Peptide microarray
பெப்டைட் மைக்ரோஅரே (பொதுவாக பெப்டைட் சிப் அல்லது பெப்டைட் எபிடோப் மைக்ரோஅரே என்றும் அழைக்கப்படுகிறது) என்பது ஒரு திடமான மேற்பரப்பில் காட்டப்படும் பெப்டைடுகளின் தொகுப்பாகும், பொதுவாக ஒரு கண்ணாடி அல்லது பிளாஸ்டிக் சிப். பெப்டைட் சில்லுகள் உயிரியல், மருத்துவம் மற்றும் மருந்தியல் விஞ்ஞானிகளால் பிணைப்பு பண்புகள் மற்றும் செயல்பாடு மற்றும் பொதுவாக புரத-புரத தொடர்புகளின் இயக்கவியல் ஆகியவற்றை ஆய்வு செய்ய பயன்படுத்தப்படுகின்றன. அடிப்படை ஆராய்ச்சியில், பெப்டைட் மைக்ரோஅரேக்கள் பெரும்பாலும் ஒரு நொதியை (கைனேஸ், பாஸ்பேடேஸ், புரோட்டீஸ், அசிடைல் டிரான்ஸ்ஃபெரேஸ், ஹிஸ்டோன் டீசிடைலேஸ் போன்றவை) சுயவிவரப்படுத்த பயன்படுத்தப்படுகின்றன. ), ஒரு ஆன்டிபாடி எபிடோப்பை வரைபடமாக்க அல்லது புரத பிணைப்புக்கான முக்கிய எச்சங்களைக் கண்டறிய. செரோமார்க்கர் கண்டுபிடிப்பு, நோய் வளர்ச்சியின் போது தனிப்பட்ட நோயாளிகளின் மாறிவரும் நகைச்சுவையான நோயெதிர்ப்பு மறுமொழிகளின் விவரக்குறிப்பு, சிகிச்சை தலையீடுகளின் கண்காணிப்பு, நோயாளி அடுக்கமைப்பு மற்றும் நோயறிதல் கருவிகள் மற்றும் தடுப்பூசிகளின் வளர்ச்சி ஆகியவை நடைமுறை பயன்பாடுகளாகும். கோட்பாடு பெப்டைட் மைக்ரோஅரேக்களின் மதிப்பீட்டுக் கோட்பாடு ஒரு எலிசா நெறிமுறையைப் போன்றது. பெப்டைடுகள் (பல பிரதிகளில் பல்லாயிரக்கணக்கான வரை) ஒரு கண்ணாடி சில்லின் மேற்பரப்புடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன, பொதுவாக ஒரு நுண்ணோக்கி ஸ்லைடின் அளவு மற்றும் வடிவம். இந்த பெப்டைட் சிப்பை சுத்திகரிக்கப்பட்ட என்சைம்கள் அல்லது ஆன்டிபாடிகள், நோயாளி அல்லது விலங்கு செரா, செல் லைசேட்டுகள் போன்ற பல்வேறு உயிரியல் மாதிரிகளுடன் நேரடியாக அடைகாக்கலாம், பின்னர் ஒரு லேபிள் சார்ந்த பாணியின் மூலம் கண்டறியப்படலாம், எடுத்துக்காட்டாக, பிணைக்கப்பட்ட புரதத்தை குறிவைக்கும் முதன்மை ஆன்டிபாடி அல்லது மாற்றியமைக்கப்பட்ட அடி மூலக்கூறுகள். பல கழுவுதல் படிகளுக்குப் பிறகு, தேவையான குறிப்பிட்ட தன்மையுடன் கூடிய இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடி (எ. கா. ஆன்டி ஐஜிஜி மனித/சுட்டி அல்லது ஆன்டி பாஸ்போடைரோசின் அல்லது ஆன்டி மைக்) பயன்படுத்தப்படுகிறது. வழக்கமாக, இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடி ஒரு ஃப்ளோரசன்ஸ் லேபிளால் குறிக்கப்படுகிறது, இது ஒரு ஃப்ளோரசன்ஸ் ஸ்கேனர் மூலம் கண்டறியப்படலாம். மற்ற லேபிள் சார்ந்த கண்டறிதல் முறைகளில் வேதியியல் ஒளிச்சேர்க்கை, வண்ண அளவீட்டு அல்லது ஆட்டோராடியோகிராபி ஆகியவை அடங்கும். லேபிள் சார்ந்த மதிப்பீடுகள் விரைவாகவும் வசதியாகவும் செயல்படுகின்றன, ஆனால் தவறான நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறை முடிவுகளுக்கு வழிவகுக்கும் ஆபத்து உள்ளது. மிக சமீபத்தில், மேற்பரப்பு பிளாஸ்மன் அதிர்வு (எஸ். பி. ஆர்) ஸ்பெக்ட்ரோஸ்கோபி, மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி (எம். எஸ்) மற்றும் பல ஆப்டிகல் பயோசென்சர்கள் உள்ளிட்ட லேபிள் இல்லாத கண்டறிதல் ஒரு பரந்த அளவிலான நொதி செயல்பாடுகளை அளவிட பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளது. புரத மைக்ரோஅரேக்களை விட பெப்டைட் மைக்ரோஅரேக்கள் பல நன்மைகளைக் காட்டுகின்றனஃ எளிமை மற்றும் தொகுப்பின் செலவு விரிவாக்கப்பட்ட அடுக்கு நிலைத்தன்மையைக் கண்டறிதல் எபிடோப் மட்டத்தில் பிணைப்பு நிகழ்வுகளைக் கண்டறிதல், அதாவது. பெப்டைட் வரிசைக்கான நெகிழ்வான வடிவமைப்பைப் பரப்பும் எபிடோப் (அதாவது. மொழிபெயர்ப்புக்குப் பிந்தைய மாற்றங்கள், வரிசைப் பன்முகத்தன்மை, இயற்கைக்கு மாறான அமினோ அமிலங்கள்.) மற்றும் அசைவற்ற வேதியியல் உயர் தொகுதி முதல் தொகுதி இனப்பெருக்கம் பெப்டைட் மைக்ரோஅரேயின் உற்பத்தி ஒரு பெப்டைட் மைக்ரோஅரே என்பது பெப்டைடுகளைக் கொண்ட ஒரு பிளானர் ஸ்லைடு ஆகும், இது அதன் மீது காணப்படுகிறது அல்லது நேரடியாக மேற்பரப்பில் ஒருங்கிணைக்கப்பட்டுள்ளது. காணப்பட்ட பெப்டைடுகள் தரக் கட்டுப்பாடுகளுக்கு உட்படலாம், இதில் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமீட்டர் பகுப்பாய்வு மற்றும் செறிவு இயல்பாக்கம் ஆகியவை அடங்கும், இது ஒரு செயற்கை தொகுதியைக் கண்டுபிடிப்பதற்கு முன்பு மற்றும் மேற்பரப்பில் நேரடியாக ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட பெப்டைடுகள் தொகுதி-முதல்-தொகுதி மாறுபாடு மற்றும் வரையறுக்கப்பட்ட தரக் கட்டுப்பாட்டு விருப்பங்களால் பாதிக்கப்படலாம். இருப்பினும், சிப்பில் உள்ள பெப்டைட் தொகுப்பு பல்லாயிரக்கணக்கான பெப்டைடுகளின் இணையான தொகுப்பை அனுமதிக்கிறது, இது குறைந்த தொகுப்பு செலவுகளுடன் இணைக்கப்பட்ட பெரிய பெப்டைட் நூலகங்களை வழங்குகிறது. பெப்டைடுகள் ஒரு வேதியியல் தேர்ந்தெடுக்கும் பிணைப்பின் மூலம் சகப்பிணைப்புடன் இணைக்கப்படுகின்றன, இது தொடர்பு விவரக்குறிப்புக்கான அதே நோக்குநிலையுடன் பெப்டைடுகளுக்கு வழிவகுக்கிறது. சில மாற்று நடைமுறைகள் குறிப்பிட்ட சகப்பிணைப்பு மற்றும் பிசின் நிலைத்தன்மையை விவரிக்கின்றன. இருப்பினும், அதிகப்படியான இணைப்பு சுழற்சிகளின் சிக்கலை சமாளிக்க லித்தோகிராஃபிக் முறைகளைப் பயன்படுத்தலாம். லேசர் அச்சிடுவதன் மூலம் மைக்ரோசிப்பில் பெப்டைட் வரிசைகளின் ஒருங்கிணைந்த தொகுப்பு விவரிக்கப்பட்டுள்ளது, அங்கு ஒரு மாற்றியமைக்கப்பட்ட வண்ண லேசர் அச்சுப்பொறி வழக்கமான திட-கட்ட பெப்டைட் தொகுப்பு வேதியியலுடன் இணைந்து பயன்படுத்தப்படுகிறது. அமினோ அமிலங்கள் டோனர் துகள்களுக்குள் அசையாமல் உள்ளன, மேலும் பெப்டைடுகள் சிப் மேற்பரப்பில் தொடர்ச்சியான, ஒருங்கிணைந்த அடுக்குகளில் அச்சிடப்படுகின்றன. இணைப்பு எதிர்வினையின் தொடக்கத்தில் டோனரின் உருகுதல் அமினோ அமிலங்களின் விநியோகத்தையும் இணைப்பு எதிர்வினையையும் சுயாதீனமாக செய்ய முடியும் என்பதை உறுதி செய்கிறது. இந்த முறையின் மற்றொரு நன்மை என்னவென்றால், ஒவ்வொரு அமினோ அமிலத்தையும் தனித்தனியாக உற்பத்தி செய்து சுத்திகரிக்க முடியும், அதைத் தொடர்ந்து அதை டோனர் துகள்களில் உட்பொதிக்க முடியும், இது நீண்ட கால சேமிப்பை அனுமதிக்கிறது. பெப்டைட் மைக்ரோஅரேக்களின் பயன்பாடுகள் பெப்டைட் மைக்ரோரேக்கள் பல்வேறு வகையான புரத-புரத தொடர்புகளை ஆய்வு செய்ய பயன்படுத்தப்படலாம், குறிப்பாக பெப்டைட் அங்கீகார தொகுதிகள் எனப்படும் மட்டு புரத அடி மூலக்கூறுகளை உள்ளடக்கியது அல்லது, பொதுவாக, புரத தொடர்பு களங்கள். இதற்குக் காரணம் என்னவென்றால், இத்தகைய புரத அடி மூலக்கூறுகள் பிணைப்பு கூட்டாளியின் பூர்வீகமாக கட்டமைக்கப்படாத பகுதிகளில் பெரும்பாலும் வெளிப்படும் குறுகிய நேரியல் மையக்கருத்துக்களை அங்கீகரிக்கின்றன, அதாவது பெப்டைடுகளால் ஆய்வுகளாகவும், பெப்டைட் அங்கீகார தொகுதியை பகுப்பாய்வாகவும் விட்ரோவில் மாதிரியாக வடிவமைக்க முடியும். பெரும்பாலான வெளியீடுகள் நோயெதிர்ப்பு கண்காணிப்பு மற்றும் நொதி விவரக்குறிப்பு சூழலில் காணப்படுகின்றன. நோயெதிர்ப்புத் திறன் ஆன்டிஜென்கள் அல்லது முழு புரோட்டியோம்களில் நோயெதிர்ப்பு ஆதிக்கம் செலுத்தும் பகுதிகளின் வரைபடம் செரோமார்க்கர் கண்டுபிடிப்பு மருத்துவ பரிசோதனைகளின் கண்காணிப்பு ஆன்டிபாடி கையொப்பங்கள் மற்றும் எபிடோப் வரைபடத்தைக் கண்டறிதல் நடுநிலையான ஆன்டிபாடி என்சைம் விவரக்குறிப்பைக் கண்டறிதல் அனாதை என்சைம்களுக்கான அடி மூலக்கூறுகளை அடையாளம் காணுதல் அறியப்பட்ட என்சைம் அடி மூலக்கூறுகளை உகந்ததாக்குதல் சமிக்ஞை கடத்தல் பாதைகளை தெளிவுபடுத்துதல் அசுத்தமான என்சைம் செயல்பாடுகளைக் கண்டறிதல் ஒருமித்த வரிசை மற்றும் முக்கிய எச்சங்களை தீர்மானித்தல் சிக்கலான பகுப்பாய்வு மற்றும் முடிவுகளின் மதிப்பீட்டிற்குள் புரத-புரத தொடர்புகளுக்கான தளங்களை அடையாளம் காணுதல் ஒவ்வொரு மைக்ரோஅரே பரிசோதனையின் மிக முக்கியமான பகுதியாகும். மைக்ரோஅரே ஸ்லைடுகளை ஸ்கேன் செய்த பிறகு, ஸ்கேனர் ஒரு 20-பிட், 16-பிட் அல்லது 8-பிட் எண் படத்தை குறிக்கப்பட்ட பட கோப்பு வடிவத்தில் (*. tif) பதிவு செய்கிறது. டிஃப்-படம் ஸ்கேன் செய்யப்பட்ட மைக்ரோ அரே ஸ்லைடில் ஒவ்வொரு ஃப்ளோரசன்ட் இடத்தின் விளக்கத்தையும் அளவீட்டையும் செயல்படுத்துகிறது. இந்த அளவு தரவு அளவிடப்பட்ட பிணைப்பு நிகழ்வுகள் அல்லது மைக்ரோ அரே ஸ்லைடில் பெப்டைட் மாற்றங்கள் குறித்த புள்ளிவிவர பகுப்பாய்வு செய்வதற்கான அடிப்படையாகும். கண்டறியப்பட்ட சமிக்ஞைகளின் மதிப்பீடு மற்றும் விளக்கத்திற்கு பெப்டைட் ஸ்பாட் (படத்தில் தெரியும்) மற்றும் அதனுடன் தொடர்புடைய பெப்டைட் வரிசையின் ஒதுக்கீடு செய்யப்பட வேண்டும். ஒதுக்கீட்டிற்கான தரவு பொதுவாக ஜெனீபிக்ஸ் அரே லிஸ்ட் (. gal) கோப்பில் சேமிக்கப்பட்டு பெப்டைட் மைக்ரோ அரேவுடன் வழங்கப்படுகிறது. . gal-கோப்பு (ஒரு தாவல்-பிரிக்கப்பட்ட உரைக் கோப்பு) மைக்ரோ அரே அளவீட்டு மென்பொருள்-தொகுதிகளைப் பயன்படுத்தி திறக்கப்படலாம் அல்லது உரை எடிட்டருடன் செயலாக்கப்படலாம் (எ. கா. நோட்பேட்) அல்லது மைக்ரோசாப்ட் எக்ஸெல். இந்த "கேல்" கோப்பு பெரும்பாலும் மைக்ரோ அரே உற்பத்தியாளரால் வழங்கப்படுகிறது மற்றும் மைக்ரோ அரே உற்பத்தியைச் செய்யும் ரோபோக்களில் கட்டமைக்கப்பட்ட உள்ளீட்டு டிஎக்ஸ்டி கோப்புகள் மற்றும் கண்காணிப்பு மென்பொருளால் உருவாக்கப்படுகிறது. குறிப்புகள் உயிரியல் நுட்பங்கள் மற்றும் கருவிகள் நோயெதிர்ப்பு நுண்ணுயிரிகள் புரத முறைகள்