Super-resolution microscopy
சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் நுண்ணோக்கி என்பது ஒளியியல் நுண்ணோக்கியில் உள்ள தொடர்ச்சியான நுட்பங்களாகும், இது ஒளியின் விலகல் காரணமாக ஏற்படும் விலகல் வரம்பால் திணிக்கப்பட்டதை விட அதிக தெளிவுத்திறனைக் கொண்டிருக்க அனுமதிக்கிறது. சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் இமேஜிங் நுட்பங்கள் அருகிலுள்ள புலம் (ஃபோட்டான்-சுரங்கப்பாதை நுண்ணோக்கி மற்றும் பெண்ட்ரி சூப்பர்லன்ஸ் மற்றும் அருகிலுள்ள புல ஸ்கேனிங் ஆப்டிகல் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தும்) அல்லது தொலைதூர புலத்தை நம்பியுள்ளன. பிந்தையதை நம்பியிருக்கும் நுட்பங்களில், விலகல்-வரம்பிற்கு அப்பால் தெளிவுத்திறனை மிதமாக (சுமார் இரண்டு காரணி வரை) மேம்படுத்துபவையும் அடங்கும், அதாவது மூடிய முள் துளை கொண்ட கான்ஃபோகல் நுண்ணோக்கி அல்லது டிகோன்வொல்யூஷன் அல்லது டிடெக்டர் அடிப்படையிலான பிக்சல் மறுசீரமைப்பு போன்ற கணக்கீட்டு முறைகளின் உதவியுடன் (எ. கா. மறு ஸ்கேன் நுண்ணோக்கி, பிக்சல் மறுசீரமைப்பு), 4 பை நுண்ணோக்கி மற்றும் சிம் மற்றும் எஸ். எம். ஐ போன்ற கட்டமைக்கப்பட்ட-ஒளிரும் நுண்ணோக்கி தொழில்நுட்பங்கள். தொலைதூர புலத்தில் சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் நுண்ணோக்கிக்கு இரண்டு முக்கிய குழுக்கள் உள்ளன, அவை மிகப் பெரிய காரணி மூலம் தெளிவுத்திறனை மேம்படுத்த முடியும்ஃ தீர்மானிக்கும் சூப்பர்-ரெசல்யூஷன்ஃ உயிரியல் நுண்ணோக்கியில் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் உமிழ்ப்பாளர்கள், ஃப்ளோரோபோர்கள், கிளர்ச்சிக்கு ஒரு நேரியல் அல்லாத பதிலைக் காட்டுகின்றன, இது தெளிவுத்திறனை மேம்படுத்த பயன்படுத்தப்படலாம். இத்தகைய முறைகளில் எஸ். டி. இ. டி, ஜி. எஸ். டி, ரெசால்ஃப்ட் மற்றும் எஸ். எஸ். ஐ. எம் ஆகியவை அடங்கும். சீரற்ற சூப்பர்-ரெசல்யூஷன்ஃ பல மூலக்கூறு ஒளி மூலங்களின் வேதியியல் சிக்கலானது அவற்றுக்கு ஒரு சிக்கலான தற்காலிக நடத்தையை அளிக்கிறது, இது அருகிலுள்ள பல ஃப்ளோரோபோர்கள் தனித்தனி நேரங்களில் ஒளியை வெளியிடுவதற்கும், அதன் மூலம் சரியான நேரத்தில் தீர்க்கப்படுவதற்கும் பயன்படுத்தப்படலாம். இந்த முறைகளில் சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் ஆப்டிகல் ஃப்ளக்சுயேஷன் இமேஜிங் (எஸ். ஓ. எஃப். ஐ) மற்றும் அனைத்து ஒற்றை மூலக்கூறு உள்ளூர்மயமாக்கல் முறைகள் (எஸ். எம். எல். எம்), அதாவது எஸ். பி. டி. எம், எஸ். பி. டி. எம்ஃபிமோட், பி. ஏ. எல். எம், எஃப். பி. ஏ. எல். எம், ஸ்டோர்ம் மற்றும் டி. எஸ். டி. ஓ. ஆர். எம் ஆகியவை அடங்கும். அக்டோபர் 8,2014 அன்று, வேதியியலுக்கான நோபல் பரிசு டபிள்யூ. இ. எரிக் பெட்ஸிக்கிற்கு வழங்கப்பட்டது. "நானோ பரிமாணத்திற்குள் ஒளியியல் நுண்ணோக்கியைக் கொண்டுவரும்" "சூப்பர்-தீர்க்கப்பட்ட ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியின் வளர்ச்சிக்காக" மோர்னர் மற்றும் ஸ்டீபன் ஹெல். சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் நுண்ணோக்கியின் வெவ்வேறு முறைகள் உயிரியல் மருத்துவ ஆராய்ச்சி சமூகத்தால் பெருகிய முறையில் ஏற்றுக்கொள்ளப்பட்டு வருகின்றன, மேலும் இந்த நுட்பங்கள் மூலக்கூறு மட்டத்தில் உயிரியல் செயல்பாட்டைப் புரிந்துகொள்ள இன்றியமையாத கருவிகளாக மாறி வருகின்றன. 1978 வாக்கில், அபே வரம்பை உடைக்க முதல் தத்துவார்த்த கருத்துக்கள் உருவாக்கப்பட்டன, இது 4 பை நுண்ணோக்கியை ஒரு கான்ஃபோகல் லேசர்-ஸ்கேனிங் ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியாகப் பயன்படுத்த அழைப்பு விடுத்தது, அங்கு ஒளி அனைத்து பக்கங்களிலிருந்தும் ஒரு பொதுவான மையத்திற்கு கவனம் செலுத்துகிறது, இது 'பாயிண்ட்-பை-பாயிண்ட்' கிளர்ச்சி மூலம் ஸ்கேன் செய்யப் பயன்படுகிறது. எவ்வாறாயினும், 1978 முதல் வெளியீடு ஒரு முறையற்ற உடல் முடிவை எடுத்தது (அதாவது. ஒரு புள்ளி போன்ற ஒளி புள்ளி) மற்றும் திடமான கோணத்தின் மறுபுறத்தைச் சேர்ப்பதன் உண்மையான நன்மையாக அச்சுத் தெளிவுத்திறன் அதிகரிப்பை முற்றிலும் தவறவிட்டது. துணை விலகல் நுண்ணோக்கி நுட்பங்கள் பற்றிய வேதியியல் வலைப்பதிவின் மதிப்பாய்விலிருந்து பின்வரும் சில தகவல்கள் (அனுமதியுடன்) சேகரிக்கப்பட்டன. 1986 ஆம் ஆண்டில், தூண்டப்பட்ட உமிழ்வை அடிப்படையாகக் கொண்ட ஒரு சூப்பர்-தெளிவுத்திறன் ஒளியியல் நுண்ணோக்கி ஓகோனின் மூலம் காப்புரிமை பெற்றது. சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் நுட்பங்கள் ஃபோட்டான் டன்னலிங் நுண்ணோக்கி (பி. டி. எம்) உள்ளூர் மேம்பாடு/ஏஎன்எஸ்ஓஎம்/ஆப்டிகல் நானோ-ஆன்டெனாக்கள் அருகிலுள்ள புலம் ஆப்டிகல் சீரற்ற மேப்பிங் (என்ஓஆர்எம்) நுண்ணோக்கி அருகிலுள்ள புலம் ஆப்டிகல் சீரற்ற மேப்பிங் (என்ஓஆர்எம்) நுண்ணோக்கி என்பது நானோ துகள்களின் பிரவுனியன் இயக்கத்தை மூழ்கும் திரவத்தில் கவனிப்பதன் மூலம் தொலைதூர புல நுண்ணோக்கி மூலம் ஒளிக்கு அருகிலுள்ள புலத்தைப் பெறுவதற்கான ஒரு முறையாகும். NORM நானோ துகள்களை சீரற்ற முறையில் நகர்த்துவதன் மூலம் பொருள் மேற்பரப்பு ஸ்கேனிங்கைப் பயன்படுத்துகிறது. நுண்ணோக்கி மூலம், நானோ துகள்கள் சமச்சீர் வட்ட புள்ளிகளைப் போல தோற்றமளிக்கின்றன. புள்ளி அகலம் புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டிற்கு (~ 250 என்எம்) சமம் மற்றும் நுண்ணோக்கி தெளிவுத்திறனால் வரையறுக்கப்படுகிறது. கொடுக்கப்பட்ட துகள்களின் பக்கவாட்டு ஆயத்தொலைவுகளை நுண்ணோக்கியின் தெளிவுத்திறனை விட மிக அதிக துல்லியத்துடன் மதிப்பீடு செய்யலாம். பல பிரேம்களிலிருந்து தகவல்களைச் சேகரிப்பதன் மூலம், நுண்ணோக்கியின் முழு பார்வைத் துறையிலும் அருகிலுள்ள புலத்தின் தீவிரத்தின் பரவலை ஒருவர் வரைபடமாக்க முடியும். என்எஸ்ஓஎம் மற்றும் ஏஎன்எஸ்ஓஎம் உடன் ஒப்பிடுகையில், இந்த முறைக்கு முனை நிலைப்படுத்துவதற்கு எந்த சிறப்பு உபகரணங்களும் தேவையில்லை, மேலும் இது ஒரு பெரிய பார்வை புலம் மற்றும் ஆழமான கவனம் ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளது. அதிக எண்ணிக்கையிலான ஸ்கேனிங் "சென்சார்கள்" காரணமாக ஒருவர் குறுகிய காலத்தில் படத்தைப் பெற முடியும். 4பிஐ ஏ 4பிஐ நுண்ணோக்கி என்பது மேம்பட்ட அச்சுத் தெளிவுத்திறனுடன் லேசர்-ஸ்கேனிங் ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி ஆகும். 500-700 nm இன் வழக்கமான மதிப்பை 100-150 nm ஆக மேம்படுத்தலாம், இது நிலையான கான்ஃபோகல் நுண்ணோக்கியை விட 5-7 மடங்கு குறைவான அளவைக் கொண்ட கிட்டத்தட்ட கோள மைய இடத்துடன் ஒத்திருக்கிறது. இரண்டு எதிர் புறநிலை லென்ஸ்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் தெளிவுத்திறனில் முன்னேற்றம் அடையப்படுகிறது, இவை இரண்டும் ஒரே வடிவியல் இருப்பிடத்தில் கவனம் செலுத்துகின்றன. மேலும், இரண்டு புறநிலை லென்ஸ்கள் ஒவ்வொன்றிலும் ஒளியியல் பாதை நீளத்தில் உள்ள வேறுபாடு கவனமாக குறைக்கப்படுகிறது. இதன் மூலம், இரு நோக்கங்களின் பொதுவான மையப் பகுதியில் வசிக்கும் மூலக்கூறுகள் இருபுறமும் ஒத்திசைவாக ஒளிர முடியும், மேலும் பிரதிபலித்த அல்லது வெளிப்படும் ஒளியை ஒத்திசைவாக சேகரிக்க முடியும், அதாவது. டிடெக்டரில் வெளிப்படும் ஒளியின் ஒத்திசைவான மேல்நிலை சாத்தியமாகும். வெளிச்சம் மற்றும் கண்டறிதலுக்குப் பயன்படுத்தப்படும் திடமான கோணம் அதிகரிக்கப்பட்டு, சிறந்த வழக்கை அணுகுகிறது, அங்கு மாதிரி ஒளிரும் மற்றும் அனைத்து பக்கங்களிலிருந்தும் ஒரே நேரத்தில் கண்டறியப்படுகிறது. இதுவரை, நிலையான உயிரணுக்களில் STED நுண்ணோக்கி மற்றும் உயிரணுக்களில் மாற்றக்கூடிய புரதங்களுடன் RESOLFT நுண்ணோக்கி ஆகியவற்றுடன் இணைந்து 4Pi நுண்ணோக்கியில் சிறந்த தரம் அடையப்பட்டுள்ளது. கட்டமைக்கப்பட்ட ஒளி நுண்ணோக்கி (சிம்) கட்டமைக்கப்பட்ட ஒளி நுண்ணோக்கி (சிம்) கவனிக்கக்கூடிய பகுதிக்கு வெளியே அதிர்வெண் இடத்திலிருந்து தகவல்களைச் சேகரிப்பதன் மூலம் இடஞ்சார்ந்த தெளிவுத்திறனை மேம்படுத்துகிறது. இந்த செயல்முறை பரஸ்பர இடத்தில் செய்யப்படுகிறதுஃ ஒரு எஸ். ஐ. படத்தின் ஃபோரியர் உருமாற்றம் (எஃப்டி) பரஸ்பர இடத்தின் பல்வேறு பகுதிகளிலிருந்து மிகைப்படுத்தப்பட்ட கூடுதல் தகவல்களைக் கொண்டுள்ளது; வெளிச்சம் சில கட்டங்களால் மாற்றப்படும் பல பிரேம்களுடன், கணக்கீட்டு ரீதியாக பிரித்து எஃப்டி படத்தை மறுகட்டமைக்க முடியும், இது அதிக தெளிவுத்திறன் தகவல்களைக் கொண்டுள்ளது. தலைகீழ் எஃப்டி மறுசீரமைக்கப்பட்ட படத்தை சூப்பர் தெளிவுத்திறன் கொண்ட படத்திற்குத் திருப்பித் தருகிறது. சிம் நுண்ணோக்கி எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கியை சில மருத்துவ நோயறிதல்களுக்கான ஒரு கருவியாக மாற்றக்கூடும். இவற்றில் சிறுநீரகக் கோளாறுகள், சிறுநீரக புற்றுநோய் மற்றும் இரத்த நோய்களைக் கண்டறிதல் ஆகியவை அடங்கும். "கட்டமைக்கப்பட்ட வெளிச்ச நுண்ணோக்கி" என்ற சொல் பிற்காலத்தில் மற்றவர்களால் உருவாக்கப்பட்டது என்றாலும், குர்ரா (1995) முதன்முதலில் வெளியிடப்பட்ட முடிவுகளில், 50 என்எம் சுருதி கிராட்டிங் மூலம் வடிவமைக்கப்பட்ட ஒளி 50 என்எம் சுருதியின் இரண்டாவது கிராட்டிங் ஒளிரும், கிராட்டிங்ஸ் ஒருவருக்கொருவர் சுழற்றப்படுகின்றன உருப்பெருக்கம் அடைய தேவையான கோண அளவு. ஒளிரும் அலைநீளம் 650 நானோமீட்டராக இருந்தபோதிலும், 50 நானோமீட்டர் கிராட்டிங் எளிதில் தீர்க்கப்பட்டது. இது அபே தெளிவுத்திறன் வரம்பான 232 நானோமீட்டரை விட கிட்டத்தட்ட 5 மடங்கு முன்னேற்றத்தைக் காட்டியது, இது பயன்படுத்தப்பட்ட எண் துளை மற்றும் அலைநீளத்திற்கு பெறப்பட்ட மிகச்சிறியதாக இருந்திருக்க வேண்டும். இந்த பணியின் மேலும் வளர்ச்சியில், குவேரா, மேம்பட்ட புலத்தை கட்டம்-மாற்றுவதன் மூலம் சூப்பர்-தீர்க்கப்பட்ட பக்கவாட்டு நிலப்பரப்பு அடையப்படுகிறது என்பதைக் காட்டினார். பல அமெரிக்க காப்புரிமைகள் குர்ராவுக்கு தனித்தனியாகவோ அல்லது சக ஊழியர்களுடனோ வழங்கப்பட்டு போலராய்டு கார்ப்பரேஷனுக்கு ஒதுக்கப்பட்டன. ஒளியியல் தரவு சேமிப்பு மற்றும் நுண்ணோக்கியில் இந்த சூப்பர்-தெளிவுத்திறன் நுட்பத்தைப் பயன்படுத்துவதற்காக இந்த தொழில்நுட்பத்திற்கான உரிமங்களை டயர் எனர்ஜி சிஸ்டம்ஸ், காலிமெட்ரிக்ஸ் இன்க் மற்றும் நானோப்டெக் கார்ப்பரேஷன் ஆகியவை பெற்றன. இடஞ்சார்ந்த மாற்றியமைக்கப்பட்ட வெளிச்சம் (எஸ். எம். ஐ) கட்டமைக்கப்பட்ட ஒளியின் ஒரு செயல்படுத்தல் இடஞ்சார்ந்த மாற்றியமைக்கப்பட்ட வெளிச்சம் (எஸ். எம். ஐ) என்று அழைக்கப்படுகிறது. நிலையான கட்டமைக்கப்பட்ட ஒளியைப் போலவே, எஸ். எம். ஐ நுட்பமும் நுண்ணோக்கியின் புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டை (பி. எஸ். எஃப்) பொருத்தமான முறையில் மாற்றியமைக்கிறது. இருப்பினும், இந்த விஷயத்தில், "ஒளியியல் தெளிவுத்திறன் மேம்படுத்தப்படவில்லை"; அதற்கு பதிலாக ஃப்ளோரசன்ட் பொருட்களின் தூர அளவீடுகளின் துல்லியத்தை அதிகரிக்க கட்டமைக்கப்பட்ட வெளிச்சம் பயன்படுத்தப்படுகிறது, "சில பத்து நானோமீட்டர்களின் மூலக்கூறு பரிமாணங்களில் அளவு அளவீடுகளை செயல்படுத்த". செங்குத்தான எஸ்எம்ஐ நுண்ணோக்கி அச்சில் ஒன்று அல்லது இரண்டு எதிர் இடையூறு லேசர் கற்றைகளைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் கட்டமைக்கப்பட்ட ஒளியை அடைகிறது. படம்பிடிக்கப்படும் பொருள் பின்னர் அலை புலம் வழியாக உயர் துல்லியமான படிகளில் நகர்த்தப்படுகிறது, அல்லது அலை புலம் கட்ட மாற்றங்களால் பொருளுடன் ஒப்பிடுகையில் நகர்த்தப்படுகிறது. இது மேம்பட்ட அச்சு அளவு மற்றும் தூரத் தெளிவுத்திறனை விளைவிக்கிறது. எஸ்எம்ஐ மற்ற சூப்பர் ரெசல்யூஷன் தொழில்நுட்பங்களுடன் இணைக்கப்படலாம், எடுத்துக்காட்டாக 3டி லிமோன் அல்லது எல்எஸ்ஐ-டிஆர்எஃப் உடன் பக்கவாட்டு கட்டமைக்கப்பட்ட ஒளியுடன் மொத்த உள் பிரதிபலிப்பு இன்டர்ஃபெரோமீட்டராக (இந்த கடைசி கருவி மற்றும் நுட்பம் அடிப்படையில் ஒரு கட்டம்-மாற்றப்பட்ட ஃபோட்டான் சுரங்கப்பாதை நுண்ணோக்கி ஆகும், இது கட்டம்-மாற்றப்பட்ட ஈவான்சென்ட் புலத்துடன் மொத்த உள் பிரதிபலிப்பு ஒளி நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்துகிறது (குர்ரா, 1996). இந்த எஸ். எம். ஐ நுட்பம் முன்பு ஒப்பிடமுடியாத ஒளியியல் தெளிவுத்திறனுடன் மனித கண் திசுக்களில் இருந்து பிரிவுகளில் ஆட்டோஃப்ளோரோஃபோர் விநியோகங்களின் ஒளி-ஒளியியல் படங்களைப் பெற அனுமதிக்கிறது. மூன்று வெவ்வேறு கிளர்ச்சி அலைநீளங்களைப் பயன்படுத்துவது (488,568 மற்றும் 647 என்எம்), தன்னியக்க ஃப்ளோரசன்ஸ் சமிக்ஞையைப் பற்றிய நிறமாலைத் தகவல்களைச் சேகரிக்க உதவுகிறது. மாகுலர் சிதைவால் பாதிக்கப்பட்ட மனித கண் திசுக்களை ஆய்வு செய்ய இது பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளது. தீர்மானிக்கும் செயல்பாட்டு நுட்பங்கள் ரிவர்சிபிள் சாச்சுரேட்டபிள் ஆப்டிகல் ஃப்ளோரசன்ஸ் டிரான்சிஷன்ஸ் (RESOLFT) நுண்ணோக்கி என்பது மிக உயர்ந்த தெளிவுத்திறனுடன் கூடிய ஒளியியல் நுண்ணோக்கி ஆகும், இது வழக்கமான அல்லது கான்ஃபோகல் நுண்ணோக்கி மூலம் படம்பிடிக்க முடியாத மாதிரிகளில் விவரங்களை படமாக்க முடியும். RESOLFT க்குள் STED நுண்ணோக்கி மற்றும் ஜி. எஸ். டி நுண்ணோக்கியின் கொள்கைகள் பொதுமைப்படுத்தப்பட்டுள்ளன. மேலும், ரெசால்ஃப்ட் அல்லது எஸ்எஸ்ஐஎம் தவிர பிற கருத்துகளுடன் கூடிய நுட்பங்கள் உள்ளன. எடுத்துக்காட்டாக, நைட்ரஜன்-வெற்றிட மையத்தின் ஒளியியல் மற்றும் கேட் பண்பைப் பயன்படுத்தி ஒளிரும் நுண்ணோக்கி, அல்லது வெப்ப கதிர்வீச்சின் தூண்டப்பட்ட உமிழ்வு (SETR) மூலம் சூப்பர்-தெளிவுத்திறன், இது கருப்பு-உடல் கதிர்வீச்சின் உள்ளார்ந்த சூப்பர்-லைனரட்டிகளைப் பயன்படுத்துகிறது மற்றும் நுண்ணோக்கிக்கு அப்பால் சூப்பர்-தெளிவுத்திறன் என்ற கருத்தை விரிவுபடுத்துகிறது. தூண்டப்பட்ட உமிழ்வு குறைப்பு (STED) தூண்டப்பட்ட உமிழ்வு குறைப்பு நுண்ணோக்கி (STED) இரண்டு லேசர் துடிப்புகளைப் பயன்படுத்துகிறது, ஃப்ளோரோபோர்களை அவற்றின் ஒளிரும் நிலைக்குத் தூண்டுவதற்கான கிளர்ச்சி துடிப்பு மற்றும் தூண்டப்பட்ட உமிழ்வு மூலம் ஃப்ளோரோபோர்களின் கிளர்ச்சியைக் குறைப்பதற்கான STED துடிப்பு. நடைமுறையில், கிளர்ச்சி லேசர் துடிப்பு முதலில் பயன்படுத்தப்படுகிறது, அதன் பிறகு ஒரு STED துடிப்பு விரைவில் பின்பற்றப்படுகிறது (தொடர்ச்சியான அலை லேசர்களைப் பயன்படுத்தி துடிப்புகள் இல்லாமல் STED பயன்படுத்தப்படுகிறது). மேலும், எஸ். டி. இ. டி துடிப்பு ஒரு வகையில் மாற்றியமைக்கப்பட்டுள்ளது, இதனால் இது ஒரு பூஜ்ஜிய-தீவிர இடத்தைக் கொண்டுள்ளது, இது கிளர்ச்சி மைய இடத்துடன் ஒத்துப்போகிறது. STED கற்றை தீவிரத்தின் மீது தூண்டப்பட்ட உமிழ்வு விகிதத்தின் நேரியல் சார்பு இல்லாததால், குவிய கிளர்ச்சி இடத்தைச் சுற்றியுள்ள அனைத்து ஃப்ளோரோபோர்களும் அவற்றின் ஆஃப் நிலையில் (ஃப்ளோரோபோர்களின் தரை நிலை) இருக்கும். இந்த மையப் பகுதியை ஸ்கேன் செய்வதன் மூலம், ஒருவர் படத்தை மீட்டெடுக்கிறார். சமன்பாடு () இன் படி, கிளர்ச்சி மைய இடத்தின் புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டின் (பிஎஸ்எஃப்) அரை அதிகபட்ச (எஃப். டபிள்யூ. எச். எம்) முழு அகலத்தை கோட்பாட்டளவில் எஸ். டி. இ துடிப்பின் தீவிரத்தை உயர்த்துவதன் மூலம் ஒரு தன்னிச்சையான அகலத்திற்கு சுருக்க முடியும். () இதில்  விசாரணா என்பது பக்கவாட்டுத் தெளிவுத்திறன், α என்பது விலகல் வரையறுக்கப்பட்ட பிஎஸ்எஃப் இன் எஃப். டபிள்யூ. எச். எம் ஆகும், ஐமாக்ஸ் என்பது எஸ்டிஇடி லேசரின் உச்ச தீவிரம் மற்றும் நிறைவுற்ற உமிழ்வு குறைப்பை அடைய தேவையான வாசல் தீவிரம் ஆகும். அதன் பரவலான பயன்பாட்டைத் தடுத்துள்ள STED இன் முக்கிய குறைபாடு என்னவென்றால், இயந்திரங்கள் சிக்கலானவை. ஒருபுறம், ஒரு படத்தை மீட்டெடுக்க மாதிரியை ஸ்கேன் செய்ய வேண்டிய அவசியம் இருப்பதால், பெரிய புலங்களுக்கு பட கையகப்படுத்தும் வேகம் ஒப்பீட்டளவில் மெதுவாக உள்ளது. மறுபுறம், சிறிய பார்வை புலங்களுக்கு இது மிகவும் வேகமாக இருக்கலாம்ஃ வினாடிக்கு 80 பிரேம்கள் வரை பதிவுகள் காட்டப்பட்டுள்ளன. எஸ். டி. இ. டி உடன் தொடர்புடைய பெரிய இஸ் மதிப்பு காரணமாக, அதிக தீவிரம் கொண்ட கிளர்ச்சி துடிப்பு தேவைப்படுகிறது, இது மாதிரிக்கு சேதத்தை ஏற்படுத்தக்கூடும். தரை நிலை குறைப்பு (ஜி. எஸ். டி) தரை நிலை குறைப்பு நுண்ணோக்கி (ஜி. எஸ். டி நுண்ணோக்கி) ஒரு ஃப்ளோரோஃபோர் இன் மூன்று நிலைகளை ஆஃப்-ஸ்டேட் ஆகவும், ஒற்றை நிலை நிலையை ஆன்-ஸ்டேட் ஆகவும் பயன்படுத்துகிறது, இதன் மூலம் ஒரு கிளர்ச்சி லேசர் பயன்படுத்தப்படுகிறது ஒற்றை நிலை மூலக்கூறின் சுற்றளவில் ஃப்ளோரோஃபோர்களை மூன்று நிலைகளுக்கு இயக்க. இது STED ஐப் போன்றது, அங்கு ஆஃப்-ஸ்டேட் என்பது ஃப்ளோரோபோர்களின் தரை நிலை, அதனால்தான் சமன்பாடு () இந்த விஷயத்திலும் பொருந்தும். மதிப்பு STED ஐ விட சிறியது, இது மிகச் சிறிய லேசர் தீவிரத்தில் சூப்பர்-தெளிவுத்திறன் இமேஜிங் சாத்தியமாக்குகிறது. இருப்பினும், எஸ். டி. இ. டி உடன் ஒப்பிடும்போது, ஜி. எஸ். டி. யில் பயன்படுத்தப்படும் ஃப்ளோரோபோர்கள் பொதுவாக குறைவான ஃபோட்டோஸ்டபிள் ஆகும், மேலும் மூன்று நிலைகளின் செறிவூட்டலை உணர்ந்து கொள்வது கடினமாக இருக்கலாம். நிறைவுற்ற கட்டமைக்கப்பட்ட ஒளியூட்டல் நுண்ணோக்கி (எஸ்எஸ்ஐஎம்) நிறைவுற்ற கட்டமைக்கப்பட்ட ஒளியூட்டல் நுண்ணோக்கி (எஸ்எஸ்ஐஎம்) ஃப்ளோரோபோர்களின் உமிழ்வு விகிதத்தின் நேரியல் சாராத சார்பை கிளர்ச்சி லேசரின் தீவிரத்தில் பயன்படுத்துகிறது. ஃப்ளோரோபோர்களை அவற்றின் ஃப்ளோரசன்ட் நிலையில் நிரப்புவதற்குத் தேவையான உச்ச தீவிரத்துடன் ஒரு சைனூசாய்டல் ஒளிரும் வடிவத்தைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், ஒருவர் மோயர் விளிம்புகளை மீட்டெடுக்கிறார். விளிம்புகள் உயர் வரிசை இடஞ்சார்ந்த தகவல்களைக் கொண்டுள்ளன, அவை கணக்கீட்டு நுட்பங்களால் பிரித்தெடுக்கப்படலாம். தகவல் பிரித்தெடுக்கப்பட்டவுடன், ஒரு சூப்பர் தெளிவுத்திறன் படம் மீட்டெடுக்கப்படுகிறது. எஸ்எஸ்ஐஎம் ஒளிரும் வடிவத்தை பல முறை மாற்ற வேண்டும், இது நுட்பத்தின் தற்காலிக தீர்மானத்தை திறம்பட கட்டுப்படுத்துகிறது. கூடுதலாக, மாதிரியில் கதிர்வீச்சு சேதத்தை ஏற்படுத்தும் மற்றும் எஸ்எஸ்ஐஎம் பயன்படுத்தக்கூடிய சாத்தியமான பயன்பாடுகளைக் கட்டுப்படுத்தும் நிறைவுற்ற நிலைமைகள் காரணமாக, மிகவும் ஃபோட்டோஸ்டபிள் ஃப்ளோரோபோர்களின் தேவை உள்ளது. இந்த நுண்ணோக்கியின் எடுத்துக்காட்டுகள் கட்டமைக்கப்பட்ட வெளிச்ச நுண்ணோக்கி (சிம்) பிரிவின் கீழ் காட்டப்பட்டுள்ளனஃ 3டி-சிம் நுண்ணோக்கியுடன் பதிவு செய்யப்பட்ட செல் கருக்கள் மற்றும் மைட்டோடிக் நிலைகளின் படங்கள். தற்செயலான செயல்பாட்டு நுட்பங்கள் உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி ஒற்றை மூலக்கூறு உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி (எஸ். எம். எல். எம்) அனைத்து நுண்ணோக்கி நுட்பங்களையும் சுருக்கமாகக் கூறுகிறது, அவை உமிழ்ப்பாளர்களை தனிமைப்படுத்துவதன் மூலமும் அவற்றின் படங்களை புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டுடன் (பி. எஸ். எஃப்) பொருத்துவதன் மூலமும் சூப்பர் தெளிவுத்திறனை அடைகின்றன. பொதுவாக, புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டின் அகலம் (~ 250 என்எம்) தெளிவுத்திறனைக் கட்டுப்படுத்துகிறது. இருப்பினும், ஒரு தனிமைப்படுத்தப்பட்ட உமிழ்ப்பான் கொடுக்கப்பட்டால், சமன்பாடு () இன் படி அதன் தீவிரத்தால் மட்டுமே வரையறுக்கப்பட்ட துல்லியத்துடன் அதன் இருப்பிடத்தை தீர்மானிக்க முடியும். () இங்கு αloc என்பது உள்ளூர்மயமாக்கல் துல்லியம், α என்பது பி. எஸ். எஃப் இன் எஃப். டபிள்யூ. எச். எம் (அரை அதிகபட்சத்தில் முழு அகலம்) மற்றும் என் என்பது சேகரிக்கப்பட்ட ஃபோட்டான்களின் எண்ணிக்கை. இந்த பொருத்துதல் செயல்முறை தனிமைப்படுத்தப்பட்ட உமிழ்ப்பாளர்களுக்கு மட்டுமே நம்பகத்தன்மையுடன் செய்ய முடியும் (டிகோன்வொல்யூஷனைப் பார்க்கவும்), மேலும் சுவாரஸ்யமான உயிரியல் மாதிரிகள் உமிழ்ப்பாளர்களுடன் மிகவும் அடர்த்தியாக பெயரிடப்பட்டுள்ளன, அனைத்து உமிழ்ப்பாளர்களும் ஒரே நேரத்தில் செயலில் இருக்கும்போது பொருத்துவது சாத்தியமற்றது. எஸ். எம். எல். எம் நுட்பங்கள் ஒரே நேரத்தில் உமிழ்ப்பாளர்களின் ஒரு சிறிய துணைக்குழுவை மட்டுமே செயல்படுத்துவதன் மூலமும், இந்த சில உமிழ்ப்பாளர்களை மிகவும் துல்லியமாக உள்ளூர்மயமாக்குவதன் மூலமும், அவற்றை செயலிழக்கச் செய்வதன் மூலமும், மற்றொரு துணைக்குழுவை செயல்படுத்துவதன் மூலமும் இந்த சங்கடத்தைத் தீர்க்கின்றன. பின்னணி மற்றும் கேமரா பிக்சலேஷனைக் கருத்தில் கொண்டு, ஒரு வழக்கமான நுண்ணோக்கியின் புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டிற்கான (ஏர் டிஸ்க்) காஸியன் தோராயத்தைப் பயன்படுத்தி, கோட்பாட்டு தீர்மானத்தை தாம்சன் மற்றும் பலர் முன்மொழிகின்றனர். மற்றும் மோர்டென்சன் மற்றும் பலர் நன்றாக ட்யூன் செய்தனர். : இங்கு * σ என்பது ஒரே மூலக்கூறின் மைய இருப்பிடங்களின் காஸியன் நிலையான விலகல், பல முறை அளவிடப்பட்டால் (எ. கா. ஒரு வீடியோவின் பிரேம்கள்). (அலகு m) * σPSF என்பது புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டின் காஸியன் நிலையான விலகல் ஆகும், இதன் FWHM எர்ன்ஸ்ட் அபே சமன்பாடு d = λ/(2 N. A.) ஐப் பின்பற்றுகிறது. (அலகு m) * a என்பது ஒவ்வொரு படத்தின் பிக்சலின் அளவாகும். (அலகு m) * Nsig என்பது அனைத்து பிக்சல்களிலும் உள்ள மொத்த பிஎஸ்எஃப்-இன் ஃபோட்டான் எண்ணிக்கையாகும். (அலகு இல்லாதது) * Nbg ஒரு பிக்சலுக்கு சராசரி பின்னணி ஃபோட்டான் கணக்கிடப்படுகிறது (இருண்ட எண்ணிக்கைகள் ஏற்கனவே அகற்றப்பட்டுள்ளன), இது காலப்போக்கில் ஒவ்வொரு பிக்சலின் பாய்சான் விநியோக பின்னணி சத்தத்தின் காஸியன் நிலையான விலகல் அல்லது பின்னணி சத்தம் மட்டுமே கொண்ட அனைத்து பிக்சல்களின் நிலையான விலகல், σbg2 இன் சதுரமாக தோராயமாக மதிப்பிடப்படுகிறது. பெரிய σbg2, சிறந்த தோராயமாக (எ. கா. σbg2> 10 க்கு நல்லது, σbg2> 1000 க்கு சிறந்தது). (அலகு இல்லாத) * தெளிவுத்திறன் FWHM என்பது ~ 2.355 மடங்கு காஸியன் நிலையான விலகல் ஆகும். பொதுவாக, உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி ஃப்ளோரோபோர்களுடன் செய்யப்படுகிறது. பொருத்தமான ஃப்ளோரோபோர்கள் (எ. கா. STORM) பெரும்பாலான நேரங்களில் ஃப்ளோரசன்ட் அல்லாத இருண்ட நிலையில் வாழ்கிறது மற்றும் பொதுவாக குறைந்த தீவிரம் கொண்ட கிளர்ச்சி லேசருடன் அசாதாரணமாக செயல்படுத்தப்படுகிறது. ஒரு ரீட்அவுட் லேசர் ஃப்ளோரசன்ஸைத் தூண்டுகிறது மற்றும் ப்ளீச்சுகள் அல்லது ஃபோட்டோஸ்விட்சுகள் ஃப்ளோரோபோர்களை மீண்டும் இருண்ட நிலைக்குத் திருப்புகிறது, பொதுவாக 10-100 எம். எஸ். க்குள். நானோ அளவிலான நிலப்பரப்பில் (PAINT) இமேஜிங் செய்வதற்கான புள்ளிகள் குவிப்பில், ஃப்ளோரோபோர்கள் பிணைப்பதற்கு முன்பு ஃப்ளோரசன்ட் அல்லாதவை மற்றும் பின்னர் ஃப்ளோரசன்ட் ஆகும். ஃப்ளோரசன்ட் கட்டத்தில் வெளிப்படும் ஃபோட்டான்கள் ஒரு கேமராவுடன் சேகரிக்கப்படுகின்றன, இதன் விளைவாக ஃப்ளோரோஃபோர் (இது பிஎஸ்எஃப் மூலம் சிதைக்கப்படுகிறது) ஒரு சில ஆங்ஸ்ட்ரோம்களின் வரிசையில் கூட மிக அதிக துல்லியத்துடன் பொருத்தப்படலாம். இந்த செயல்முறையை பல ஆயிரம் முறை மீண்டும் மீண்டும் செய்வது அனைத்து ஃப்ளோரோபோர்களும் பிரகாசமான நிலையில் சென்று பதிவு செய்யப்படுவதை உறுதி செய்கிறது. ஒரு கணினி பின்னர் ஒரு சூப்பர் தீர்க்கப்பட்ட படத்தை மறுகட்டமைக்கிறது. இந்த முறைகளுக்கு பயன்படுத்தப்படும் ஃப்ளோரோபோர்களின் விரும்பத்தக்க பண்புகள், தெளிவுத்திறனை அதிகரிப்பதற்காக, அவை பிரகாசமாக இருக்க வேண்டும். அதாவது, அவை அதிக அழிவு குணகம் மற்றும் அதிக அளவு விளைச்சலைக் கொண்டிருக்க வேண்டும். அவை அதிக மாறுபட்ட விகிதத்தையும் கொண்டிருக்க வேண்டும் (ஒளி நிலையில் வெளிப்படும் ஃபோட்டான்களின் எண்ணிக்கைக்கும் இருண்ட நிலையில் வெளிப்படும் ஃபோட்டான்களின் எண்ணிக்கைக்கும் இடையிலான விகிதம்). மேலும், நிக்விஸ்ட் அளவுகோல்களின்படி, அடர்த்தியாக பெயரிடப்பட்ட மாதிரி விரும்பத்தக்கது. உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி முறைகளின் எண்ணிக்கை பெரும்பாலும் பயன்படுத்தப்படும் ஃப்ளோரோபோர்களின் வகைகளில் வேறுபடுகிறது. ஸ்பெக்ட்ரல் துல்லிய தூர நுண்ணோக்கி (எஸ். பி. டி. எம்) பொதுவாக அனுமதிக்கும் நுண்ணோக்கியின் தெளிவுத்திறனை விட ஒரு ஒற்றை, சிறிய ஒளி மூலத்தை மிகவும் சிறப்பாகக் கண்டறியலாம்ஃ ஒளி ஒரு மங்கலான புள்ளியை உருவாக்கும் என்றாலும், கணினி வழிமுறைகள் துல்லியமாக கணக்கிட பயன்படுத்தப்படலாம் மங்கலான இடத்தின் மையம், நுண்ணோக்கியின் புள்ளி பரவல் செயல்பாடு, டிடெக்டரின் சத்தம் பண்புகள் போன்றவற்றை கணக்கில் எடுத்துக்கொள்வது போன்றவை. இருப்பினும், ஒருவருக்கொருவர் நெருக்கமாக பல ஆதாரங்கள் இருக்கும்போது இந்த அணுகுமுறை வேலை செய்யாதுஃ ஆதாரங்கள் அனைத்தும் ஒன்றாக மங்குகின்றன. ஸ்பெக்ட்ரல் துல்லிய தூர நுண்ணோக்கி (எஸ். பி. டி. எம்) என்பது ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியில் உள்ளூர்மயமாக்கும் நுட்பங்களின் குடும்பமாகும், இது ஒரு நேரத்தில் ஒரு சில ஆதாரங்களை அளவிடுவதன் மூலம் பல ஆதாரங்கள் இருப்பதால் ஏற்படும் சிக்கலைச் சமாளிக்கிறது, இதனால் ஒவ்வொரு மூலமும் மற்றவற்றிலிருந்து "ஒளியியல் ரீதியாக தனிமைப்படுத்தப்படுகிறது" (அதாவது, நுண்ணோக்கியின் தெளிவுத்திறனை விட அதிகமாக பிரிக்கப்படுகிறது, பொதுவாக ~ 200-250 என்எம்), பரிசோதனையின் கீழ் உள்ள துகள்கள் வெவ்வேறு நிறமாலை கையொப்பங்களைக் கொண்டிருந்தால், பொருத்தமான ஒளி ஆதாரங்கள் மற்றும் வடிப்பான்களைப் பயன்படுத்தி ஒரு நேரத்தில் ஒரு சில மூலக்கூறுகளிலிருந்து ஒளியைப் பார்க்க முடியும். இது வழக்கமான ஒளியியல் தெளிவுத்திறனை விட பல மடங்கு சிறந்த ஒளியியல் தெளிவுத்திறனை அடைகிறது, இது பயனுள்ள புள்ளி பட செயல்பாட்டின் முக்கிய அதிகபட்சத்தின் அரை அகலத்தால் குறிக்கப்படுகிறது. எஸ். பி. டி. எம். ஐப் பயன்படுத்தி அடையக்கூடிய கட்டமைப்புத் தெளிவுத்திறனை வெவ்வேறு நிறமாலை பண்புகளின் ("இடவியல் தெளிவுத்திறன்") இரண்டு முத்திரைத் துகள்களுக்கு இடையிலான மிகச்சிறிய அளவிடக்கூடிய தூரத்தின் அடிப்படையில் வெளிப்படுத்தலாம். மாடலிங் உள்ளூர்மயமாக்கல், துகள் அடர்த்தி போன்றவற்றின் துல்லியம் தொடர்பான பொருத்தமான நிலைமைகளின் கீழ், "இடவியல் தீர்மானம்" ஒரு "விண்வெளி அதிர்வெண்" உடன் ஒத்திருக்கிறது என்பதைக் காட்டுகிறது, இது கிளாசிக்கல் வரையறையின் அடிப்படையில், மிகவும் மேம்பட்ட ஒளியியல் தீர்மானத்திற்கு சமம். ஃப்ளோரசன்ட் வாழ்நாள் மற்றும் பிற நுட்பங்களின் அடிப்படையில் மூலக்கூறுகளை இன்னும் நுட்பமான வழிகளில் வேறுபடுத்திக் காட்டலாம். மரபணு ஆராய்ச்சியில் (மரபணுவின் செயல்பாட்டு அமைப்பு பற்றிய ஆய்வு) ஒரு முக்கியமான பயன்பாடு உள்ளது. பயன்பாட்டின் மற்றொரு முக்கியமான பகுதி சவ்வுகளின் அமைப்பு குறித்த ஆராய்ச்சி ஆகும். சில ஒளி-இயற்பியல் நிலைமைகள் இருந்தால் ஜி. எஃப். பி, அலெக்சா சாயங்கள் மற்றும் ஃப்ளோரெசின் மூலக்கூறுகள் போன்ற பல நிலையான ஃப்ளோரசன்ட் சாயங்களுக்கான எஸ். பி. டி. எம்ஃபைமட் உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி சாத்தியமாகும். இயற்பியல் ரீதியாக மாற்றியமைக்கக்கூடிய ஃப்ளோரோபோர்கள் (எஸ். பி. டி. எம்ஃபைமாட்) தொழில்நுட்பம் என்று அழைக்கப்படுவதன் மூலம், பொருத்தமான தீவிரம் கொண்ட ஒற்றை லேசர் அலைநீளம் நானோ இமேஜிங்கிற்கு போதுமானது, மற்ற உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி தொழில்நுட்பங்களுக்கு மாறாக, சிறப்பு புகைப்பட-மாற்றக்கூடிய/புகைப்பட-செயல்படுத்தக்கூடிய ஃப்ளோரசன்ஸ் மூலக்கூறுகள் பயன்படுத்தப்படும்போது இரண்டு லேசர் அலைநீளங்கள் தேவைப்படுகின்றன. புகையிலை மொசைக் வைரஸ் (டி. எம். வி) துகள்களின் பகுப்பாய்வு அல்லது வைரஸ்-செல் தொடர்பு பற்றிய ஆய்வு ஆகியவை எஸ். பி. டி. எம். ஃபைமாட் பயன்பாட்டிற்கு மற்றொரு எடுத்துக்காட்டு ஆகும். ஒற்றை-முக்கோண நிலை மாற்றங்களின் அடிப்படையில், எஸ். பி. டி. எம். ஃபைமோடுக்கு இந்த செயல்முறை தொடர்கிறது மற்றும் ஒரு மூலக்கூறு முதலில் மிக நீண்ட காலம் வாழக்கூடிய தலைகீழ் இருண்ட நிலைக்கு (பல விநாடிகள் வரை அரை ஆயுளுடன்) வரும் விளைவுக்கு வழிவகுக்கிறது, அதில் இருந்து அது ஒரு ஃப்ளோரசன்ட் நிலைக்குத் திரும்புகிறது, இது பல மில்லி விநாடிகளுக்கு பல ஃபோட்டான்களை வெளியிடுகிறது, இது மிக நீண்ட ஆயுள், மாற்ற முடியாத இருண்ட நிலை என்று அழைக்கப்படுகிறது. எஸ். பி. டி. எம். ஃபைமட் நுண்ணோக்கி ஃப்ளோரசன்ட் மூலக்கூறுகளைப் பயன்படுத்துகிறது, அவை ஒரே நிறமாலை ஒளி அதிர்வெண்ணை வெளியிடுகின்றன, ஆனால் ஒளிரும் பண்புகளின் அடிப்படையில் வெவ்வேறு நிறமாலை கையொப்பங்களுடன். ஒரே கலத்தின் இரண்டாயிரம் படங்களை இணைப்பதன் மூலம், லேசர் ஒளியியல் துல்லிய அளவீடுகளைப் பயன்படுத்தி, கணிசமாக மேம்பட்ட ஒளியியல் தெளிவுத்திறனுடன் உள்ளூர்மயமாக்கல் படங்களைப் பதிவு செய்ய முடியும். ஜிஎஃப்பி, ஆர்எஃப்பி, ஒய்எஃபி, அலெக்சா 488, அலெக்சா 568, அலெக்சா 647, சை2, சை3, அட்டோ 488 மற்றும் ஃப்ளோரெசின் ஆகியவை ஏற்கனவே எஸ். பி. டி. எம். பைமாட் தொழில்நுட்பத்துடன் வெற்றிகரமாகப் பயன்படுத்தப்படும் நிலையான ஒளிரும் சாயங்கள் ஆகும். 3டி (குளிர்) கிரையோஜெனிக் ஆப்டிகல் உள்ளூர்மயமாக்கலில் கிரையோஜெனிக் ஆப்டிகல் உள்ளூர்மயமாக்கல் 3டி (குளிர்) என்பது ஆங்ஸ்ட்ரோம் அளவிலான தெளிவுத்திறனுடன் ஒரு சிறிய முதல் நடுத்தர அளவிலான உயிரணு மூலக்கூறுக்குள் பல ஒளிரும் தளங்களை உள்ளூர்மயமாக்க அனுமதிக்கும் ஒரு முறையாகும். இந்த அணுகுமுறையில் உள்ளூர்மயமாக்கல் துல்லியம் மேம்படுத்தப்படுகிறது, ஏனெனில் குறைந்த வெப்பநிலையில் மெதுவான ஒளி வேதியியல் அதிக எண்ணிக்கையிலான ஃபோட்டான்களுக்கு வழிவகுக்கிறது, அவை ஃபோட்டோப்லீச்சிங்கிற்கு முன் ஒவ்வொரு ஃப்ளோரோஃபோரிலிருந்தும் வெளியேற்றப்படலாம். இதன் விளைவாக, கிரையோஜெனிக் சீரற்ற உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி ஒரு சிறிய புரதத்துடன் இணைக்கப்பட்ட பல ஃப்ளோரோபோர்களின் 3D நிலைகளைத் தீர்க்க தேவையான துணை மூலக்கூறு தீர்மானத்தை அடைகிறது. எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கியிலிருந்து அறியப்பட்ட வழிமுறைகளைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், ஃப்ளோரோபோர்களின் 2டி கணிப்புகள் 3டி கட்டமைப்பாக மறுகட்டமைக்கப்படுகின்றன. லேபிளின் அளவைப் பொறுத்து, குளிர் ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியை அதன் அடிப்படை வரம்பிற்கு கொண்டு வருகிறது. எக்ஸ்-ரே படிகவியல், காந்த அதிர்வு ஸ்பெக்ட்ரோஸ்கோபி மற்றும் எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கி போன்ற பிற கட்டமைப்பு உயிரியல் நுட்பங்களுடன் இந்த முறையை இணைத்து மதிப்புமிக்க நிரப்பு தகவல்களையும் குறிப்பிட்ட தன்மையையும் வழங்கலாம். பிணைப்பு-செயல்படுத்தப்பட்ட உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி (பி. ஏ. எல். எம்) பிணைப்பு-செயல்படுத்தப்பட்ட உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி (பி. ஏ. எல். எம்) என்பது ஒற்றை மூலக்கூறு உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கிக்கான (எஸ். எம். எல். எம்) ஒரு பொதுவான கருத்தாகும்ஃ டிஎன்ஏ மற்றும் சாயத்தின் பண்புகளை மாற்றியமைப்பதன் அடிப்படையில் டிஎன்ஏ-பிணைப்பு சாயங்களின் சூப்பர்-தீர்க்கப்பட்ட இமேஜிங். இரசாயன சூழலை கவனமாக சரிசெய்வதன் மூலம்-உள்ளூர், தலைகீழ் டிஎன்ஏ உருகுதல் மற்றும் ஃப்ளோரசன்ஸ் சமிக்ஞையின் மீது கலப்பினக் கட்டுப்பாட்டுக்கு வழிவகுக்கும்-டிஎன்ஏ-பிணைப்பு சாய மூலக்கூறுகள் அறிமுகப்படுத்தப்படலாம். ஒரு நேரத்தில் ஒரு சில டிஎன்ஏ-பிணைப்பு சாய சமிக்ஞைகளை மட்டுமே பதிவுசெய்து ஒளியியல் ரீதியாக தனிமைப்படுத்த இன்டர்கலேட்டிங் மற்றும் சிறிய-பள்ளம் பிணைப்பு டிஎன்ஏ சாயங்களைப் பயன்படுத்தலாம். டிஎன்ஏ கட்டமைப்பு ஏற்ற இறக்கத்தின் உதவியுடன் பி. ஏ. எல். எம் (எஃப். பி. ஏ. எல். எம்) அணு கட்டமைப்பில் நானோ அளவீட்டு வேறுபாடுகளுக்கு பயன்படுத்தப்படுகிறது, எதிர்பார்க்கப்பட்ட கட்டமைப்பு தீர்மானம் சுமார் 50 நானோமீட்டர் ஆகும். டிஎன்ஏ கட்டமைப்பின் ஏற்ற இறக்கங்களின் அடிப்படையில் பிணைப்பு-செயல்படுத்தப்பட்ட உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கியுடன் குரோமாட்டின் நானோ கட்டமைப்பை இமேஜிங் செய்தல். சமீபத்தில், என்ஐஏடி-4 இன் ஃப்ளோரசன்ஸ் குவாண்டம் விளைச்சலின் குறிப்பிடத்தக்க மேம்பாடு ஒரு அமிலாய்டுடன் பிணைக்கப்பட்டவுடன் அமிலாய்டு ஃபைப்ரில்கள் மற்றும் ஒலிகோமர்களின் பிஏஎல்எம் இமேஜிங்கிற்காக பயன்படுத்தப்பட்டது. ஸ்டார்ம், பிஏஎல்எம் மற்றும் எஃப். பி. ஏ. எல். எம் ஸ்டோகேஸ்டிக் ஆப்டிகல் புனரமைப்பு நுண்ணோக்கி (ஸ்டோர்ம்), ஃபோட்டோ ஆக்டிவேட்டட் லோக்கலைசேஷன் மைக்ரோஸ்கோபி (பிஏஎல்எம்) மற்றும் ஃப்ளோரசன்ஸ் ஃபோட்டோ-ஆக்டிவேஷன் லோக்கலைசேஷன் மைக்ரோஸ்கோபி (எஃப். பி. ஏ. எல். எம்) ஆகியவை சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் இமேஜிங் நுட்பங்களாகும், அவை உயர் தெளிவுத்திறன் கொண்ட படங்களை உருவாக்க ஃபோட்டோவிசபிள் ஃப்ளோரோபோர்களின் தொடர்ச்சியான செயல்பாடு மற்றும் நேர தீர்க்கப்பட்ட உள்ளூர்மயமாக்கலைப் பயன்படுத்துகின்றன. இமேஜிங்கின் போது, ஒளியியல் ரீதியாக தீர்க்கக்கூடிய ஃப்ளோரோபோர்களின் துணைக்குழு மட்டுமே எந்த நேரத்திலும் ஒரு ஃப்ளோரசன்ட் நிலைக்கு செயல்படுத்தப்படுகிறது, அதாவது ஒவ்வொரு ஃப்ளோரோஃபோரின் நிலையும் ஒரு குறிப்பிட்ட ஃப்ளோரோஃபோரின் ஒற்றை மூலக்கூறு படங்களின் சென்ட்ராய்டு நிலைகளைக் கண்டறிவதன் மூலம் அதிக துல்லியத்துடன் தீர்மானிக்க முடியும். ஃப்ளோரோபோர்களின் ஒரு துணைக்குழு பின்னர் செயலிழக்கச் செய்யப்படுகிறது, மற்றொரு துணைக்குழு செயல்படுத்தப்பட்டு படம்பிடிக்கப்படுகிறது. இந்த செயல்முறையின் மறு செய்கை ஏராளமான ஃப்ளோரோபோர்களை உள்ளூர்மயமாக்க அனுமதிக்கிறது மற்றும் படத் தரவுகளிலிருந்து ஒரு சூப்பர்-தெளிவுத்திறன் படத்தை உருவாக்க அனுமதிக்கிறது. இந்த மூன்று முறைகளும் குறுகிய காலத்தில் சுயாதீனமாக வெளியிடப்பட்டன, அவற்றின் கொள்கைகள் ஒரே மாதிரியானவை. STORM முதலில் நியூக்ளிக் அமிலங்கள் அல்லது புரதங்களுடன் இணைக்கப்பட்ட Cy5 மற்றும் Cy3 சாயங்களைப் பயன்படுத்தி விவரிக்கப்பட்டது, அதே நேரத்தில் PALM மற்றும் FPALM ஒளி வீசக்கூடிய ஒளிரும் புரதங்களைப் பயன்படுத்தி விவரிக்கப்பட்டன. கொள்கையளவில் எந்த ஃபோட்டோவிட்சபிள் ஃப்ளோரோஃபோரையும் பயன்படுத்தலாம், மேலும் STORM பல்வேறு வகையான ஆய்வுகள் மற்றும் லேபிளிங் உத்திகளுடன் நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. Cy5 போன்ற ஒற்றை ஃப்ளோரோபோர்களின் சீரற்ற ஒளிச்சேர்க்கையைப் பயன்படுத்தி, STORM ஒரு சிவப்பு லேசர் கிளர்ச்சி மூலத்துடன் செய்யப்படலாம். சிவப்பு லேசர் இரண்டும் ஒரு அடக்டை உருவாக்குவதன் மூலம் சை 5 ஃப்ளோரோஃபோரை இருண்ட நிலைக்கு மாற்றுகிறது, பின்னர் மூலக்கூறை ஃப்ளோரசன்ட் நிலைக்குத் திருப்புகிறது. வேறு பல சாயங்களும் STORM உடன் பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளன. ஒற்றை ஃப்ளோரோபோர்களைத் தவிர, ஆக்டிவேட்டர் ஃப்ளோரோஃபோர் (அலெக்சா 405, சை 2, அல்லது சை 3 போன்றவை) மற்றும் ஃபோட்டோவிட்சபிள் ரிப்போர்ட்டர் டை (சை 5, அலெக்சா 647, Cy5.5, அல்லது சை 7 போன்றவை) ஆகியவற்றைக் கொண்ட சாய-ஜோடிகள் ஸ்டோர்ம் உடன் பயன்படுத்தப்படலாம். இந்த திட்டத்தில், ஆக்டிவேட்டர் ஃப்ளோரோஃபோர், அதன் உறிஞ்சுதல் அதிகபட்சத்திற்கு அருகில் உற்சாகமாக இருக்கும்போது, ஒளி வீசக்கூடிய சாயத்தை ஒளிரும் நிலைக்கு மீண்டும் செயல்படுத்த உதவுகிறது. பயன்படுத்தப்படும் ஆக்டிவேட்டர் ஃப்ளோரோஃபோரைப் பொறுத்து, அல்லது ஆக்டிவேட்டர் ஃப்ளோரோஃபோர்களுடன் அல்லது இல்லாமல், நிறமாலை தனித்துவமான ஃபோட்டோவிசபிள் ஃப்ளோரோஃபோர்களைப் பயன்படுத்தி, சாய-ஜோடிகளை வேறுபடுத்துவதற்கு வெவ்வேறு செயல்படுத்தும் அலைநீளங்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் பல வண்ண இமேஜிங் செய்யப்படுகிறது. ஒளி வீசக்கூடிய ஒளிரும் புரதங்களையும் பயன்படுத்தலாம். ஒளி மயக்கக்கூடிய ஆய்வுகளுடன் உயிரியல் கட்டமைப்புகளின் மிகவும் குறிப்பிட்ட லேபிளிங் ஆன்டிபாடி கறை, புரதங்களின் நேரடி இணைப்பு மற்றும் மரபணு குறியாக்கம் மூலம் அடையப்பட்டுள்ளது. ஆப்டிகல் அஸ்டிக்மேட்டிசத்தைப் பயன்படுத்தி முப்பரிமாண இமேஜிங்கிற்கும் STORM நீட்டிக்கப்பட்டுள்ளது, இதில் புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டின் நீள்வட்ட வடிவம் பல மைக்ரோமீட்டர் தடிமன் வரை மாதிரிகளுக்கான x, y மற்றும் z நிலைகளை குறியாக்கம் செய்கிறது, மேலும் உயிரணுக்களில் நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. இன்றுவரை, இந்த நுட்பத்தால் அடையப்பட்ட இடஞ்சார்ந்த தீர்மானம் பக்கவாட்டு பரிமாணங்களில் ~ 20 என்எம் மற்றும் அச்சு பரிமாணத்தில் ~ 50 என்எம் ஆகும்; மற்றும் தற்காலிக தீர்மானம் 0.1-0.33s வரை வேகமாக உள்ளது. நானோ அளவிலான நிலப்பரப்பில் (PAINT) இமேஜிங் செய்வதற்கான புள்ளிகள் குவிப்பு நானோ அளவிலான நிலப்பரப்பில் (PAINT) இமேஜிங் செய்வதற்கான புள்ளிகள் குவிப்பு என்பது ஒரு மூலக்கூறு உள்ளூர்மயமாக்கல் முறையாகும், இது மூலக்கூறு உறிஞ்சுதல்/உறிஞ்சுதல் மற்றும் ஃபோட்டோப்லீச்சிங்/உறிஞ்சுதல் மூலம் சீரற்ற ஒற்றை மூலக்கூறு ஒளிரும் தன்மையை அடைகிறது. பயன்படுத்தப்பட்ட முதல் சாயம் நைல் சிவப்பு ஆகும், இது நீரிய கரைசலில் ஃப்ளோரசன்ட் அல்ல, ஆனால் மைக்கேல்ஸ் அல்லது உயிருள்ள செல் சுவர்கள் போன்ற ஹைட்ரோபோபிக் சூழலில் செருகப்படும்போது ஃப்ளோரசன்ட் ஆகும். எனவே, சாயத்தின் செறிவு நானோ மோலார் மட்டத்தில் சிறியதாக வைக்கப்படுகிறது, இதனால் விலகல்-வரையறுக்கப்பட்ட பகுதிக்கு மூலக்கூறின் உறிஞ்சுதல் விகிதம் மில்லி விநாடி பகுதியில் இருக்கும். ஒற்றை-சாய மூலக்கூறுகளின் (ஆய்வுகள்) அசாதாரண பிணைப்பு ஒரு அசையாத இலக்குடன் ஒரு பொதுவான பரந்த புலம் ஒளிரும் நுண்ணோக்கியின் கீழ் இட ரீதியாகவும் தற்காலிகமாகவும் தீர்க்கப்படலாம். ஒவ்வொரு சாயமும் புலத்தை இருண்ட நிலைக்குத் திருப்புவதற்கு ஒளி ஊதப்படுகிறது, எனவே அடுத்த சாயத்தை பிணைத்து கவனிக்க முடியும். மற்ற சீரற்ற முறைகளுடன் ஒப்பிடுகையில், இந்த முறையின் நன்மை என்னவென்றால், நிலையான இலக்கின் மிகத் தீர்க்கப்பட்ட படத்தைப் பெறுவதோடு மட்டுமல்லாமல், கரைசலில், இலக்குடன் பரவும் ஆய்வு மூலக்கூறுகளின் மாறும் பிணைப்பு இயக்கவியலை அளவிட முடியும். 3டி சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் நுட்பத்தை இணைத்தல் (எ. கா. இரட்டை-ஹெலிக்ஸ் புள்ளி பரவல் செயல்பாடு மோர்னரின் குழுவில் உருவாகிறது), ஒளி-செயல்படுத்தப்பட்ட சாயங்கள், சக்தி-சார்ந்த செயலில் இடைப்பட்ட நிலை மற்றும் நானோ அளவிலான நிலப்பரப்பில் இமேஜிங் செய்வதற்கான புள்ளிகள் குவிப்பு, SPRAIPAINT (SPRAI = PoweR-சார்ந்த செயலில் இடைப்பட்ட நிலை மூலம் சூப்பர் தீர்மானம்) நேரடி செல் சுவர்களை சூப்பர் தீர்க்க முடியும். சாய உறிஞ்சுதல்/உறிஞ்சுதல் மற்றும் ஃபோட்டோப்லீச்சிங்/உறிஞ்சுதல் விகிதங்களுக்கு இடையில் சமநிலையை பராமரிப்பதன் மூலம் PAINT செயல்படுகிறது. இந்த சமநிலையை புள்ளிவிவரக் கோட்பாடுகளுடன் மதிப்பிடலாம். வாயு அல்லது திரவக் கரைசலில் ஒரு மேற்பரப்பு அல்லது இடைமுகத்தில் ஒரு நீர்த்த கரைசலின் உறிஞ்சுதல் அல்லது உறிஞ்சுதல் விகிதத்தை ஃபிக்கின் பரவல் விதிகளைப் பயன்படுத்தி கணக்கிடலாம். ஃபோட்டோப்லீச்சிங்/டிஸார்ப்ஷன் விகிதத்தை கொடுக்கப்பட்ட கரைசல் நிலை மற்றும் ஒளிரும் சக்தி அடர்த்திக்கு அளவிட முடியும். வழக்கமான சாயங்களைப் பயன்படுத்த டிஎன்ஏ-பிஏஐஎன்டி மேலும் நீட்டிக்கப்பட்டுள்ளது, அங்கு ஒரு நிலையான டிஎன்ஏ ஓரிகமியுடன் சாய-பெயரிடப்பட்ட டிஎன்ஏ ஆய்வின் மாறும் பிணைப்பு மற்றும் பிணைப்பு நீக்குதல் ஆகியவை சீரற்ற ஒற்றை மூலக்கூறு இமேஜிங்கை அடைய பயன்படுத்தப்படுகின்றன. டிஎன்ஏ-பிஏஐஎன்டி இனி சுற்றுச்சூழல் உணர்திறன் சாயங்களுக்கு மட்டுப்படுத்தப்படவில்லை, மேலும் ஆய்வுகளின் உறிஞ்சுதல் மற்றும் உறிஞ்சுதல் இயக்கவியல் ஆகிய இரண்டையும் இலக்கை நோக்கி அளவிட முடியும். இந்த முறை நகரும் சாயங்களின் கேமரா மங்கலான விளைவைப் பயன்படுத்துகிறது. ஒரு வழக்கமான சாயம் கரைசலில் பரவும்போது, ஒரு வழக்கமான சிசிடி கேமராவில் அதன் படம் அதன் ஒப்பீட்டளவில் வேகமான வேகம் மற்றும் ஒப்பீட்டளவில் நீண்ட கேமரா வெளிப்பாடு நேரம் காரணமாக மங்கலாகிறது, இது ஃப்ளோரசன்ஸ் பின்னணிக்கு பங்களிக்கிறது. இருப்பினும், அது ஒரு நிலையான இலக்குடன் பிணைக்கும்போது, சாயம் நகர்வதை நிறுத்துகிறது; மேலும் புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டில் தெளிவான உள்ளீட்டை அடைய முடியும். இந்த முறையின் சொல் mbPAINT (இயக்க மங்கலைக் குறிக்கும் "mb"). இமேஜிங்கிற்கு மொத்த உள் பிரதிபலிப்பு ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி (டி. ஐ. ஆர். எஃப்) பயன்படுத்தப்படும்போது, தூண்டுதல் ஆழம் அடி மூலக்கூறிலிருந்து ~ 100 என். எம் வரை வரையறுக்கப்படுகிறது, இது அடி மூலக்கூறுக்கு அருகிலுள்ள மங்கலான சாயங்களிலிருந்தும், மொத்த கரைசலில் உள்ள பின்னணியிலிருந்தும் ஃப்ளோரசன்ஸ் பின்னணியை மேலும் குறைக்கிறது. எம். பி. பி. ஏ. ஐ. என். டி. க்கு மிகவும் பிரகாசமான சாயங்களைப் பயன்படுத்தலாம், இது ~ 20 என். எம் இன் வழக்கமான ஒற்றை-சட்டக இடஞ்சார்ந்த தீர்மானங்களையும், ~ 20 எம். எஸ் இன் ஒற்றை மூலக்கூறு இயக்க தற்காலிக தீர்மானங்களையும் ஒப்பீட்டளவில் லேசான ஒளி உந்துதல் தீவிரங்களின் கீழ் வழங்குகிறது, இது ஒற்றை புரதங்களின் மூலக்கூறு பிரிப்பைப் படிப்பதில் பயனுள்ளதாக இருக்கும். தரவு கையகப்படுத்தலின் போது ஃபோரியர் விமானத்தில் வைக்கப்பட்ட சுழற்சி கட்ட முகமூடியைப் பயன்படுத்தி தற்காலிக தீர்மானம் மேலும் மேம்படுத்தப்பட்டுள்ளது (20 முறை) மற்றும் தற்காலிக தகவல்களைக் கொண்ட சிதைந்த புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டைத் தீர்க்கிறது. இந்த முறைக்கு சூப்பர் டெம்போரல்-ரெசல்வ்டு மைக்ரோஸ்கோபி (எஸ். டி. ஆர். இ. எம்) என்று பெயரிடப்பட்டது. லேபிள் இல்லாத உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி சுமார் 50 என்எம் வரம்பில் செல்லுலார் கட்டமைப்புகளின் ஒளியியல் தெளிவுத்திறனை அடைய முடியும், லேபிள் இல்லாத செல்களில் கூட, உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி எஸ். பி. டி. எம் பயன்படுத்தி. இரண்டு வெவ்வேறு லேசர் அலைநீளங்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், எஸ். பி. டி. எம் வழக்கமான ஃப்ளோரசன்ஸ் வைட்-ஃபீல்ட் இமேஜிங் நிலைமைகளின் கீழ் கண்டறிய முடியாத செல்லுலார் பொருட்களை வெளிப்படுத்துகிறது, அதோடு தன்னியக்க ஃப்ளோரசன் கட்டமைப்புகளின் கணிசமான தெளிவுத்திறனை மேம்படுத்துகிறது. ஒரு கட்டுப்பாட்டாக, உள்ளூர்மயமாக்கல் படத்தில் கண்டறியப்பட்ட பொருட்களின் நிலைகள் பிரகாசமான புலப் படத்தில் உள்ளவற்றுடன் பொருந்துகின்றன. மிகவும் சீரான பிளாஸ்மோனிக் உருமாற்ற மேற்பரப்பில் மேற்பரப்பு-மேம்படுத்தப்பட்ட ராமன் சிதறல் சமிக்ஞையின் ஏற்ற இறக்கங்களைப் பயன்படுத்தி லேபிள் இல்லாத சூப்பர் ரெசல்யூஷன் நுண்ணோக்கியும் நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. டைரக்ட் ஸ்டோக்சிஸ்டிகல் ஆப்டிகல் ரீகன்ஸ்ட்ரக்ஷன் மைக்ரோஸ்கோபி (டிஎஸ்டிஓஆர்எம்) டிஎஸ்டிஓஆர்எம் ஒரு ஃப்ளோரோஃபோரின் ஃபோட்டோவிச்சிங்கைப் பயன்படுத்துகிறது. டி. எஸ். டி. ஓ. ஆர். எம். இல், ஃப்ளோரோபோர்கள் ஒரு குறைப்பு மற்றும் ஆக்சிஜனேற்ற இடையக அமைப்பில் (ஆர். ஓ. எக்ஸ். எஸ்) உட்பொதிக்கப்பட்டுள்ளன, மேலும் ஃப்ளோரசன்ஸ் உற்சாகப்படுத்தப்படுகிறது. சில நேரங்களில், தற்செயலாக, ஃப்ளோரோபோர் ஒரு மும்மடங்கு அல்லது வேறு சில இருண்ட நிலைக்குள் நுழையும், இது இடையகத்தின் ஆக்சிஜனேற்ற நிலைக்கு உணர்திறன் கொண்டது, இதிலிருந்து அவற்றை ஃப்ளோரஸ் செய்ய முடியும், இதனால் ஒற்றை மூலக்கூறு நிலைகளை பதிவு செய்ய முடியும். டிஎஸ்டிஓஆர்எம் முறையின் வளர்ச்சி ஒரே நேரத்தில் 3 சுயாதீன ஆய்வகங்களில் நிகழ்ந்தது, மேலும் இது "ரிவர்சிபிள் ஃபோட்டோப்லீச்சிங் மைக்ரோஸ்கோபி" (ஆர்பிஎம்), "கிரவுண்ட் ஸ்டேட் டிப்லீஷன் மைக்ரோஸ்கோபி அதைத் தொடர்ந்து தனிப்பட்ட மூலக்கூறு ரிட்டர்ன்" (ஜிஎஸ்டிஐஎம்), அதே போல் இப்போது பொதுவாக ஏற்றுக்கொள்ளப்பட்ட மோனிகர் டிஎஸ்டிஓஆர்எம் என்றும் அழைக்கப்பட்டது. உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கிக்கான மென்பொருள் ஒரு சில நிமிடங்களில் செயலில் உள்ள ஃப்ளோரோபோர்களின் மில்லியன் கணக்கான படங்களுக்கு புள்ளி பரவல் செயல்பாட்டை (பிஎஸ்எஃப்) துல்லியமாக பொருத்தக்கூடிய மென்பொருளை பெரிதும் சார்ந்துள்ளது. இயற்கை அறிவியலில் பயன்படுத்தப்படும் பாரம்பரிய பகுப்பாய்வு முறைகள் மற்றும் மென்பொருள் தொகுப்புகள் இந்த சிக்கல்களை கணக்கீட்டு ரீதியாக தீர்க்க மிகவும் மெதுவாக இருப்பதால், பெரும்பாலும் நிமிடங்களில் அளவிடப்படும் தரவை செயலாக்குவதற்கு கணக்கீட்டு மணிநேரங்களை எடுத்துக்கொள்வதால், சிறப்பு மென்பொருள் நிரல்கள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. இந்த உள்ளூர்மயமாக்கல் மென்பொருள் தொகுப்புகளில் பல திறந்த மூலமாகும்; அவை எஸ். எம். எல். எம் மென்பொருள் அளவுகோலில் பட்டியலிடப்பட்டுள்ளன. மூலக்கூறு நிலைகள் தீர்மானிக்கப்பட்டவுடன், இருப்பிடங்கள் காட்டப்பட வேண்டும் மற்றும் காட்சிப்படுத்த பல வழிமுறைகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் ஆப்டிகல் ஏற்ற இறக்க இமேஜிங் (எஸ். ஓ. எஃப். ஐ) பிக்சல்களின் தற்காலிக தன்னியக்க தொடர்பை நேரடியாகக் கணக்கிடுவதன் மூலம் ஒற்றை மூலக்கூறு உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கியில் (எஸ். எம். எல். எம்) உள்ளார்ந்த பி. எஸ். எஃப் பொருத்துதலின் தேவையைத் தவிர்க்க முடியும். இந்த நுட்பம் சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் ஆப்டிகல் ஃப்ளக்சுயேஷன் இமேஜிங் (எஸ். ஓ. எஃப். ஐ) என்று அழைக்கப்படுகிறது, மேலும் ஒரே நேரத்தில் செயலில் உள்ள ஃப்ளோரோபோர்களின் அடர்த்தி மிக அதிகமாக இருக்கும்போது எஸ். எம். எல். எம். ஐ விட மிகவும் துல்லியமானது என்று நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. அனைத்து இடங்களிலும் உள்ளூர்மயமாக்கல் நுண்ணோக்கி (ஓஎல்எம்) என்பது ஒற்றை மூலக்கூறு நுண்ணோக்கி (எஸ்எம்எல்எம்) நுட்பங்களின் விரிவாக்கமாகும், இது உயர் அடர்த்தி கொண்ட ஒற்றை மூலக்கூறு இமேஜிங்கை ஒரு ஒத்திசைவற்ற ஒளி மூலத்துடன் (பாதரச-வளைவு விளக்கு போன்றவை) மற்றும் வழக்கமான எபிஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி அமைப்புடன் அனுமதிக்கிறது. ஆழமான-நீல கிளர்ச்சியின் ஒரு குறுகிய வெடிப்பு (405 என்எம் லேசருக்குப் பதிலாக 350-380 என்எம் உடன்) சோதனை மாதிரிகளில் 90 என்எம் தீர்மானத்திற்கு மூலக்கூறுகளை நீண்டகாலமாக மீண்டும் செயல்படுத்த உதவுகிறது. இறுதியாக, தொடர்புடைய எஸ். டி. இ. டி மற்றும் எஸ். எம். எல். எம் இமேஜிங் ஒரு எளிய இமேஜிங் ஊடகத்தைப் பயன்படுத்தி ஒரே உயிரியல் மாதிரியில் செய்யப்படலாம், இது மேலும் மேம்பட்ட தெளிவுத்திறனுக்கான அடிப்படையை வழங்க முடியும். இந்த கண்டுபிடிப்புகள் சூப்பர் ரெசல்யூஷன் இமேஜிங்கை ஜனநாயகப்படுத்தலாம் மற்றும் எந்தவொரு விஞ்ஞானிக்கும் குறைந்த பட்ஜெட்டில் கூட அதிக அடர்த்தி கொண்ட ஒற்றை மூலக்கூறு படங்களை உருவாக்க உதவும். சீக்வென்ஷியல் இமேஜிங் (ஆர்இஎஸ்ஐ) மூலம் தெளிவுத்திறன் மேம்பாடு சீக்வென்ஷியல் இமேஜிங் (ஆர்இஎஸ்ஐ) மூலம் தெளிவுத்திறன் மேம்பாடு என்பது டிஎன்ஏ-பிஏஐஎன்ட்டின் விரிவாக்கமாகும், இது கோட்பாட்டளவில் வரம்பற்ற தெளிவுத்திறனை அடைய முடியும். கொடுக்கப்பட்ட இலக்கு இனங்களை அடையாளம் காண ஒரு லேபிள் வகையைப் பயன்படுத்துவதற்குப் பதிலாக, அதே இலக்கின் பிரதிகள் ஆர்த்தோகனல் டிஎன்ஏ வரிசைகளுடன் பெயரிடப்படுகின்றன. வரிசைப்படி (அதாவது. பிரிக்கப்பட்ட) இமேஜிங், வழக்கமான எஸ். எம். எல். எம். இல் ஒன்றுடன் ஒன்று இருக்கும் உள்ளூர்மயமாக்கல் மேகங்கள் (1) தீர்க்கப்படலாம் மற்றும் (2) ஒற்றை "சூப்பர்" உள்ளூர்மயமாக்கலாக இணைக்கப்படலாம், இதன் துல்லியம் உள்ளூர்மயமாக்கல்களின் அடிப்படை எண்ணிக்கையுடன் அளவிடப்படுகிறது. டிஎன்ஏ-பிஏஐஎன்ட்டில் அடையக்கூடிய உள்ளூர்மயமாக்கல்களின் எண்ணிக்கை வரம்பற்றது போலவே, ஆர்இஎஸ்ஐயின் கோட்பாட்டு தீர்மானமும் உள்ளது. அடிப்படை இமேஜிங் சுற்றுகளிலிருந்து RESI உள்ளூர்மயமாக்கல்களை ஒன்றுடன் ஒன்று இணைப்பது ஒரு கலப்பு, மிகவும் தீர்க்கப்பட்ட படத்தை உருவாக்குகிறது. வெர்டிகோ எஸ்எம்ஐ நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி 3டி லைட் மைக்ரோஸ்கோபிகல் நானோசைசிங் (லிமோன்) நுண்ணோக்கி ஒளி மைக்ரோஸ்கோபிகல் நானோசைசிங் (3டி லிமோன்) படங்களின் தொழில்நுட்பங்களின் கலவை, எஸ்எம்ஐ மற்றும் எஸ்பிடிஎம் ஆகியவற்றின் கலவையால் சாத்தியமாக்கப்படுகிறது, இதன் மூலம் முதலில் எஸ்எம்ஐ, பின்னர் எஸ்பிடிஎம், செயல்முறை பயன்படுத்தப்படுகிறது. எஸ்எம்ஐ செயல்முறை துகள்களின் மையத்தையும் நுண்ணோக்கி அச்சின் திசையில் அவற்றின் பரவுதலையும் தீர்மானிக்கிறது. துகள்கள்/மூலக்கூறுகளின் மையத்தை 1 முதல் 2 என்எம் துல்லியத்துடன் தீர்மானிக்க முடியும் என்றாலும், இந்த புள்ளியைச் சுற்றியுள்ள பரவலை தோராயமாக 30-40 என்எம் என்ற அச்சு விட்டம் வரை தீர்மானிக்க முடியும். அதைத் தொடர்ந்து, தனிப்பட்ட துகள்/மூலக்கூறின் பக்கவாட்டு நிலை எஸ். பி. டி. எம் பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்படுகிறது, இது ஒரு சில நானோமீட்டர்களின் துல்லியத்தை அடைகிறது. 3டி இரட்டை வண்ண முறையில் ஒரு உயிரியல் பயன்பாடாக, ஹெர்2/நியூ மற்றும் ஹெர்3 கிளஸ்டர்களின் இடஞ்சார்ந்த ஏற்பாடுகள் அடையப்பட்டன. புரதக் கொத்துக்களின் மூன்று திசைகளிலும் உள்ள நிலைகளை சுமார் 25 நானோமீட்டர் துல்லியத்துடன் தீர்மானிக்க முடியும். ஒருங்கிணைந்த தொடர்புடைய ஒளி மற்றும் எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கி ஒரு சூப்பர்-தெளிவுத்திறன் நுண்ணோக்கியை ஒரு எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கியுடன் இணைப்பது, ஃப்ளோரசன்ஸ் மார்க்கர்களால் வழங்கப்பட்ட லேபிளிங்குடன் சூழல் தகவல்களைக் காட்சிப்படுத்த உதவுகிறது. ஒளி நுண்ணோக்கியை மட்டுமே பயன்படுத்தும் போது ஆராய்ச்சியாளருக்கு எஞ்சியிருக்கும் கருப்பு பின்னணியின் சிக்கலை இது சமாளிக்கிறது. ஒரு ஒருங்கிணைந்த அமைப்பில், மாதிரி ஒரே நேரத்தில் இரண்டு நுண்ணோக்கிகளால் அளவிடப்படுகிறது. நரம்பியல் நெட்வொர்க்குகளைப் பயன்படுத்தி நுட்பங்களை மேம்படுத்துதல் சமீபத்தில், செயற்கை நுண்ணறிவு கணினியின் முன்னேற்றங்கள் காரணமாக, ஆழமான கற்றல் நரம்பியல் நெட்வொர்க்குகள் (GANs) ஒளியியல்-நுண்ணோக்கி புகைப்படப் படங்களின் சூப்பர்-தெளிவுத்திறனை மேம்படுத்த பயன்படுத்தப்படுகின்றன, 40x முதல் 100x வரை, ஒளியியல் நுண்ணோக்கி மூலம் 20x முதல் 1500x வரை, ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கி, நரம்பியல் லென்ஸ் வழியாக, பாசிட்ரான்-உமிழ்வு டோமோகிராஃபி மற்றும் ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி மூலம் ஒப்பிடலாம். மேலும் காண்க மல்டிஃபோகல் பிளேன் மைக்ரோஸ்கோபி (எம். யு. எம்) தூண்டப்பட்ட உமிழ்வு குறைப்பு நுண்ணோக்கி (எஸ். டி. இ. டி) ஃபோட்டோஆக்டிவேட்டட் லோக்கலைசேஷன் மைக்ரோஸ்கோபி (பி. ஏ. எல். எம்) டிகோன்வொல்யூஷன் ஃபோட்டோஆக்டிவேட்டபிள் ப்ரோப்ஸ் கோரிலேட்டிவ் லைட்-எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோபி சூப்பர்-ரெசல்யூஷன் இமேஜிங் வீடியோ சூப்பர் ரெசல்யூஷன் குறிப்புகள் மேலும் படிக்க மைக்ரோஸ்கோபி ஜெர்மன் கண்டுபிடிப்புகள் செல் இமேஜிங் ஆய்வக உபகரணங்கள் ஆப்டிகல் மைக்ரோஸ்கோபி ஃப்ளோரசன்ஸ் நுட்பங்கள்