்காட்டாக, கரைசல்களில் உள்ள கார்பாக்சிலிக் குழுக்கள் பெருகிய முறையில் எதிர்மறையாக சார்ஜ் செய்யப்படுகின்றன, ஏனெனில் நடமாடும் கட்டத்தின் pH அவற்றின் pKa ஐ விட அதிகமாக உயர்கிறது, எனவே முழு மூலக்கூறும் அதிக துருவமாக மாறுகிறது மற்றும் a-துருவ நிலையான கட்டத்தில் குறைவாக தக்கவைக்கப்படுகிறது. இந்த வழக்கில், கட்ட மொபைல் pH ஐ 4-5 = pH க்கு மேல் உயர்த்துவது (இது கார்பாக்சிலிக் குழுக்களுக்கான வழக்கமான pKa வரம்பாகும்) அவற்றின் அயனியாக்கத்தை அதிகரிக்கிறது, எனவே அவற்றின் தக்கவைப்பு குறைகிறது. மாறாக, 4 க்கும் குறைவான pH இல் ஒரு மொபைல் கட்டத்தைப் பயன்படுத்துவது அவற்றின் தக்கவைப்பை அதிகரிக்கும், ஏனெனில் இது அவற்றின் அயனியாக்க அளவைக் குறைத்து, அவற்றை குறைந்த துருவமாக மாற்றும். அமின்கள் போன்ற அடிப்படை செயல்பாட்டுக் குழுக்களைக் கொண்ட பொருட்களுக்கும் இதே கருத்துக்கள் பொருந்தும், அவற்றின் pKa வரம்புகள் சுமார் 8 மற்றும் அதற்கு மேல் இருக்கும், அவை அதிக அளவில் தக்கவைக்கப்படுகின்றன, ஏனெனில் நடமாடும் கட்டத்தின் pH அதிகரிக்கிறது, 8 மற்றும் அதற்கு மேல் நெருங்குகிறது, ஏனெனில் அவை குறைந்த அயனியாக்கம் செய்யப்பட்டவை, எனவே குறைந்த துருவமுனைப்பு. இருப்பினும், அதிக pH மொபைல் கட்டங்களில், பெரும்பாலான பாரம்பரிய சிலிக்கா ஜெல் அடிப்படையிலான தலைகீழ் கட்ட நெடுவரிசைகள் பொதுவாக pH 8 மற்றும் அதற்கு மேல் மொபைல் கட்டங்களில் பயன்படுத்துவதற்கு மட்டுப்படுத்தப்பட்டுள்ளன, எனவே, இந்த வரம்பில் அமீன்களை தக்கவைத்துக்கொள்வதற்கான கட்டுப்பாடு குறைவாக உள்ளது. இடையக வகையைத் தேர்ந்தெடுப்பது ஆர். பி-எல். சி முறை வளர்ச்சியில் ஒரு முக்கிய காரணியாகும், ஏனெனில் இது ஆர்வமுள்ள பகுப்பாய்வுகளின் தக்கவைப்பு, தேர்ந்தெடுப்பு மற்றும் தீர்மானத்தை பாதிக்கலாம். ஆர்பி-எச். பி. எல். சி. க்கான இடையகத்தைத் தேர்ந்தெடுக்கும்போது, கருத்தில் கொள்ள வேண்டிய பல காரணிகள் உள்ளன, அவற்றுள் பின்வருவன அடங்கும்ஃ மொபைல் கட்டத்தின் விரும்பிய pH: இடையகங்கள் அவற்றின் pKa மதிப்பைச் சுற்றி மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும், எனவே தேவையான மொபைல் கட்ட pH க்கு நெருக்கமாக இருக்கும் pKa உடன் ஒரு இடையகத்தைத் தேர்ந்தெடுப்பது முக்கியம். கரிம கரைப்பானில் இடையகத்தின் கரைதிறன்ஃ இடையகமானது நடமாடும் கட்டத்தில் பயன்படுத்தப்படும் கரிம கரைப்பானுடன் இணக்கமாக இருக்க வேண்டும், பெரும்பாலும் மேலே குறிப்பிடப்பட்ட பொதுவான கரிம கரைப்பான்கள், அசிட்டோனிட்ரைல், மெத்தனால் மற்றும் ஐசோப்ரோபனால் ஆகியவற்றுடன். இடையகத்தின் புற ஊதா வெட்டுஃ புற ஊதா கண்டறிதல் விஷயத்தில், இடையகத்தில் ஒரு புற ஊதா உறிஞ்சுதல் இருக்க வேண்டும், இது ஆர்வமுள்ள பகுப்பாய்வுகளின் கண்டறிதல் அலைநீளத்திற்குக் குறைவாக இருக்க வேண்டும். இது அந்த பகுப்பாய்வுகளைக் கண்டறிவதில் இடையூறு செய்வதிலிருந்து இடையகத்தைத் தடுக்கும். டிடெக்டருடன் இடையகத்தின் பொருந்தக்கூடிய தன்மைஃ வெகுஜன நிறமாலையியல் (எம்எஸ்) கண்டறிதலுக்கு பயன்படுத்தப்பட்டால், இடையகமானது வெகுஜன நிறமாலையியல் (எம்எஸ்) கருவியுடன் இணக்கமாக இருக்க வேண்டும். பாஸ்பேட் உப்புகளைக் கொண்டவை போன்ற சில இடையகங்களை எம்எஸ் டிடெக்டர்களுடன் பயன்படுத்த முடியாது, ஏனெனில் அவை தேவைக்கேற்ப கொந்தளிப்பாக இல்லை, மேலும் அவை அனலைட்டுகளின் அயனியாக்கத்தை அடக்குவதன் மூலம் எம்எஸ் கண்டறிதலில் தலையிடுகின்றன, இதனால் அவை எம்எஸ் மூலம் கண்டறியப்படாமல் போகின்றன. ஆர். பி.-எச். பி. எல். சி. யில் பயன்படுத்தப்படும் மிகவும் பொதுவான இடையகங்களில் சில பின்வருமாறுஃ பாஸ்பேட் இடையகங்கள்ஃ பாஸ்பேட் இடையகங்கள் பலவகையானவை மற்றும் 3 pKa மதிப்புகளுக்கு நன்றி, பரந்த அளவிலான pH மதிப்புகளை அடைய பயன்படுத்தப்படலாம். புற ஊதா கண்டறிதலுக்காக அவை மிகக் குறைந்த புற ஊதா பின்னணியையும் கொண்டுள்ளன. இருப்பினும், அவை எம்எஸ் கண்டறிதலுக்கு பொருத்தமானவை அல்ல. அசிட்டேட் இடையகங்கள்ஃ அசிட்டேட் இடையகங்களும் பன்முகத்தன்மை கொண்டவை மற்றும் பொதுவாக ஆர். பி-எல். சி. யில் பயன்படுத்தப்படும் பி. எச் மதிப்புகளின் வரம்பை அடைய பயன்படுத்தப்படலாம். 220 நானோமீட்டருக்கு குறைவான அலைநீளத்தில் புற ஊதாக் கதிர் கண்டறிதலைப் பொறுத்தவரை, அது அவ்வளவு சாதகமாக இல்லை. அம்மோனியம் அசிடேட் இடையகமானது எம். எஸ். உடன் இணக்கமானது. வடிவமைக்கப்பட்ட இடையகங்கள்ஃ வடிவமைக்கப்பட்ட இடையகங்கள் 225 என். எம். க்கு கீழ் பயன்படுத்தப்படும் pH இன் வரம்பு மற்றும் வரையறுக்கப்பட்ட புற ஊதா கண்டறிதலின் அடிப்படையில் அசிடேட் இடையகத்தைப் போலவே இருக்கும். அதன் அம்மோனியம் அசிடேட்டும் எம். எஸ் உடன் இணக்கமானது. அம்மோனியம் இடையகங்கள்ஃ அம்மோனியம் இடையகங்கள் கொந்தளிப்பானவை மற்றும் பெரும்பாலும் எல். சி-எம். எஸ் முறைகளில் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. குறைந்த புற ஊதா கண்டறிதலுக்கும் அவை வரையறுக்கப்பட்டுள்ளன. சார்ஜ் செய்யப்பட்ட பகுப்பாய்வுகளை அயனி-இணைப்பைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் தலைகீழ்-கட்ட நெடுவரிசையில் பிரிக்கலாம் (அயனி-தொடர்பு என்றும் அழைக்கப்படுகிறது). இந்த நுட்பம் தலைகீழ்-கட்ட அயனி-இணைக்கும் குரோமடோகிராஃபி என்று அழைக்கப்படுகிறது. எல்யூஷன் ஐகோக்ரடிக் முறையில் செய்யப்படலாம் (நீர்-கரைப்பான் கலவை பிரிப்பு செயல்பாட்டின் போது மாறாது) அல்லது ஒரு கரைசல் சாய்வைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் (நீர்-கரைப்பான் கலவை பிரிப்பு செயல்பாட்டின் போது மாறுகிறது, பொதுவாக துருவமுனைப்பைக் குறைப்பதன் மூலம்). நீரிய இயல்பான-கட்ட குரோமாடோகிராஃபி குறிப்புகள் வெளிப்புற இணைப்புகள் அட்டவணைகள் பல்வேறு வகையான தலைகீழ் கட்டங்களை சுருக்கமாகக் கூறுகின்றன, மேலும் செயல்பாட்டு செயல்முறை குரோமாடோகிராஃபி பற்றிய தகவல்களையும் பார்க்கவும்.