Cycloheximide chase
சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு சேஸ் மதிப்பீடுகள் என்பது மூலக்கூறு மற்றும் செல்லுலார் உயிரியலில் நிலையான நிலை புரத ஸ்திரத்தன்மையை அளவிட பயன்படுத்தப்படும் ஒரு சோதனை நுட்பமாகும். சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு என்பது யூகாரியோடிக் புரத மொழிபெயர்ப்பில் நீளம் படிநிலையைத் தடுக்கும் ஒரு மருந்து, இதன் மூலம் புரதத் தொகுப்பைத் தடுக்கிறது. வளர்க்கப்பட்ட உயிரணுக்களில் சைக்ளோஹெக்ஸிமைடைச் சேர்ப்பதைத் தொடர்ந்து பல நேர புள்ளிகளில் புரத லைசிஸ் காலப்போக்கில் புரதச் சீரழிவைக் கவனிக்க நடத்தப்படுகிறது, மேலும் இது ஒரு புரதத்தின் அரை ஆயுளைத் தீர்மானிக்கப் பயன்படுத்தப்படலாம். இந்த மதிப்பீடுகள் பெரும்பாலும் புரத மிகுதியை மதிப்பிடுவதற்கு வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டிங் மூலம் பின்பற்றப்படுகின்றன, மேலும் இமேஜ்ஜே போன்ற அளவு கருவிகளைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யலாம். ஈஸ்ட் மற்றும் பாலூட்டி செல் கோடுகள் போன்ற பல்வேறு வகையான செல் வகைகளைப் பயன்படுத்தி சைக்ளோஹெக்ஸிமைட் சேஸ் மதிப்பீடுகள் செயல்படுத்தப்பட்டுள்ளன. பகுப்பாய்விற்கு பயன்படுத்தப்படும் செல் அமைப்பைப் பொறுத்து, மதிப்பீடு பயன்பாடு மற்றும் நேரப் போக்கில் மாறுபடலாம். எடுத்துக்காட்டாக, ஆர்வமுள்ள புரத அடி மூலக்கூறை வெளிப்படுத்தும் ஈஸ்ட் செல்களுக்கு பொதுவாக 90 நிமிடங்கள் வரை நீடிக்கும் சைக்ளோஹெக்ஸிமைட் துரத்தல்கள் தேவைப்படுகின்றன, இது புரத விற்றுமுதல் ஏற்பட அனுமதிக்கிறது. இதற்கு மாறாக, பாலூட்டி உயிரணு கோடுகளில் வெளிப்படும் புரதங்கள் நிலையான நிலையில் மிகவும் நிலையானவை மற்றும் 3 முதல் 8 மணி நேரம் நீடிக்கும் துரத்துதல் தேவைப்படலாம். புரதத்தின் சிக்கல் மற்றும் அது மாதிரி அமைப்புக்கு மிகைப்படுத்தப்பட்டதா அல்லது எண்டோஜெனஸ் ஆக இருக்கிறதா என்பதைப் பொறுத்து, துரத்தலின் தேவையான நீளம் மாறுபடலாம். முழு துரத்தலின் போது புரதத் தொகுப்பு தடுக்கப்படுவதை உறுதிசெய்ய, சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு பெரும்பாலும் ஒவ்வொரு சில மணி நேரங்களுக்கும் மாதிரியில் இணைக்கப்படுகிறது. ஈஸ்டில், சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு துரத்தல்கள் மூலம் காலப்போக்கில் புரத ஸ்திரத்தன்மையை மதிப்பிடுவதற்கு நீக்குதல் விகாரங்கள் அடிக்கடி பயன்படுத்தப்படுகின்றன. எடுத்துக்காட்டாக, சேப்பரோன்கள், E3 தசைநார்கள் மற்றும் வெற்றிட புரதங்கள் போன்ற முக்கியமான சீரழிவு இயந்திரங்கள் இல்லாத ஈஸ்ட் விகாரங்கள் பெரும்பாலும் ஆர்வமுள்ள புரத அடி மூலக்கூறுக்கான சீரழிவு பொறிமுறையை தீர்மானிக்க பயன்படுத்தப்படுகின்றன. மருந்து சிகிச்சைகள் (எம்ஜி132 போன்றவை) சீரழிவு படிகளைத் தடுக்கப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, அதைத் தொடர்ந்து ஆர்வமுள்ள புரதத்தின் ஸ்திரத்தன்மை எவ்வாறு பாதிக்கப்படுகிறது என்பதைக் கவனிக்க சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு துரத்தப்படுகிறது. ஈஸ்ட் நீக்குதல் விகாரங்களுக்கு பதிலாக இணக்கமான நாக் டவுன் நடைமுறைகளை செயல்படுத்துவதன் மூலம் பாலூட்டி உயிரணுக்களில் இந்த சோதனைகள் நடத்தப்படலாம். வெவ்வேறு பிறழ்வுகள் ஒரு புரதத்தின் நிலைத்தன்மையை எவ்வாறு பாதிக்கின்றன என்பதை மதிப்பிடுவதற்கு சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு துரத்தல்கள் மதிப்புமிக்கவை. புரத ஸ்திரத்தன்மைக்கு தேவையான முக்கியமான எச்சங்கள் மற்றும் நோய் தொடர்பான பிறழ்வுகள் உயிரணுக்களுக்குள் புரதத்தின் அரைவாழ்வை எவ்வாறு பாதிக்கலாம் என்பதை தீர்மானிக்க ஈஸ்ட் மற்றும் பாலூட்டி உயிரணுக்களில் சோதனைகள் நடத்தப்பட்டுள்ளன. புரத மடிப்புகளின் சிக்கல்களைப் புரிந்துகொள்வதற்கும், அவை தொடர்புடைய நோய்களின் நோய்க்கிருமிகளுக்கு பிறழ்வுகள் எவ்வாறு பங்களிக்கின்றன என்பதற்கும் இந்த தகவல் மதிப்புமிக்கது. நன்மைகள் புரத ஸ்திரத்தன்மையை மதிப்பிடும் பிற முறைகளுக்கு மாறாக சைக்ளோஹெக்ஸிமைட் சேஸ் மதிப்பீடுகளைப் பயன்படுத்துவதில் பல நன்மைகள் உள்ளன. சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு துரத்தல்கள் பல்வேறு வகையான மாதிரி அமைப்புகளுடன் பயன்படுத்தப்படலாம் மற்றும் கிட்டத்தட்ட எந்த புரத அடி மூலக்கூறையும் ஆய்வு செய்ய செயல்படுத்தப்படலாம். மற்ற மருந்துகளுடன் ஒப்பிடும்போது சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு ஒப்பீட்டளவில் மலிவான கலவையாகும், மேலும் குறுகிய காலத்திற்கு குறைந்த அளவுகளில் பயன்படுத்தும்போது இது பயனுள்ளதாக இருக்கும். பல்ஸ் சேஸ் மதிப்பீடுகள் சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு சேஸ் மதிப்பீடுகளுக்கு ஒரு மாற்று முறையாகும், மேலும் புதிதாக மொழிபெயர்க்கப்பட்ட புரதங்களின் கதிரியக்க லேபிளிங்கையும் அதைத் தொடர்ந்து இதேபோன்ற "சேஸ்" காலத்தையும் உள்ளடக்கியது. இந்த முறை தகவலறிந்தது மற்றும் புதிய புரத மிகுதியைக் கவனிப்பதன் நன்மையை வழங்குகிறது என்றாலும், அதற்குத் தேவையான கதிரியக்க பொருள் குறுகிய அடுக்கு-ஆயுளுடன் விலை உயர்ந்தது மற்றும் சைக்ளோஹெக்ஸிமைடை விட பயன்படுத்த அதிக எச்சரிக்கையைக் கோருகிறது. குறைபாடுகள் சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு துரத்தல் மதிப்பீடுகளை நடத்துவதில் உள்ள சில குறைபாடுகளில் சைக்ளோஹெக்ஸிமைடின் நச்சு தன்மை அடங்கும். நீண்ட காலத்திற்கு அதிக செறிவுகளில் பயன்படுத்தப்படும்போது, சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு உயிரணுக்குள் உள்ள டிஎன்ஏவை சேதப்படுத்தும் மற்றும் முக்கியமான செல்லுலார் செயல்பாட்டை பாதிக்கும். இந்த காரணத்திற்காக, சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு துரத்தல்கள் பொதுவாக 12 மணி நேரத்திற்கு மேல் நீடிக்காது. குறிப்பாக நிலையான புரதத்தின் விற்றுமுதல் ஆய்வு செய்யப்பட்டால் இது ஒரு வரம்பை முன்வைக்கிறது. கூடுதலாக, சைக்ளோஹெக்ஸிமைடு துரத்தல்கள் துடிப்பு துரத்துதல் போன்ற புதிதாக மொழிபெயர்க்கப்பட்ட புரத அளவுகளுக்கு மாறாக நிலையான நிலை புரத அளவுகளைப் பார்க்கும் திறனை மட்டுமே வழங்குகின்றன. எனவே, புரதம் முதிர்ச்சியடையாமல் புரதம் சிதைவடைவதை மட்டுமே கவனிக்க முடியும். குறிப்புகள் மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனைகள் உயிரணு உயிரியல் புரதங்கள்