MCherry
எம் செர்ரி என்பது மோனோமெரிக் ரெட் ஃப்ளோரசன்ட் புரதங்களின் (எம். ஆர். எஃப். பி) எம்ஃப்ரூட் குடும்பத்தைச் சேர்ந்தது. ஒரு ஆர். எஃப். பி. யாக, எம் செர்ரி டிஸ்கோசோமா கடல் அனிமோன்களின் டிஎஸ் ரெட்டில் இருந்து பெறப்பட்டது, இது பச்சை ஃப்ளோரசன்ட் புரதங்களைப் (ஜி. எஃப். பி) போலல்லாமல் பெரும்பாலும் ஈக்வோரியா விக்டோரியா ஜெல்லிமீன்களிலிருந்து பெறப்படுகிறது. ஃப்ளோரசன்ட் புரதங்கள் உயிரணுவில் உள்ள கூறுகளைக் குறிக்கப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, எனவே அவை ஃப்ளோரசன்ஸ் ஸ்பெக்ட்ரோஸ்கோபி மற்றும் ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி ஆய்வு செய்யப்படலாம். mCherry 540-590 nm க்கு இடையில் ஒளியை உறிஞ்சி, 550-650 nm வரம்பில் ஒளியை வெளியிடுகிறது. mCherry என்பது ஃப்ளோரசன்ட் புரத குரோமோபோர்களின் குழுவைச் சேர்ந்தது, இது மரபணுக்களைக் காட்சிப்படுத்துவதற்கும் சோதனைகளில் அவற்றின் செயல்பாடுகளை பகுப்பாய்வு செய்வதற்கும் கருவிகளாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. பல வேறுபட்ட உயிரினங்களின் மரபணு பொருட்களில் இந்த ஒளிரும் புரதக் குறிச்சொற்களை துல்லியமாக செருகுவதன் மூலம் மரபணு எடிட்டிங் பெரிதும் மேம்படுத்தப்பட்டுள்ளது. வெவ்வேறு ஃப்ளோரசன்ட் புரதங்களின் பிரகாசம் மற்றும் ஒளி நிலைத்தன்மைக்கு இடையிலான பெரும்பாலான ஒப்பீடுகள் இன் விட்ரோவில் செய்யப்பட்டுள்ளன, அவை உயிரணுக்கள் அல்லது உயிரினங்களில் புரத செயல்திறனை பாதிக்கும் உயிரியல் மாறிகளிலிருந்து அகற்றப்படுகின்றன. விட்ரோவில் செல்லுலார் சூழல்களை சரியாக உருவகப்படுத்துவது கடினம், மேலும் சூழலில் உள்ள வேறுபாடு பிரகாசம் மற்றும் ஒளி நிலைத்தன்மை ஆகியவற்றில் தாக்கத்தை ஏற்படுத்தக்கூடும். எம். ஆர். எஃப். பி. க்கள்-எம் செர்ரி போன்றவை-பயனுள்ளதாக இருக்கும், ஏனெனில் அவை குறைந்த மூலக்கூறு எடையைக் கொண்டுள்ளன, மேலும் அவை டெட்ராமர்களை விட வேகமாக மடிக்கும், இதன் விளைவாக இலக்கு அமைப்பின் இடையூறு குறைகிறது. வளர்ச்சி டிஎஸ் ரெட் டிஸ்கோசோமா கடல் அனிமோன்களிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்படுகிறது, மேலும் இது ஒரு டெட்ராமெரிக் புரதமாகும். பெரும்பாலான சிவப்பு ஒளிரும் புரதங்கள் டிஎஸ் ரெட்டில் இருந்து வருகின்றன. டிஎஸ் ரெட் குறைந்த ஒளி நிலைத்தன்மை (கதிர்வீச்சு ஆற்றல் அல்லது ஒளியின் செல்வாக்கின் கீழ் மாற்றத்திற்கு எதிர்ப்பு) மற்றும் மெதுவான முதிர்வு விகிதம் (பாதி புரதம் மடிக்கப்படும் வரை நேரம்) ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளது. mRFP1 என்பது DsRed இலிருந்து பெறப்பட்டது மற்றும் இது ஒரு மோனோமர் ஆகும், எனவே இது சிறியது, ஆனால் அதன் குவாண்டம் மகசூல் மற்றும் ஒளி நிலைத்தன்மை DsRed ஐ விட குறைவாக உள்ளது. எம் செர்ரி மற்றும் பிற எம்ஃப்ரூட்கள் டிஎஸ் ரெட் மற்றும் எம்ஆர்எஃப்பி 1 ஆகிய இரண்டையும் விட மேம்பட்ட பிரகாசம் மற்றும் ஒளி நிலைத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளன. ராபர்ட் இ காம்ப்பெல் என்பவரால் எம்ஆர்எஃப்பி1 இலிருந்து இயக்கப்படும் பரிணாமத்தின் மூலம் எம்செர்ரி உருவாக்கப்பட்டது. பொதுவாக எம்ஃப்ரூட்கள் உருவாக்கப்பட்டன, ஏனெனில் மற்ற ஆந்தோசோவான்களிலிருந்து வெவ்வேறு வண்ண புரதங்களைக் காண முடிந்தாலும், புரதங்கள் பெரும்பாலும் டெட்ராமர்களாக இருக்கும், அவை பெரும்பாலும் டிஎஸ் ரெட் போன்ற பிரச்சினைகளைக் கொண்டிருக்கும். இந்த டெட்ராமர்களுக்கு பயனுள்ள இணைவு கூட்டாளிகளாக மாற்றுவதற்காக டிஎஸ் ரெட் செய்யப்பட்டதைப் போன்ற வழித்தோன்றல்கள் செய்யப்பட வேண்டும். இதன் விளைவாக, கிளர்ச்சி மற்றும் உமிழ்வு அலைநீளங்களை சரிசெய்வதற்காக முக்கிய அமினோ அமிலங்களை சரிசெய்வதன் மூலம் எம். ஆர். எஃப். பி 1 இலிருந்து எம்ஃப்ரூட்கள் பெறப்பட்டன. வெவ்வேறு நிறங்கள் வெவ்வேறு உயிரணு வகைகள், டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் செயல்பாடு மற்றும் புரதங்களில் இணைவு ஆகியவற்றைக் கண்காணிக்க அனுமதிக்கின்றன. mCherry, உருவாக்கப்பட்ட அனைத்து உண்மையான மோனோமர்களிலும், மிக நீண்ட அலைநீளங்கள், மிக உயர்ந்த ஒளி நிலைத்தன்மை, வேகமான முதிர்ச்சி, சிறந்த pH எதிர்ப்பு மற்றும் அதன் கிளர்ச்சி மற்றும் உமிழ்வு அதிகபட்சத்தில் mRFP1 க்கு மிக அருகில் உள்ளது. இருப்பினும், mRFP1 ஐ விட mCherry குறைந்த அளவு விளைச்சலைக் கொண்டுள்ளது. கட்டமைப்பு mCherry க்கான மரபணு 711bp நீளம் கொண்டது, மேலும் புரதம் 26.722 kDa வெகுஜனத்துடன் 236 எச்சங்களால் ஆனது. mCherry இன் படிக அமைப்பு 2006 இல் தீர்மானிக்கப்பட்டது. இதில் 3 ஆல்பா ஹெலிக்ஸ் மற்றும் 13 பீட்டா தாள்கள் உள்ளன, அவை பீட்டா பீப்பாயை உருவாக்குகின்றன. எம் செர்ரியில் உள்ள குரோமோபோர் மெத்தியோனின், டைரோசின் மற்றும் கிளைசின் ஆகிய மூன்று அமினோ அமிலங்களால் ஆனது, அவை மொழிபெயர்ப்புக்கு பிந்தைய ஒரு இமிடாசோலினோனாக மாற்றப்படுகின்றன. இந்த எச்சங்களின் எண்ணிக்கை முறையே 71,72 மற்றும் 73 ஆகும். நீட்டிக்கப்பட்ட பை-எலக்ட்ரான் இணைவு mCherry க்கு அதன் சிவப்பு-மாற்றப்பட்ட உறிஞ்சுதல் மற்றும் உமிழ்வை அளிக்கிறது. குரோமோபோர் ஒரு மைய ஹெலிக்ஸிலிருந்து உருவாகிறது, இது 11-இழைகள் கொண்ட பீட்டா பீப்பாயில் கரைப்பானில் இருந்து பாதுகாக்கப்படுகிறது. இந்த அமைப்பு DsRed இன் மூன்றாம் நிலை கட்டமைப்பைப் போலவே உள்ளது, இது 11-இழைகள் கொண்ட பீட்டா பீப்பாயையும் கொண்டுள்ளது, மேலும் இது GFP களின் மூன்றாம் நிலை கட்டமைப்பைப் போன்றது. இது டிஎஸ் ரெட்டின் குரோமோபோரைச் சுற்றியுள்ள சூழலை விட எம் செர்ரியில் உள்ள குரோமோபோரைச் சுற்றியுள்ள சூழலை அதிக ஹைட்ரோபோபிக் ஆக்குகிறது. mCherry இல் உள்ள இறுதி முனையம் GFP-போன்றது, இது GFP ஐப் பயன்படுத்தக்கூடிய மற்றும் mRFP1 ஐப் பயன்படுத்த முடியாத அமைப்புகளில் இணைக்க அனுமதிக்கிறது. எம் செர்ரி ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியில் ஒரு ஊடுருவல் ஆய்வாக பயன்படுத்தப்படுகிறது. இருப்பினும், ஒரு புரதம் ஒரு ஃப்ளோரசன்ட் புரதத்துடன் இணைவதன் மூலம் குறிக்கப்படும்போது, அவற்றுக்கிடையேயான தொடர்புகள் இலக்கு அல்லது செயல்பாட்டை விரும்பத்தகாத வகையில் தொந்தரவு செய்யலாம். அமைப்பு மரபணு வெளிப்பாடு விரும்பப்படும் இடத்தில் mCherry மதிப்பிடப்படுகிறது, மேலும் பிற சோதனை அணுகுமுறைகளுக்கு பல மரபணுக்களின் ஒருங்கிணைந்த கட்டுப்பாடு தேவைப்படுகிறது. ஈ. கோலை மற்றும் பிற மாதிரிகளில் பயன்படுத்த பல இடங்கள் உருவாக்கப்பட்டிருந்தாலும், அத்தகைய நுட்பங்களின் பயன்பாடு மற்றும் செயல்பாடு எப்போதும் மற்ற இனங்களுக்கு மொழிபெயர்க்கப்படுவதில்லை. எடுத்துக்காட்டாக, கிராம்-நெகட்டிவ் நோய்க்கிருமிக்கு, லெஜியோனெல்லா நியூமோஃபிலா, லெஜியோனியர்ஸ் நோய்க்கான ஒரு திசையன், பி. டி. ஏ. சி அமைப்பு மட்டுமே நன்கு நிறுவப்பட்ட வெளிப்பாடு கட்டுப்பாட்டு அமைப்பைக் குறிக்கிறது. எல். நியூமோஃபிலாவில் பாக்டீரியா மரபணு வெளிப்பாட்டைப் படிக்க கிடைக்கக்கூடிய கருவிகளை மேம்படுத்துவதற்காக, எம் செர்ரி உருவாக்கப்பட்டது, இது ஒரு பிறழ்ந்த லேசி பிணைப்பு தளத்திலிருந்து அமைப்பு மரபணு வெளிப்பாட்டை வழங்குகிறது. செர்ரி மற்ற பிளாஸ்மிட்களுடன் தலையிடுவதில்லை, இது ஒரு அப்படியே லேசி-பி. டி. ஏ. சி வெளிப்பாடு அமைப்பை அடைத்து வைக்கிறது அல்லது செல்களுக்குள் வளர்ச்சியின் போது லெஜியோனெல்லா இனங்களின் வளர்ச்சியை மாற்றாது. mCherry இன் பரந்த-புரவலன் வரம்பு பிளாஸ்மிட் முதுகெலும்பு பல்வேறு வகையான கிராம்-நெகட்டிவ் பாக்டீரியா இனங்களில் அமைப்பு மரபணு வெளிப்பாட்டை அனுமதித்தது, இது mCherry ஐ அதிக ஆராய்ச்சி சமூகத்திற்கு ஒரு பயனுள்ள கருவியாக மாற்றியது. இது ஒரு நீண்ட அலைநீளம் ஹெட்டோரோ-எஃப். ஆர். இ. டி (ஃப்ளோரசன்ஸ் அதிர்வு ஆற்றல் பரிமாற்றம்) ஏற்பியாகவும், ஹோமோ-எஃப். ஆர். இ. டி சோதனைகளுக்கான ஆய்வாகவும் பயன்படுத்தப்படலாம். FRET என்பது ஒரு வகை ஃப்ளோரசன்ஸ் ஆற்றல் பரிமாற்றமாகும், அங்கு இடைநிலை ஃபோட்டான் இல்லை மற்றும் ஆற்றல் நன்கொடையாளரிடமிருந்து ஏற்பவருக்கு மாற்றப்படுகிறது. பாக்டீரியாவை ஆண்டிபயாடிக் அழுத்தம் இல்லாமல் காட்சிப்படுத்த அவற்றை முத்திரை குத்தவும் பயன்படுத்தலாம். பிற ஆர்எஃப்பி மற்றும் எம்ஃப்ரூட்கள் அசல் ஆர்எஃப்பிஃ டிஎஸ் ரெட் முதல் தலைமுறை ஆர்எஃப்பிஃ எம்ஆர்எஃப்பி1 இரண்டாவது தலைமுறை ஆர்எஃப்பிஃ எம்ஸ்ட்ராபெரி, எம்ஓரேஞ்ச், டி டொமேட்டோ எம்ஃப்ரூட்கள் இரண்டாம் தலைமுறை மோனோமெரிக் ரெட் ஃப்ளோரசன்ட் புரதங்கள் (எம்ஆர்எஃப்பி) ஆகும், அவை முதல் தலைமுறை எம்ஆர்எஃப்பி1 உடன் ஒப்பிடும்போது மேம்பட்ட பிரகாசம் மற்றும் ஒளி நிலைத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளன. அவற்றின் உமிழ்வு மற்றும் கிளர்ச்சி அலைநீளங்கள் முறையே சுமார் 550−650 மற்றும் 540−590 நானோமீட்டர் வரம்பில் விநியோகிக்கப்படுகின்றன. இருப்பினும், அவற்றின் நிறமாலையில் உள்ள மாறுபாடுகளை ஒரு சில முக்கிய அமினோ அமிலங்களில் காணலாம். மொராஞ்ச், எம்ஸ்ட்ராபெரி மற்றும் எம்செர்ரி ஆகிய மூன்று பிரதிநிதிகளின் ஸ்பெக்ட்ரோஸ்கோபிக் மற்றும் அணு தெளிவுத்திறன் படிகவியல் பகுப்பாய்வுகள், கிளர்ச்சி மற்றும் உமிழ்வு அதிகபட்சத்தை நிறுவ வெவ்வேறு வழிமுறைகள் செயல்படுகின்றன என்பதை வெளிப்படுத்துகின்றன. இரண்டாவது ஆக்சிஜனேற்ற நடவடிக்கையின் கீழ், ஒவ்வொரு எம்ஃப்ரூடும் பாலிபெப்டைட் முதுகெலும்பில் ஒரு அசைலிமைன் இணைப்பை உருவாக்குகிறது. முன்னோடியான டிஎஸ் ரெட் உடன் ஒப்பிடுகையில், இந்த இணைப்புக்கு நேரடி சகப்பிணைப்பு மாற்றம் (எம்ஓரேஞ்ச்) மற்றும் குரோமோஃபோர் சூழலின் மறைமுக மாற்றம் (எம்ஸ்ட்ராபெரி மற்றும் எம்செர்ரி) வலுவான நீல மற்றும் சிவப்பு-மாற்றப்பட்ட வகைகளை உருவாக்குகிறது. மொராஞ்சின் நீல மாற்றம் அதன் புரத முதுகெலும்பு ஒரு சகப்பிணைப்பு மாற்றத்தால் தூண்டப்படுகிறது. எலக்ட்ரான்-அடர்த்தி வரைபடம் பாலிப்பெப்டைட் முதுகெலும்பு உடன் Thr 66 Oγ வினைபுரியும் போது, 2-ஹைட்ராக்ஸி-டைஹைட்ரூஆக்ஸசோல் என்ற மூன்றாவது ஹீட்டோரோசைக்கிள் உருவாகுவதைக் குறிக்கிறது, இதையொட்டி கார்போனைல் நிலை 65 இல் மற்ற குரோமோஃபோருடன் இணைவதைக் குறைக்கிறது. mStrawberry மற்றும் mCherry இல், சார்ஜ் செய்யப்பட்ட Lys 70 இன் இயக்கம் மற்றும் Glu 215 இன் புரோட்டானேஷன் ஆகியவை குரோமோபோர் எலக்ட்ரான்-அடர்த்தி விநியோகத்தை மாற்றியமைக்க முன்மொழியப்பட்டுள்ளன, இது அவற்றின் கையொப்ப சிவப்பு மாற்றத்தைத் தூண்டுகிறது. குறிப்புகள் ஃப்ளோரசன்ட் புரதங்கள் வீடியோ கிளிப்களைக் கொண்ட கட்டுரைகள் வெளிப்புற இணைப்புகள் fpbase இல் mCherry, ஒரு ஃப்ளோரசன்ட் புரத தரவுத்தளத்தில்