Q-FISH
குவான்டிடேட்டிவ் ஃப்ளோரசன்ட் இன் சிட்டு ஹைப்ரிடைசேஷன் (க்யூ-ஃபிஷ்) என்பது பாரம்பரிய ஃபிஷ் முறையை அடிப்படையாகக் கொண்ட ஒரு சைட்டோஜெனெடிக் நுட்பமாகும். க்யூ-ஃபிஷில், ஃப்ளோரசன்ட் நுண்ணோக்கி மற்றும் பகுப்பாய்வு மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி குரோமோசோமால் டி. என். ஏவில் உள்ள இலக்கு வரிசைகளை அளவிடுவதற்கு பெப்டைட் நியூக்ளிக் அமிலம் (பி. என். ஏ) ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடுகள் எனப்படும் பெயரிடப்பட்ட (சை 3 அல்லது எஃப். ஐ. டி. சி) செயற்கை டி. என். ஏ பிரதிபலிப்புகளை இந்த நுட்பம் பயன்படுத்துகிறது. கியூ-ஃபிஷ் பொதுவாக டெலோமியர் நீளத்தைப் படிக்கப் பயன்படுத்தப்படுகிறது, இது முதுகெலும்புள்ள விலங்குகளில் குரோமோசோம்களின் தொலைதூர முனையில் அமைந்துள்ள மீண்டும் மீண்டும் வரும் ஹெக்ஸாமெரிக் வரிசைகள் (டிடிஏஜிஜிஜி) ஆகும். டிஎன்ஏ-சேத பதில்கள் மற்றும் மரபணு உறுதியற்ற தன்மையைத் தடுக்க குரோமோசோம் முனைகளில் டெலோமியர்ஸ் அவசியம். இன்றுவரை, டெலோமியர் ஆராய்ச்சித் துறையில் கியூ-ஃபிஷ் முறை தொடர்ந்து பயன்படுத்தப்படுகிறது. பி. என். ஏ முதுகெலும்புகளில் சார்ஜ் செய்யப்பட்ட பாஸ்பேட் குழுக்கள் இல்லாததால், பி. என். ஏ மற்றும் டிஎன்ஏ இடையேயான பிணைப்பு டிஎன்ஏ/டிஎன்ஏ அல்லது டிஎன்ஏ/ஆர்என்ஏ டுப்லெக்ஸ்களை விட வலுவானது. கியூ-ஃபிஷ் பி. என். ஏ. களின் இந்த தனித்துவமான பண்பைப் பயன்படுத்துகிறது, அங்கு குறைந்த அயனி வலிமையில், பி. என். ஏ. க்கள் நிரப்பு ஒற்றை-இழையுள்ள டிஎன்ஏ காட்சிகளுக்கு அனீல் செய்ய முடியும், அதே நேரத்தில் ஒற்றை இழையுள்ள டிஎன்ஏ செய்ய முடியாது. பெயரிடப்பட்ட (சி. சி. சி. டி. ஏ. ஏ) 3 பி. என். ஏவை மட்டுமே (டி. டி. ஏ. ஜி. ஜி. ஜி) என் இலக்கு வரிசைகளுக்கு கலப்பினமாக்க அனுமதிக்கும் நிபந்தனைகளைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், க்யூ-ஃபிஷ் மூலம் பி. என். ஏக்களை டெலோமெரிக் வரிசைகளுக்கு கலப்பினமாக்கலை அளவிட முடியும். வளர்க்கப்பட்ட உயிரணுக்களுக்கான பொதுவான முறை/நெறிமுறை மெட்டாஃபேஸ்-கைது செய்யப்பட்ட உயிரணுக்களைத் தயாரிக்கவும் வளர்க்கப்பட்ட உயிரணுக்களை அறுவடை செய்வதற்கு பல மணி நேரங்களுக்கு முன்பு, கலாச்சார ஊடகத்தில் கொல்ஸிமிட் சேர்க்கப்படுகிறது. மைட்டோடிக் செல்களில் உள்ள மைக்ரோட்யூபூல்களை சீர்குலைப்பதன் மூலம் மெட்டாபேஸ் நிலையில் உள்ள செல்களைக் கைது செய்ய கொல்ஸிமிட் செயல்படுகிறது. செல்கள் பின்னர் டிரிப்சினைஸ் செய்யப்பட்டு ஒரு ஹைபோடோனிக் இடையகத்தில் மீண்டும் இடைநிறுத்தப்படுகின்றன. இது சேகரிக்கப்பட்ட செல்களை வீசி, குரோமோசோம்களைப் பரப்பும். உயிரணுக்களை சரிசெய்யவும் ஹைபோடோனிக் கரைசல் பின்னர் மையவிலக்கு மூலம் அகற்றப்பட்டு மெத்தனால்/பனிப்பாறை அசிட்டிக் அமில நிலைப்படுத்தலில் மீண்டும் இடைநிறுத்தப்படுகிறது. ஸ்லைடுகளைத் தயாரிக்கவும் செல் சஸ்பென்ஷனின் சில துளிகளை ஒரு நுண்ணோக்கி ஸ்லைடில் வைக்கவும், ஒரே இரவில் காற்றை உலர விடவும். அடுத்த நாள், ஸ்லைடை பாஸ்பேட் இடையக உப்புநீரில் (பிபிஎஸ்) பல நிமிடங்கள் மூழ்கடித்து விடுங்கள். ஸ்லைடுகளை ஃபார்மால்டிஹைட்டில் சரிசெய்து, ஸ்லைடுகளை 4 சதவீதம் ஃபார்மால்டிஹைட் கரைசலில் மாற்றி, பல நிமிடங்கள் சரிசெய்யவும். ஸ்லைடுகளை பி. பி. எஸ் மூலம் பல முறை கழுவுங்கள். பெப்சின் ஸ்லைடுகளுடன் ட்ரீட் ஸ்லைடுகள் பின்னர் ஒரு பெப்சின் கரைசலில் மாற்றப்படுகின்றன. பெப்சின் ஒரு புரோட்டீஸ் மற்றும் புரதங்களை பெப்டைடுகளாக ஜீரணிக்க செயல்படுகிறது. ஹைப்ரிடைஸ் பி. என். ஏ ப்ரோப் (சை 3 அல்லது எஃப். ஐ. டி. சி பெயரிடப்பட்ட பி. என். ஏக்கள்) ஹைப்ரிடைசேஷன் கலவையின் ஒரு சிறிய அளவு ஒரு கவர்ஸ்லிப் மீது வைக்கப்பட்டு பின்னர் நிலையான செல்களைக் கொண்ட நுண்ணோக்கி ஸ்லைடில் மெதுவாக வைக்கப்படுகிறது. வெப்ப சிதைவு டிஎன்ஏ ஸ்லைடு பின்னர் ஒரு முன்கூட்டியே சூடாக்கப்பட்ட அடுப்பில் வைக்கப்படுகிறது, அங்கு உயிரணுவில் உள்ள குரோமோசோமல் டிஎன்ஏ 80 டிகிரி செல்சியஸில் பல நிமிடங்களுக்கு சிதைவு செய்யப்படுகிறது. பி. என். ஏ நிரப்பு டிஎன்ஏவாக கலப்பினமாக இருக்க அனுமதிக்கும் வகையில் ஸ்லைடு பின்னர் அறை வெப்பநிலையில் பல மணி நேரம் விடப்படுகிறது. வரம்பற்ற பி. என். ஏ. க்களை அகற்ற வாஷ் ஸ்லைடுகள் மற்றும் கவுண்டர்ஸ்டெய்ன் டிஎன்ஏ (டிஏபிஐ அல்லது பிஐ) ஸ்லைடுகள் பின்னர் வரம்பற்ற பி. என். ஏவை அகற்ற பல்வேறு வாஷ் கரைசல்களில் கவனமாக கழுவப்படுகின்றன. நுண்ணோக்கி ஏற்றும் ஊடகம் பின்னர் செல்களில் வைக்கப்படுகிறது. இந்த ஊடகத்தில் பொதுவாக டிஏபிஐ (ஒரு டிஎன்ஏ கவுண்டர்ஸ்டெய்ன்) மற்றும் பி. என். ஏ ஃப்ளோரசன்ஸைப் பாதுகாப்பதற்கும் ஃபோட்டோப்லீச்சிங்கைக் குறைப்பதற்கும் ஒரு ஆன்டிஃபேட் கரைசல் உள்ளது. படம் பிடிப்பு மற்றும் பகுப்பாய்வு சோதனை மாதிரிகள் படம்பிடிக்கப்படுவதற்கு முன்பு, கேமரா மற்றும் ஃப்ளோரசன்ட் நுண்ணோக்கியின் சரியான அமைப்பை உறுதி செய்வதற்காக ஃப்ளோரசன்ட் குறிப்பு மணிகள் படம்பிடிக்கப்படுகின்றன. கூடுதலாக, இந்த குறிப்பு மணிகள் ஒவ்வொரு கையகப்படுத்தும் அமர்வுக்கும் முன் படம்பிடிக்கப்படும். இது மாதிரிகளுக்கு இடையிலான வேறுபாடுகள் விளக்கு அல்லது கேமராவில் உள்ள பிழைகள் காரணமாக இல்லை என்பதை உறுதி செய்யும். ஒரு மெட்டாபேஸ் செல் பின்னர் கைமுறையாக தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டு கேமராவை மையமாகக் கொண்டுள்ளது. இரண்டு வகையான படங்கள் எடுக்கப்படுகின்றனஃ அவற்றின் மெட்டாபேஸ் நிலையில் கறை படிந்த குரோமோசோம்களின் படங்கள் மற்றும் டெலோமியர்களின் ஃப்ளோரசன்ட் படங்கள். இரண்டு படங்களும் பின்னர் ஒரு ஒருங்கிணைந்த படத்தை உருவாக்குவதற்கு மிகைப்படுத்தப்படலாம். இந்த படம் பின்னர் கேரியோடைப் செய்யப்படலாம் அல்லது பெயரிடப்படலாம். மேலும், p-ஆயுதங்கள் மற்றும் q-ஆயுதங்களில் டெலோமியர் நீளத்தின் இன்ட்ரா-குரோமோசோமல் பரவலை அளவிட முடியும். வெவ்வேறு சோதனைகளின் தரவு ஃப்ளோரசன்ஸ் தீவிரத்தை இயல்பாக்க பயன்படுத்தப்படலாம், அதே நேரத்தில் அறியப்பட்ட எண்ணிக்கையிலான டெலோமெரிக் மீள்நிகழ்வுகளைக் கொண்ட பிளாஸ்மிட்கள் டெலோமியர் ஃப்ளோரசன்ஸ் மற்றும் டெலோமியர் நீளத்தை தொடர்புபடுத்த உதவும் தரங்களாகப் பயன்படுத்தப்படலாம். ஃப்ளோரசன்ட் குறிப்பு மணிகளுக்கு கூடுதலாக, சகோதரி குரோமாடிட்களிலிருந்து வரும் சமிக்ஞை வலிமை சமமாக இருக்க வேண்டும், எனவே தரவுகளின் துல்லியத்தை அளவிட மற்றொரு கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தலாம். கடைசியாக, படங்கள் நிறைவுறாமல் இருப்பது முக்கியம். ஃப்ளோரசன்ஸ் தீவிரம் செறிவூட்டலை அடைந்தால், டெலோமியர் நீளம் குறைத்து மதிப்பிடப்படுகிறது. க்யூ-ஃபிஷ் பட பகுப்பாய்வு மென்பொருள் ஃபிளின்ட்பாக்ஸ் நெட்வொர்க்கிலிருந்து இலவசமாகக் கிடைக்கிறது. பயன்பாடுகள் மற்றும் முக்கியத்துவம் கியூ-ஃபிஷ் டெலோமியர் நீளம் விநியோகம் தொடர்பான தகவல்களை அளவிடுவதற்கும் பல்வேறு நோய்களுடன் தொடர்புபடுத்துவதற்கும் விரிவாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இந்த சூழலில், க்யூ-ஃபிஷ் குறிப்பாக பொருத்தமானது, ஏனெனில் இது விமர்சன ரீதியாக குறுகிய டெலோமியர்களைக் கண்டறிந்து அளவிட முடியும். டெலோமியர் செயலிழப்புக்கு முக்கியமானது, சராசரி டெலோமியர் நீளத்தை விட, இந்த விமர்சன ரீதியாக குறுகிய டெலோமர்களின் அதிர்வெண் என்று நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. க்யூ-ஃபிஷ் டெலோமியர் நீளம் பற்றிய துல்லியமான தகவல்களை வழங்குகையில், ஃப்ளோ-ஃபிஷ் போன்ற பிற மீன் தொடர்பான நுட்பங்களுடன் க்யூ-ஃபிஷ் இணைப்பதன் மூலம் அதன் பொருத்தத்தை நீட்டிக்க முடியும். ஃப்ளோ-ஃபிஷில், ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரி என்பது க்யூ-ஃபிஷில் உள்ள ஒரு சில செல்களை விட அதிக எண்ணிக்கையிலான செல்களில் ஃப்ளோரசன்ஸ் தீவிரத்தை (இதனால் டெலோமியர் நீளம்) அளவிட பயன்படுத்தப்படுகிறது. மாறாக, க்யூ-ஃபிஷ் போலல்லாமல், ஃப்ளோ-ஃபிஷ் ஒரு தனிப்பட்ட உயிரணுக்குள் ஒரு குறிப்பிட்ட குரோமோசோமில் டெலோமியர் நீளத்தை தீர்மானிக்க முடியாது. இருப்பினும், கியூ-ஃபிஷ் பொதுவாக குறைந்த-செயல்திறன் கொண்டதாகவும், மக்கள்தொகை ஆய்வுகளுக்கு ஏற்றதாகவும் கருதப்படாவிட்டாலும், குழுக்கள் உயர்-செயல்திறன் (எச். டி) கியூ-ஃபிஷ் நெறிமுறைகளை உருவாக்கியுள்ளன, அவை தானியங்கி இயந்திரங்களைப் பயன்படுத்தி 96 கிணறு தட்டுகளில் உள்ள இடைப்பட்ட கருக்களில் கியூ-ஃபிஷ் செய்ய பயன்படுத்தப்படுகின்றன. இதேபோல், மல்டிபிளெக்ஸ்-ஃபிஷ் மற்றும் சென்எம்-ஃபிஷ் போன்ற பிற முறைகளும் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன, அவை கியூ-ஃபிஷுடன் இணைந்து பயன்படுத்தப்படலாம். மல்டிபிளெக்ஸ்-ஃபிஷ் 24 குரோமோசோம்களை வெவ்வேறு வண்ணங்களில் காட்சிப்படுத்தவும், உள் அல்லது இடை-குரோமோசோமல் மறுசீரமைப்புகளை அடையாளம் காணவும் பல்வேறு ஆய்வுகளைப் பயன்படுத்துகிறது. சென்ட்ரோமீர்-குறிப்பிட்ட பல வண்ண ஃபிஷ் (சென்எம்-ஃபிஷ்) மல்டிபிளெக்ஸ்-ஃபிஷ் மற்றும் சென்ட்ரோமீர் குறிப்பிட்ட பெயரிடப்பட்ட ஆய்வுகளிலிருந்து பல வண்ண ஆய்வுகளைப் பயன்படுத்தி சென்ட்ரோமீர் பகுதிகளை அடையாளம் கண்டு வேறுபடுத்துகிறது. சென்ட்ரோமியர் அசாதாரணங்கள் அல்லது குரோமோசோமால் மறுசீரமைப்புகள் மற்றும் டெலோமியர் நீளம் ஆகியவற்றுக்கு இடையிலான உறவு அதிக மருத்துவ தாக்கத்தை ஏற்படுத்தக்கூடும், ஏனெனில் இவை அனைத்தும் பிரசவத்திற்கு முந்தைய அல்லது பிந்தைய நோயறிதல் மற்றும் கட்டி வளர்ச்சிகளில் முக்கியமானதாகத் தோன்றுகின்றன. இந்த சோதனைகள் டெலோமியர்களின் பங்கு மற்றும் டெலோமியர் நீளத்தின் முக்கியத்துவம் பற்றிய கூடுதல் அறிவை வழங்க முடியும். க்யூ-ஃபிஷின் மற்றொரு பயன்பாடு டெலோமெரிக் இணைப்புகளைக் கண்டறிவதாகும், அங்கு குரோமோசோம்களின் முனைகள் டெலோமியரில் ஒன்றாக இணைக்கப்பட்டுள்ளன, அவை சில நேரங்களில் இடைநிலை (குரோமோசோமுக்குள்) டெலோமெரிக் வரிசைகள் (ஐ. டி. எஸ்) என்று அழைக்கப்படுகின்றன. டெலோமெரிக் இணைப்புகளைப் படிப்பது சில நேரங்களில் பரிணாம வளர்ச்சியின் போக்கைக் காட்டலாம். எடுத்துக்காட்டாக, ஒரு மனித குரோமோசோம் ஒரு ஐ. டி. எஸ்ஸைக் கொண்டுள்ளது, இது சிம்பன்சிகளில் உள்ள இரண்டு குரோமோசோம்களுக்கு சமமானது என்று கருதப்படுகிறது. வெவ்வேறு இனங்களில் டெலோமியர் நீளத்தின் ஒழுங்குமுறையைக் கவனிப்பது கேரியோடைப் பரிணாமம் மற்றும் மனித நோய்களுக்கான பொருத்தத்தைப் பற்றிய முக்கியமான தகவல்களையும் வெளிப்படுத்துகிறது. மற்றொரு எடுத்துக்காட்டில், ஹோமோலோகஸ் அல்லாத எண்ட் ஜாயினிங் (என். எச். இ. ஜே) புரதம் இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏ உடைப்புகளை சரிசெய்கிறது மற்றும் செயல்பட கு 70/கு 80 ஹெட்டோரோடைமரை நம்பியுள்ளது. இந்த புரதங்களை சீர்குலைப்பது டெலோமெரிக் சுருக்கத்தை ஏற்படுத்துகிறது, இது ஃபிஷ் மூலம் டெலோமியர் நீளத்தை அளவிடுவதன் மூலம் கவனிக்கப்படலாம். எடுத்துக்காட்டாக, கியூ 80 மரபணு இல்லாத எலிகளில், டெலோமியர் நீளங்கள் கியூஃபிஷ் மூலம் அளவிடப்படுகின்றன, மேலும் அவை கணிசமாக குறுகியதாக காணப்படுகின்றன. கியூ-ஃபிஷ் பொதுவாக புற்றுநோய் ஆராய்ச்சியில் புற்றுநோய் மற்றும் புற்றுநோய் அல்லாத உயிரணுக்களுக்கு இடையிலான டெலோமியர் நீளங்களில் உள்ள வேறுபாடுகளை அளவிட பயன்படுத்தப்படுகிறது. டெலோமியர் சுருங்குவது மரபணு உறுதியற்ற தன்மையை ஏற்படுத்துகிறது மற்றும் இயற்கையாகவே முதிர்ந்த வயதிற்கு ஏற்ப நிகழ்கிறது, இவை இரண்டும் புற்றுநோய்க்கான சாத்தியமான காரணங்களுடன் தொடர்புடையவை. க்யூ-ஃபிஷின் நன்மைகள் மற்ற மீன் நுட்பங்களை விட க்யூ-ஃபிஷின் மிகப்பெரிய நன்மை நுட்பத்தின் அளவு திறன் ஆகும். டிஎன்ஏ ஆய்வுகளைப் பயன்படுத்தும் பாரம்பரிய ஃபிஷ் உடன் ஒப்பிடும்போது, அளவு தகவல்களைப் பெறுவது கடினம், ஏனெனில் கலப்பின ஆய்வுகள் நிரப்பு மரபணு டிஎன்ஏ இழைகளின் மறுசீரமைப்புடன் போட்டியிடுகின்றன. எனவே, பி. என். ஏக்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலமும், மிகவும் கடுமையான நிலைமைகளின் கீழ் அவற்றை கலப்பினமாக்குவதன் மூலமும், இந்த சிக்கலை சமாளிக்க இது அனுமதிக்கிறது. இதேபோல், பி. என். ஏ ஆய்வின் முன்னிலையில் ஒருவர் குரோமோசோமால் டிஎன்ஏவை சிதைக்க முடியும் என்பதால், இது மீன் செயல்முறையை எளிதாக்குகிறது. கூடுதலாக, இந்த முறை அதிக தெளிவுத்திறனை வழங்குகிறது, இது ஒரு குறிப்பிட்ட செல்லில் உள்ள ஒவ்வொரு தனிப்பட்ட குரோமோசோமின் (பி அல்லது க்யூ கை) டெலோமியர் நீளத்தை ஆய்வு செய்ய பயனரை அனுமதிக்கிறது. மேலும், ஒரு புள்ளிக்கு 105 க்கும் மேற்பட்ட செல்கள் தேவைப்படும் தெற்கு பிளாட்களைப் போலல்லாமல், க்யூ-ஃபிஷில் 30 க்கும் குறைவான செல்கள் தேவைப்படுகின்றன. க்யூ-ஃபிஷின் குறைபாடுகள் அதன் நன்மைகள் இருந்தபோதிலும், க்யூ-ஃபிஷ் மிகவும் உழைப்பு-தீவிரமானது மற்றும் பொதுவாக உயர் செயல்திறன் பகுப்பாய்விற்கு ஏற்றது அல்ல. நுட்பம் நன்கு தயாரிக்கப்பட்ட மெட்டாபேஸ் செல்களைப் பொறுத்தது, மேலும் அளவீடு துல்லியமாக இருப்பதற்கு உபகரணங்கள் மற்றும் மாதிரிகள் சரியாக சரிசெய்யப்படுவது/இயல்பாக்கப்படுவது முக்கியம். மேலும், ஒரு சிறிய அளவிலான செல்கள் மட்டுமே தேவைப்படும்போது, ஒரே நேரத்தில் மெட்டாபேஸில் போதுமான எண்ணிக்கையைப் பெறுவது கடினம். கூடுதலாக, தயாரிப்பின் போது அதிக வெப்பநிலைக்கு அதிகப்படியான வெளிப்பாடு காரணமாக மோசமான குரோமோசோம் உருவவியல் ஏற்படலாம். இதேபோல், ஒருவர் வெவ்வேறு செல் வகைகளைப் பயன்படுத்துகிறார் என்றால், கியூ-ஃபிஷில் உள்ள பல படிகளுக்கு (கொல்ஸிமிட் சிகிச்சையின் நீளம் போன்றவை) உகப்பாக்கம் தேவைப்படும். ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியில் ஒரு பொதுவான சிக்கல் ஃபோட்டோப்லீச்சிங் ஆகும், அங்கு ஒளியின் வெளிப்பாட்டின் விளைவாக ஃப்ளோரோபோர் அதன் செயல்பாட்டை இழக்கிறது. இது ஃப்ளோரசன்ஸ் தீவிரத்தின் தவறான அளவீட்டுக்கு வழிவகுக்கும். ஃபோட்டோப்லீச்சிங், ஒளி மூல ஸ்திரத்தன்மை மற்றும் கணினி மாறுபாடு அனைத்தும் பிழையின் ஆதாரங்களாகும், ஆனால் பயனரால் மாதிரிகளுக்கு இடையில் கையகப்படுத்தும் நேரத்தைக் குறைக்கவும் சரியான கட்டுப்பாடுகளைச் சேர்க்கவும் முடிந்தால் அதைக் குறைக்கலாம். க்யூ-ஃபிஷ் மற்றும் பி. என். ஏ. களின் வளர்ச்சிக்கு முன்பு, டெலோமியர் நீளத்தை அளவிடுவதற்கான பாரம்பரிய நுட்பம் தெற்கு புள்ளிகளைப் பயன்படுத்துவதாகும். இந்த முறையில், மரபணு டிஎன்ஏ கட்டுப்பாடு என்சைம்களைப் பயன்படுத்தி செரிக்கப்படுகிறது மற்றும் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் பிரிக்கப்படுகிறது. டிஎன்ஏ பின்னர் ஒரு சவ்வுக்கு மாற்றப்பட்டு கதிரியக்க அல்லது ஒளிரும் டெலோமெரிக் டிஎன்ஏ ஆய்வுகளைப் பயன்படுத்தி கலப்பினமாக்கப்படுகிறது. இருப்பினும், இந்த முறை ஒரு செல் மக்கள்தொகையில் சராசரி டெலோமியர் நீளத்தை மட்டுமே மதிப்பீடு செய்ய முடியும் மற்றும் மரபணுவில் இடைநிலை டெலோமெரிக் வரிசைகள் இருப்பது தவறான அளவீடுகளை வழங்க முடியும். க்யூ-ஃபிஷ் ஃப்ளோ-ஃபிஷின் மாறுபாடுகள் க்யூ-ஃபிஷ் போலவே, ஃப்ளோ-ஃபிஷ் என்பது க்யூ-ஃபிஷின் தழுவலாகும், இது பி. என். ஏ. களின் பயன்பாட்டை ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரியுடன் ஒருங்கிணைக்கிறது. இந்த முறையில், ஃப்ளோ-ஃபிஷ் மெட்டாபேஸ் குரோமோசோம்களை விட இன்டர்பேஸ் செல்களைப் பயன்படுத்துகிறது மற்றும் சஸ்பென்ஷனில் பி. என். ஏ ஆய்வுகளை கலப்பினமாக்குகிறது. கலப்பினமயமாக்கலைத் தொடர்ந்து, ஆயிரக்கணக்கான உயிரணுக்களை ஒப்பீட்டளவில் குறுகிய காலத்தில் ஓட்டம் சைட்டோமீட்டரில் பகுப்பாய்வு செய்யலாம். இருப்பினும், ஃப்ளோ-ஃபிஷ் ஒவ்வொரு உயிரணுவிற்கும் சராசரி டெலோமெரிக் நீளத்தை மட்டுமே வழங்குகிறது, அதே நேரத்தில் க்யூ-ஃபிஷ் ஒரு தனிப்பட்ட குரோமோசோமின் டெலோமியர் நீளத்தை பகுப்பாய்வு செய்ய முடியும். பி. என். ஏ-ஃபிஷ் கியூ-ஃபிஷின் அளவு திறன் பொதுவாக டெலோமியர் ஆராய்ச்சியில் பயன்படுத்தப்பட்டாலும், தரமான தரவு மட்டுமே தேவைப்படும் பிற துறைகள் ஆராய்ச்சி மற்றும் நோயறிதல் நோக்கங்களுக்காக ஃபிஷ் உடன் பி. என். ஏ-களின் பயன்பாட்டை ஏற்றுக்கொண்டுள்ளன. கிளினிக்கிற்குள் தொற்று நோய்களை விரைவாக அடையாளம் கண்டு கண்டறிவதற்காக பி. என். ஏ-ஃபிஷ் மதிப்பீடுகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. நேர்மறை இரத்த கலாச்சாரங்களின் பாரம்பரிய கிராம் கறைகளுடன் இணைந்து, பாக்டீரியா அல்லது ஈஸ்டின் வெவ்வேறு விகாரங்களை அடையாளம் காண இனங்கள்-குறிப்பிட்ட ஆர். ஆர். என். ஏ (ரைபோசோமல் ஆர். என். ஏ) ஐ குறிவைக்க பி. என். ஏக்கள் பயன்படுத்தப்படலாம். சோதனையை ஒப்பீட்டளவில் விரைவாகச் செய்ய முடியும் என்பதால், மருத்துவமனையால் பெறப்பட்ட நோய்த்தொற்றுகள் ஏற்படக்கூடிய மருத்துவமனைகளில் பயன்படுத்த இந்த சோதனை பரிசீலிக்கப்படுகிறது. கோ-ஃபிஷ் (குரோமோசோம் நோக்குநிலை-ஃபிஷ்) பி. என். ஏக்கள் மற்றும் ஃபிஷ் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தும் மற்றொரு தழுவல் கோ-ஃபிஷ் (குரோமோசோம் நோக்குநிலை-ஃபிஷ்) என்று அழைக்கப்படுகிறது, இது பி. என். ஏக்களுடன் குரோமோசோம்களை ஒரு குறிப்பிட்ட முறையில் பெயரிட அனுமதிக்கிறது. இந்த முறை டிஎன்ஏவின் புதிதாக நகலெடுக்கப்பட்ட இழைகளை தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட முறையில் அகற்றுவதை உள்ளடக்கியது (பிஆர்டியு இணைப்பைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம்), இதன் விளைவாக ஒற்றை சிக்கலான இலக்கு டிஎன்ஏ மட்டுமே உருவாகிறது. வெவ்வேறு வண்ண ஒற்றையாட்சி பி. என். ஏ ஆய்வுகளைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், சகோதரி குரோமாடிட்களை தனித்துவமாக முத்திரை குத்த முடியும். குறிப்புகள் சைட்டோஜெனெடிக்ஸ்