Optical mapping
ஒளியியல் வரைபடம் என்பது "ஒளியியல் வரைபடங்கள்" என்று அழைக்கப்படும் டிஎன்ஏவின் ஒற்றை, கறை படிந்த மூலக்கூறுகளிலிருந்து வரிசைப்படுத்தப்பட்ட, மரபணு அளவிலான, உயர் தெளிவுத்திறன் கொண்ட கட்டுப்பாட்டு வரைபடங்களை உருவாக்குவதற்கான ஒரு நுட்பமாகும். ஒரு உயிரினத்தின் அறியப்படாத டிஎன்ஏவுடன் கட்டுப்பாட்டு நொதி தளங்களின் இருப்பிடத்தை வரைபடமாக்குவதன் மூலம், இதன் விளைவாக வரும் டிஎன்ஏ துண்டுகளின் நிறமாலை கூட்டாக அந்த வரிசைக்கு ஒரு தனித்துவமான "கைரேகை" அல்லது "பார்கோடு" ஆக செயல்படுகிறது. முதலில் டாக்டர் டேவிட் சி. ஸ்வார்ட்ஸ் மற்றும் NYU இல் உள்ள அவரது ஆய்வகத்தால் 1990 களில் உருவாக்கப்பட்டது, இந்த முறை பின்னர் நுண்ணுயிர் மற்றும் யூகாரியோடிக் மரபணுக்களுக்கான பல பெரிய அளவிலான வரிசைமுறை திட்டங்களின் அசெம்பிளி செயல்முறைக்கு ஒருங்கிணைந்ததாக உள்ளது. பிற்கால தொழில்நுட்பங்கள் டிஎன்ஏ உருகுதல், டிஎன்ஏ போட்டி பிணைப்பு அல்லது என்சைமாடிக் லேபிளிங் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி ஒளியியல் வரைபடங்களை உருவாக்குகின்றன. தொழில்நுட்பம் நவீன ஒளியியல் வரைபடத் தளம் பின்வருமாறு செயல்படுகிறதுஃ மரபணு டிஎன்ஏ லைஸ் செய்யப்பட்ட உயிரணுக்களிலிருந்து பெறப்படுகிறது, மேலும் ஒளியியல் வரைபடத்திற்காக பெரிய மரபணு மூலக்கூறுகளின் "நூலகத்தை" உருவாக்க தோராயமாக வெட்டப்படுகிறது. டிஎன்ஏவின் ஒரு மூலக்கூறு சார்ஜ் இடைவினைகள் காரணமாக ஒரு ஃப்ளோரசன்ட் நுண்ணோக்கியின் கீழ் ஒரு ஸ்லைடில் நீட்டப்பட்டு (அல்லது நீளமாக) வைக்கப்படுகிறது. டிஎன்ஏ மூலக்கூறு கூடுதல் கட்டுப்பாட்டு என்சைம்களால் செரிக்கப்படுகிறது, அவை குறிப்பிட்ட செரிமான தளங்களில் பிளவுபடுகின்றன. இதன் விளைவாக உருவாகும் மூலக்கூறு துண்டுகள் மேற்பரப்பில் இணைக்கப்பட்டுள்ளன. பிளவு தளங்களில் துண்டு முனைகள் பின்னோக்கி இழுக்கப்படுகின்றன (நேரியல் டிஎன்ஏவின் நெகிழ்ச்சி காரணமாக), நுண்ணோக்கியின் கீழ் அடையாளம் காணக்கூடிய இடைவெளிகளை விட்டுச்செல்கின்றன. இன்டர்கலேட்டிங் சாயத்துடன் கறை படிந்த டிஎன்ஏ துண்டுகள் ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி மூலம் காட்சிப்படுத்தப்படுகின்றன மற்றும் ஒருங்கிணைந்த ஃப்ளோரசன்ஸ் தீவிரத்தை அளவிடுவதன் மூலம் அளவிடப்படுகின்றன. இது ஒற்றை மூலக்கூறுகளின் ஒளியியல் வரைபடத்தை உருவாக்குகிறது. தனிப்பட்ட ஒளியியல் வரைபடங்கள் ஒன்றிணைந்து ஒருமித்த, மரபணு ஒளியியல் வரைபடத்தை உருவாக்குகின்றன. ஆப்டிகல் மேப்பிங் தளத்தின் வரலாறு ஆரம்பகால அமைப்பு டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகள் ஒரு கவர் சீட்டு மற்றும் நுண்ணோக்கி ஸ்லைடிற்கு இடையில் உருவாக்கப்பட்ட உருகிய அகரோஸில் சரி செய்யப்பட்டன. டிஎன்ஏ வைப்பதற்கு முன்பு கட்டுப்படுத்தப்பட்ட நொதி உருகிய அகரோஸுடன் முன் கலக்கப்பட்டது மற்றும் மெக்னீசியம் சேர்ப்பதன் மூலம் பிளவு தூண்டப்பட்டது. சார்ஜ் செய்யப்பட்ட மேற்பரப்புகளைப் பயன்படுத்தி ஒரு ஜெல் மேட்ரிக்ஸுக்குள் அசையாமல் இருப்பதற்குப் பதிலாக, டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகள் ஒரு நேர்மறையான சார்ஜ் செய்யப்பட்ட மேற்பரப்பில் நிலைமின்னியல் தொடர்புகளால் வைக்கப்பட்டன. ~ 30 kb இலிருந்து துண்டுகள் 800 bp வரை சிறியதாக இருக்கும் வகையில் தீர்மானம் மேம்படுத்தப்பட்டது. தானியங்கி அமைப்பு இது இணையான நொதி செயலாக்கத்திற்காக ஒரு ஸ்லைடில் (மைக்ரோஅரே போன்றவை) பல ஒற்றை மூலக்கூறுகளைக் கண்டறிய ஒரு தானியங்கி கண்டறிதல் அமைப்பின் வளர்ச்சி மற்றும் ஒருங்கிணைப்பை உள்ளடக்கியது, படங்களைப் பெறுவதற்கான தானியங்கி ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி, படங்களைக் கையாள பட ஊர்வன பார்வை, ஒளியியல் வரைபட கட்டுமானத்திற்கான வழிமுறைகள், அதிக அளவு தரவை செயலாக்குவதற்கான கிளஸ்டர் கம்ப்யூட்டிங் மைக்ரோஃப்ளூயிடிக்ஸ் பயன்படுத்தி உயர்-செயல்திறன் அமைப்பு ஒற்றை மூலக்கூறுகளுடன் காணப்பட்ட மைக்ரோஅரேக்கள் பெரிய மரபணு டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளுக்கு சரியாக வேலை செய்யவில்லை என்பதைக் கவனித்தல், மைக்ரோஃப்ளூயிடிக் சாதனங்கள் மென்மையான லித்தோகிராஃபியைப் பயன்படுத்தி இணையான மைக்ரோ சேனல்களின் வரிசையைக் கொண்டுள்ளன. நானோ குறியீட்டு தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தும் அடுத்த தலைமுறை அமைப்பு "நானோ குறியீடு" என்று அழைக்கப்படும் ஒளியியல் வரைபடத்தின் முன்னேற்றம், நானோ இணைப்புகளில் நீளமான டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளை சிக்க வைப்பதன் மூலம் செயல்திறனை அதிகரிக்கும் ஆற்றலைக் கொண்டுள்ளது. ஒப்பீடுகள் பிற வரைபட நுட்பங்கள் பாரம்பரிய வரைபட நுட்பங்களை விட OM இன் நன்மை என்னவென்றால், இது டிஎன்ஏ துண்டின் வரிசையைப் பாதுகாக்கிறது, அதே நேரத்தில் கட்டுப்பாட்டு வரைபடத்தைப் பயன்படுத்தி வரிசையை மறுகட்டமைக்க வேண்டும். கூடுதலாக, வரைபடங்கள் நேரடியாக மரபணு டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளிலிருந்து கட்டப்படுவதால், குளோனிங் அல்லது பிசிஆர் கலைப்பொருட்கள் தவிர்க்கப்படுகின்றன. இருப்பினும், ஒவ்வொரு OM செயல்முறையும் தவறான நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறை தளங்களால் பாதிக்கப்படுகிறது, ஏனெனில் ஒவ்வொரு மூலக்கூறிலும் அனைத்து கட்டுப்பாட்டு தளங்களும் பிளவுபடுவதில்லை, மேலும் சில தளங்கள் தவறாக வெட்டப்படலாம். நடைமுறையில், ஒரே மரபணு பிராந்தியத்தின் மூலக்கூறுகளிலிருந்து பல ஒளியியல் வரைபடங்கள் உருவாக்கப்படுகின்றன, மேலும் சிறந்த ஒருமித்த வரைபடத்தைத் தீர்மானிக்க ஒரு வழிமுறை பயன்படுத்தப்படுகிறது. பிற மரபணு பகுப்பாய்வு முறைகள் மரபணுக்களுக்கு இடையே பெரிய அளவிலான மரபணு மாறுபாடுகளை (இண்டெல்ஸ், நகல்கள், தலைகீழ்கள், இடமாற்றங்கள் போன்றவை) அடையாளம் காண பல்வேறு அணுகுமுறைகள் உள்ளன. மைக்ரோஅரேக்கள், பல்ஸ் ஃபீல்ட் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ், சைட்டோஜெனெடிக்ஸ் மற்றும் ஜோடி-இறுதி குறிச்சொற்களைப் பயன்படுத்துதல் ஆகியவை பிற வகை முறைகளில் அடங்கும். பயன்பாடுகள் ஆரம்பத்தில், பாக்டீரியா, ஒட்டுண்ணிகள் மற்றும் பூஞ்சைகளின் முழு-மரபணு கட்டுப்பாடு வரைபடங்களை உருவாக்க ஒளியியல் வரைபட அமைப்பு பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளது. பாக்டீரியா மரபணுக்களை சாரக்கட்டு மற்றும் சரிபார்க்கவும் இது பயன்படுத்தப்படுகிறது. அசெம்பிளி செய்வதற்கான சாரக்கட்டு களாக செயல்பட, அறியப்பட்ட வரிசைத் தரவைப் பயன்படுத்தி சிலிக்கோவில் உள்ள கட்டுப்பாட்டு தளங்களுக்கு அசெம்பிள் செய்யப்பட்ட சீக்வென்ஸ் காண்டிக்ஸை ஸ்கேன் செய்து அவற்றை அசெம்பிள் செய்யப்பட்ட மரபணு ஒளியியல் வரைபடத்துடன் சீரமைக்கலாம். வணிக நிறுவனமான ஓப்ஜென், நுண்ணுயிர் மரபணுக்களுக்கான ஒளியியல் வரைபடங்களை வழங்கியுள்ளது. பெரிய யூகாரியோடிக் மரபணுக்களுக்கு, டேவிட் சி. ஸ்வார்ட்ஸ் ஆய்வகம் (இப்போது மாடிசன்-விஸ்கான்சின்) மட்டுமே சுட்டி, மனிதர், அரிசி மற்றும் மக்காச்சோளத்திற்கான ஒளியியல் வரைபடங்களை உருவாக்கியுள்ளது. ஒளியியல் வரிசைமுறை என்பது ஒற்றை மூலக்கூறு டிஎன்ஏ வரிசைமுறை நுட்பமாகும், இது வரிசை-மூலம்-தொகுப்பைப் பின்பற்றுகிறது மற்றும் ஒளியியல் மேப்பிங் தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்துகிறது. எஸ். எம். ஆர். டி வரிசைமுறை போன்ற பிற ஒற்றை மூலக்கூறு வரிசைமுறை அணுகுமுறைகளைப் போலவே, இந்த நுட்பமும் ஒரு ஒற்றை டிஎன்ஏ மூலக்கூறை பகுப்பாய்வு செய்கிறது, ஆரம்ப மாதிரி மற்றும் டிஎன்ஏவின் பல நகல்களை வரிசைப்படுத்துவதை விட. தொகுப்பின் போது, ஃப்ளோரோக்ரோம்-லேபிள் செய்யப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகள் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் இணைக்கப்பட்டு ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி மூலம் கண்காணிக்கப்படுகின்றன. இந்த நுட்பத்தை முதலில் டேவிட் சி. ஸ்வார்ட்ஸ் மற்றும் அரவிந்த் ராமநாதன் ஆகியோர் 2003 இல் முன்மொழிந்தனர். ஒளியியல் வரிசைமுறைச் சுழற்சி ஒளியியல் வரிசைமுறைச் செயல்பாட்டில் ஒவ்வொரு சுழற்சியின் கண்ணோட்டமும் பின்வருமாறு. படி 1: டிஎன்ஏ பார்கோடிங் செல்கள் மரபணு டிஎன்ஏவை வெளியிடுவதற்கு லைஸ் செய்யப்படுகின்றன. இந்த டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகள் தொந்தரவில்லாமல், மைக்ரோஃப்ளூயிடிக் சேனல்களைக் கொண்ட ஆப்டிகல் மேப்பிங் மேற்பரப்பில் வைக்கப்படுகின்றன, மேலும் டிஎன்ஏ சேனல்கள் வழியாக பாய அனுமதிக்கப்படுகிறது. இந்த மூலக்கூறுகள் பின்னர் ஆப்டிகல் மேப்பிங் நுட்பத்தின் மூலம் மரபணு உள்ளூர்மயமாக்கலை அனுமதிக்க கட்டுப்பாடு என்சைம்களால் பார்கோடு செய்யப்படுகின்றன. அந்த படிகளுக்கு "தொழில்நுட்பம்" பற்றிய மேற்கண்ட பகுதியைப் பார்க்கவும். படி 2: பொருத்தப்பட்ட டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளை சீரற்ற முறையில் நிக் செய்ய டெம்ப்ளேட் நிக்கிங் டிஎன்ஏஸ் I சேர்க்கப்படுகிறது. பின்னர் DNase I ஐ அகற்ற ஒரு கழுவுதல் செய்யப்படுகிறது. ஒரு டெம்ப்ளேட்டுக்கு நிகழும் நிக்குகளின் சராசரி எண்ணிக்கை டினேஸ் I இன் செறிவு மற்றும் அடைகாக்கும் நேரத்தைப் பொறுத்தது. படி 3: இடைவெளி உருவாக்கம் டி 7 எக்ஸோ நியூக்ளியேஸ் சேர்க்கப்படுகிறது, இது டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளில் உள்ள நிக்குகளைப் பயன்படுத்தி 5 '-3' திசையில் இடைவெளிகளை விரிவுபடுத்துகிறது. அதிகப்படியான இரட்டை இழைகள் இடைவெளிகளைத் தவிர்க்க T7 எக்ஸோ நியூக்ளியேஸின் அளவு கவனமாக கட்டுப்படுத்தப்பட வேண்டும். படி 4: ஒவ்வொரு டிஎன்ஏ மூலக்கூறிலும் பல இடைவெளி தளங்களில் ஃப்ளோரோக்ரோம்-பெயரிடப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகளை (எஃப். டி. என். டி. பி) இணைக்க ஃப்ளோரோக்ரோம் ஒருங்கிணைப்பு டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் பயன்படுத்தப்படுகிறது. ஒவ்வொரு சுழற்சியிலும், எதிர்வினை கலவையில் ஒரு வகை எஃப். டி. என். டி. பி உள்ளது மற்றும் அந்த நியூக்ளியோடைடு வகையின் பல சேர்த்தல்களை அனுமதிக்கிறது. இமேஜிங் மற்றும் எஃப். டி. என். டி. பி கூட்டலின் அடுத்த சுழற்சிக்கான தயாரிப்பில் இணைக்கப்படாத எஃப். டி. என். டி. பி. க்களை அகற்ற பல்வேறு கழுவல்கள் செய்யப்படுகின்றன. படி 5: இமேஜிங் இந்த படி ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி இடைவெளி பகுதிகளில் இணைக்கப்பட்ட ஃப்ளோரோக்ரோம்-லேபிள் செய்யப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகளின் எண்ணிக்கையை கணக்கிடுகிறது. படி 6: ஃபோட்டோப்லீச்சிங் ஃப்ளோரோக்ரோமை உற்சாகப்படுத்தப் பயன்படுத்தப்படும் லேசர் வெளிச்சமும் ஃப்ளோரோக்ரோம் சமிக்ஞையை அழிக்க இங்கு பயன்படுத்தப்படுகிறது. இது அடிப்படையில் ஃப்ளோரோக்ரோம் கவுண்டரை மீட்டமைக்கிறது, மேலும் அடுத்த சுழற்சிக்கு கவுண்டரைத் தயாரிக்கிறது. இந்த படி ஆப்டிகல் வரிசைமுறையின் ஒரு தனித்துவமான அம்சமாகும், ஏனெனில் இது நியூக்ளியோடைடு இணைக்கப்பட்ட பிறகு அதன் ஃப்ளோரோக்ரோம் லேபிளை உண்மையில் அகற்றாது. ஃப்ளோரோக்ரோம் லேபிளை அகற்றாதது வரிசைமுறையை மிகவும் சிக்கனமாக்குகிறது, ஆனால் இது ஃப்ளோரோக்ரோம் லேபிள்களை தொடர்ச்சியாக இணைக்க வேண்டிய அவசியத்தை விளைவிக்கிறது, இது லேபிள்களின் மொத்தத்தன்மை காரணமாக சிக்கல்களை ஏற்படுத்தும். படி 7: ஒவ்வொரு முறையும் வெவ்வேறு ஃப்ளோரோக்ரோம்-லேபிள் செய்யப்பட்ட நியூக்ளியோடைடு (எஃப். டி. என். டி. பி) கொண்ட எதிர்வினை கலவையைப் பயன்படுத்தி படி 4 உடன் 4 முதல் 6 படிகள் மீண்டும் மீண்டும் செய்யப்படுகின்றன. விரும்பிய பகுதி வரிசைப்படுத்தப்படும் வரை இது மீண்டும் மீண்டும் செய்யப்படுகிறது. உகப்பாக்கம் உத்திகள் ஒரு பொருத்தமான டிஎன்ஏ பாலிமரேஸைத் தேர்ந்தெடுப்பது அடிப்படை கூட்டல் படியின் செயல்திறனுக்கு முக்கியமானது மற்றும் பல அளவுகோல்களை பூர்த்தி செய்ய வேண்டும்ஃ தொடர்ச்சியான நிலைகளில் எஃப். டி. என். டி. பி. யை திறம்பட இணைக்கும் திறன் 3 '-5' எக்ஸோ நியூக்ளியேஸ் மற்றும் ப்ரூஃப் ரீடிங் செயல்பாட்டின் பற்றாக்குறை புதிதாக இணைக்கப்பட்ட எஃப். டி. என். டி. பி. தவறான இணைப்புகளைக் குறைக்க உயர் நம்பகத்தன்மை மேற்பரப்புகளில் பொருத்தப்பட்ட வார்ப்புருக்களில் நல்ல செயல்பாடு (எ. கா. ஆப்டிகல் மேப்பிங் மேற்பரப்பு) கூடுதலாக, வெவ்வேறு ஃப்ளோரோக்ரோம்களுக்கான வெவ்வேறு பாலிமரேஸ் விருப்பம், ஃப்ளோரோக்ரோம்-நியூக்ளியோடைடுகளில் லிங்கர் நீளம் மற்றும் இடையக கலவைகள் ஆகியவை அடிப்படை கூட்டல் செயல்முறையை மேம்படுத்துவதற்கும் தொடர்ச்சியான எஃப். டி. என். டி. பி இணைப்புகளின் எண்ணிக்கையை அதிகரிப்பதற்கும் கருத்தில் கொள்ள வேண்டிய முக்கிய காரணிகளாகும். நன்மைகள் ஒற்றை மூலக்கூறு பகுப்பாய்வு குறைந்தபட்ச டிஎன்ஏ மாதிரி தேவைப்படுவதால், மாதிரி தயாரிப்பு செயல்முறையை நெறிப்படுத்த நேரம் எடுக்கும் மற்றும் விலையுயர்ந்த பெருக்க நடவடிக்கை தவிர்க்கப்படுகிறது. பெரிய டிஎன்ஏ மூலக்கூறு வார்ப்புருக்கள் (~ 500 kb) மற்றும் குறுகிய டிஎன்ஏ மூலக்கூறு வார்ப்புருக்கள் (<1kb) பெரும்பாலான அடுத்த தலைமுறை வரிசைமுறை தொழில்நுட்பங்கள் பெரிய அளவிலான சிறிய வரிசைமுறை வாசிப்புகளை நோக்கமாகக் கொண்டிருந்தாலும், இந்த சிறிய வரிசைமுறை வாசிப்புகள் டி நோவோ வரிசைமுறை முயற்சிகளையும், மரபணு மறுசீரமைப்பு பகுதிகளையும் புரிந்துகொள்வது கடினம். ஒளியியல் வரிசைமுறை வரிசைமுறைக்கு பெரிய டிஎன்ஏ மூலக்கூறு வார்ப்புருக்கள் (~ 500 கேபி) பயன்படுத்துகிறது, மேலும் இவை சிறிய வார்ப்புருக்களை விட பல நன்மைகளை வழங்குகின்றனஃ இந்த பெரிய டிஎன்ஏ வார்ப்புருக்கள் அவற்றின் மரபணு உள்ளூர்மயமாக்கலை நம்பிக்கையுடன் தீர்மானிக்க "டிஎன்ஏ பார்கோடட்" செய்யப்படலாம். எனவே, பெரிய வார்ப்புருவிலிருந்து எடுக்கப்பட்ட எந்தவொரு வரிசையும் அதிக அளவிலான நம்பிக்கையுடன் மரபணுவில் வரைபடமாக்கப்படலாம். மிக முக்கியமாக, அதிக தொடர்ச்சியான பகுதிகளிலிருந்து வரிசை வாசிப்புகள் அதிக அளவிலான நம்பிக்கையுடன் வைக்கப்படலாம், அதே நேரத்தில் குறுகிய வாசிப்புகள் அதிக தொடர்ச்சியான பகுதிகளில் வரைபட நிச்சயமற்ற தன்மையால் பாதிக்கப்படுகின்றன. ஒற்றை மூலக்கூறு பார்கோடுகளை ஒரு குறிப்பு மரபணுவுடன் சீரமைக்க ஆப்டிகல் மேப்பிங் மற்றும் நானோகோடிங் போன்ற சிறப்பு வழிமுறைகள் மற்றும் மென்பொருள்கள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. ஒரே பெரிய வார்ப்புரு மூலக்கூறிலிருந்து பல வரிசைகள் வாசிக்கப்படுகின்றன. இந்த பல வரிசை வாசிப்புகள் டி நோவோ அசெம்பிளியின் சிக்கலைக் குறைக்கின்றன, மரபணு மறுசீரமைப்பு பகுதிகளை தெளிவுபடுத்துகின்றன, மேலும் "எந்தவொரு அசெம்பிளி பிழைகளிலிருந்தும் உள்ளார்ந்த முறையில் விடுபடுகின்றன". பெரிய டிஎன்ஏ மூலக்கூறு வார்ப்புருக்களின் மூலக்கூறு பார்கோடிங் வரிசைமுறை கையகப்படுத்துதலுடன் பரந்த மற்றும் குறிப்பிட்ட மரபணு பகுப்பாய்வுகளை வழங்குகிறது குறைபாடுகள் ஒற்றை மூலக்கூறு டிஎன்ஏ வரிசைமுறைக்கு தற்போதைய அடுத்த தலைமுறை வரிசைமுறை தொழில்நுட்பங்களால் வழங்கப்பட்ட தேவையற்ற வாசிப்பு பாதுகாப்பிலிருந்து நம்பிக்கையுடன் பொருந்த உயர் மட்ட துல்லியம் தேவைப்படுகிறது. ஒரே மாதிரியான நிலைகளில் இரு இழைகளிலும் நிக்ஸ் செய்வதன் விளைவாக வரிசை-மூலம்-தொகுப்பின் போது குறைந்த வார்ப்புரு உருவாகிறது. புளோரோக்ரோம்-லேபிள் செய்யப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகள் இணைக்கப்பட்ட பிறகு அகற்றப்படுவதில்லை, மேலும் இந்த பருமனான லேபிள்கள் காரணமாக, பல இணைப்புகள் கடினமாக இருக்கலாம். குறிப்புகள் வெளிப்புற இணைப்புகள் ஓப்ஜென் ஆப்டிகல் மேப்பிங் தீர்வுகள் டாக்டர் டேவிட் சி. ஸ்வார்ட்ஸ் ஆய்வக உயிர் இயற்பியல் மரபியல் நுட்பங்கள் நுண்ணோக்கி மூலக்கூறு உயிரியல்