SOS chromotest
SOS குரோமோட்டஸ்ட் என்பது இரசாயன சேர்மங்களின் மரபணு நச்சு திறனை மதிப்பிடுவதற்கான ஒரு உயிரியல் மதிப்பீடாகும். இந்த சோதனை ஒரு வண்ண அளவீட்டு மதிப்பீடாகும், இது எஸ்செரிச்சியா கோலியில் உள்ள மரபணு நச்சு முகவர்களால் தூண்டப்பட்ட மரபணுக்களின் வெளிப்பாட்டை அளவிடுகிறது, இது β-கேலக்டோசிடேஸுக்கான கட்டமைப்பு மரபணுவுடன் இணைவதன் மூலம். சோதனை மாதிரிகளின் அதிக செறிவுகளுடன் 96-கிணறு மைக்ரோபிளேட்டின் நெடுவரிசைகளில் சில மணிநேரங்களுக்கு இந்த சோதனை செய்யப்படுகிறது. இந்த சோதனை மரபணு நச்சுத்தன்மைக்கான பாரம்பரிய அமெஸ் சோதனை மதிப்பீட்டிற்கு ஒரு நடைமுறை நிரப்பு அல்லது மாற்றாக உருவாக்கப்பட்டது, இதில் அகர் தட்டுகளில் வளர்ந்து வரும் பாக்டீரியாக்கள் மற்றும் இயற்கையான பிறழ்வு விகிதங்களை சாத்தியமான பிறழ்வு சேர்மங்கள் அல்லது மாதிரிகளால் வெளிப்படும் பாக்டீரியாவின் பிறழ்வு விகிதங்களுடன் ஒப்பிடுவது ஆகியவை அடங்கும். எஸ்ஓஎஸ் குரோமோட்டஸ்ட் துல்லியம் மற்றும் உணர்திறன் ஆகியவற்றில் அமேஸ் சோதனை போன்ற நிறுவப்பட்ட முறைகளுடன் ஒப்பிடத்தக்கது மற்றும் மேலும் ஆழமான பகுப்பாய்விற்கு இரசாயனங்களை தனிமைப்படுத்துவதற்காக, மனிதர்களில் புற்றுநோயை ஏற்படுத்தக்கூடியதாக நிரூபிக்கக்கூடிய மரபணு நச்சு சேர்மங்களைத் திரையிட ஒரு பயனுள்ள கருவியாகும். பிற பாக்டீரியா ஜென்டோக்சிசிட்டி மற்றும் முடஜெனிசிட்டி மதிப்பீடுகளைப் போலவே, செயல்பாட்டிற்கு வளர்சிதை மாற்ற செயல்பாடு தேவைப்படும் சேர்மங்களையும் எஸ் 9 மைக்ரோசோமல் எலி கல்லீரல் சாற்றைச் சேர்ப்பதன் மூலம் ஆராய முடியும். மரபணு நச்சு சேர்மங்களுக்கு ஈ. கோலியின் பதிலில் எஸ்ஓஎஸ் பதில் ஒரு முக்கிய பங்கைக் கொண்டுள்ளது, ஏனெனில் இது பரந்த அளவிலான இரசாயன முகவர்களுக்கு பதிலளிக்கிறது. இந்த அமைப்பைத் தூண்டுவது டிஎன்ஏ சேதத்தின் ஆரம்ப அறிகுறியாகப் பயன்படுத்தப்படலாம் மற்றும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. எஸ்ஓஎஸ் பதிலில் இரண்டு மரபணுக்கள் முக்கிய பங்கு வகிக்கின்றனஃ லெக்ஸ்ஏ அமைப்பில் உள்ள அனைத்து மரபணுக்களுக்கும் ஒரு ஒடுக்கியை குறியாக்கம் செய்கிறது, மேலும் எஸ்ஓஎஸ் தூண்டுதல் சமிக்ஞையால் செயல்படுத்தப்படும் போது லெக்ஸ்ஏ ஒடுக்கியை பிளவுபடுத்தக்கூடிய புரதத்தை ரீக்ஏ குறியாக்கம் செய்கிறது (இந்த விஷயத்தில் ஒரு மரபணு நச்சு கலவை இருப்பதால் ஏற்படுகிறது). எஸ்ஓஎஸ் பதிலின் சரியான வழிமுறை இன்னும் தெரியவில்லை என்றாலும், டிஎன்ஏ புண்கள் டிஎன்ஏ பிரதிபலிப்பைத் தடுக்கும்போது அல்லது நிறுத்தும்போது இது தூண்டப்படுகிறது. . பல்வேறு இறுதிப் புள்ளிகள் எஸ்ஓஎஸ் அமைப்பைத் தூண்டுவதற்கான சாத்தியமான குறிகாட்டிகளாகும்; ரெக்கா புரதத்தை செயல்படுத்துதல், லெக்ஸ்ஏ ஒடுக்கியின் பிளவு, ஏதேனும் எஸ்ஓஎஸ் மரபணுக்களின் வெளிப்பாடு போன்றவை. எளிதான மதிப்பீடுகளில் ஒன்று, ஈ. கோலை β-கேலக்டோசிடேஸின் கட்டமைப்பு மரபணு லாக்இசட் உடன் இணைவதன் மூலம் ஒரு எஸ்ஓஎஸ் மரபணுவின் வெளிப்பாட்டைக் கண்காணிப்பதாகும். செயல்முறை எஸ். ஓ. எஸ் குரோமோட்டஸ்ட் என்பது ஈ. கோலியை சோதனை செய்ய வேண்டிய இரசாயனத்தின் அதிக செறிவுகளுடன் அடைகாக்குவதைக் கொண்டுள்ளது. புரதத் தொகுப்புக்கான நேரத்தை அனுமதித்த பிறகு, β-கேலக்டோசிடேஸ் செயல்பாடு ஒரு எளிய வண்ண அளவீட்டு மதிப்பீட்டைப் பயன்படுத்தி மதிப்பீடு செய்யப்படுகிறது. சீரழிந்தவுடன் ஒரு வண்ணச் சேர்மத்தை விளைவிக்கும் லாக்டோஸ் அனலாக்கைச் சேர்ப்பதன் மூலம், நிறத்தில் எளிதில் கவனிக்கக்கூடிய அல்லது அளவிடக்கூடிய மாற்றம் ஒரு அளவீடாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. ரசாயன சோதனை அதிக செறிவுகளில் புரதத் தொகுப்பைத் தடுக்கக்கூடும் என்பதால், இது பி-கேலக்டோசிடேஸ் தூண்டலை குறைத்து மதிப்பிடுவதற்கு வழிவகுக்கும் என்பதால், ஆல்கலைன் பாஸ்பேடேஸ் β-கேலக்டோசிடேஸுடன் ஒரே நேரத்தில் மதிப்பீடு செய்யப்படுகிறது. மதிப்பீட்டை பல மணிநேரங்களில் எளிதாக முடிக்க முடியும். ஒரு மைக்ரோ-பிளேட் ரீடரைப் பயன்படுத்தினால், சோதனை அளவு மற்றும் டோஸ்-ரெஸ்பான்ஸ் வளைவுகள் ஆரம்ப நேரியல் பகுதியைக் கொண்டுள்ளன. இந்த நேரியல் பகுதியின் சாய்வு ஒவ்வொரு சேர்மத்தையும் ஒரு ஒற்றை அளவுருவான எஸ்ஓஎஸ்-தூண்டுதல் ஆற்றல் (எஸ்ஓஎஸ்ஐபி) உடன் சந்தேகத்திற்கு இடமின்றி இணைக்க அனுமதிக்கிறது, இது சேர்மத்தின் தூண்டுதல் செயல்பாட்டை பிரதிபலிக்கிறது. இந்த மதிப்பீடு திரையிடல் நோக்கங்களுக்காக ஒரு தரமான (வண்ண சாய்வின் புலப்படும் அவதானிப்பு) அல்லது பொதுவாக ஏற்றுக்கொள்ளப்பட்ட அளவீடுகளின் கணக்கீட்டிற்கான அளவு அளவீட்டு (ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமெட்ரி) ஆகிய இரண்டையும் வழங்குகிறது. அளவு மதிப்பீட்டில், ஒரு சேர்மத்தின் டோஸ்-ரெஸ்பான்ஸ் (பீட்டா-கேலக்டோசிடேஸ் உற்பத்தியுடன் இணைக்கப்பட்ட வண்ண உற்பத்தி) திட்டமிடப்பட்டுள்ளது, ஆரம்ப நேரியல் பகுதியின் சாய்வு ஒரு உலகளாவிய அளவுருவாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது, எஸ்ஓஎஸ்-தூண்டுதல் ஆற்றல் (எஸ்ஓஎஸ்ஐபி), இது எஸ்ஓஎஸ் பதிலைத் தூண்டும் ஒரு சேர்மத்தின் திறனைப் பிரதிபலிக்கிறது (பீட்டா-கேலக்டோசிடேஸ் உற்பத்தி மற்றும் லாக்டோஸ் அனலாக் முறிவு மூலம் மறைமுகமாக அளவிடப்படுகிறது). பொதுவாக, லாக்டோஸ் அனலாக் எக்ஸ்-கால் ஆகும், இது பீட்டா-கேலக்டோசிடேஸால் பிளவுபடுத்தப்படும்போது நீல நிறத்தை உருவாக்குகிறது. டோஸ் பதில் உயிரணுக்களின் உயிர்வாழ்வின் மூலம் அளவிடப்படுகிறது, இது அல்கலைன் பாஸ்பேடேஸின் முறிவு மூலம் அளவிடப்படுகிறது (இது ஒரு மஞ்சள் நிறத்தை உருவாக்குகிறது), இது எஸ்ஓஎஸ்ஐபி கணக்கீட்டை அனுமதிக்கிறது. எஸ்ஓஎஸ்ஐபி ஒரு செறிவு அடிப்படையிலான மெட்ரிக் என்றாலும், செறிவு அல்லது ஆர்வமுள்ள சேர்மங்கள் கூட அறியப்படாத சிக்கலான சுற்றுச்சூழல் கலவைகளுக்கு அதே முறையைப் பயன்படுத்தலாம். இடைநிலை எஸ்ஓஎஸ்-தூண்டல் காரணியை (எஸ்ஓஎஸ்ஐஎஃப்) கணக்கிடுவதன் மூலம், மாதிரிகளின் பகுப்பாய்வு அளவீடுகள் இல்லாமல் டோஸ்-பதிலைப் பற்றிய ஒரு விளக்கப்படத்தை வழங்குவதற்காக அதே முறையில் நீர்த்தலுக்கு எதிராக திட்டமிட முடியும். நன்மைகள் எஸ்ஓஎஸ் குரோமோட்டஸ்ட் மரபணு நச்சுத்தன்மைக்கான மிக எளிய மற்றும் விரைவான குறுகிய கால சோதனையாக கருதப்படுகிறது. இது பல காரணங்களுக்காக பாரம்பரிய அமெஸ் சோதனைக்கு ஒரு பயனுள்ள மற்றும் செலவு குறைந்த நிரப்பாக செயல்படுகிறது. முதலாவதாக, அதன் எளிமை மற்றும் வேகம் காரணமாக, எஸ்ஓஎஸ் குரோமோட்டஸ்ட் அதிக எண்ணிக்கையிலான மரபணு நச்சு சேர்மங்களுக்கான திரையிடல் சோதனையாக பயன்படுத்தப்படலாம். இரண்டாவதாக, இது ஜீனோடாக்ஸிக் இரசாயனங்களைக் கண்டறிய அனுமதிக்கலாம், அவை அமெஸ் சோதனையில் தவறான எதிர்மறைகளை அளிக்கின்றன (எஸ்ட்ராடியோல் போன்றவை, வளர்ந்து வரும் கவலையின் கலவை). மூன்றாவதாக, அமெஸ் சோதனையில் தவறான நேர்மறை முடிவுகளை பாகுபாடு காட்ட இது ஒரு பயனுள்ள முறையை நிரூபிக்க முடியும். குறிப்புகள் உயிரியல் நுட்பங்கள் மற்றும் கருவிகள் மரபியல் சோதனைகள்