Hi-C (genomic analysis technique)
ஹை-சி (அல்லது நிலையான ஹை-சி) என்பது 2009 ஆம் ஆண்டில் லீபர்மேன்-ஐடன் மற்றும் பலர் முதன்முதலில் விவரித்த உயர்-செயல்திறன் கொண்ட மரபணு மற்றும் எபிஜெனோமிக் நுட்பமாகும். குரோமாட்டின் இணக்கத்தை பிடிக்க. பொதுவாக, 3 சி (குரோமோசோம் இணக்கம் பிடிப்பு), 4 சி (குரோமோசோம் இணக்கம் பிடிப்பு-மீது-சிப்/வட்ட குரோமோசோம் இணக்கம் பிடிப்பு), மற்றும் 5 சி (குரோமோசோம் இணக்கம் கார்பன் நகலைப் பிடிக்கிறது) உள்ளிட்ட ஆனால் அவை மட்டுமல்லாமல் குரோமோசோம் இணக்கம் பிடிப்பு தொழில்நுட்பங்களின் தொடர்ச்சியின் வழித்தோன்றலாக ஹை-சி கருதப்படுகிறது. 3சி மற்றும் அடுத்த தலைமுறை வரிசைமுறை (என்ஜிஎஸ்) அணுகுமுறைகளை இணைப்பதன் மூலம் செல் அணுக்கருவில் உள்ள மரபணு அளவிலான குரோமாட்டின் தொடர்புகளை ஹை-சி விரிவாகக் கண்டறிகிறது, மேலும் சி-தொழில்நுட்பத்தின் (குரோமோசோம் இணக்கம் பிடிப்பு அடிப்படையிலான தொழில்நுட்பங்கள்) வளர்ச்சி மற்றும் 3டி மரபியல் தொடக்கத்தில் ஒரு தரமான பாய்ச்சலாக இது கருதப்படுகிறது. கிளாசிக் 3 சி நுட்பத்தைப் போலவே, ஹை-சி அதிர்வெண்ணை அளவிடுகிறது (ஒரு செல் மக்கள்தொகையின் சராசரியாக) இதில் இரண்டு டிஎன்ஏ துண்டுகள் 3 டி இடத்தில் உடல் ரீதியாக தொடர்புபடுத்தப்படுகின்றன, இது குரோமோசோம் கட்டமைப்பை நேரடியாக மரபணு வரிசையுடன் இணைக்கிறது. ஹை-சி இன் பொதுவான செயல்முறை ஃபார்மால்டிஹைடைப் பயன்படுத்தி குரோமாட்டின் பொருளை முதலில் குறுக்கு இணைப்பதை உள்ளடக்கியது. பின்னர், குரோமாட்டின் கரைக்கப்பட்டு துண்டு துண்டாகிறது, மேலும் ஊடாடும் இருப்பிடங்கள் ஒன்றாக மீண்டும் இணைக்கப்பட்டு சிமெரிக் டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளின் மரபணு நூலகத்தை உருவாக்குகின்றன. இந்த சிமெராஸ் அல்லது பிணைப்பு தயாரிப்புகளின் ஒப்பீட்டளவில் மிகுதியானது, அந்தந்த குரோமாட்டின் துண்டுகள் செல் மக்கள் தொகை முழுவதும் 3D இடத்தில் தொடர்பு கொள்வதற்கான நிகழ்தகவுடன் தொடர்புடையது. ஆர்வமுள்ள குரோமோசோம் பகுதிகளின் இணக்கம் குறித்த "ஒன்றுக்கு எதிராக சில" விசாரணைகளை வழங்குவதற்கு முன்னரே தீர்மானிக்கப்பட்ட மரபணு இருப்பிடங்களின் தொகுப்பின் பகுப்பாய்வில் 3 சி கவனம் செலுத்துகிறது, ஹை-சி பிணைப்புக்கு முன் பயோடினைலேட்டட் நியூக்ளியோடைடுடன் அனைத்து துண்டு துண்டான குரோமாடினையும் முத்திரை குத்துவதன் மூலம் "ஆல்-வெர்சஸ்-ஆல்" தொடர்பு விவரக்குறிப்பை செயல்படுத்துகிறது. இதன் விளைவாக, பயோட்டின் குறிக்கப்பட்ட பிணைப்பு சந்திப்புகளை ஸ்ட்ரெப்டாவிடின் பூசப்பட்ட காந்த மணிகள் மூலம் மிகவும் திறமையாக சுத்திகரிக்க முடியும், மேலும் ஹை-சி நூலகத்தின் நேரடி வரிசைமுறை மூலம் குரோமாட்டின் தொடர்பு தரவைப் பெற முடியும். ஹை-சி தரவுகளின் பகுப்பாய்வுகள் பாலூட்டி குரோமோசோம்களின் ஒட்டுமொத்த மரபணு கட்டமைப்பை வெளிப்படுத்துவதோடு மட்டுமல்லாமல், குரோமாட்டின் உயிர் இயற்பியல் பண்புகள் மற்றும் தொலைதூர மரபணு கூறுகளுக்கு இடையிலான குறிப்பிட்ட, நீண்ட தூர தொடர்புகள் பற்றிய நுண்ணறிவுகளையும் வழங்குகின்றன (எ. கா. மரபணுக்கள் மற்றும் ஒழுங்குமுறை கூறுகளுக்கு இடையில்). சமீப ஆண்டுகளில், உயிரணு வளர்ச்சி மற்றும் பிரிவு, டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ஒழுங்குமுறை, விதி நிர்ணயம், வளர்ச்சி, நோய் மற்றும் மரபணு பரிணாமம் உள்ளிட்ட பல்வேறு வகையான உயிரியல் துறைகளில் ஹை-சி அதன் பயன்பாட்டைக் கண்டறிந்துள்ளது. குரோமாட்டின் மாற்றங்களின் மரபணு அளவிலான வரைபடங்கள் மற்றும் மரபணு வெளிப்பாடு சுயவிவரங்கள் போன்ற பிற தரவுத்தொகுப்புகளுடன் ஹை-சி தரவை இணைப்பதன் மூலம், மரபணு ஒழுங்குமுறை மற்றும் ஸ்திரத்தன்மையில் குரோமாட்டின் இணக்கத்தின் செயல்பாட்டு பாத்திரங்களையும் வரையறுக்க முடியும். அதன் தொடக்கத்தில், ஹை-சி என்பது குறைந்த தெளிவுத்திறன், உயர் சத்தம் தொழில்நுட்பமாகும், இது 1 மில்லியன் அடிப்படை ஜோடிகள் (எம்பி) தொட்டி அளவிற்குள் குரோமாட்டின் தொடர்பு பகுதிகளை மட்டுமே விவரிக்கும் திறன் கொண்டது. ஹை-சி நூலகத்தை உருவாக்க பல நாட்கள் தேவைப்பட்டன, மேலும் தரவுத்தொகுப்புகள் வெளியீடு மற்றும் இனப்பெருக்கம் ஆகிய இரண்டிலும் குறைவாக இருந்தன. ஆயினும்கூட, ஹை-சி தரவு குரோமாட்டின் இணக்கம் மற்றும் அணு மற்றும் மரபணு கட்டமைப்புகளுக்கான புதிய நுண்ணறிவுகளை வழங்கியது, மேலும் இந்த வாய்ப்புகள் கடந்த தசாப்தத்தில் நுட்பத்தை மாற்றுவதற்கான முயற்சிகளை மேற்கொள்ள விஞ்ஞானிகளை ஊக்குவித்தன. 2012 மற்றும் 2015 க்கு இடையில், ஹை-சி நெறிமுறையில் பல மாற்றங்கள் செய்யப்பட்டுள்ளன, 4-கட்டர் செரிமானம் அல்லது அதிக தெளிவுத்திறனைப் பெறுவதற்கு ஆழமான வரிசைமுறை ஆழத்தைத் தழுவின. அடிக்கடி வெட்டப்படும் கட்டுப்பாடு எண்டோநியூக்ளியேஸ்களின் பயன்பாடு, அல்லது டி. என். ஏ. சி. ஐ மற்றும் மைக்ரோகோக்கல் நியூக்ளியேஸ்கள் முறையின் தெளிவுத்திறனை கணிசமாக அதிகரித்தன. மிக சமீபத்தில் (2017), பெலாக்சல் மற்றும் பலர். கிலோபேஸ் (kb) தெளிவுத்திறனை அடைய முடிந்த ஒரு ஹை-சி 2 நெறிமுறையை விவரித்தார். அடிப்படை நெறிமுறைக்கான முக்கிய தழுவல், செரிமானத்திற்குப் பிறகு எஸ். டி. எஸ் கரைத்தல் படிநிலையை அகற்றுவதாகும், இது அணு கட்டமைப்பைப் பாதுகாக்கவும், சிதைந்த குரோமாடினுக்கு இடையில் சீரற்ற பிணைப்பு மூலம் சீரற்ற கருக்களுக்குள் பிணைப்பைத் தடுக்கவும், இது இன் சிட்டு ஹை-சி இன் அடிப்படையை உருவாக்கியது. 2021 ஆம் ஆண்டில், ஹை-சி 3 ஐ லாஃபோன்டைன் மற்றும் பலர் விவரித்தனர், ஃபார்மால்டிஹைடுடன் குறுக்கு இணைப்பை மேம்படுத்துவதன் மூலம் அதிக தெளிவுத்திறன் அடையப்பட்டது, அதைத் தொடர்ந்து டிஸுசினிமைடைல் குளூட்டரேட் (டி. எஸ். ஜி). ஃபார்மால்டிஹைட் புரதங்கள் மற்றும் டிஎன்ஏ ஆகிய இரண்டின் அமினோ மற்றும் அமினோ குழுக்களைப் பிடிக்கிறது, டிஎஸ்ஜியில் உள்ள என்ஹெச்எஸ்-எஸ்டர்கள் புரதங்களில் முதன்மை அமீன்களுடன் வினைபுரிகின்றன மற்றும் அமீன்-அமீன் தொடர்புகளைப் பிடிக்க முடியும். அடிப்படை நெறிமுறைக்கான இந்த புதுப்பிப்புகள் விஞ்ஞானிகள் குரோமோசோம் கம்பார்ட்மெண்ட் மற்றும் டோபோலாஜிக்கல் அசோசியேட்டிங் டொமைன்கள் (டிஏடி) போன்ற விரிவான இணக்க கட்டமைப்புகளையும், டிஎன்ஏ லூப்கள் போன்ற உயர் தெளிவுத்திறன் கொண்ட இணக்க அம்சங்களையும் பார்க்க அனுமதித்தன. இன்றுவரை, ஹை-சி இன் பல்வேறு வழித்தோன்றல்கள் ஏற்கனவே வெளிவந்துள்ளன, இதில் சிட்டு ஹை-சி, லோ ஹை-சி, சேஃப் ஹை-சி மற்றும் மைக்ரோ-சி ஆகியவை அடங்கும், நிலையான ஹை-சி இன் பல்வேறு அம்சங்களுடன் தொடர்புடைய தனித்துவமான அம்சங்களுடன், ஆனால் அடிப்படை கொள்கை அப்படியே உள்ளது. பாரம்பரிய ஹை-சி முதலில் லிபர்மேன்-ஐடன் மற்றும் பலர் வெளியிட்டனர். 2009 ஆம் ஆண்டில், கிளாசிக்கல் ஹை-சி பணிப்பாய்வின் அவுட்லைன் பின்வருமாறுஃ செல்கள் ஃபார்மால்டிஹைடுடன் குறுக்கு-இணைக்கப்பட்டுள்ளன; குரோமாட்டின் 5 'ஓவர்ஹாங்கை உருவாக்கும் ஒரு கட்டுப்பாட்டு நொதியுடன் செரிக்கப்படுகிறது; 5' ஓவர்ஹாங் பயோடினைலேட்டட் தளங்களால் நிரப்பப்படுகிறது மற்றும் இதன் விளைவாக அப்பட்டமான-முனை டிஎன்ஏ இணைக்கப்படுகிறது. சந்திப்பில் பயோட்டின் கொண்ட பிணைப்பு தயாரிப்புகள், ஸ்ட்ரெப்டாவிடினைப் பயன்படுத்துவதற்குத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டு, அடுத்தடுத்த வரிசைமுறை முயற்சிகளுக்குத் தயாராக ஒரு நூலகத்தைத் தயாரிக்க மேலும் செயலாக்கப்படுகின்றன. ஹை-சி மரபணு முழுவதும் பிடிக்கக்கூடிய ஜோடி வாரியான தொடர்புகள் மகத்தானவை, எனவே பொதுவான மக்கள்தொகையில் ஒரு சிறுபான்மையினரில் மட்டுமே காணக்கூடிய தனித்துவமான தொடர்புகளைப் பிடிக்க, பொருத்தமான பெரிய மாதிரி அளவை பகுப்பாய்வு செய்வது முக்கியம். உயர் தெளிவுத்திறன் மற்றும் தரவுகளின் ஆழத்தை உறுதி செய்யும் பிணைப்பு தயாரிப்புகளின் உயர் சிக்கலான நூலகத்தைப் பெற, ஹை-சி-க்கு உள்ளீடாக 20-25 மில்லியன் செல்களின் மாதிரி தேவைப்படுகிறது. குறைவான செல் எண்களில் மட்டுமே கிடைக்கக்கூடிய முதன்மை மனித மாதிரிகள், 1 முதல் 5 மில்லியன் செல்கள் வரையிலான நிலையான ஹை-சி நூலகத் தயாரிப்புக்கு பயன்படுத்தப்படலாம். இருப்பினும், செல்களின் குறைந்த உள்ளீட்டைப் பயன்படுத்துவது குறைந்த நூலக சிக்கலுடன் தொடர்புடையதாக இருக்கலாம், இதன் விளைவாக நூலகத் தயாரிப்பின் போது அதிக சதவீத நகல் வாசிப்புகள் ஏற்படுகின்றன. நிலையான ஹை-சி 1 முதல் 10 எம்பி தெளிவுத்திறனில் ஜோடி வாரியான தொடர்புகள் குறித்த தரவை வழங்குகிறது, அதிக வரிசைமுறை ஆழம் தேவைப்படுகிறது மற்றும் நெறிமுறை முடிக்க 7 நாட்கள் ஆகும். ஃபார்மால்டிஹைட் குறுக்கு இணைக்கும் செல் மற்றும் அணு சவ்வுகள் ஃபார்மால்டிஹைடுக்கு மிகவும் ஊடுருவக்கூடியவை. டிஎன்ஏ-புரதம் மற்றும் புரதம்-புரதம் தொடர்புகளைக் கண்டறிந்து அளவிடுவதற்கு ஃபார்மால்டிஹைட் குறுக்கு இணைப்பு அடிக்கடி பயன்படுத்தப்படுகிறது. ஹை-சி மற்றும் அனைத்து 3 சி அடிப்படையிலான முறைகளின் சூழலில் ஆர்வமுள்ளது, குரோமாட்டின் தொலைதூர பிரிவுகளுக்கு இடையிலான சிஸ் குரோமோசோம் தொடர்புகளைப் பிடிக்க ஃபார்மால்டிஹைட்டின் திறன் ஆகும். இது இடஞ்சார்ந்த அருகிலுள்ள குரோமாட்டின் பிரிவுகளுக்கு இடையில் சகப்பிணைப்புகளை உருவாக்குவதன் மூலம் அவ்வாறு செய்கிறது. ஃபார்மால்டிஹைட் இரண்டு படிகளில் பெரிய மூலக்கூறுகளுடன் வினைபுரியும்ஃ எடுத்துக்காட்டாக, முதலில் இது ஒரு டிஎன்ஏ தளத்தில் ஒரு நியூக்ளியோஃபிலிக் குழுவுடன் வினைபுரிந்து, ஒரு மெத்திலோல் இணைப்பை உருவாக்குகிறது, பின்னர் அது ஒரு ஷிஃப் தளமாக மாற்றப்படுகிறது. இரண்டாவது கட்டத்தில், விரைவாக சிதைக்கக்கூடிய ஷிஃப் காரம், மற்றொரு மூலக்கூறில் மற்றொரு செயல்பாட்டுக் குழுவுடன் ஒரு மெத்திலீன் பாலத்தை உருவாக்குகிறது. இது கிளைசின் போன்ற கரைசலில் உள்ள ஒரு சிறிய மூலக்கூறுடன் இந்த மெத்திலீன் பாலத்தை உருவாக்கலாம், இது ஹை-சி இல் உள்ள ஃபார்மால்டிஹைடைத் தணிக்க அதிகமாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. தணிப்பான்கள் பொதுவாக உயிரணுவுக்கு வெளியே இருந்து ஃபார்மால்டிஹைடில் ஒரு விளைவை ஏற்படுத்தலாம். இந்த இரண்டு-படி ஃபார்மால்டிஹைட் குறுக்கு இணைப்பு எதிர்வினையின் ஒரு முக்கிய அம்சம் என்னவென்றால், அனைத்து எதிர்வினைகளும் மாற்றியமைக்கக்கூடியவை, இது குரோமாட்டின் பிடிப்புக்கு இன்றியமையாதது. குறுக்கு இணைப்பு என்பது குரோமாட்டின் பிடிப்பு பணிப்பாய்வின் ஒரு முக்கிய படியாகும், ஏனெனில் நுட்பத்தின் செயல்பாட்டு வாசிப்பு என்பது இரண்டு மரபணு பகுதிகள் ஒருவருக்கொருவர் குறுக்கு இணைக்கப்பட்ட அதிர்வெண் ஆகும். எனவே, இந்த படிநிலையின் தரப்படுத்தல் முக்கியமானது, அதற்காக, மாறுபாட்டின் சாத்தியமான ஆதாரங்களை ஒருவர் கருத்தில் கொள்ள வேண்டும். கல்ச்சர் மீடியாவில் புரதத்தின் அதிக செறிவு கொண்ட சீரம் இருப்பது, கல்ச்சர் மீடியாவில் பிரித்தெடுப்பதன் மூலம் குரோமாட்டின் குறுக்கு இணைப்புக்கு கிடைக்கக்கூடிய ஃபார்மால்டிஹைட்டின் பயனுள்ள செறிவைக் குறைக்கும். எனவே, கல்ச்சரில் சீரம் பயன்படுத்தப்படும் சந்தர்ப்பங்களில், குறுக்கு இணைப்பு படிநிலைக்கு அதை அகற்ற வேண்டும். செல்களின் தன்மை, அதாவது, அவை இடைநீக்கம் செய்யப்பட்டதா அல்லது பின்பற்றப்பட்டதா என்பதும் குறுக்கு இணைப்பு படிநிலைக்கு பொருத்தமான கருத்தாகும். சைட்டோஸ்கெலிட்டன்களின் மூலக்கூறு வழிமுறைகளின் உதவியுடன் தொடர்ச்சியான செல்கள் மேற்பரப்புகளுடன் பிணைக்கப்படுகின்றன. சைட்டோஸ்கெலிட்டன் பராமரிக்கப்படும் அணு மற்றும் செல்லுலார் உருவவியல் இடையே ஒரு தொடர்பு இருப்பதாகக் காட்டப்பட்டுள்ளது, இது மாற்றப்பட்டால், உலகளாவிய அணு அமைப்பை எதிர்மறையாக பாதிக்கக்கூடும். எனவே, பின்பற்றப்படும் செல்கள் அவற்றின் கலாச்சார மேற்பரப்பில் இணைக்கப்பட்டிருக்கும்போது குறுக்கு இணைக்கப்பட வேண்டும். லைசிஸ், கட்டுப்பாடு செரிமானம் மற்றும் பயோடினைலேஷன் செல்கள் சோடியம் குளோரைடு கொண்ட குளிர்ந்த ஹைபோடோனிக் இடையகத்துடன் பனிக்கட்டியில் இணைக்கப்படுகின்றன, pH 8 இல் டிரிஸ்-HCl மற்றும் அயனி அல்லாத சோப்பு IGEPAL CA-630, புரோட்டீஸ் தடுப்பான்களுடன் கூடுதலாக உள்ளன. புரோட்டீஸ் தடுப்பான்கள் மற்றும் பனியில் அடைகாக்கும் தன்மை ஆகியவை எண்டோஜெனஸ் புரோட்டீஸ்களிலிருந்து குறுக்கு இணைக்கப்பட்ட குரோமாட்டின் வளாகங்களின் ஒருமைப்பாட்டைப் பாதுகாக்க உதவுகின்றன. லைசிஸ் படி உயிரணுக்களில் இருந்து நியூக்ளிக் பொருளை வெளியிட உதவுகிறது. செல் லைசிஸைத் தொடர்ந்து, குறுக்கு இணைக்கப்படாத புரதங்களை அகற்றுவதற்கும், குரோமாடினைத் திறப்பதற்கும், அடுத்தடுத்த கட்டுப்பாடு எண்டோநியூக்லீஸ்-மத்தியஸ்த செரிமானத்திற்கு அதை அணுகுவதற்கும் குரோமாட்டின் நீர்த்த எஸ். டி. எஸ் உடன் கரையச் செய்யப்படுகிறது. எஸ். டி. எஸ் உடன் அடைகாக்கும் நேரம் பரிந்துரைக்கப்பட்ட 10 நிமிடங்களுக்கு மேல் இருந்தால், ஃபார்மால்டிஹைட் குறுக்கு இணைப்புகளை மாற்றியமைக்கலாம், எனவே எஸ். டி. எஸ் உடன் அடைகாக்கும் நேரத்தைத் தொடர்ந்து உடனடியாக பனியில் அடைகாக்கும் நேரம் வர வேண்டும். ட்ரைடான் எக்ஸ்-100 எனப்படும் அயனி அல்லாத சோப்பு அடுத்த கட்டத்தில் நொதி சிதைவைத் தடுக்க எஸ். டி. எஸ்ஸைத் தணிக்கப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. ஹிந்த் III போன்ற 5 'ஓவர்ஹாங்கை உருவாக்கும் எந்தவொரு கட்டுப்பாட்டு நொதியையும் இப்போது அணுகக்கூடிய குரோமாடினை ஒரே இரவில் ஜீரணிக்க பயன்படுத்தலாம். இந்த 5 'ஓவர்ஹாங் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் I இன் க்ளெனோ துண்டு குரோமாட்டின் செரிக்கப்பட்ட முனைகளில் பயோடினைலேட்டட் சிடிபி அல்லது ஏடிபி சேர்க்க தேவையான வார்ப்புருவை வழங்குகிறது. இந்த படி நூலகத் தயாரிப்புக்கான ஹை-சி பிணைப்பு தயாரிப்புகளைத் தேர்ந்தெடுக்க அனுமதிக்கிறது. அருகாமை பிணைப்பு டிஎன்ஏ துண்டுகளில் ஒரு நீர்த்த பிணைப்பு செய்யப்படுகிறது, அவை வெவ்வேறு வளாகங்களில் உள்ள துண்டுகளுக்கு இடையிலான பிணைப்பு நிகழ்வுகளுக்கு பதிலாக ஒரே குரோமாட்டின் வளாகத்திற்குள் துண்டுகளின் மூலக்கூறு பிணைப்புக்கு சாதகமாக இருக்கும் பொருட்டு ஒருவருக்கொருவர் குறுக்கு இணைக்கப்பட்டுள்ளன. இந்த பிணைப்பு படி அப்பட்டமான-முனை டிஎன்ஏ துண்டுகளுக்கு இடையில் ஏற்படுவதால் (ஒட்டும் முனைகள் பயோட்டின்-லேபிள் செய்யப்பட்ட தளங்களால் நிரப்பப்பட்டிருப்பதால்), எதிர்வினை அதன் உள்ளார்ந்த திறமையின்மையை ஈடுசெய்ய 4 மணி நேரம் வரை செல்ல அனுமதிக்கப்படுகிறது. அருகாமை பிணைப்பின் விளைவாக, முனைய ஹிந்த் III தளங்கள் இழக்கப்படுகின்றன மற்றும் ஒரு என். எச். இ. ஐ தளம் உருவாக்கப்படுகிறது. பயோட்டின் அகற்றுதல், டிஎன்ஏ வெட்டு, அளவு தேர்வு மற்றும் இறுதி பழுதுபார்ப்பு பயோட்டின்-பெயரிடப்பட்ட பிணைப்பு தயாரிப்புகள் பினோல்-குளோரோஃபார்ம் டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் பயன்படுத்தி சுத்திகரிக்கப்படலாம். பிணைக்கப்படாத பயோட்டின்-பெயரிடப்பட்ட முனைகளைக் கொண்ட எந்தவொரு துண்டுகளையும் அகற்ற, 3 'முதல் 5' எக்ஸோ நியூக்ளியேஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்ட டி 4 டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் அத்தகைய துண்டுகளின் முனைகளில் இருந்து நியூக்ளியோடைடுகளை அகற்ற பயன்படுத்தப்படுகிறது. இந்த படி நூலகத் தயாரிப்புக்கு இந்த கட்டுப்பாடற்ற துண்டுகள் எதுவும் தேர்ந்தெடுக்கப்படவில்லை என்பதை உறுதி செய்கிறது. ஈடிடிஏ மூலம் எதிர்வினை நிறுத்தப்படுகிறது மற்றும் டிஎன்ஏ மீண்டும் பினோல்-குளோரோஃபார்ம் டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் பயன்படுத்தி சுத்திகரிக்கப்படுகிறது. வரிசைமுறை நூலகத்திற்கான டிஎன்ஏ துண்டுகளின் சிறந்த அளவு பயன்படுத்தப்படும் வரிசைமுறை தளத்தைப் பொறுத்தது. டிஎன்ஏ முதலில் சோனிகேஷனைப் பயன்படுத்தி 300-500 பிபி நீளத்தைச் சுற்றியுள்ள துண்டுகளாக வெட்டப்படலாம். இந்த அளவிலான துண்டுகள் உயர்-செயல்திறன் வரிசைப்படுத்தலுக்கு ஏற்றவை. சோனிகேஷனைத் தொடர்ந்து, 150 முதல் 300 பிபி வரையிலான அளவு விநியோகத்துடன் பிணைப்பு தயாரிப்புகளைப் பெற பெக்மேன் கோல்டரிடமிருந்து AMPure XP மணிகளைப் பயன்படுத்தி துண்டுகளைத் தேர்ந்தெடுக்கலாம். இது ஹைசெக் கிளஸ்டர் உருவாக்கத்திற்கான உகந்த துண்டு அளவு சாளரமாகும். டிஎன்ஏ வெட்டு சமச்சீரற்ற டிஎன்ஏ முறிவுகளை ஏற்படுத்துகிறது, மேலும் பயோட்டின் இழுப்பு மற்றும் அடாப்டர் பிணைப்பை வரிசைப்படுத்துவதற்கு முன்பு சரிசெய்யப்பட வேண்டும். 5 'ஓவர்ஹாங்குகளை நிரப்பும் என்சைம்களின் கலவையைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் இது அடையப்படுகிறது, மேலும் 5' பாஸ்பேட் குழுக்கள் மற்றும் அடினைலேட் ஆகியவற்றை 3 'துண்டுகளின் முனைகளில் சேர்ப்பதன் மூலம் வரிசைமுறை அடாப்டர்களை பிணைக்க அனுமதிக்கிறது. டைனாபீட்ஸில் இருந்து மை-ஒன் சி 1 ஸ்ட்ரெப்டாவிடின் மணிகள் கரைசல் போன்ற ஸ்ட்ரெப்டாவிடின் மணிகளை அதிகமாகப் பயன்படுத்தி, பயோடினைலேட்டட் ஹை-சி பிணைப்பு தயாரிப்புகளை இழுத்துச் சென்று செறிவூட்டலாம். டிஎன்ஏ துண்டுகள் ஸ்ட்ரெப்டாவிடின் மணிகளுடன் பிணைக்கப்பட்டிருக்கும் போது இல்லுமினா ஜோடி-இறுதி அடாப்டர்களின் பிணைப்பு செய்யப்படுகிறது. மணிகளுக்கு உறிஞ்சுதல் இந்த அப்பட்டமான-முனை டிஎன்ஏ துண்டுகளை அடாப்டர்களுக்கு பிணைக்கும் செயல்திறனை அதிகரிக்கிறது, ஏனெனில் இது அவற்றின் இயக்கத்தைக் குறைக்கிறது. நூலகத் தயாரிப்பு மற்றும் வரிசைமுறை அடாப்டர்களின் பிணைப்பு முடிந்த பிறகு, நூலகத்தின் பி. சி. ஆர் பெருக்கம் செய்யப்படுகிறது. பி. சி. ஆர் படி அதிகப்படியான பெருக்கத்தின் விளைவாக குறைந்த சிக்கலான ஹை-சி பிணைப்பு தயாரிப்பு மாதிரியில் அதிக எண்ணிக்கையிலான நகல்களை அறிமுகப்படுத்த முடியும். இதன் விளைவாக மிகக் குறைவான இடைவினைகள் கைப்பற்றப்படுகின்றன மற்றும் பெரும்பாலும், உள்ளீட்டு மாதிரி அளவு குறைந்த அளவு செல்களைக் கொண்டிருந்ததால் இது நிகழ்கிறது. குறைந்தபட்சம் 50 என்ஜி ஹை-சி நூலக டிஎன்ஏவை வரிசைப்படுத்துவதற்குத் தேவையான சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கையை டைட்ட்ரேட் செய்வது முக்கியம். சுழற்சி எண் குறைவாக இருந்தால், பி. சி. ஆர் கலைப்பொருட்கள் (ஆஃப்-டார்கெட் ஆம்ப்ளிகான்கள், அல்லாத குறிப்பிட்டது போன்றவை) இல்லாததால் சிறந்தது. பிசிஆர் சுழற்சிகளின் சிறந்த வரம்பு 9-15 ஆகும், மேலும் ஒரு பிசிஆர் எதிர்வினைக்கு சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கையை அதிகரிப்பதை விட, வரிசைப்படுத்துவதற்கு போதுமான டிஎன்ஏவைப் பெற பல பிசிஆர் எதிர்வினைகளைச் சேகரிப்பது மிகவும் சிறந்தது. பி. சி. ஆர் தயாரிப்புகள் ப்ரைமர் டைமர்களை அகற்ற AMPure மணிகளைப் பயன்படுத்தி மீண்டும் சுத்திகரிக்கப்படுகின்றன, பின்னர் வரிசைப்படுத்தப்படுவதற்கு முன்பு அளவிடப்படுகின்றன. ஒருவருக்கொருவர் தொடர்பு கொள்ளும் குரோமாட்டின் பகுதிகள் பின்னர் பயோடினைலேட்டட், லிகேட்டட் தயாரிப்புகளின் ஜோடி-இறுதி வரிசைமுறை மூலம் அடையாளம் காணப்படுகின்றன. பிணைக்கப்பட்ட துண்டுகளை என். எச். இ. ஐ சந்திப்பின் (ரோச் 454) குறுக்கே வரிசைப்படுத்த அனுமதிக்கும் எந்த தளமும் அல்லது ஜோடி-முனை அல்லது இணை-ஜோடி ரீட்கள் (இலுமினா ஜி. ஏ மற்றும் ஹைசெக் இயங்குதளங்கள்) மூலம் ஹை-சி-க்கு ஏற்றதாக இருக்கும். உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறைக்கு முன், நூலகத்தின் தரம் சாங்கர் வரிசைமுறையைப் பயன்படுத்தி சரிபார்க்கப்பட வேண்டும், இதில் நீண்ட வரிசைமுறை ரீட் பயோட்டின் சந்திப்பு வழியாக படிக்கப்படும். இலுமினா ஜோடி-இறுதி வரிசைமுறையைப் பயன்படுத்தி பெரும்பாலான குரோமாட்டின் தொடர்பு ஜோடிகளை அடையாளம் காண முப்பத்தாறு அல்லது 50 பிபி ரீட்கள் போதுமானது. நூலகத்தில் உள்ள துண்டுகளின் சராசரி அளவு 250 பிபி என்பதால், 50 பிபி ஜோடி-இறுதி ரீட்கள் ஹை-சி நூலக வரிசைமுறைக்கு உகந்தவை என்று கண்டறியப்பட்டுள்ளது. ஹை-சி நூலகங்களின் தரக் கட்டுப்பாடு ஹை-சி மாதிரி தயாரிப்பின் பணிப்பாய்வு முழுவதும் பல அழுத்த புள்ளிகள் உள்ளன, அவை நன்கு ஆவணப்படுத்தப்பட்டு அறிக்கையிடப்பட்டுள்ளன. துண்டுகளின் அளவு விநியோகத்தை மதிப்பிடுவதற்கு பல்வேறு நிலைகளில் டிஎன்ஏவை 0.8 சதவீதம் அகரோஸ் ஜெல்களில் இயக்க முடியும். அளவு தேர்வு படிகளை வெட்டியதற்குப் பிறகு இது மிகவும் முக்கியமானது. டிஎன்ஏவின் சிதைவு ஜெல்களில் குறைந்த மூலக்கூறு எடை தயாரிப்புகளின் கீழ் தோன்றும் ஸ்மியர்களாக கண்காணிக்கப்படலாம். லைசிஸின் போது போதுமான புரோட்டீஸ் தடுப்பான்களைச் சேர்க்காதது, எண்டோஜெனஸ் நியூக்ளீஸ் செயல்பாடு அல்லது தவறான ஐசிங் காரணமாக வெப்ப சீரழிவு காரணமாக சீரழிவு ஏற்படலாம். அருகாமை பிணைப்பு தயாரிப்புகளின் உருவாக்கம் சோதிக்க 3 சி பி. சி. ஆர் எதிர்வினைகள் செய்யப்படலாம். மாறுபாடுகள் நிலையான ஹை-சி அதிக உள்ளீட்டு செல் எண் செலவைக் கொண்டுள்ளது, ஆழமான வரிசைமுறை தேவைப்படுகிறது, குறைந்த தெளிவுத்திறன் தரவை உருவாக்குகிறது, மேலும் செல் எண்கள் குறைவாக இருக்கும்போது குறைந்த சிக்கலான நூலகங்களுக்கு பங்களிக்கும் தேவையற்ற மூலக்கூறுகள் உருவாவதால் பாதிக்கப்படுகிறது. இந்த சிக்கல்களை எதிர்த்துப் போராடுவதற்காக, செல் எண் ஒரு வரம்புக்குட்பட்ட காரணியாக இருக்கும் சூழல்களில் இந்த நுட்பத்தைப் பயன்படுத்த முடியும், எடுத்துக்காட்டாக, முதன்மை மனித செல் வேலையுடன், ஹை-சி இன் முதல் கருத்தாக்கத்திலிருந்து பல ஹை-சி மாறுபாடுகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. ஹை-சி மாறுபாடுகள் கீழ் வரும் நான்கு முக்கிய வகுப்புகள்ஃ நீர்த்த பிணைப்பு, உள்ளூரில் பிணைப்பு, ஒற்றை செல் மற்றும் குறைந்த சத்தம் மேம்பாட்டு அமைப்புகள். நிலையான ஹை-சி என்பது ஒரு வகை நீர்த்த பிணைப்பு மற்றும் பிற நீர்த்த பிணைப்புகளில் டிஎன்எஸ் ஹை-சி மற்றும் கேப்சர் ஹை-சி ஆகியவை அடங்கும். நிலையான மற்றும் கேப்சர் ஹை-சி-க்கு மாறாக, டினேஸ் ஹை-சி-க்கு 2 முதல் 5 மில்லியன் செல்கள் மட்டுமே உள்ளீடாக தேவைப்படுகின்றன, குரோமாட்டின் துண்டு துண்டுக்கு டினேஸ்ஐ-ஐப் பயன்படுத்துகிறது மற்றும் ஜெல் நீர்த்தல் அருகாமை பிணைப்பைப் பயன்படுத்துகிறது. DNASEI இன் பயன்பாடு ஹை-சி இன் செயல்திறன் மற்றும் தெளிவுத்திறனை பெரிதும் மேம்படுத்துவதாகக் காட்டப்பட்டுள்ளது. ஹை-சி பிடிப்பு என்பது இலக்கு மரபணு பகுதிகளின் கலப்பின அடிப்படையிலான பிடிப்பைப் பயன்படுத்தி குறிப்பிட்ட இருப்பிடத்தின் குரோமாட்டின் தொடர்புகளைப் பார்க்க ஒரு மரபணு அளவிலான மதிப்பீட்டு நுட்பமாகும். இது முதலில் மிஃப்சுத் மற்றும் பலர் உருவாக்கியது. 21, 841 ஊக்குவிப்பு பகுதிகளை இலக்காகக் கொண்ட பயோடினைலேட்டட் ஆர்என்ஏ பைட் நூலகத்தை உருவாக்குவதன் மூலம் மனித உயிரணுக்களில் நீண்ட தூர ஊக்குவிப்பு தொடர்புகளை வரைபடமாக்குதல். இந்த மாறுபாடுகள், மற்றவற்றுடன் கூடுதலாக (கீழே விவரிக்கப்பட்டுள்ளது), நிலையான ஹை-சி மற்றும் முகவரியின் அடித்தள நுட்பத்தில் மாற்றங்களைக் குறிக்கின்றன மற்றும் அசல் முறையின் ஒன்று அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட வரம்புகளை நீக்குகின்றன. ராவ் மற்றும் பலர் முதலில் விவரித்த சிட்டு ஹை-சி இல், சிட்டு ஹை-சி நிலையான ஹை-சி ஐ அணு பிணைப்பு மதிப்பீட்டுடன் ஒருங்கிணைக்கிறது, அதாவது, அப்படியே கருக்களில் நிகழ்த்தப்படும் அருகாமை பிணைப்பு. நெறிமுறை அடிப்படை பணிப்பாய்வு அவுட்லைனின் அடிப்படையில் நிலையான ஹை-சி போன்றது, ஆனால் மற்ற வழிகளில் வேறுபடுகிறது. நிலையான ஹை-சி-க்குத் தேவையான சிறந்த 20 முதல் 25 மில்லியனுடன் ஒப்பிடும்போது ஹை-சி-க்கு 2 முதல் 5 மில்லியன் செல்கள் தேவைப்படுகின்றன, மேலும் நெறிமுறையை முடிக்க 3 நாட்கள் மட்டுமே தேவைப்படுகின்றன, நிலையான ஹை-சி-க்கு 7 நாட்கள் தேவைப்படுகின்றன. மேலும், கைப்பற்றப்பட்ட பயோடினைலேட்டட் டிஎன்ஏவில் மைட்டோகாண்ட்ரியல் மற்றும் நியூக்ளியர் டிஎன்ஏ தொடர்புகளின் குறைந்த அதிர்வெண்ணால் சுட்டிக்காட்டப்பட்டபடி, நிலையான ஹை-சி போன்ற கரைசலில் அருகாமை பிணைப்பு ஏற்படாது, இது சீரற்ற, உயிரியல் ரீதியாக பொருத்தமற்ற தொடர்புகள் மற்றும் பிணைப்புகளின் அதிர்வெண்ணைக் குறைக்கிறது. பிணைப்பு படிநிலைக்கு கருக்களை அப்படியே விட்டுவிடுவதன் மூலம் இது அடையப்படுகிறது. உயிரணுக்கள் இன்னும் pH 8 இல் டிரிஸ்-HCl கொண்ட ஒரு இடையகத்துடன் இணைக்கப்படுகின்றன, சோடியம் குளோரைடு மற்றும் அடைப்புக்கு முன் சவர்க்காரம் IGEPAL CA630, ஆனால் செல் லைசேட்டை ஒரே மாதிரியாக மாற்றுவதற்குப் பதிலாக, செல் கருக்கள் செல் சவ்வை சிதைக்க ஆரம்ப லைசிஸுக்குப் பிறகு இழுக்கப்படுகின்றன. அருகாமை பிணைப்பு முடிந்த பிறகு, அணுக்கரு சவ்வை ஊடுருவி அதன் அணு உள்ளடக்கங்களை வெளியிடுவதற்காக செல் கருக்கள் குறைந்தது ஒன்றரை மணி நேரம் 68 டிகிரி செல்சியஸில் அடைகாக்கப்படுகின்றன. நிலையான ஹை-சி இன் 1 முதல் 10 எம்பி தெளிவுத்திறன் மற்றும் டினேஸ் ஹை-சி இன் 100 கேபி தெளிவுத்திறனுடன் ஒப்பிடும்போது இன் சிட்டு ஹை-சி மூலம் அடையக்கூடிய தீர்மானம் 950 முதல் 1000 பிபி வரை இருக்கலாம். நிலையான ஹை-சி கட்டுப்பாடு செரிமான நடவடிக்கைக்கு ஹிந்த் III போன்ற 6-பிபி கட்டரைப் பயன்படுத்துகிறது, அதே நேரத்தில் ஹை-சி 4-பிபி கட்டரைப் பயன்படுத்துகிறது, அதாவது எம். பி. ஓ. ஐ அல்லது அதன் ஐசோசிசோமர் டி. பி. என். ஐ. ஐ (இது சிபிஜி மெத்திலேஷனுக்கு உணர்திறன் இல்லை) செயல்திறன் மற்றும் தெளிவுத்திறனை அதிகரிக்க (எம். பி. ஓ. ஐ மற்றும் டி. பி. என். ஐ. ஐ இன் கட்டுப்பாடு தளங்கள் மரபணுவில் அடிக்கடி நிகழ்கின்றன). இன் சிட்டு ஹை-சி க்கான பிரதிகளுக்கு இடையிலான தரவு நிலையானது மற்றும் மிகவும் இனப்பெருக்கம் செய்யக்கூடியது, மிகக் குறைந்த பின்னணி சத்தம் மற்றும் தெளிவான குரோமாட்டின் தொடர்புகளை நிரூபிக்கிறது. இருப்பினும், அணுக்கரு புரதங்கள் மற்றும் டிஎன்ஏ ஆகியவற்றால் அடர்த்தியாக நிரம்பியிருப்பதால் கைப்பற்றப்பட்ட சில தொடர்புகள் துல்லியமான மூலக்கூறுகளுக்கிடையேயான தொடர்புகளாக இருக்காது, எனவே அப்படியே இருக்கும் கருக்களில் அருகாமை இணைப்புகளைச் செய்வது குழப்பமான தொடர்புகளை இழுக்கக்கூடும், அவை அணு பேக்கேஜிங்கின் தன்மை காரணமாக மட்டுமே உருவாகலாம் மற்றும் செல்லுலார் செயல்பாட்டு தாக்கத்துடன் தனித்துவமான குரோமோசோமால் தொடர்புகள் அல்ல. ராவ் மற்றும் பலர் விவரித்த தரவுகளின் தெளிவுத்திறனை அடைய ஒரு மாதிரிக்கு சுமார் 5 பில்லியன் ஜோடி-இறுதி ரீட்களின் மிக உயர்ந்த வரிசைமுறை ஆழமும் தேவைப்படுகிறது. இன் சிட்டு ஹை-சி என்ற கருத்தைத் தழுவிய பல நுட்பங்கள் உள்ளன, அவற்றில் சிஸ் ஹை-சி, ஓசியன்-சி மற்றும் இன் சிட்டு கேப்சர் ஹை-சி ஆகியவை அடங்கும். சிட்டு ஹை-சி அடிப்படையிலான நுட்பங்களில் இரண்டு மிக முக்கியமானவை கீழே விவரிக்கப்பட்டுள்ளன. 1. லோ-சி லோ-சி என்பது குறைந்த செல் எண்களில் பயன்படுத்தத் தழுவிய ஒரு இன் சிட்டு ஹை-சி நெறிமுறையாகும், இது செல் எண் ஒரு கட்டுப்படுத்தும் முகவராக இருக்கும் சூழல்களில் குறிப்பாக பயனுள்ளதாக இருக்கும், எடுத்துக்காட்டாக, முதன்மை மனித செல் கலாச்சாரத்தில். இந்த முறை சிறிய மாற்றங்களைப் பயன்படுத்துகிறது, இதில் பயன்படுத்தப்படும் அளவுகள் மற்றும் செறிவுகள் மற்றும் சில சோதனை நடவடிக்கைகளின் நேரம் மற்றும் வரிசை ஆகியவை 1000 செல்கள் வரை குறைந்த செல் எண்களிலிருந்து உயர்தர ஹை-சி நூலகங்களை உருவாக்க அனுமதிக்கின்றன. 1000 செல்கள் வரை பயன்படுத்தக்கூடிய மற்றும் உயர் தெளிவுத்திறன் தரவை உருவாக்கும் திறன் இருந்தபோதிலும், டயஸ் மற்றும் பலர். சாத்தியமானால் குறைந்தது 1 முதல் 2 மில்லியன் செல்கள் அல்லது குறைந்தபட்சம் 500 கே செல்களைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. நூலகத்தின் தரம் முதன்முதலில் இல்லுமினா மிசெக் (2x84 என். பி. ஜோடி-எண்ட் ரீட்ஸ்) இயங்குதளத்தில் மதிப்பிடப்பட்டது மற்றும் தரக் கட்டுப்பாட்டு அளவுகோல்களை (குறைந்த பி. சி. ஆர் நகல்கள் உட்பட) நிறைவேற்றியவுடன், நூலகம் இல்லுமினா நெக்ஸ்ட்செக் (2x80 பிபி ஜோடி-எண்ட்) இல் வரிசைப்படுத்தப்பட்டது. ஒட்டுமொத்தமாக, இந்த நுட்பம் ஹை-சி-க்கு அதிக செல் எண் உள்ளீடு மற்றும் உயர் தெளிவுத்திறன் தரவைப் பெறுவதற்குத் தேவையான உயர் வரிசைமுறை ஆழம் தேவைப்படும் பிரச்சினையைத் தவிர்க்கிறது, ஆனால் 5 கிலோபி வரை தீர்மானங்களை மட்டுமே அடைய முடியும், மேலும் மாறுபட்ட தன்மை காரணமாக எப்போதும் மீண்டும் உருவாக்கப்படாமல் இருக்கலாம் பயன்படுத்தப்பட்ட மாதிரி அளவுகள் மற்றும் அதிலிருந்து உருவாக்கப்பட்ட தரவு. 2. SAFE ஹை-சி பாதுகாப்பான ஹை-சி, அல்லது எளிமைப்படுத்தப்பட்ட, வேகமான மற்றும் பொருளாதார ரீதியாக திறமையான ஹை-சி, உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறைக்கு பெருக்கம் இல்லாமல் போதுமான இணைக்கப்பட்ட துண்டுகளை உருவாக்குகிறது. வெளியிடப்பட்ட ஹை-சி தரவுகளில், பெருக்கம் (நூலகத் தயாரிப்புக்கான பி. சி. ஆர் கட்டத்தில்) தூரத்தை சார்ந்த பெருக்க சார்பை அறிமுகப்படுத்துகிறது என்பதைக் குறிக்கிறது, இதன் விளைவாக மரபணு தூரத்திற்கு எதிராக அதிக சத்தம் மற்றும் சமிக்ஞை விகிதம் ஏற்படுகிறது. SAFE ஹை-சி வெற்றிகரமாக 250 ஆயிரம் கே 562 செல்களிலிருந்து பெருக்கம் இல்லாத, இன் சிட்டு ஹை-சி பிணைப்பு நூலகத்தை உருவாக்க பயன்படுத்தப்பட்டது. பிணைப்பு துண்டுகள் 200 முதல் 500 பிபி வரை நீளமாக இருக்கும், சராசரியாக சுமார் 370 பிபி ஆகும். அனைத்து பிணைப்பு தயாரிப்பு நூலகங்களும் இல்லுமினா ஹைசெக் இயங்குதளத்தைப் பயன்படுத்தி வரிசைப்படுத்தப்பட்டன (2x150 பிபி ஜோடி-இறுதி வாசிப்புகள்). SAFE ஹை-சி 250 ஆயிரம் வரை குறைந்த செல் உள்ளீட்டிற்கு பயன்படுத்தப்படலாம் என்றாலும், நியு மற்றும் பலர். 1 முதல் 2 மில்லியன் செல்களைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. மாதிரிகள் ஒரு பாதையின் நான்கில் ஒரு பங்கில் வரிசைப்படுத்த போதுமான லிகேட்டுகளை உருவாக்குகின்றன. பிசிஆர் நகல்களை அகற்றுவதன் காரணமாக நூலக சிக்கலை அதிகரிக்க SAFE ஹை-சி நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது, இது தனித்துவமான ஜோடி ரீட்களின் ஒட்டுமொத்த சதவீதத்தைக் குறைக்கிறது. ஒட்டுமொத்தமாக, SAFE ஹை-சி குரோமோசோம் தொடர்புகளின் ஒருமைப்பாட்டைப் பாதுகாக்கிறது, அதே நேரத்தில் அதிக வரிசைமுறை ஆழத்தைக் கொண்டிருப்பதன் தேவையைக் குறைக்கிறது மற்றும் ஒட்டுமொத்த செலவு மற்றும் உழைப்பைச் சேமிக்கிறது. மைக்ரோ-சி மைக்ரோ-சி என்பது ஹை-சியின் ஒரு பதிப்பாகும், இது மைக்ரோகோக்கல் நியூக்ளியேஸ் (எம்என்ஏஎஸ்) செரிமான நடவடிக்கையை உள்ளடக்கியது, இது ஜோடி நியூக்ளியோசோம்களுக்கு இடையிலான தொடர்புகளைப் பார்க்கிறது, இதனால் 1 முதல் 100 நியூக்ளியோசோம் அளவில் துணை-மரபணு டிஏடி கட்டமைப்புகளின் தீர்மானத்தை செயல்படுத்துகிறது. இது முதன்முதலில் ஈஸ்டில் பயன்படுத்துவதற்காக உருவாக்கப்பட்டது மற்றும் ஒரு நிலையான ஹை-சி இலிருந்து பெறப்பட்ட கட்டமைப்பு தரவைப் பாதுகாப்பதாகக் காட்டப்பட்டது, ஆனால் அதிக சமிக்ஞை-க்கு-சத்தம் விகிதத்துடன். மனித கரு ஸ்டெம் செல்கள் மற்றும் ஃபைப்ரோபிளாஸ்ட்களுடன் பயன்படுத்தப்படும்போது, ஒரு மாதிரிக்கு 2.6 முதல் 4.5 பில்லியன் தனித்துவமான வரைபட அளவீடுகள் பெறப்பட்டன. ஹ்ஸீ மற்றும் பலர். சுட்டி கரு ஸ்டெம் செல்களில் இருந்து 2.6 பில்லியன் ரீட்களை பகுப்பாய்வு செய்து, குறுகிய தூர தொடர்புகளைக் கண்டறிவதற்கான அதிக சக்தி இருப்பதை நிரூபித்தது. ஒற்றை செல் ஹை-சி ஹை-சி ஒற்றை செல் பயன்பாட்டிற்காகவும் மாற்றியமைக்கப்பட்டுள்ளது, ஆனால் இந்த நுட்பங்களுக்கு உயர் மட்ட நிபுணத்துவம் தேவைப்படுகிறது மற்றும் குறைந்த தரவு தரம், பாதுகாப்பு மற்றும் தீர்மானம் போன்ற சிக்கல்களால் பாதிக்கப்படுகின்றன. தரவு பகுப்பாய்வு ஹை-சி ஆல் உருவாக்கப்படும் சிமெரிக் டிஎன்ஏ பிணைப்பு தயாரிப்புகள் அணுக்கருவிற்குள் ஜோடி வாரியான குரோமாட்டின் தொடர்புகள் அல்லது இயற்பியல் 3 டி தொடர்புகளைக் குறிக்கின்றன, மேலும் பல்வேறு கீழ்நிலை அணுகுமுறைகளால் பகுப்பாய்வு செய்யப்படலாம். சுருக்கமாக, ஆழமான வரிசைமுறை தரவு பக்கச்சார்பற்ற மரபணு அளவிலான குரோமாட்டின் தொடர்பு வரைபடங்களை உருவாக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது. பின்னர் குரோமோசோம் கட்டமைப்பு வடிவங்கள் மற்றும் அவற்றின் உயிரியல் விளக்கங்களை அடையாளம் காண இந்த வரைபடங்களை பகுப்பாய்வு செய்ய பல்வேறு முறைகள் பயன்படுத்தப்படலாம். இந்த தரவு பகுப்பாய்வு அணுகுமுறைகளில் பல 3 சி-வரிசைமுறை அல்லது பிற சமமான தரவுகளுக்கும் பொருந்தும். ஆழமான வரிசைமுறையால் தயாரிக்கப்படும் ரீட் மேப்பிங் ஹை-சி தரவு ஒரு பாரம்பரிய ஃபாஸ்ட்க்யூ கோப்பின் வடிவத்தில் உள்ளது, மேலும் ரீட்களை வரிசை சீரமைப்பு மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி ஆர்வமுள்ள மரபணுவுடன் சீரமைக்கலாம் (எ. கா. பௌட்டி, பி. டபிள்யூ. ஏ, போன்றவை). ஹை-சி பிணைப்பு தயாரிப்புகள் நூற்றுக்கணக்கான மெகாபேஸ்களை பரப்பக்கூடும் மற்றும் வெவ்வேறு குரோமோசோம்களில் இருப்பிடத்தை இணைக்கக்கூடும் என்பதால், ஹை-சி ரீட் சீரமைப்பு பெரும்பாலும் சிமெரிக் ஆகும், அதாவது ஒரு ரீடின் வெவ்வேறு பகுதிகள் தொலைதூர இடத்துடன் சீரமைக்கப்படலாம், ஒருவேளை வெவ்வேறு நோக்குநிலைகளில் இருக்கலாம். நீண்ட வாசிப்பு சீரமைப்புகள் (எ. கா. மினிமேப் 2) பெரும்பாலும் சிமெரிக் சீரமைப்பை ஆதரிக்கிறது மற்றும் நீண்ட வாசிப்பு ஹை-சி தரவுகளுக்கு நேரடியாக பயன்படுத்தப்படலாம். குறுகிய-வாசிப்பு ஹை-சி சீரமைப்பு மிகவும் சவாலானது. குறிப்பாக, ஹை-சி பல்வேறு அளவுகளில் பிணைப்பு சந்திப்புகளை உருவாக்குகிறது, ஆனால் பிணைப்பு தளத்தின் சரியான நிலை அளவிடப்படவில்லை. இந்த சிக்கலைத் தவிர்க்க, ரீட்களை இரண்டாகப் பிரித்து, தொடர்பு ஜோடிகளை அடையாளம் காண அவற்றை தனித்தனியாக மேப்பிங் செய்வதற்கு முன்பு சந்திப்பு தளத்தைத் தேடுவதைத் தவிர்க்க மறு செய்கை மேப்பிங் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இடரேட்டிவ் மேப்பிங்கின் பின்னணியில் உள்ள யோசனை என்னவென்றால், சந்திப்பு தளத்தை அடைவதற்கு முன்பு தொடர்பு ஜோடிகளின் தனித்துவமான அடையாளத்தை உறுதி செய்வதற்காக முடிந்தவரை குறுகிய வரிசையை வரைபடமாக்குவதாகும். இதன் விளைவாக, 5 'முனையிலிருந்து தொடங்கும் 25-பிபி நீளமான வாசிப்புகள் முதலில் மரபணுவுடன் வரைபடமாக்கப்படுகின்றன, மேலும் ஒரு இடத்துடன் தனித்துவமாக வரைபடமாக்காத வாசிப்புகள் கூடுதலாக 5 பிபி மூலம் நீட்டிக்கப்படுகின்றன, பின்னர் மீண்டும் வரைபடமாக்கப்படுகின்றன. அனைத்து வாசிப்புகளும் தனித்துவமாக வரைபடம் செய்யும் வரை அல்லது வாசிப்புகள் முழுமையாக நீட்டிக்கப்படும் வரை இந்த செயல்முறை மீண்டும் மீண்டும் செய்யப்படுகிறது. ஒற்றை மரபணு இருப்பிடத்துடன் தனித்துவமாக வரைபடமாக்கப்பட்ட ஒவ்வொரு பக்கத்துடனும் ஜோடி முனை ரீட்கள் மட்டுமே வைக்கப்படுகின்றன. மற்ற ஜோடி இறுதி ரீட்கள் அனைத்தும் நிராகரிக்கப்படுகின்றன. ஐசிஇ, ஹைசி-ப்ரோ, எச்ஐபிபிஐஇ, ஹைசுப் மற்றும் டிஏடிபிட் போன்ற பல உயிர் தகவலியல் குழாய்களில் ரீட் மேப்பிங் நுட்பங்களின் பல மாறுபாடுகள் செயல்படுத்தப்படுகின்றன, ஒரு ஜோடி முனையின் இரண்டு பகுதிகளை தனித்தனியாக படிக்க வரைபடமாக்க, இரண்டு பகுதிகளும் தனித்துவமான மரபணு நிலைகளுடன் பொருந்துகின்றன, இதனால் பிணைப்பு சந்திப்புகளில் ரீட்கள் பரவியிருக்கும் சவாலை நிவர்த்தி செய்கின்றன. அதிகரித்த வாசிப்பு நீளத்துடன், மிக சமீபத்திய குழாய்கள் (எ. கா. ஜூசர் மற்றும் 4டி-நியூக்ளியோசோம் டேட்டா போர்டல்) பெரும்பாலும் குறுகிய ஹை-சி ரீட்களை பி. டபிள்யூ. ஏ-மெம், குரோமாப் மற்றும் டிராக்மேப் போன்ற சிமெரிக் சீரமைப்பு திறன் கொண்ட சீரமைப்பு வழிமுறையுடன் சீரமைக்கின்றன. இந்த செயல்முறை ஒரு முறை சீரமைப்பை அழைக்கிறது மற்றும் மறு செய்கை வரைபடத்தை விட எளிதானது. துண்டு ஒதுக்கீடு மற்றும் வடிகட்டுதல் வரைபடம் செய்யப்பட்ட வாசிப்புகள் ஒவ்வொன்றும் மரபணுவில் அதன் 5 'வரைபட நிலைக்கு ஏற்ப ஒற்றை மரபணு சீரமைப்பு இருப்பிடத்தை ஒதுக்குகின்றன. ஒவ்வொரு வாசிப்பு ஜோடிக்கும், கட்டுப்பாடு துண்டுகளில் ஒன்றுக்கு மட்டுமே ஒரு இடம் ஒதுக்கப்பட்டுள்ளது, எனவே ஒரு கட்டுப்பாடு தளத்திற்கு அருகில் இருக்க வேண்டும் மற்றும் அதிகபட்ச மூலக்கூறு நீளத்தை விட குறைவாக இருக்க வேண்டும். நெருங்கிய கட்டுப்பாட்டு தளங்களிலிருந்து அதிகபட்ச மூலக்கூறு நீளத்தை விட அதிகமாக வரைபடமாக்கப்பட்ட ரீட்கள் குரோமாட்டின் அல்லது கேனோனிக்கல் அல்லாத நியூக்ளியேஸ் செயல்பாடுகளின் உடல் முறிவுகளின் விளைவாகும். இந்த வாசிப்புகள் குரோமாட்டின் தொடர்புகள் பற்றிய தகவல்களையும் அறிவுறுத்துவதால், அவை நிராகரிக்கப்படுவதில்லை, ஆனால் தரவுத்தொகுப்பில் உள்ள தொழில்நுட்ப சத்தத்தை அகற்ற மரபணு இருப்பிடங்களை ஒதுக்கிய பிறகு பொருத்தமான வடிகட்டுதல் நடக்க வேண்டும். வாசிப்பு ஜோடி ஒரே அல்லது வெவ்வேறு கட்டுப்பாட்டு துண்டுகளுக்குள் உள்ளதா என்பதைப் பொறுத்து, வெவ்வேறு வடிகட்டுதல் அளவுகோல்கள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. இணைக்கப்பட்டவை அதே கட்டுப்பாட்டு துண்டுக்கு வரைபடத்தைப் படித்தால், அவை தகவல் இல்லாத தொங்கும் முனைகள் அல்லது வட்டமிடப்பட்ட துண்டுகளைக் குறிக்கின்றன, எனவே அவை தரவுத்தொகுப்பிலிருந்து அகற்றப்படுகின்றன. இந்த வாசிப்புகள் பி. சி. ஆர் கலைப்பொருட்கள், ஜீரணிக்கப்படாத குரோமாட்டின் துண்டுகள் அல்லது வெறுமனே, குறைந்த சீரமைப்பு தரத்துடன் படிக்கலாம். அவற்றின் தோற்றம் எதுவாக இருந்தாலும், அதே துண்டுடன் வரைபடமாக்கப்பட்ட வாசிப்புகள் "போலி சமிக்ஞைகள்" என்று கருதப்படுகின்றன, மேலும் அவை பொதுவாக கீழ்நிலை செயலாக்கத்திற்கு முன் நிராகரிக்கப்படுகின்றன. தனித்துவமான கட்டுப்பாட்டு துண்டுகளாக வரைபடமாக்கப்பட்ட மீதமுள்ள ஜோடி ரீட்களும் ஒரே மாதிரியான/தேவையற்ற பி. சி. ஆர் தயாரிப்புகளை நிராகரிக்க வடிகட்டப்படுகின்றன, மேலும் அதே வரிசை அல்லது 5 'சீரமைப்பு நிலைகளைப் பகிர்ந்து கொள்ளும் ரீட்களை அகற்றுவதன் மூலம் இது அடையப்படுகிறது. சோதனை நோக்கத்திற்கு ஏற்றவாறு கூடுதல் அளவிலான வடிகட்டுதலையும் பயன்படுத்தலாம். எடுத்துக்காட்டாக, செரிமானம் செய்யப்படாத கட்டுப்பாட்டு தளங்கள் செயலற்ற முறையில் அடையாளம் காணப்படுவதை விட, இடையில் ஒரு சிறிய தூரத்துடன் (பயனர் வரையறுக்கப்பட்ட, அனுபவம் அடிப்படையிலான) அதே குரோமோசோமால் இழையுடன் வரைபடமாக்கப்பட்ட வாசிப்புகளை அகற்றுவதன் மூலம் குறிப்பாக வடிகட்டப்படலாம். பின்னிங் மற்றும் பின்-லெவல் வடிகட்டுதல் அவற்றின் நடுப்புள்ளி ஆயத்தொகுதிகளின் அடிப்படையில், ஹை-சி கட்டுப்பாட்டு துண்டுகள் நிலையான மரபணு இடைவெளிகளில் பிணைக்கப்படுகின்றன, தொட்டி அளவுகள் 40 kb முதல் 1 Mb வரை இருக்கும். இந்த அணுகுமுறையின் பின்னணியில் உள்ள காரணம் என்னவென்றால், தரவுகளின் சிக்கலைக் குறைப்பதன் மூலமும், ஒரு தொட்டி மரபணு அளவிலான தொடர்புகளின் எண்ணிக்கையைக் குறைப்பதன் மூலமும், மரபணு தொட்டிகள் மிகவும் வலுவான மற்றும் குறைவான சத்தம் கொண்ட சமிக்ஞைகளை உருவாக்க அனுமதிக்கின்றன, தொடர்பு அதிர்வெண்களின் வடிவத்தில், தீர்மானத்தின் செலவில் (கட்டுப்பாட்டு துண்டு நீளம் இன்னும் ஹை-சி தெளிவுத்திறனுக்கான இறுதி இயற்பியல் வரம்பாக இருந்தாலும்). தொட்டி முதல் தொட்டி இடைவினைகள் வெறுமனே தொகையை எடுத்துக்கொள்வதன் மூலம் ஒருங்கிணைக்கப்படுகின்றன, இருப்பினும் சமிக்ஞையை மேலும் மேம்படுத்துவதற்காக பல ஆண்டுகளாக அதிக கவனம் மற்றும் தகவல் முறைகளும் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. ராவ் மற்றும் பலர் விவரித்த அத்தகைய ஒரு முறை. தொட்டி அளவின் வரம்பை சிறிய மற்றும் சிறிய தொட்டிகளுக்குத் தள்ளுவதை நோக்கமாகக் கொண்டுள்ளது, இறுதியில் 80 சதவீத தொட்டிகளில் ஒவ்வொன்றும் 1000 ரீட்களால் மூடப்பட்டிருக்கும், இது இறுதி பகுப்பாய்வு முடிவுகளின் தெளிவுத்திறனை கணிசமாக அதிகரித்தது. துண்டு-நிலை வடிகட்டலைப் போலவே, பெறப்பட்ட தரவுகளிலிருந்து சோதனைக் கலைப்பொருட்களை வெளியேற்றுவதற்கும் தொட்டி-நிலை வடிகட்டுதல் நடைபெறுகிறது. அதிக சத்தம் மற்றும் குறைந்த சமிக்ஞைகளைக் கொண்ட தொட்டிகள் அகற்றப்படுகின்றன, ஏனெனில் அவை பொதுவாக டெலோமியர்ஸ் மற்றும் சென்ட்ரோமியர்களைச் சுற்றியுள்ள அதிக தொடர்ச்சியான மரபணு உள்ளடக்கங்களைக் குறிக்கின்றன. தனிப்பட்ட தொட்டி தொகைகளை அனைத்து தொட்டிகளின் கூட்டுத்தொகையுடன் ஒப்பிடுவதன் மூலமும், கீழே உள்ள 1 சதவீத தொட்டிகளை அகற்றுவதன் மூலமும் அல்லது மாறுபாட்டை சத்தத்தின் அளவீடாகப் பயன்படுத்துவதன் மூலமும் இது செய்யப்படுகிறது. குறைந்த-கவரேஜ் தொட்டிகள், அல்லது ஒரு பதிவு-இயல்பான விநியோகத்தின் மையத்திற்குக் கீழே உள்ள மூன்று நிலையான விலகல்கள் (இது ஒரு மரபணு தொட்டிக்கு மொத்த தொடர்புகளின் எண்ணிக்கைக்கு பொருந்துகிறது), MAD-அதிகபட்சம் (அதிகபட்ச அனுமதிக்கப்பட்ட சராசரி முழுமையான விலகல்) வடிப்பானைப் பயன்படுத்தி அகற்றப்படுகின்றன. பின்னப்பட்ட பிறகு, ஹை-சி தரவு ஒரு சமச்சீர் அணி வடிவத்தில் சேமிக்கப்படும். மிக சமீபத்தில், வெவ்வேறு ஹை-சி சோதனைகளுக்கு உகந்த தொட்டி அளவை முன்கூட்டியே தீர்மானிக்க பல அணுகுமுறைகள் முன்மொழியப்பட்டுள்ளன. லீ மற்றும் பலர். 2018 ஆம் ஆண்டில் டிடாக் விவரிக்கப்பட்டது, இது தொட்டி அளவு தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட ஒரு முறையாகும், இதில் ஹை-சி மேட்ரிக்ஸின் கட்டமைப்பு என்ட்ரோபி ஒரு நிலையான குறைந்தபட்சத்தை அடைகிறது. மறுபுறம், குவாஸார், இன்னும் கொஞ்சம் தரமான மதிப்பீட்டை வழங்குகிறது, மேலும் அதிகபட்ச பயன்படுத்தக்கூடிய தெளிவுத்திறனைக் கண்டறிய மாதிரிகளின் பிரதி மதிப்பெண்களை ஒப்பிடுகிறது (பிரதிகள் உண்மையில் சோதனை நோக்கத்திற்காக சேர்க்கப்பட்டுள்ளன). சில வெளியீடுகள் ஒற்றை-துண்டு மட்டத்தில் தொடர்பு அதிர்வெண்களை மதிப்பெண் பெற முயற்சித்தன, அங்கு குறைந்த எண்ணிக்கையிலான ரீட்களுடன் கூட அதிக அளவை அடைய முடியும். ஹைசி பிளஸ், ஜாங் மற்றும் பலர் உருவாக்கிய ஒரு கருவி. 2018 ஆம் ஆண்டில், அசல் ரீட்களின் 1/16 ஐ மட்டுமே பயன்படுத்தி அசல் மாட்ரிக்ஸ்களைப் போலவே ஹை-சி மேட்ரிக்ஸ்களைக் குறிக்க முடியும். சமநிலைப்படுத்தல்/இயல்பாக்கம் சமநிலைப்படுத்தல் என்பது பெறப்பட்ட ஹை-சி தரவின் சார்பு திருத்தத்தின் செயல்முறையைக் குறிக்கிறது, மேலும் இது வெளிப்படையாகவோ அல்லது மறைமுகமாகவோ இருக்கலாம். தெளிவான சமநிலைப்படுத்தும் முறைகளுக்கு ஹை-சி ரீட்களுடன் (அல்லது பொதுவாக எந்தவொரு உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறை நுட்பத்துடனும்) தொடர்புடையதாக அறியப்படும் சார்புகளின் வெளிப்படையான வரையறைகள் தேவைப்படுகின்றன, இதில் ரீட் மேப்பபிலிட்டி, ஜிசி உள்ளடக்கம் மற்றும் தனிப்பட்ட துண்டு நீளம் ஆகியவை அடங்கும். கருதப்படும் சார்புகள் ஒவ்வொன்றிற்கும் ஒரு திருத்தக் காரணி முதலில் கணக்கிடப்படுகிறது, அதைத் தொடர்ந்து அவற்றின் ஒவ்வொரு கலவையும், பின்னர் ஒரு மரபணு தொட்டிக்கு ரீட் எண்ணிக்கையில் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இருப்பினும், சில சார்புகள் அறியப்படாத தோற்றத்திலிருந்து வரலாம், இந்த விஷயத்தில் அதற்கு பதிலாக ஒரு மறைமுக சமநிலைப்படுத்தும் அணுகுமுறை பயன்படுத்தப்படுகிறது. உள்ளார்ந்த சமநிலை ஒவ்வொரு மரபணு இருப்பிடமும் "சமமான தெரிவுநிலையைக்" கொண்டிருக்க வேண்டும் என்ற அனுமானத்தை நம்பியுள்ளது, இது ஹை-சி தரவுகளில் உள்ள ஒவ்வொரு மரபணு இருப்பிடத்திலும் உள்ள தொடர்பு சமிக்ஞை அதே மொத்த அளவு வரை சேர்க்க வேண்டும் என்பதைக் குறிக்கிறது. மறு செய்கை திருத்தம் என்று அழைக்கப்படும் ஒரு அணுகுமுறை சிங்க்ஹார்ன்-நோப் சமநிலைப்படுத்தும் வழிமுறையைப் பயன்படுத்துகிறது மற்றும் மேற்கூறிய அனுமானத்தைப் பயன்படுத்தி சமச்சீர் மேட்ரிக்ஸை சமநிலைப்படுத்த முயற்சிக்கிறது (மேட்ரிக்ஸில் உள்ள ஒவ்வொரு வரிசை மற்றும் நெடுவரிசையின் கூட்டுத்தொகையை சமன் செய்வதன் மூலம்). வழிமுறை இரண்டு படிகளுக்கு இடையில் மாறி மாறி வருகிறதுஃ 1) ஒவ்வொரு வரிசையையும் அதன் சராசரியால் வகுத்தல், மற்றும் 2) ஒவ்வொரு நெடுவரிசையையும் அதன் சராசரியால் வகுத்தல், அவை இறுதியில் ஒன்றிணைவதற்கு உத்தரவாதம் அளிக்கின்றன மற்றும் தொடர்பு மேட்ரிக்ஸில் வெளிப்படையாக உயர் வரிசைகள் அல்லது நெடுவரிசைகளை விட்டுச்செல்லாது. தொடர்ச்சியான கூறு இயல்பாக்கம் (எஸ். சி. என்), நைட்-ரூயிஸ் மேட்ரிக்ஸ்-சமநிலை அணுகுமுறை மற்றும் ஐகென் வெக்டர் சிதைவு (ஐ. சி. இ) இயல்பாக்கம் உள்ளிட்ட ஹை-சி தரவுகளில் உள்ளார்ந்த சார்புகளை இயல்பாக்குவதற்கான பிற கணக்கீட்டு முறைகளும் உள்ளன. இறுதியில், வெளிப்படையான மற்றும் மறைமுகமான சார்பு திருத்த முறைகள் இரண்டும் ஒப்பிடக்கூடிய முடிவுகளைத் தருகின்றன. பகுப்பாய்வு மற்றும் தரவு விளக்கம் ஒரு முத்திரையிடப்பட்ட, மரபணு அளவிலான தொடர்பு மேட்ரிக்ஸ் மூலம், பாலூட்டி மரபணுக்களில் காணப்பட்ட பொதுவான தொடர்பு வடிவங்களை உயிரியல் ரீதியாக அடையாளம் கண்டு விளக்க முடியும், அதே நேரத்தில் மிகவும் அரிதான, வட்ட குரோமோசோம்கள் மற்றும் சென்ட்ரோமியர் கிளஸ்டரிங் போன்ற குறைவான அடிக்கடி காணப்பட்ட வடிவங்கள், அடையாளம் காண கூடுதல் சிறப்பாக வடிவமைக்கப்பட்ட முறைகள் தேவைப்படலாம். 1. சிஸ்/டிரான்ஸ் இடைவினை விகிதம் சிஸ்/டிரான்ஸ் இடைவினைகள் ஹை-சி வரைபடங்களில் காணப்பட்ட இரண்டு வலுவான தொடர்பு வடிவங்களில் ஒன்றாகும். அவை லோக்கஸ்-குறிப்பிட்டவை அல்ல, எனவே அவை ஒரு மரபணு நிலை வடிவமாக கருதப்படுகின்றன. பொதுவாக, வெவ்வேறு குரோமோசோம்களில் (டிரான்ஸ்) வசிக்கும் ஜோடி இருப்பிடங்களை விட, ஒரே குரோமோசோமில் (சிஸ் இல்) வசிக்கும் ஜோடி இருப்பிடங்களுக்கு சராசரியாக அதிக தொடர்பு அதிர்வெண் காணப்படுகிறது. ஹை-சி இடைவினை மேட்ரிக்ஸ்களில், சிஸ்/டிரான்ஸ் இடைவினைகள் ஒரு மூலைவிட்டத்தை மையமாகக் கொண்ட சதுரத் தொகுதிகளாகத் தோன்றுகின்றன, அதே நேரத்தில் தனிப்பட்ட குரோமோசோம்களுடன் பொருந்துகின்றன. இந்த முறை வெவ்வேறு இனங்கள் மற்றும் உயிரணு வகைகளில் ஒப்பீட்டளவில் சீராக இருப்பதால், தரவுகளின் தரத்தை மதிப்பிடுவதற்கு இதைப் பயன்படுத்தலாம். சீரற்ற பின்னணி பிணைப்பு அல்லது ஏதேனும் அறியப்படாத காரணி காரணமாக ஒரு சத்தமான சோதனை, குறைந்த சிஸ்-டிரான்ஸ் தொடர்பு விகிதத்தை விளைவிக்கும் (சிஸ் மற்றும் டிரான்ஸ் தொடர்புகள் இரண்டையும் சிஸ் மற்றும் டிரான்ஸ் தொடர்புகள் இரண்டையும் இதே அளவிற்கு பாதிக்கும் என்று எதிர்பார்க்கப்படுகிறது), மேலும் உயர்தர சோதனைகள் பொதுவாக மனித மரபணுவுக்கு 40 முதல் 60 வரை சிஸ்/டிரான்ஸ் தொடர்பு விகிதத்தைக் கொண்டுள்ளன. 2. தூர-சார்ந்த தொடர்பு அதிர்வெண் இந்த முறை ஒரு மரபணு மட்டத்தில் தொடர்பு அதிர்வெண்களின் தூர-சார்ந்த சிதைவைக் குறிக்கிறது, மேலும் இரண்டு வலுவான ஹை-சி தொடர்பு வடிவங்களில் இரண்டாவதைக் குறிக்கிறது. சிஸ்-இன்டராக்ட்டிங் லோகிக்கு இடையிலான இன்டராக்ஷன் அதிர்வெண்கள் குறைவதால் (அவற்றுக்கிடையேயான மேலும் தூரத்தின் விளைவாக), இன்டராக்ஷன் மேட்ரிக்ஸில் உள்ள மூலைவிட்டத்திலிருந்து விலகிச் செல்வதை இன்டராக்ஷன் அதிர்வெண் படிப்படியாகக் குறைவதைக் காணலாம். கொடுக்கப்பட்ட தூரத்தால் பிரிக்கப்பட்ட இருப்பிட ஜோடிகளின் பண்புகளை புள்ளிவிவர ரீதியாக வகைப்படுத்த பல்வேறு பாலிமர் மாதிரிகள் உள்ளன, ஆனால் தனித்துவமான பின்னல் மற்றும் பொருத்துதல் தொடர்ச்சியான செயல்பாடுகள் ஆகியவை தரவு புள்ளிகளுக்கு இடையிலான தூர-சார்ந்த தொடர்பு அதிர்வெண்களை பகுப்பாய்வு செய்வதற்கான இரண்டு பொதுவான வழிகளாகும். முதலில், இடைவினை அதிர்வெண்கள் அவற்றின் மரபணு தூரத்தின் அடிப்படையில் பிணைக்கப்படலாம், பின்னர் ஒவ்வொரு தொட்டியின் சராசரியின் தகவல்களையும் பயன்படுத்தி தரவுகளுக்கு ஒரு தொடர்ச்சியான செயல்பாடு பொருத்தப்படுகிறது. இதன் விளைவாக ஏற்படும் சிதைவு செயல்பாடு ஒரு லாக்-லாக் பிளாட்டில் திட்டமிடப்பட்டுள்ளது, இதனால் பாலிமர் மாதிரிகளால் கணிக்கப்பட்ட சக்தி-விதி சிதைவுகளைக் குறிக்க ஒரு நேரியல் கோட்டைப் பயன்படுத்தலாம். இருப்பினும், பெரும்பாலும் ஒரு எளிய பாலிமர் மாதிரி தூர-சார்ந்த தொடர்பு அதிர்வெண்களை முழுமையாகக் குறிக்க போதுமானதாக இருக்காது, இந்த கட்டத்தில் மிகவும் சிக்கலான சிதைவு செயல்பாடுகள் ஏற்படலாம், இது ஹை-சி மேட்ரிக்ஸில் காணப்பட்ட மரபணு-பரந்த வடிவங்களைக் காட்டிலும் லோகஸ்-குறிப்பிட்ட இருப்பதன் காரணமாக தரவின் இனப்பெருக்கம் பாதிக்கப்படலாம் (அவை பாலிமர் மாதிரிகளால் கருத்தில் கொள்ளப்படுவதில்லை). 3. குரோமாட்டின் பெட்டிகள் ஹை-சி வரைபடங்களில் காணப்படும் வலுவான இருப்பிட-குறிப்பிட்ட வடிவம் குரோமாட்டின் பெட்டிகளாகும், இது ஒரு பிளேட் அல்லது "செக்கர்-போர்டு" போன்ற வடிவத்தை எடுக்கும்-தொடர்பு மேட்ரிக்ஸில் வடிவம், மாறி மாறி தொகுதிகள் 1 முதல் 10 எம்பி வரை இருக்கும் அளவு (இது மிகக் குறைந்த மாதிரியுடன் கூடிய சோதனைகளில் கூட பிரித்தெடுக்க எளிதாக்குகிறது) மனித மரபணுவில். இந்த வடிவத்தை உயர் மற்றும் குறைந்த அதிர்வெண்களில் காணலாம். குரோமோசோம்கள் தனிப்பட்ட குரோமோசோம்களின் நீளத்துடன் மாறி மாறி வரும் இரண்டு வகையான மரபணு பகுதிகளைக் கொண்டிருப்பதால், ஒரே வகையான இரண்டு பகுதிகளுக்கு இடையிலான தொடர்பு அதிர்வெண்கள் மற்றும் வெவ்வேறு வகையான இரண்டு பகுதிகளுக்கு இடையிலான தொடர்பு அதிர்வெண்கள் மிகவும் வித்தியாசமாக இருக்கலாம். செயலில் (ஏ) மற்றும் செயலற்ற (பி) குரோமாட்டின் பெட்டிகளின் வரையறை முதன்முதலில் லீபர்மேன்-ஐடன் மற்றும் பலர் நிறுவிய முக்கிய கூறு பகுப்பாய்வை அடிப்படையாகக் கொண்டது. 2009இல். அவர்களின் அணுகுமுறை கவனிக்கப்பட்ட மற்றும் எதிர்பார்க்கப்பட்ட சமிக்ஞையின் (தூர-இயல்பாக்கப்பட்ட தொடர்பு மேட்ரிக்ஸிலிருந்து பெறப்பட்ட) விகிதத்தின் ஹை-சி மேட்ரிக்ஸின் தொடர்பைக் கணக்கிட்டது, மேலும் இதன் விளைவாக வரும் பிளாட்டின் நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறை பகுதிகளை முறையே ஏ மற்றும் பி பெட்டிகளாக குறிக்க முதல் ஐகென் வெக்டரின் அடையாளத்தைப் பயன்படுத்தியது. மரபணு அடர்த்தி, டிஎன்ஏ அணுகல், ஜிசி உள்ளடக்கம், பிரதி நேரம் மற்றும் ஹிஸ்டோன் மதிப்பெண்கள் போன்ற குரோமாட்டின் நிலைகளுடன் குரோமாட்டின் பெட்டிகள் தொடர்புபடுத்தப்பட்டுள்ளன என்று பல மரபணு ஆய்வுகள் சுட்டிக்காட்டியுள்ளன. எனவே, வகை ஏ பெட்டிகள் யூக்ரோமாட்டின் மரபணு அடர்த்தியான பகுதிகளைக் குறிக்க மிகவும் குறிப்பாக வரையறுக்கப்படுகின்றன, அதே நேரத்தில் வகை பி பெட்டிகள் குறைந்த மரபணு செயல்பாடுகளைக் கொண்ட பன்முக நிற பகுதிகளைக் குறிக்கின்றன. ஒட்டுமொத்தமாக, குரோமாட்டின் பெட்டிகள் ஆர்வமுள்ள மரபணுவின் பொதுவான அமைப்புக் கொள்கைகள் பற்றிய நுண்ணறிவுகளை வழங்குகின்றன. HOMER, HiTC R மற்றும் CscoreTool உட்பட, கடந்த பத்தாண்டுகளில் கம்பார்ட்மெண்ட் அழைப்பைச் செய்யக்கூடிய மேலும் மேலும் உயிர் தகவலியல் கருவிகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. அவை ஒவ்வொன்றும் அசல் 2009 அணுகுமுறையில் செய்யப்பட்ட அவற்றின் சொந்த வேறுபாடுகள் மற்றும் உகப்பாக்கங்களைக் கொண்டிருந்தாலும், அவற்றின் அடிப்படை நெறிமுறைகள் இன்னும் முக்கிய கூறு பகுப்பாய்வை நம்பியுள்ளன. 4. இடவியல் ரீதியாக இணைக்கும் களங்கள் (TADs) TAD கள் துணை-Mb கட்டமைப்புகள் ஆகும், அவை உள்ளூர் விளம்பரதாரர்-மேம்பாட்டாளர் தொடர்புகள் போன்ற மரபணு-ஒழுங்குமுறை அம்சங்களைக் கொண்டிருக்கலாம். மேலும் பொதுவாக, டிஏடிக்கள் அடிப்படை உயிரியல் வழிமுறைகளின் ஒரு வெளிப்படையான பண்பாகக் கருதப்படுகின்றன, இது டிஏடிகளை மரபணுவின் நிலையான கட்டமைப்பு அம்சத்தைக் காட்டிலும் வளைய வெளியேற்றங்கள், கம்பார்ட்மெண்டலைசேஷன்கள் அல்லது எந்தவொரு மாறும் மரபணு வடிவமாகவும் வரையறுக்கிறது. எனவே, டிஏடிக்கள் ஒழுங்குமுறை நுண் சூழல்களைக் குறிக்கின்றன, மேலும் பொதுவாக ஹை-சி வரைபடத்தில் மிகவும் சுய-தொடர்பு பகுதிகளின் தொகுதிகளாக காட்டப்படுகின்றன, இதில் பிராந்தியத்திற்குள் தொடர்பு அதிர்வெண்கள் இரண்டு அருகிலுள்ள பகுதிகளுக்கு இடையிலான தொடர்பு அதிர்வெண்களை விட கணிசமாக அதிகமாக உள்ளன. ஹை-சி இடைவினை மேட்ரிக்ஸ்களில், டிஏடிக்கள் மூலைவிட்டத்தை மையமாகக் கொண்ட உயர்ந்த இடைவினை அதிர்வெண்களின் சதுர தொகுதிகள் ஆகும். இருப்பினும், இது வெறுமனே ஒரு மிகைப்படுத்தப்பட்ட விளக்கமாகும், மேலும் உண்மையான வடிவத்தை அடையாளம் காண அதிக புள்ளிவிவர செயலாக்கம் மற்றும் மதிப்பீடு தேவைப்படுகிறது. டிஎடிகளை அடையாளம் காண்பதற்கான ஒரு அணுகுமுறை டிக்சன் மற்றும் பலர் விவரித்தனர், அங்கு அவர்கள் முதலில் (சில மரபணு வரம்பிற்குள்) சராசரி மேல்நோக்கிய தொடர்புகளுக்கும் மேட்ரிக்ஸில் உள்ள ஒவ்வொரு தொட்டியிலும் சராசரி கீழ்நோக்கிய தொடர்புகளுக்கும் இடையிலான வேறுபாட்டைக் கணக்கிட்டனர். இந்த வேறுபாடு பின்னர் மறைக்கப்பட்ட மார்கோவ் மாதிரியை அடிப்படையாகக் கொண்ட ஒரு சி-ஸ்கொயர் புள்ளிவிவரமாக மாற்றப்பட்டது, மேலும் இந்த சி-ஸ்கொயர் மதிப்பில் எந்தவொரு கூர்மையான மாற்றமும், திசைக் குறியீடு என்று அழைக்கப்படுகிறது, இது டிஏடிகளின் எல்லைகளை வரையறுக்கும். மாற்றாக, நௌமோவா மற்றும் பலர் செய்ததைப் போல, டிஏடி எல்லைகளை வரையறுக்க சராசரி மேல்நோக்கிய மற்றும் கீழ்நிலை தொடர்புகளுக்கு இடையிலான விகிதத்தை ஒருவர் எளிதாக எடுத்துக் கொள்ளலாம். மற்றொரு அணுகுமுறை என்னவென்றால், ஒவ்வொரு தொட்டியையும் கடக்கும் சராசரி தொடர்பு அதிர்வெண்களைக் கணக்கிடுவது, மீண்டும் சில முன்னரே தீர்மானிக்கப்பட்ட மரபணு வரம்பிற்குள். இதன் விளைவாக வரும் மதிப்பு காப்பு மதிப்பெண் என்று குறிப்பிடப்படுகிறது, மேலும் மேட்ரிக்ஸின் மூலைவிட்டத்தில் ஒரு சதுர ஸ்லைடிங்கின் சராசரி என்று கருதலாம் (கிரேன் மற்றும் பலர்). இந்த மதிப்பு TAD எல்லைகளில் குறைவாக இருக்கும் என்று எதிர்பார்க்கப்படுகிறது; எனவே, உள்ளூர் மினிமாவை (எல்லைகள்) கண்டறிய நிலையான புள்ளிவிவர நுட்பங்களைப் பயன்படுத்தலாம், மேலும் தொடர்ச்சியான எல்லைகளுக்கு இடையிலான பகுதிகளை TAD களாக வரையறுக்கலாம். இருப்பினும், இன்று பெருகிய முறையில் அங்கீகரிக்கப்பட்டபடி, டிஏடிக்கள் முந்தைய முறைகளால் வழங்கப்பட்ட ஒரு பரிமாண மதிப்பெண்களால் முழுமையாக வகைப்படுத்த முடியாத ஒரு படிநிலை தொடர் கட்டமைப்புகளைக் குறிக்கின்றன. புதிய தரவுத்தொகுப்புகளில் கிடைக்கும் அதிகரித்த தெளிவுத்திறன் இப்போது பல அளவிலான பகுப்பாய்வு அணுகுமுறைகளுடன் TAD களை வெளிப்படையாக உரையாற்ற முடியும். ஆர்மட்டஸால் முதன்முதலில் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டபடி, தீர்மான குறிப்பிட்ட களங்களை அடையாளம் காண முடியும் மற்றும் தீர்மானங்கள் முழுவதும் பாதுகாக்கப்பட்ட களங்களின் ஒருமித்த தொகுப்பைக் கணக்கிட முடியும், இது TAD அழைப்பின் சிக்கலை அவற்றின் உள்ளூர் தொடர்பு அடர்த்திகளின் அடிப்படையில் ஸ்கோரிங் செயல்பாடுகளின் உகப்பாக்கமாக மாற்றுகிறது. உயர் தெளிவுத்திறன் தரவுத்தொகுப்புகளில் சிறந்த கணினி செயல்திறனை அடைய லாவபர்ஸ்ட், மிஸ்டர்டிஏடிஃபைண்டர், 3டிநெட்மாட் மற்றும் மெட்ரியோஷ்கா போன்ற பல்வேறு புறநிலை செயல்பாடுகளுடன் இந்த அணுகுமுறையின் மாறுபாடுகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. 5. புள்ளி தொடர்புகள் உயிரியல் ரீதியாக, ஒழுங்குமுறை தொடர்புகள் பொதுவாக டிஏடிக்களை விட மிகச் சிறிய அளவில் நிகழ்கின்றன, மேலும் இரண்டு மரபணு கூறுகள் 1 கிலோபி வரை சிறிய தூரத்திற்குள் ஒரு மரபணுவின் வெளிப்பாட்டை செயல்படுத்தலாம்/தடுக்கலாம். எனவே, ஹை-சி வரைபடங்களை விளக்குவதில் புள்ளி தொடர்புகள் முக்கியமானவை, மேலும் அவை தொடர்பு நிகழ்தகவில் உள்ளூர் செறிவூட்டல்களாக தோன்றும் என்று எதிர்பார்க்கப்படுகிறது. இருப்பினும், புள்ளி தொடர்புகளை அடையாளம் காண்பதற்கான தற்போதைய முறைகள் அனைத்தும் இயற்கையில் மறைமுகமாக உள்ளன, அதில் அவை ஒரு புள்ளி தொடர்பு எப்படி இருக்க வேண்டும் என்பதை அறிவுறுத்துவதில்லை. அதற்கு பதிலாக, புள்ளி பிறழ்வுகள் ஹை-சி மேட்ரிக்ஸில் எதிர்பார்த்ததை விட அதிக தொடர்பு அதிர்வெண்களைக் கொண்ட அவுட்லையர்களாக அடையாளம் காணப்படுகின்றன, ஏனெனில் பின்னணி மாதிரி தூர-சிதைவு செயல்பாடுகள் போன்ற வலுவான சமிக்ஞைகளை மட்டுமே கொண்டுள்ளது. பின்னணி மாதிரியை உள்ளூர் சமிக்ஞை விநியோகங்கள் மற்றும் உலகளாவிய அணுகுமுறைகள் (அதாவது. குரோமோசோம்-அகலம்/மரபணு-அகலம்). மேற்கூறிய பல உயிர் தகவலியல் தொகுப்புகள் புள்ளி தொடர்புகளை அடையாளம் காண வழிமுறைகளை இணைக்கின்றன. சுருக்கமாக, தனிப்பட்ட ஜோடி வாரியான தொடர்புகளின் முக்கியத்துவம் கணக்கிடப்படுகிறது, மேலும் அவை உண்மையான தகவல் புள்ளி தொடர்புகளாக அங்கீகரிக்கப்படுவதற்கு முன்பு பல சோதனைகளுக்கு கணிசமாக அதிக அவுட்லையர்கள் சரிசெய்யப்படுகின்றன. இந்த தொடர்புகள் உண்மையில் உயிரியல் முக்கியத்துவம் வாய்ந்தவை என்பதைக் குறிக்க, செறிவூட்டல் மதிப்பெண்கள் மற்றும் உயிரியல் பிரதிகளின் பகுப்பாய்வு போன்ற கூடுதல் சான்றுகளுடன் அடையாளம் காணப்பட்ட புள்ளி தொடர்புகளைப் பாராட்டுவது உதவியாக இருக்கும். பயன்பாடு மேம்பாடு 1. செல் பிரிவின் போது குரோமாட்டின் இணக்க மாற்றங்களை ஹை-சி வெளிப்படுத்த முடியும். இடைப்பட்டத்தில், குரோமாடின்கள் பொதுவாக தளர்வானவை மற்றும் சுறுசுறுப்பானவை, இதனால் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ஒழுங்குமுறை மற்றும் பிற ஒழுங்குமுறை நடவடிக்கைகள் நடைபெறலாம். மைட்டோசிஸ் மற்றும் செல் பிரிவுக்குள் நுழையும் போது, குரோமாடின்கள் அடர்த்தியான உருளை குரோமோசோம்களாக சுருக்கமாக மடிக்கப்படுகின்றன. கடந்த ஐந்து ஆண்டுகளுக்குள், ஒற்றை செல் ஹை-சி இன் வளர்ச்சி செல் சுழற்சி முழுவதும் குரோமாடின்கள்/குரோமோசோம்களின் முழு 3 டி கட்டமைப்பு நிலப்பரப்பை சித்தரிக்க உதவியது, மேலும் பல ஆய்வுகள் இந்த அடையாளம் காணப்பட்ட மரபணு களங்கள் இடைப்பட்ட நிலையில் மாறாமல் இருப்பதைக் கண்டறிந்துள்ளன, மேலும் செல் மைட்டோசிஸில் நுழையும் போது மெளனம் செய்யும் வழிமுறைகளால் அழிக்கப்படுகின்றன. மைட்டோடிக் பிரிவு முடிந்ததும், செல் இன்டர்பேஸை மீண்டும் நுழையும் போது, குரோமாட்டின் 3D கட்டமைப்புகள் மீண்டும் நிறுவப்படுவதைக் காணலாம், மேலும் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் கட்டுப்பாடு மீட்டெடுக்கப்படுகிறது. 2. டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ஒழுங்குமுறை மற்றும் விதி நிர்ணயம் கரு ஸ்டெம் செல்கள் (ஈஎஸ்சி) மற்றும் தூண்டப்பட்ட ப்ளூரிபோடென்ட் ஸ்டெம் செல்கள் (ஐபிஎஸ்சி) ஆகியவற்றை பல்வேறு முதிர்ந்த செல் வம்சாவளிகளுக்குள் வேறுபடுத்துவது குரோமோசோம் கட்டமைப்புகளில் உலகளாவிய மாற்றங்களுடனும், அதன் விளைவாக தொடர்பு இயக்கவியலுடனும் இணைந்து டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் ஆக்டிவேஷன்/சைலன்சிங்கின் ஒழுங்குமுறையை அனுமதிக்கிறது என்று சந்தேகிக்கப்படுகிறது. இந்த ஆராய்ச்சி கேள்வியை விசாரிக்க நிலையான ஹை-சி பயன்படுத்தப்படலாம். 2015 ஆம் ஆண்டில், டிக்சன் மற்றும் பலர். உயர் ஐந்து செல்களாக வேறுபடும் போது மனித ESC களில் உலகளாவிய 3D இயக்கவியலைப் பிடிக்க நிலையான ஹை-சி பயன்படுத்தப்பட்டது. வேறுபாடு தொடர்பான டிஏடி-களில் மாறும் தொடர்புகளை சித்தரிக்கும் ஹை-சியின் திறன் காரணமாக, ஆராய்ச்சியாளர்கள் டிஹெச்எஸ் தளங்களின் எண்ணிக்கை அதிகரிப்பு, சி. டி. சி. எஃப் பிணைப்பு திறன், செயலில் உள்ள ஹிஸ்டோன் மாற்றங்கள் மற்றும் ஆர்வமுள்ள இந்த டிஏடி-களுக்குள் இலக்கு மரபணு வெளிப்பாடுகள் ஆகியவற்றைக் கண்டறிந்தனர், மேலும் குறிப்பிடத்தக்க பங்கேற்பைக் கண்டறிந்தனர் உடற்கூறு உயிரணு மறுசீரமைப்பின் போது தொடர்பு வலையமைப்பில் ஓ. சி. டி 4, என். ஏ. என். ஓ. ஜி மற்றும் எஸ். ஓ. எக்ஸ் 2 போன்ற முக்கிய ப்ளூரிபோடென்ஸி காரணிகள். அப்போதிருந்து, டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் ஒழுங்குமுறை நடவடிக்கைகளை ஆராய்வதற்கான நிலையான முறைகளில் ஒன்றாக ஹை-சி அங்கீகரிக்கப்பட்டுள்ளது, மேலும் குரோமோசோம் கட்டமைப்பு செல் விதியுடன் நெருக்கமாக தொடர்புடையது என்பதை உறுதிப்படுத்தியுள்ளது. 3. வளர்ச்சி மற்றும் வளர்ச்சி பாலூட்டிகளின் உடல் வளர்ச்சி மற்றும் வளர்ச்சி விந்து மற்றும் ஓசைட்டின் கருத்தரித்தல் மூலம் தொடங்குகிறது, அதைத் தொடர்ந்து ஜைகோட் நிலை, 2-செல், 4-செல் மற்றும் 8-செல் நிலை, பிளாஸ்டோசிஸ்ட் நிலை மற்றும் இறுதியாக கரு நிலை. வளர்ச்சி மற்றும் வளர்ச்சியின் போது விரிவான மரபணு கட்டமைப்பை ஆராய்வதை ஹை-சி சாத்தியமாக்கியது, ஏனெனில் சிஸ்-ஹை-சி மற்றும் இன் சிட்டு ஹை-சி ஆகிய இரண்டும் டிஏடிக்கள் மற்றும் மரபணு ஏ மற்றும் பி பெட்டிகள் வெளிப்படையாக இல்லை என்றும் ஓசைட் உயிரணுக்களில் நன்கு கட்டமைக்கப்படவில்லை என்றும் தெரிவிக்கின்றன. குரோமாடினின் இந்த கட்டமைப்பு அம்சங்கள் படிப்படியாக பலவீனமான அதிர்வெண்களிலிருந்து கருத்தரித்த பிறகு தூய்மையான மற்றும் அடிக்கடி தரவு புள்ளிகளுக்கு மட்டுமே நிறுவப்படுகின்றன, வளர்ச்சி நிலைகள் முன்னேறும்போது. மரபணு பரிணாமம் சமீபத்திய ஆண்டுகளில் 3டி மரபணு கட்டமைப்புகள் குறித்த தரவு மேலும் மேலும் பரவலாகி வருவதால், பரிணாம கட்டமைப்பு அம்சங்கள்/மாற்றங்களைக் கண்காணிப்பதற்கான ஒரு வழிமுறையாக ஹை-சி பயன்படுத்தப்படத் தொடங்குகிறது. மரபணு ஒற்றை நியூக்ளியோடைடு பாலிமார்பிசம் (எஸ்என்பி) மற்றும் டிஏடி பொதுவாக இனங்கள் முழுவதும் பாதுகாக்கப்படுகிறது, குரோமாட்டின் கள பரிணாம வளர்ச்சியில் சி. டி. சி. எஃப் காரணியுடன். இருப்பினும், 3டி கட்டமைப்பில் கட்டமைப்பு பரிணாமங்களை அனுபவிக்க ஹை-சி நுட்பங்களால் பிற காரணிகள் வெளிப்படுத்தப்பட்டுள்ளன. கோடன் பயன்பாட்டு அதிர்வெண் ஒற்றுமை (CUFS), இணை மரபணு இணை கட்டுப்பாடு மற்றும் இடஞ்சார்ந்த இணை பரிணாமம் கொண்ட ஆர்த்தோலோகஸ் தொகுதிகள் (SCOM கள்) ஆகியவை இதில் அடங்கும். பெரிய அளவிலான கள பரிணாம வளர்ச்சிக்கு, குரோமோசோமால் இடமாற்றங்கள், சின்டெனிக் பகுதிகள் மற்றும் மரபணு மறுசீரமைப்பு பகுதிகள் அனைத்தும் ஒப்பீட்டளவில் பாதுகாக்கப்பட்டன. இந்த கண்டுபிடிப்புகள் ஹை-சி தொழில்நுட்பங்கள் யூகாரியோடிக் மரத்தில் ஒரு மாற்றுக் கண்ணோட்டத்தை வழங்கும் திறன் கொண்டவை என்பதைக் குறிக்கின்றன. பல்வேறு புற்றுநோய்களில் குரோமாட்டின் கட்டமைப்பை விவரிக்கவும் ஆய்வு செய்யவும் மற்றும் நோய் நோய்க்கிருமிகளில் அவற்றின் தாக்கத்தை விவரிக்கவும் பல ஆய்வுகள் ஹை-சி பயன்பாட்டைப் பயன்படுத்தியுள்ளன. க்ளோட்ஜென் மற்றும் பலர். டி செல் கடுமையான லிம்போபிளாஸ்டிக் லுகேமியாவை (டி-ஏஎல்எல்) ஆய்வு செய்ய சிட்டு ஹை-சி இல் பயன்படுத்தப்பட்டது மற்றும் ஒரு டிஏடி இணைவு நிகழ்வைக் கண்டறிந்தது, இது ஒரு சி. டி. சி. எஃப் காப்பு தளத்தை அகற்றியது, இது ஆன்கோஜீன் எம்ஒய்சியின் விளம்பரதாரர் ஒரு தொலைதூர சூப்பர் மேம்பாட்டாளருடன் நேரடியாக தொடர்பு கொள்ள அனுமதிக்கிறது. ஃபாங் மற்றும் பலர். குரோமாட்டின் இன்சுலேஷனின் டி-ஏஎல்எல் குறிப்பிட்ட ஆதாயம் அல்லது இழப்பு எவ்வாறு உள்ளது என்பதையும் அவர்கள் காட்டியுள்ளனர், இது மரபணுவின் டிஏடி கட்டமைப்பின் வலிமையை மாற்றுகிறது, இன் சிட்டு ஹை-சி ஐப் பயன்படுத்துகிறது. பரவலான பெரிய பி-செல் லிம்போமா நோயாளியின் முதன்மை பி செல்களின் குரோமாட்டின் கட்டமைப்பை வரைபடமாக்க லோ-சி பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளது மற்றும் நோயாளிக்கும் ஆரோக்கியமான பி-செல்களுக்கும் இடையிலான உயர் குரோமோசோம் கட்டமைப்பு மாறுபாட்டைக் கண்டறிய பயன்படுத்தப்பட்டது. ஒட்டுமொத்தமாக, புற்றுநோய் ஆராய்ச்சியில் ஹை-சி மற்றும் அதன் வகைகளின் பயன்பாடு செல் அசாதாரணத்தின் உந்து காரணிகளின் மூலக்கூறு அடித்தளங்களைப் பற்றிய தனித்துவமான நுண்ணறிவை வழங்குகிறது. இது உயிரியல் நிகழ்வுகளை (டி-ஏஎல்எல் இல் அதிக எம்ஒய்சி வெளிப்பாடு) விளக்க உதவும் மற்றும் புற்றுநோய் உயிரணுக்களுக்கு தனித்துவமான வழிமுறைகளை இலக்காகக் கொண்ட மருந்து வளர்ச்சிக்கு உதவும். குறிப்புகள் மரபியல் நுட்பங்கள்