Hot start PCR
ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆர் என்பது வழக்கமான பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினையின் (பி. சி. ஆர்) மாற்றியமைக்கப்பட்ட வடிவமாகும், இது அறை (அல்லது குளிர்ந்த) வெப்பநிலையில் குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ பெருக்கம் காரணமாக விரும்பத்தகாத தயாரிப்புகள் மற்றும் ப்ரைமர் டைமர்களின் இருப்பைக் குறைக்கிறது. அதிக விளைச்சலை அடைவதற்காக பி. சி. ஆர் செயல்முறையின் பல மாறுபாடுகள் மற்றும் மாற்றங்கள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன; சூடான தொடக்க பி. சி. ஆர் அவற்றில் ஒன்றாகும். ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆர் வழக்கமான பி. சி. ஆரின் அதே கொள்கைகளைப் பின்பற்றுகிறது-இது டிஎன்ஏ பாலிமரேஸைப் பயன்படுத்தி ஒற்றை சிக்கலான வார்ப்புருவிலிருந்து டிஎன்ஏவை ஒருங்கிணைக்கிறது. இருப்பினும், இது கூடுதல் வெப்பம் மற்றும் பிரிப்பு முறைகளைப் பயன்படுத்துகிறது, அதாவது டாக் பாலிமரேஸின் பிணைப்பை செயலிழக்கச் செய்வது அல்லது தடுப்பது மற்றும் டாக் பாலிமரேஸை தாமதமாகச் சேர்ப்பது, தயாரிப்பு விளைச்சலை அதிகரிப்பதற்கும், அதிக குறிப்பிட்ட தன்மை மற்றும் உணர்திறனை வழங்குவதற்கும். வரையறுக்கப்படாத பிணைப்பு மற்றும் ப்ரைமர் டைமர்களின் ப்ரைமிங் அல்லது உருவாக்கம் ஆகியவை டினேச்சரேஷனுக்குப் பிறகு எதிர்வினை கலவையை நிறைவு செய்வதன் மூலம் குறைக்கப்படுகிறது. அதிக வெப்பநிலையில் எதிர்வினை கலவைகளை நிறைவு செய்வதற்கான சில வழிகளில் குறைந்த வெப்பநிலையில் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் செயல்பாட்டைத் தடுக்கும் மாற்றங்கள், மாற்றியமைக்கப்பட்ட டியோக்ஸிரிபோநியூக்ளியோடைட் ட்ரைபாஸ்பேட்டுகளின் (டிஎன்டிபி) பயன்பாடு மற்றும் டினேச்சரேஷனுக்குப் பிறகு அத்தியாவசிய உலைகளில் ஒன்றின் உடல் சேர்க்கை ஆகியவை அடங்கும். இந்த கூடுதல் முறைகள் மூலம், ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆர் குறைந்த வெப்பநிலையில் இயற்கையாக நிகழும் குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கங்களின் அளவைக் குறைக்க முடியும்-இது வழக்கமான பி. சி. ஆருக்கு ஒரு பிரச்சினையாக உள்ளது. கரைசலில் உள்ள குறிப்பிட்ட என்சைம்கள் செயலற்ற நிலையில் இருக்கும் அல்லது உகந்த அனீலிங் வெப்பநிலையை அடையும் வரை தடுக்கப்படும் என்பதை உறுதிப்படுத்த இந்த மாற்றங்கள் ஒட்டுமொத்தமாக செயல்படுகின்றன. குறிப்பிட்ட அல்லாத பி. சி. ஆர் தயாரிப்புகளின் உருவாக்கத்தைத் தடுப்பது, குறிப்பாக ஆரம்ப சுழற்சிகளில், பி. சி. ஆர் மூலம் பெருக்கத்தின் உணர்திறன் கணிசமாக அதிகரிக்கிறது. பி. சி. ஆர் அல்லது ஆர்டி-பி. சி. ஆரின் நோயறிதல் பயன்பாடுகளில் இது மிகவும் முக்கியமானது. பின்னணி பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை (பி. சி. ஆர்) என்பது ஒரு மூலக்கூறு உயிரியல் நுட்பமாகும், இது குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ பிரிவுகளை பல அளவுகளால் பெருக்க பயன்படுகிறது. டிஎன்ஏவின் குறிப்பிட்ட பிரிவுகள் டினேச்சரேஷன், அனீலிங் மற்றும் எக்ஸ்டென்ஷன் ஆகிய மூன்று செயல்முறைகளில் பெருக்கப்படுகின்றன-அங்கு டிஎன்ஏ இழைகள் அறை வெப்பநிலையிலிருந்து உகந்த வெப்பநிலையை உயர்த்துவதன் மூலம் பிரிக்கப்படுகின்றன, ப்ரைமர்கள் பிணைக்கப்படுவதற்கு முன்பு மற்றும் பாலிமரேஸ் நியூக்ளியோடைடுகளை வார்ப்புரு இழையுடன் சீரமைக்கிறது. இது டிஎன்ஏ பாலிமரேஸைப் பயன்படுத்துகிறது, இது குறைந்த வெப்பநிலையில் சற்று சுறுசுறுப்பாக உள்ளது. வழக்கமான பி. சி. ஆரில், எதிர்வினை கலவை அறை வெப்பநிலையில் முடிக்கப்படுகிறது, மேலும் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் செயல்பாடு காரணமாக, ப்ரைமர்கள் ப்ரைமர் டைமர்களை உருவாக்கலாம் அல்லது டிஎன்ஏ-க்கு அனீலை உருவாக்கலாம். பி. சி. ஆர் செயல்முறையின் போது, டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் டிஎன்ஏவின் எந்தத் துண்டையும் பிணைக்கப்பட்ட ப்ரைமர்களுடன் விரிவுபடுத்தும், இலக்கு தயாரிப்புகளை உருவாக்குகிறது, ஆனால் விளைச்சலைக் குறைக்கும் குறிப்பிடப்படாத தயாரிப்புகளையும் உருவாக்குகிறது. சூடான தொடக்க பி. சி. ஆரில், சில வினைப்பொருள்கள் குறிப்பிட்ட அனீலிங் வெப்பநிலைக்கு கலவை சூடாகும் வரை தனித்தனியாக வைக்கப்படுகின்றன. இது அனீலிங் நேரத்தைக் குறைக்கிறது, இது குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ நீட்டிப்பின் சாத்தியக்கூறுகளையும், டினேச்சரேஷனுக்கு முன்னர் குறிப்பிட்ட ப்ரைமர் பிணைப்பின் செல்வாக்கையும் குறைக்கிறது. வழக்கமான பி. சி. ஆரில், உகந்த அனீலிங் வெப்பநிலைக்கு (50-65 டிகிரி செல்சியஸ்) கீழே உள்ள குறைந்த வெப்பநிலைகள் குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கங்கள் போன்ற இலக்கு மாற்றங்களை விளைவிக்கின்றன, அங்கு ப்ரைமர்கள் நியூக்ளிக் அமிலத்துடன் குறிப்பாக பிணைக்கப்படாது. கலவையில் அதிகமாக இருக்கும் இந்த குறிப்பிட்ட ப்ரைமர் அல்லாத வளாகங்கள், ப்ரைமர் டைமர் மற்றும் தவறான ப்ரைமிங் போன்ற துணை தயாரிப்புகளின் தொகுப்புக்குப் பின்னால் உள்ளன. பெருக்கலுக்கான இலக்கு வரிசைகளுடன் தீவிரமாக போட்டியிடுவதன் மூலம் பி. சி. ஆர் பெருக்கத்தின் செயல்திறனை தவறாக முதன்மைப்படுத்துவது பெரிதும் தடுக்கிறது மற்றும் குறைக்கிறது. இதேபோல், ப்ரைமர் டைமர்கள் சிக்கல்களை உருவாக்குகின்றன, இது பெறப்பட்ட நகல் எண் பெருக்கங்களின் அளவைக் குறைக்கிறது. சூடான தொடக்க பி. சி. ஆரை செயல்படுத்துவதன் மூலம் இதைக் கட்டுப்படுத்தலாம், இது உகந்த வெப்பநிலையை சந்திக்கும் வரை ப்ரைமர் நீட்டிப்புகளைத் தடுக்க அனுமதிக்கிறது. சூடான தொடக்க பி. சி. ஆரில், முக்கியமான வினைப்பொருள்கள் (டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மற்றும் மெக்னீசியம் கோஃபாக்டர்கள் போன்றவை) பிசிஆர் கலவையில் வினைபுரிவதைத் தடுக்கின்றன, உகந்த வெப்பநிலைகள் உடல் பிரிப்பு அல்லது இரசாயன மாற்றங்கள் மூலம் சந்திக்கும் வரை. டாக் பாலிமரேஸ் தடுக்கப்படும்/செயலிழக்கப்படும் போது அல்லது உகந்த அனீலிங் வெப்பநிலை வரை அதன் சேர்க்கை தாமதமாகும் போது, டியோக்ஸிரிபோநியூக்ளியோடைட் ட்ரைபாஸ்பேட் மாற்றங்கள் மூலம் அல்லது கேஜிங் மற்றும் இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்பு கையாளுதல் மூலம் ப்ரைமர்களை மாற்றியமைப்பதன் மூலமும் ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆர் ஏற்படலாம். எதிர்வினை கலவையில் டிஎன்ஏவின் குறைந்த செறிவு இருக்கும் சூழ்நிலைகளில், டிஎன்ஏ வார்ப்புரு மிகவும் சிக்கலானது அல்லது பிசிஆரில் பல ஜோடி ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடு ப்ரைமர்கள் இருந்தால், ஹாட் ஸ்டார்ட் பிசிஆர் பெரும்பாலும் பாரம்பரிய பிசிஆருக்கு எதிரான ஒரு சிறந்த அணுகுமுறையாகும். முறைகள் சூடான தொடக்க பி. சி. ஆர் என்பது குறைந்த வெப்பநிலையில் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் நீட்டிப்பைத் தடுக்கும் ஒரு முறையாகும், இது மகசூல் இழப்பைக் குறைக்க குறிப்பிட்ட அல்லாத பிணைப்பைத் தடுக்கிறது. ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆர் பி. சி. ஆரின் வெப்ப நடவடிக்கைகள் வரை உலைகளைக் கட்டுப்படுத்துவதன் மூலம் குறிப்பிட்ட அல்லாத பிணைப்பின் அளவைக் குறைக்கிறது-ஒரு எதிர்வினையில் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸைக் கட்டுப்படுத்துவதன் மூலம் எதிர்வினையை முன்கூட்டியே கட்டுப்படுத்துங்கள். குறிப்பிட்ட பிணைப்பு இல்லாதது பெரும்பாலும் ப்ரைமர் டைமர்கள் மற்றும் தவறான முதன்மையான/தவறான முதன்மையான இலக்குகளுக்கு வழிவகுக்கிறது. இவை மாற்றியமைக்கப்பட்ட முறைகள் மூலம் சரிசெய்யப்படலாம்ஃ டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் என்சைம் இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகள்/டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் ஆன்டி டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் ஆன்டிபாடிகளுடன் சிக்கலான டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸை செயலிழக்கச் செய்தல்/தடுப்பதுஃ நொதியுடன் இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகள் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸை செயலிழக்கச் செய்கின்றன. ஆன்டிபாடிகள் பாலிமரேசுடன் இணைக்கப்பட்டு பிணைக்கப்படுகின்றன, இது குறைந்த வெப்பநிலையில் ஏற்படக்கூடிய ஆரம்ப டிஎன்ஏ பெருக்கத்தை தடுக்கிறது. உகந்த அனீலிங் வெப்பநிலையை சந்தித்தவுடன், ஆன்டிபாடிகள் சிதைந்து பிரிக்கத் தொடங்கும், டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸை எதிர்வினையில் வெளியிடும் மற்றும் பெருக்க செயல்முறையைத் தொடங்க அனுமதிக்கும். பிளாட்டினம் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மற்றும் அக்கூஸ்டார்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் (முறையே ஆயுள் தொழில்நுட்பங்கள் மற்றும் குவாண்டா பயோ சயின்சஸ் ஆகியவற்றில் அயூப் ராட்சியன் உருவாக்கிய இரண்டும்) வணிக ரீதியாக கிடைக்கக்கூடிய ஆன்டிபாடி அடிப்படையிலான ஹாட் ஸ்டார்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களின் எடுத்துக்காட்டுகளாகும். இந்த டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்கள் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸிற்கு குறிப்பிட்ட மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளின் கலவையுடன் முன்கூட்டியே சிக்கலானவை. மெழுகு மணிகள்ஃ டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மற்றும் மீதமுள்ள பி. சி. ஆர் கூறுகளுக்கு இடையில் வெப்பநிலையைப் பொறுத்து மெழுகு மணிகளால் ஒரு இயற்பியல் தடை உருவாக்கப்படுகிறது. வெப்பநிலை 70 டிகிரி செல்சியஸுக்கு மேல் உயர்ந்தவுடன், முதல் சுழற்சியில் சிதைவு படியின் போது, மெழுகு மணி உருகி, டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் தடையைத் தாண்டி எதிர்வினைக்குள் விடுவிக்க அனுமதிக்கிறது-பெருக்க செயல்முறையைத் தொடங்குகிறது. மெழுகு அடுக்கு பின்னர் பெருக்க கட்டத்தில் எதிர்வினை கலவையின் மேற்புறத்திற்கு நகர்கிறது, பின்னர் நீராவி தடையாக செயல்படுகிறது. மிகவும் குறிப்பிட்ட ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடுகள்ஃ ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடுகள் எளிதில் பிணைக்கும் நியூக்ளிக் அமிலத்தின் குறுகிய பாலிமர்கள் ஆகும். ஆப்டேமர்கள் போன்ற மிகவும் குறிப்பிட்ட ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடுகள், குறைந்த வெப்பநிலையில் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேசுடன் பிணைக்கப்பட்டு கலவையில் செயலற்ற நிலையில் உள்ளன. அதிக வெப்பநிலையில் மட்டுமே ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடுகள் டாக்-இலிருந்து பிரிந்து வினைபுரிய அனுமதிக்கும். சூடான தொடக்க பி. சி. ஆருக்கு இவை மிகவும் பயனுள்ள முறைகள், நொதியுடன் இணைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகள் மற்றும் குறிப்பாக மிகவும் குறிப்பிட்ட ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடுகள் முறைகள் குறுகிய செயலிழப்பு நேரம் தேவைப்படும் நடைமுறைகளின் போது மிகவும் பொருத்தமானவை. இருப்பினும், பிற முறைகள் செயல்படுத்தப்படுவதாக அறியப்படுகிறதுஃ டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் முன்கூட்டியே சூடாக்குதல்ஃ பிசிஆர் இயந்திரம் முன்கூட்டியே சூடாக்கப்படுகிறது, அதே நேரத்தில் கூறுகள் பனிக்கட்டி மீது கலக்கப்படுகின்றன, பின்னர் அது உகந்த வெப்பநிலையை அடைந்தவுடன் உடனடியாக பிசிஆர் இயந்திரத்தில் வைக்கப்படுகிறது. இது தேவையான வார்ம்-அப் செயல்முறையை அகற்றும், ப்ரைமர்களின் குறிப்பிட்ட அல்லாத அனீலிங்கை குறைக்கும் மற்றும் கலவையில் உள்ள எந்த மிஸ் ஜோடி ப்ரைமர்களும் பிரிக்கப்படுவதை உறுதி செய்யும். உறைதல்ஃ உறைதல் என்பது மெழுகு மணிகளைப் போலவே உடல் ரீதியான பிரிவின் ஒரு வடிவமாக செயல்படுகிறது. ப்ரைமர்கள், டெம்ப்ளேட் ஸ்ட்ராண்ட், நீர் மற்றும் டியோக்ஸிரிபோநியூக்ளியோடைட் ட்ரைபாஸ்பேட் (டி. என். டி. பி) ஆகியவற்றைக் கொண்ட எதிர்வினை கலவை டாக் பாலிமரேஸ் முன் உறைந்து, மீதமுள்ள பி. சி. ஆர் கூறுகள் உறைந்த கலவையின் மேல் சேர்க்கப்படுகின்றன. இது குறிப்பிட்ட அல்லாத பிணைப்பைத் தடுக்க செயல்படுகிறது. பின்னர் டாக் சேர்க்கப்பட்டதுஃ எதிர்வினை கலவையில் பி. சி. ஆரின் கூறுகள் டாக் சேர்க்காமல் தயாரிக்கப்பட்டு சூடாக்கப்படுகின்றன. உகந்த வெப்பநிலையை அடைந்த பின்னரே டாக் கலவையில் அறிமுகப்படுத்தப்படுகிறது. இருப்பினும், இந்த முறை மிகக் குறைந்த நம்பகத்தன்மை கொண்டது மற்றும் கூறுகள் மாசுபடுவதற்கு வழிவகுக்கும். மற்றொரு முறை டியோக்ஸிரிபோநியூக்ளியோடைடு ட்ரைபாஸ்பேட் மத்தியஸ்தம் செய்யப்பட்ட சூடான தொடக்க பி. சி. ஆர் வழியாகும், இது ஒரு பாதுகாப்புக் குழுவின் மூலம் நியூக்ளியோடைடு தளங்களை மாற்றியமைக்கிறது. டியோக்ஸிரிபோநியூக்ளியோடைடு ட்ரைபாஸ்பேட் (டிஎன்டிபி) மாற்றங்கள் 3 முதன்மை முனையத்தில் ஒரு வெப்ப உணர்திறன் பாதுகாப்புக் குழுவைச் சேர்க்க சூடான தொடக்க டிஎன்டிபி வேதியியல் ரீதியாக மாற்றியமைக்கப்படலாம். உகந்த வெப்பநிலையை அடையும் வரை நியூக்ளியோடைடுகள் டாக் பாலிமரேசுடன் தொடர்பு கொண்டு வார்ப்புரு இழையுடன் பிணைக்கப்படுவதை இந்த மாற்றம் தடுக்கும், எனவே, வெப்ப செயல்பாட்டு நடவடிக்கையின் போது பாதுகாக்கும் குழு அகற்றப்படும். சூடான தொடக்க டிஎன்டிபி, டிஏ, டிடி, டிசி மற்றும் டிஜி ஆகியவை இயற்கையான நியூக்ளியோடைடுகளை மாற்றுகின்றன. மாற்றியமைக்கப்பட்ட நான்கு நியூக்ளியோடைடுகளையும் பயன்படுத்துவது பரிந்துரைக்கப்படுகிறது, இருப்பினும், முந்தைய ஆராய்ச்சி ஒன்று அல்லது இரண்டு இயற்கை நியூக்ளியோடைடுகளை மாற்றியமைக்கப்பட்ட டி. என். டி. பி. களுடன் மாற்றுவதன் மூலம் குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கம் ஏற்படாது என்பதை உறுதிப்படுத்த போதுமானது என்பதைக் காட்டுகிறது. நியூக்ளிக் அமிலத்தின் மற்றொரு இரசாயன மாற்றம் வெப்ப-மீளக்கூடிய சகப்பிணைப்பு மாற்றம் மூலம் ஆகும், இது ஆர்வமுள்ள வார்ப்புருவிற்கு ப்ரைமர்களின் கலப்பினத்தைத் தடுக்கிறது. குவானோசின் அமினோ குழு கிளைஆக்சலுடன் தொடர்பு கொண்டு டி. ஜி. யை உருவாக்குகிறது. மாற்றியமைக்கப்பட்ட ப்ரைமர்கள் இரண்டாம் நிலை அமைப்புஃ சில இரண்டாம் நிலை அமைப்பு ப்ரைமர்களின் செயல்பாடுகளைத் தடுக்கலாம். எடுத்துக்காட்டாக, ஹேர்பின் கட்டமைப்பைக் கொண்ட ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடுகள் ஒரு ப்ரைமராக திறமையாக செயல்பட முடியாது. இருப்பினும், எதிர்வினை கலவையை அனீலிங் வெப்பநிலைக்கு சூடாக்கிய பிறகு, ப்ரைமர் ஒரு இணக்க மாற்றத்திற்கு உட்படும், இது ப்ரைமருக்கு பதிலாக ஒரு நேரியல் கட்டமைப்பை உருவாக்க அனுமதிக்கிறது, இது ப்ரைமரை இலக்கு பிரிவில் இணைக்கவும் பி. சி. ஆரைத் தொடங்கவும் உதவுகிறது. உண்மையில், 'இரட்டை குமிழி' ப்ரைமர்கள் என்று அழைக்கப்படும் ஹேர்பின் ப்ரைமர்களுக்கு மிகவும் நிலையான உள்ளமைவு உள்ளது, இது தலை முதல் வால் ஹோமோடைமர் உள்ளமைவை உருவாக்குகிறது, இது தலைகீழ்-டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் ஹாட்-ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆர் ஆகிய இரண்டிற்கும் பயன்படுத்தப்படலாம். ஒளி வேதியியல் ரீதியாக அகற்றக்கூடிய கூண்டுகள்ஃ ஒளி வேதியியல் ரீதியாக அகற்றக்கூடிய ஒரு பாதுகாப்புக் குழுவாக இருக்கும் ஒரு கூண்டு குழு, கூண்டு தைமிடின் பாஸ்போரமைடைட்டுகள் போன்றவை ஒலிகோ நியூக்ளியோடைடு ப்ரைமரில் இணைக்கப்படுகின்றன. இது புற ஊதா கதிர்வீச்சு (365 என்எம்) பயன்படுத்துவதன் மூலம் ப்ரைமரின் செயல்பாட்டை செயல்படுத்தவும் செயலிழக்கச் செய்யவும் அனுமதிக்கிறது. எனவே, அனீலிங் வெப்பநிலையை அடைந்த பிறகு ப்ரைமர்களை செயல்படுத்தலாம். பி. சி. ஆரில் மெக்னீசியம் மெக்னீசியத்தின் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட சேர்க்கை தேவைப்படுகிறது மற்றும் டாக் பாலிமரேஸ் மெக்னீசியத்தை சார்ந்திருப்பதால் ஒரு இணை காரணியாக செயல்படுகிறது. நிலையான இடையக உலைகளுக்கு மெக்னீசியம் மற்றும் பாஸ்பேட் செறிவை அதிகரிப்பது ஒரு மெக்னீசியம் வீழ்படிவத்தை உருவாக்குகிறது, இது வெப்ப சுழற்சி கட்டத்தில் டி. என். ஏ பாலிமரேஸிற்கு மெக்னீசியம் இல்லாததால் எதிர்வினைக்கு ஒரு சூடான தொடக்கத்தை வழங்குகிறது. வெப்ப சுழற்சியின் போது, மெக்னீசியம் மீண்டும் கரைசலில் கரைந்து, பாலிமரேஸ் பயன்படுத்துவதற்கு அது சாதாரணமாக செயல்பட அனுமதிக்கும். நன்மைகள் ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆர் சாதகமானது, ஏனெனில் இதற்கு குறைவான கையாளுதல் தேவைப்படுகிறது மற்றும் மாசுபடும் அபாயத்தைக் குறைக்கிறது. ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆர் வேதியியல் ரீதியாக மாற்றியமைக்கப்படலாம் அல்லது ஆன்டிபாடி அடிப்படையிலானது, இது செயல்முறைக்கு வெவ்வேறு நன்மைகளை வழங்குகிறது. வேதியியல் ரீதியாக மாற்றியமைக்கப்பட்ட ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆரில், செயல்முறை அறை வெப்பநிலையின் கீழ் எடுக்கப்படலாம் மற்றும் பி. சி. ஆர் செயல்முறை தொடங்குவதற்கு முன்பு ப்ரைமர்கள் ஒன்றோடொன்று பிணைக்கப்படுவதைத் தடுப்பதன் மூலமும், குறிப்பிட்ட அல்லாத ப்ரைமிங்கைக் கட்டுப்படுத்துவதன் மூலமும் ப்ரைமர்-டைமர்களின் உருவாக்கத்தை கணிசமாகக் குறைக்கிறது. இதேபோல், ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆர் குறைந்த ஒத்த தன்மையைக் கொண்ட டெம்ப்ளேட் வரிசைகளுடன் ப்ரைமர்களை பிணைப்பதைத் தடுக்கிறது, இது தவறான ப்ரைமிங்கிற்கு வழிவகுக்கிறது. கடுமையான நிலைமைகள் காரணமாக இது குறிப்பிட்ட தன்மை மற்றும் உணர்திறனை மேம்படுத்தலாம், அதே போல் இலக்கு துண்டின் தயாரிப்பு விளைச்சலை அதிகரிக்கலாம். ஆன்டிபாடி அடிப்படையிலான ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆரில், சைக்கிள் ஓட்டும் செயல்பாட்டின் போது ஆரம்ப சிதைவு நடவடிக்கைக்குப் பிறகு பாலிமரேஸ் செயல்படுத்தப்படுகிறது, எனவே தேவையான நேரத்தைக் குறைக்கிறது. இது ஒரு உயர் குறிப்பிட்ட தன்மைக்கும் வழிவகுக்கிறது. வரம்புகள் அதன் நன்மைகளுடன், ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆருக்கும் வரம்புகள் உள்ளன, அவை முறையை செயல்படுத்துவதற்கு முன்பு கருத்தில் கொள்ளப்பட வேண்டும். ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆருக்கு வழக்கமான பி. சி. ஆருக்கு மாறாக நீண்ட காலத்திற்கு வெப்பத்தைச் சேர்க்க வேண்டும், எனவே, டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏ சேதமடைவதற்கு மிகவும் எளிதில் பாதிக்கப்படுகிறது. அதிகரித்த வெப்ப நேரம் என்பது ஒரு குழாய், ஒற்றை இடையக தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன்-பி. சி. ஆர் முறை போன்ற சில நடைமுறைகளுக்கு இந்த செயல்முறை பொருந்தாது என்பதையும் குறிக்கிறது, இதற்கு தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் படிநிலைக்கு உட்படுத்த குறைந்த வெப்பநிலை தேவைப்படுகிறது. வேதியியல் ரீதியாக மாற்றியமைக்கப்பட்ட ஹாட் ஸ்டார்ட் பி. சி. ஆரில், டிஎன்ஏவின் பெருக்க செயல்முறை எதிர்மறையாக பாதிக்கப்படலாம், முதலில் பாலிமரேஸ் செயல்படுத்தப்படுவதற்குத் தேவையான மீண்டும் செயல்படுத்தும் நேரத்தில் குறிப்பிடத்தக்க அதிகரிப்பு மற்றும் இரண்டாவதாக இலக்கு டிஎன்ஏ வார்ப்புருவின் நீளம் மிக நீளமாக இருந்தால். ஆன்டிபாடி அடிப்படையிலான நடைமுறைகளில், ஒவ்வொரு நொதிக்கும் வெவ்வேறு ஆன்டிபாடி தேவைப்படுகிறது, எனவே செயல்முறையைச் செய்வதற்கான செலவு அதிகமாக உள்ளது. பல வணிக ரீதியான சூடான தொடக்க நொதிகள் உண்மையில் சிதைவு ஏற்படுவதற்கு முன்பு ஓரளவு செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளன என்பதற்கான சான்றுகளும் உள்ளன, மேலும் சில சப்ளையர்கள் இந்த எஞ்சிய செயல்பாட்டிற்கான சோதனை பற்றிய எந்த தகவலையும் வழங்குவதில்லை. இதன் பொருள் என்னவென்றால், சூடான தொடக்க என்சைம்களால் ஏற்படும் நன்மைகள் உணரப்படாமல் போகலாம், அல்லது சிறந்த முறையில் தொகுதிகள் அல்லது உற்பத்தியாளருக்கு இடையில் மாறுபடும். குறிப்புகள் பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை